实验六 酵母菌形态的观察及死活细胞的鉴定

实验六酵母菌形态的观察及死活细胞的鉴定

一.实验目的与要求.

1、观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；

2、掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。

二.基本原理

酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见的细菌大几倍甚至十几倍，大多数的酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过美蓝染液水浸片来观察酵母菌的出芽生殖方式。

美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母菌的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原力的酵母活细胞是无色的，而死或代谢作用微弱的衰老细胞则呈现蓝色或淡蓝色，即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。

三.实验材料和用具

1、菌种：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）培养约2d的麦芽汁（或豆芽汁）斜面培养物。

2、溶液或试剂：0.05%和0.1%吕氏碱性美蓝染色液，革兰氏染色用碘液。

3、仪器或用具：显微镜.擦镜纸.接种环.酒精灯.载玻片.盖玻片.吸水纸.小滴管

一. 操作步骤：

1、美蓝浸片的观察

①在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作用接种环挑取少量酵母菌苔放在染液中，混合均匀。

②用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。

③将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高位镜观察酵母菌的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。

④染色约0.5h后再进行观察，注意死细胞数量是否增加。

⑤用0.05%吕氏碱性美蓝染液重复上述操作。

2、的观察

在载玻片中央加1小滴革兰氏染色用碘液，然后在其上加3小滴水，取少许酵母菌苔放在水-碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。

五．实验报告：

1．结果

绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征。

2．思考题

①吕氏碱性美蓝染液的浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析其原因。

②在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌。

附：

1、吕氏碱性美蓝染液

A液：美蓝（methylene blue） 0.6g

95%酒精 30Ml

B液：KOH 0.01g

蒸馏水 100Ml

2、革兰氏碘液

碘片 1g

碘化钾 2g

蒸馏水 300Ml

先将碘化钾放在少量的水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，等碘片全溶后，加足水分、即成。

每四人一个实验台：

接种环４根，酒精灯４盏，菌种1支（酵母菌）

载玻片３片／人，染色体2瓶，蒸馏水１瓶，试管架２个，洗瓶４个

废液缸４个，小号滤纸２盒，显微镜４台（附香柏油）

［油镜集中清洁：二甲苯１瓶，擦镜纸２个，在前台］