药敏试验方法及药敏试纸的选择

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青霉素葡萄球菌头孢噻肟球菌内酰胺酶链球菌耐药肺炎链球菌肠杆菌科内酰

胺类

摘要：头孢他定/克拉维酸（CAZ/CA）羧苄青霉素（CB）奥格门丁（AMX/CA）哌拉

西林/三唑巴坦（PIP/TZ）亚安培南头孢匹肟（FEP）头孢克罗（CEC）2、铜绿假单

孢菌/不动杆菌妥布霉素（TM）阿米卡星（AN）安曲南（AZT）头孢哌酮（CFP）哌

拉西林（PIP）头孢匹肟头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP）头孢他定（CAZ）左旋氧

氟沙星（OFL）亚安培南哌拉西林/三唑巴坦3、金黄色葡萄球菌苯唑西林（OX）青

霉素G（P）头孢唑林（

K-B法：

1 从孵育了16-24小时的琼脂平板上（血平板），挑出单个菌落，直接用生理盐水制成0.5麦氏单位。

2 在15分钟内，用无菌棉拭子蘸取调好的菌液，在液面上方管壁处旋转并用力挤压几次，以从中挤出过多的菌液。

3 用棉拭子在无菌的M-H培养基表面化线接种，再重复操作两次，每次将平板转动60度，每次接种都应保证接种物均匀分布，最后用棉拭子涂抹平板的边缘。

4 将确定好的药敏纸片分贴到平板表面。每个纸片都应压一下，以保证与平板表面完全接触。每个纸片中心间距24mm。纸片一旦与平板接触，不应再移动。

5 贴完纸片后，应在15分钟内放入35度孵箱。嗜血杆菌属，链球菌属放入3%-5%的CO2烛缸。

6 孵育24小时以后，测量各药敏纸片抑菌圈直径，与NCCLS手册比较，作出结果判断。

说明：细菌药敏结果的判断以NCCLS为标准，所以药敏试验的每一步都应严格按照N CCLS操作，否则将失去意义。链球菌、奈瑟菌属、流感嗜血杆菌、除铜绿假单孢菌和不动杆菌外的假单孢菌属不用K-B法.

肺炎链球菌胶乳凝集测定法

1 在一干净玻片上分别滴两滴生理盐水。

2 从冰箱取出鉴定试剂(Slidex pneumo-kit)于室温。

3 在其中一滴生理盐水上滴加R1试剂，在另外一滴上滴加R2试剂，用搅拌棒混匀。

4 轻轻晃动玻片2分钟，观察结果。

5 2分钟内，如R1出现凝集为阳性；如R1和R2均未出现凝集为阴性。

注：R3为阳性对照。

药敏纸片的选择

1、革兰阴性杆菌（肠杆菌科）

头孢噻肟（CTX）头孢唑林（CZ）头孢他定（CAZ）

氨苄西林（AM）哌拉西林（PIP）阿米卡星（AN）

头孢噻吩（CF）环丙沙星（CIP）头孢呋辛（CXM）

庆大霉素（GM）头孢噻肟/棒酸（CTX/CA）

头孢他定/克拉维酸（CAZ/CA）羧苄青霉素（CB）

奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦（PIP/TZ）

亚安培南头孢匹肟（FEP）头孢克罗（CEC）

2、铜绿假单孢菌/不动杆菌

妥布霉素（TM）阿米卡星（AN）安曲南（AZT）

头孢哌酮（CFP）哌拉西林（PIP）头孢匹肟

头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP）头孢他定（CAZ）

左旋氧氟沙星（OFL）亚安培南哌拉西林/三唑巴坦

3、金黄色葡萄球菌

苯唑西林（OX）青霉素G（P）头孢唑林（CZ）阿米卡星（AN）

红霉素（E）头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP）

万古霉素奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦

头孢噻吩（CF）

4 、肠球菌

氨苄西林（AM）万古霉素环丙沙星（CIP）

庆大霉素（GM）红霉素（E）氧氟沙星（OFL）

5、除肺炎链球菌外链球菌

氨苄西林（AM）头孢噻肟（CTX）万古霉素

红霉素（E）氧氟沙星（OFL）克林霉素(CM)

肺炎克雷伯菌产酸克雷伯菌和大肠杆菌ESBLs的检测

MH培养基上贴头孢他定，头孢他定/克拉维酸，头孢噻肟/棒酸，安曲南。

如头孢他定的抑菌圈<22mm，安曲南<27mm，头孢噻肟<27mm，意味可能有ESBLS 产生。

如头孢他定/克拉维酸与头孢他定，头孢噻肟/棒酸与头孢噻肟的差值≥5mm，则确证E SBLS产生。

耐药机制。

一代头孢对普通变形杆菌、枸橼酸杆菌、肠球菌、假单孢菌属、沙雷氏菌属、拟杆菌属无效。第二代头孢对假单孢菌属、不动杆菌属、沙雷氏菌属、肠球菌无效；肠球菌对头孢类天然耐药。氨基糖甙类抗生素阿米卡星与庆大霉素不完全交叉耐药。红霉素类、四环素类等抗生素内部有相互交叉耐药。

金黄色葡萄球菌耐万古霉素、无乳链球菌耐青霉素和氨苄青霉素、无乳链球菌和D群链球菌耐万古霉素和替拉考宁为不可能的表型。

洋葱伯克霍德菌对氨基糖甙类、亚安培南天然耐药。

除表皮葡萄球菌和溶血葡萄球菌外，替拉考宁耐药的凝固酶阴性的葡萄球菌不常见。

金黄色葡萄球菌对复方新诺明耐药为罕见表型。

氨苄青霉素对非发酵类不宜应用。

对于葡萄球菌，苯唑西林耐药，青霉素敏感是不可能的。

NCCLS关于细菌药敏实验的说明

总评论：1、头孢噻吩可以代表头孢噻吩、头孢匹林、头孢拉定、头孢氨苄、头孢克洛、和头孢羟氨苄。但是，头孢唑林、头孢呋辛、头孢泊肟、头孢丙烯应单独测试，因为某些对这些药物敏感的菌株对头孢噻吩是耐药的。

2、利福平不能单独用于化疗。

肠杆菌科

1对于沙门菌属和志贺菌属只有氨苄西林、喹诺酮、和甲氧苄啶/磺胺甲恶唑可用于常规试验与报告。初此之外，对于沙门菌属和志贺菌属的肠道外分离株，应测试并报告氯霉素和一种三代头孢菌素。

2、克雷伯菌属和大肠艾希菌的产ESBLS株对青霉素、头孢菌素类或安曲南临床治疗可显耐药性，尽管在体外药敏试验对其中某些抗生素敏感。对于所有产ESBLs株，应报告为耐所有青霉素类、头孢菌素及安曲南。

3、随着3代头孢菌素的治疗，肠杆菌属、枸橼酸菌属和沙雷菌属可发展其耐药性。最易敏感的菌株在开始治疗3-4天就可变为耐药，因此要反复测试这些菌株。

葡萄球菌

1、青霉素敏感的葡萄球菌对FDA批准的用于葡萄球菌感染的其他青霉素类、头孢菌素和碳青烯类也是敏感的。青霉素耐药而苯唑西林敏感的菌株对β-内酰胺酶不稳定的青霉素是耐药的，但对其他β-内酰胺酶稳定的青霉素、β-内酰胺酶抑制剂复合药、相关的头孢类和卡巴陪南是敏感的。苯唑西林耐药的葡萄球菌对现在可用的所有β-内酰胺类抗生素是耐药的。因此仅测试青霉素和苯唑西林就可以推知一大批β-内酰胺类抗生素的敏感性与耐