2种流感病毒的检测方法结果比较

2种流感病毒的检测方法结果比较

发表时间：2017-09-11T13:50:44.197Z 来源：《心理医生》2017年22期作者：刘磊

[导读] 探讨不同的流感病毒检验方法的应用效果。

（黑龙江省牡丹江市疾病预防控制中心微生物检验科黑龙江牡丹江 157021）

【摘要】目的：探讨不同的流感病毒检验方法的应用效果。方法：选取160例急性呼吸道感染的患者作为研究对象，对其分别实施了胶体金免疫层析技术（GICA）和实时荧光RT-PCR两种方法进行相关流感病毒检测，并对比分析两种方法的检验结果。结果：RT-PCR检测法阳性患者有78例，阳性率为48.75%；GICA检测法阳性患者有73例，阳性率为45.63%。通过比较分析两种方法的检测结果发现结果一致的患者数为61例，检测结果差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：GICA检测方法操作便捷，检验快速且具有较高的准确率，是流感病毒疫情及临床检验中有价值的筛选方法。

【关键词】流感病毒；检验方法；比较研究

【中图分类号】R511 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2017）22-0319-02

流行性感冒简称流感，是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，已成为人类面临的公共健康问题。流感发病率高、传染性强、潜伏期短。流感患者与其它呼吸道感染患者临床表现相似，然而治疗方案不同，多数研究表明早期治疗效果更佳。因此，快速确定患者病原、早诊断、早治疗是防控流感的重要手段[1]。目前流感病毒分为甲、乙、丙三型。甲型流感病毒常以流行形式出现，能引起世界性流感大流行；乙型流感病毒常引起局部暴发，不引起世界性流感大流行；丙型流感病毒主要以散在形式出现，侵袭婴幼儿，一般不引起流行。因此对于甲型和乙型流感病毒抗原检测具有重要的意义。本研究采用胶体金免疫层析技术（GICA）和实时荧光RT-PCR两种方法进行相关流感病毒检测，现将对比结果报告如下。

1.资料与方法

1.1 资料来源

根据《全国流感监测方案（2010年版）》中的定义，ILI指发热（体温≥38℃），伴咳嗽或咽痛之一者，缺乏其它实验室确定诊断依据的急性上呼吸道感染患者。我中心监测哨点医院将采集的流感样病例咽拭子标本送往本中心，本次研究样本160例，年龄≥14岁，其中男74例，女86例。

1.2 方法

1.2.1样本提取方法将压舌板抵于患者的舌根部，将两根咽拭子同时探入患者的咽部，将扁桃体隐窝处上皮细胞组织取下。把一根咽拭子放入pH值在7.4～7.6的Hank's溶液中，而将另一根咽拭子放入胶体金快速检测的裂解液中。

1.2.2 GICA检测方法对装有样本的细胞裂解液进行充分搅拌，用吸管取3-4滴裂解液于检测卡的加样孔中，待15min后观察分析检测结果。若检测区和对照区分别出现一条红色带，则表示检测结果为阳性；若仅对照区出现一条红色带而检测区未出现红色带，则表示检测结果为阴性。

1.2.3 RT-PCR检测方法提取方法为kingfi sher duo自动核酸提取仪及其配套试剂提取病毒核酸，检测试剂为上海之江的甲型流感病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR法），PCR仪器为美国ABI 7500型实时荧光定量PCR扩增仪。

1.3 统计学处理

应用SPSS 17.0统计软件，计数资料组间比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2.结果

RT-PCR检测法阳性患者有78例，阳性率为48.75%；GICA检测法阳性患者有73例，阳性率为45.63%。通过比较分析两种方法的检测结果发现结果一致的患者数为61例，检测结果差异无统计学意义（P＞0.05）。

3.讨论

流感病毒(influenza virus)属于正粘病毒科(Orthomyxoviridae)，核酸是分节段的单链RNA。病毒颗粒为球形，直径80-120nm，具有包膜。根据流感病毒核蛋白(nucleoprotein，NP)和基质蛋白(matrix protein，M)抗原性不同，将流感病毒分类为甲型(influenza virus A)、乙型(influenza virus B)、丙型(influenza virus C)3个属；近年发现流感病毒第4个属，即丁型流感病毒(influenza virus D)，主要感染牛和猪。再根据病毒表面血凝素(haemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(nueraminidase，NA)抗原不同，将甲型流感病毒分为诸多亚型，即H1-H18，N1-N11。水生鸟类是流感病毒亚型天然宿主(natural reservoir)。甲型流感病毒感染禽类(野生和家禽)和哺乳类，如人、猪和马等；乙型和丙型流感病毒感染宿主基本为人类。流感潜伏期为1～5d。传播途径通过打喷嚏、咳嗽及说话时产生的细小液滴直接吸入传播。近代流感发生多次全球性感染，甚至大流行，造成较多患者死亡，包括1918年西班牙流感(H1N1)、1957年亚洲流感(H3N2)、1968年香港流感(H1N1)、1997年香港高致病禽流感(H5N1)、2009年墨西哥新甲流(H1N1)以及2013年上海高致病禽流感(H7N9)等。据世界卫生组织（World Health Organization，WHO）估计在非大流行的正常年份，流感病毒每年仍然感染全球5%～15%人口，造成约50万人死亡[2]。流感临床表现多以发热突然发病，体温38～40℃，持续1～5d，可伴有咽喉痛、咳嗽、头痛、肌肉酸痛、畏寒和全身不适。流感临床表现并非特异，与其他呼吸道病原体感染不易区别。临床诊断疑似流感经病毒培养或核酸检测最终确认的仅有12.8%～26.2%。因此，流感的实验室诊断是必要的，尤其对流感病毒神经氨酸酶抑制剂(infiuenza virus neuraminidase inhibitors)一线药物治疗，以及公共卫生感控尤为需要。

目前，流感病毒感染进行实验室诊断的方法有病毒培养、RT-PCR及GICA等。流感病毒培养纵然是检测的金标方法，可分别进行病毒分型及抗原变异分析的检测，但由于其检测周期过长，而操作十分繁琐，进而对检验人员的自身素质有着极高的要求，不适合爆发式疫情进行病原学的快速诊断[3]。RT-PCR检测法也有许多优点，但RT-PCR的实验室需大型专用设备仪器，且实验室分区严格而要求洁净程度高，造成了极高的检验成本。GICA检测法是用胶体金作示踪物用于抗原抗体间反应的新型的标记技术，该技术有着快捷、简便、准确、操作误差小、稳定性好及检验成本低廉等优点，因此在免疫学检测中得到了广泛的重视及应用。胶体金免疫层析法检测流感病毒具有较强的特异性、良好的稳定性与便捷的操作方法，且灵敏度能达到临床的应用要求，可以为临床的诊断、治疗及隔离提供有效的参考依据。

本研究结果显示，RT-PCR检测法阳性患者有78例，阳性率为48.75%；GICA检测法阳性患者有73例，阳性率为45.63%。通过比较分