CD4+T淋巴细胞检测内部质量控制

胞的进行性损耗在一定程度｝二反映ｒ感染者免疫系统破坏情 况及其向艾滋病期进展的程度｜２“。根据ＣＤ４ Ｔ淋巴细胞计
数结果可以显著提高对艾滋病病期的及时监测“］，在对感染 者进行药物治疗前可根据ＣＤ４１细胞计数进行分组，并指导临
１．１．３采样量
成人采集静脉血５ ｍＬ，采集儿童静脉血样品
建议用儿童型注射器和小试管（２ ｍＬ），采集婴儿样品较为困 难，用小试管采集０．５～１ ｍＬ即可。所有血样应立刻注入事 先加入适当抗凝剂的试管。 １．１．４标本混匀 采集的静脉血注人抗凝管后，立即轻轻颠
１．１．５影响因素ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞水平会受到一些因素的
影响，采血前应了解患者的状况。服用肾上腺皮质激素，急性 病毒感染以及术后患者等均不宜采血。 １．２标本运输
１．２．１
病毒治疗措施的实施及接受抗病毒治疗的艾滋病患者的增多， 能否获得患者准确可靠的免疫功能检测结果，对ＣＤ４＋Ｔ淋巴
细胞计数检测质量控制也必烙提出更高的要求。因此，做好
［１］黄承荣，颜娟．三酰甘油、总胆固醇试剂对总胆汁酸测定 的干扰及排除ＥＪ３．临床检验杂志，２００６，２４（３）：２２０．
［２１陈继中，李旭光，唐吉斌．试剂携带污染对血清总胆汁酸
测定结果的影响及消除措施ＥＪ３．检验医学，２００６，２１（３）：
２２８—２３０．
［３］于嘉屏．全自动生化分析仪及其试剂间化学污染对检测 结果的影响［Ｊ］．中华检验医学杂志，２００７，３０（１１）：１３０１—
Ｍｅｄ，１９９５，１５５（１４）：１５３７—１５４２．
ＡＮ，Ｌｅｅ ＣＡ，Ｅｌｆｏｒｄ
３试剂质控 所用试剂应在有效期内。试剂严格按要求保存。使用不 同批号试剂时，需要进行平行实验。即新批号试剂在测定质控 品（已知细胞数的商业质控品）时能够获得与原试剂相同的
结果。 ４过程质控 ４．１标本处理加入标本应采用反向加样法，确保加样的精
ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞检测的内部喷控对获得准确的ＣＤ４＋Ｔ淋巴 细胞至关重要。笔者长期从事免疫学检验质量管理工作，发现 疾病预防控制中心、医院、血站检验科在实际工作中存在一些 比较普遍的问题或疑问。根据自身实践经验，结合相关专著，
对怎样做好ＣＤ４＋检测内部质量控制简要介绍如下，供实验室
安全运输标本
按照国务院“病原微生物实验室生物
ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞计数在人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）感染的 实验窀研究及临床诊治中有莺要意义，是艾滋病诊断、病程监 控、治疗以及疗效评价等方面的重要指标“。ＣＤ４ Ｔ淋巴细
号标签贴于抗凝管上，并在ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞检测样品交接单 上注明采样日期和时间。 １．１．２采血时间鉴于ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞数日问自然变化的 个体差异凹］，每一患者采样时间应尽可能集中在某个相同的时 段。
１．３．１
但不超过抗凝管容积的水平，以保证抗凝剂的最终有效浓度。 尽可能采用真空管，避免使用注射器采集血样。将被检者ＩＤ
标本接收检测实验室应指定专人接收标本。收到标
本后，应填写ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞检测标本交接单。检查标本质
万方数据
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检验医学与临床２００９年２月第６卷第３期Ｌａｂ Ｍｅｄ
Ｃｌｉｎ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２００９，Ｖ０１．６，Ｎｏ．３
安全管理条例”和国际传染病物质航空运输的标准，进行３层
包装。
１．２．２标本运输条件３７℃以上的温度会破坏细胞，使血液
学和流式仪的检测结果受到影响。在室温（１８～２５℃）保存和 运输标本，避免极端温度（结冰或大于３７℃）。高温季节，需用 隔热容器盛装标本，并将其置于有冰袋和吸热物质的容器中。 如标本不能立即送到实验室或送到后不能立即检测，应存放于
ｐｒｅｄｉｃｔｏｒ ｏｆ ｔｈｅ ｄｕｒａｔｉｏｎ
ｏｆ ｈｉｇｈｌｙ ａｃｔｉｖｅ
ｔｉｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ ｔｈｅｒａｐｙｉｎｄｕｃｅｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕ— ｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｖｉｒｕｓ ５３３．
ｌｏａｄ［Ｊ］．Ｉｎｆｅｃｔ
Ｄｉｓ，１９９９，１８０（２）：５３０—
［Ｊ］．ＭＭＷＲ，１９９５，４４（ＲＲ一４）：１—１１． ［７３
Ｉｓｌａｍ Ｄ，Ｌｉｎｄｂｅｒｇ ＡＡ，Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｓｏｎ ｃｅｌｌ
ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ
Ｂ．Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ
ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｌｅｕ－
ａｓ
ｋｏｃｙｔｅ ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｔｉｖｅ ｍｕｈｉｃｏｌｏｒ ｆｌｏｗ （２）：１２８—１３４．
同。而含较低浓度ＣＥ和ＣＨｏＤ的ＣＨ Ｒ２试剂污染组对ＵＡ 的测定产生的影响明显小于ＨＤＬ—ｃ和ＬＤＬ－Ｃ Ｒ２试剂污染组 对ＵＡ测定产生的影响。这再次说明先测定ＬＤＬ—Ｃ或ＣＨ，『『ｉｉ 后测定ｕＡ引起其测定值增高，应该是ＬＤＬ．Ｃ和ＣＨ榆测试 剂中的某种化学成分比例不当或质量的改变引起比色杯清洗 不完全造成的污染。以上试剂污染情况反应到试剂厂家，试剂 厂家调整了试剂的配方已解决了试剂污染问题，但因厂家保密 的需要没有向本实验室透露试剂配方调整情况。 当日常检测工作中出现顺序性异常结果时．将出现异常结 果的检测项目及其前一个项目单独复检结果又恢复正常，多是
４．２
［５３
Ｍｅｒｃｏｌｉｎｏ ＴＪ。Ｃｏｎｎｅｌｌｙ ＭＣ，Ｍｅｙｅｒ ＥＪ，ｅｔ ａ１．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ａｂｓｏｌｕｔｅ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｇｒａｔｅｄ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ ｓｙｓｔｅｍ：ａ ｎｅｗ Ｔ ｃｅｌｌ ｓｕｂｓｅｔ ４８—５９．
量、数量并核对标识。溶血、凝血、结冰、遗漏或采血时间超４８ ｈ的标本应视为不合格标本，不可检测。如果标本较热或较 冷，但没有明显的溶血或结冰，可以进行处理检测，但要在接收 记录以及结果报告表上详细注明接收时不正确的温度条件或
的原始文件、报表和报告。保存期至少２年，或按照当地政府 或有关部门规定要求保留更长的时间。 总之，实验室每一个环节都与检验质量密切相关，实验室
工作人员只有认真对待，耐心细致地做好各方面的工作，才是 检验质量可靠性的根本保证。 参考文献
存在溶血的程度。 １．３。２标本贮存标本到达后，应及时进行处理，如不能马上
处理，应在室温（１８～２５℃）保存，避免极端温度（结冰或大于 ３７℃）。标本应在采集后４８ ｈ内完成检测。 ２仪器设备质控
２．１
Ｅ１３
床医生选择合适的时机用药及预防机会性感染。美国公共卫
生署建议：所有的ＨＩＶ感染者应该每隔３～６个月对ＣＤ４＋Ｔ 淋巴细胞水平进行监控［６］。流式细胞术（ＦＣＭ）被认为是分析 血液淋巴细胞免疫表型的标准方法，但其结果受到实验操作过 程中多种因素的影响｜７ｆ８］。同时，随着我国艾滋病患者免费抗
倒抗凝管６～８次，使血液与抗凝剂充分混匀，防止血液凝固。
ｏｒ
时，荧光小球获取数量应超过２ ０００。分析时察看仪器自动圈
ｐｅｒｉｎａｔａｌｌｙ ｅｘｐｏｓｅｄ
ｔｏ
ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ
门情况，不正确时须手动圈门。
５全血质控 ５．１稳定的全血标本可用于室内质控。在ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞 测定过程中，同时使用室内质控品，可帮助分析和判断仪器的 准备和分析是否均处于最佳状态。 ５．２实验室需绘制每ＦＪ质控图。 ５．３每日质控图应由参加ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞检测的工作人员
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Ｉ．ａｂ
Ｍｅｄ Ｃｌｉｎ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ
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次之，对ＵＡ的检测已产生了较大的影响，ＣＨ检测试剂中ＣＥ
和ＣＨＯＤ的浓度最低，对ＵＡ的检测产生的影响反而最大，且
由于发生试剂间交叉污染所致。各个试剂厂家所提供的产品 说明一般都不能全面反应试剂组成情况，而因试剂成分的复杂 多样性，各仪器状况的独特性，可能发生的试剂间交叉污染情 况也不可能相同一致，因此需要通过试验才能发现试剂交叉污 染可能带来的干扰。本试验方法可作为排除试剂间交叉污染 的参考。 参考文献
参考．以期为准确的检测ＣＤ４＋Ｔ细胞数提供参考标准，保证
结果的准确性和可靠性。 ｌ样本质控 １．１样本采集 １．１．１抗凝管的准备和标记选择含有乙二胺四乙酸二钾的 采血管（２ ｍＬ或５ ｍＬ）作为血样采集管。应保证采血量达到
室温环境下，不得冰冻保存。特殊情况下按要求保存和运输。
标本应在４８ ｈ之内送到检测实验室［９］。 １．３标本接收和贮存
确性。加入荧光抗体应过饱和，避光孵育，时间要充分，以确保 细胞抗原全部结合标记。加入溶血素应充分，避光孵育，时间 要充分，确保红细胞裂解彻底，防止影响流式仪的检测结果。 标本处理后尽快上机检测，防止荧光衰减影响流式仪的检测结
果。若不能即刻检测，应将标本储存于４～１０℃冰箱。已经加 入荧光微球的标本应在６ ｈ内上机检测。检测时间必须遵循 不同仪器的相关标准操作程序。
ｃｏｕｎｔ
ｗｉｔｈ
ａｎ
ｉｎｔｅ—
ｃｏｎｃｅｐｔ
ｆｏｒａｂｓｏｌｕｔｅ
ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，１ ９９５，２２（１）：
ｒｅｖｉｓｅｄ ｆｏｒ
［６］ＣＤＣ．１９９５
ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ
ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ
ａｇａｉｎｓｔ
上机
上机前充分混匀，上样管底部不能有气泡。获取
Ｐｎｅｕｍｏｃｙｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ ｆｏｒ ｃｈｉｌｄｒｅｎ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ
引起的误差并不是恒定的。据此分析本实验窀产生的试剂间
的污染不应是比色杯太陈旧吸附作用增强或冲洗站的清洗刷 破损而引起，可能是试剂中的复杂的化学成分引起比色杯清洗 不完全造成的污染。笔者又用试剂污染试验比较分析，用含 ＣＥ和ＣＨＯＤ浓度几乎相同的ＨＤＬ－Ｃ和ＬＤＩ．－Ｃ Ｒ２试剂按一
定比例直接污染ＵＡ的检测．对ＵＡ的测定产生的影响几乎相
［３］Ｐｈｉｌｌｉｐｓ
３９２．
Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｓｅｒｉａｌ ＣＤ４
ｃｏｕｎｔｓ
ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ
ＡＩＤＳ［Ｊ］．Ｌａｎｃｅｔ，３３７（８７３８）：３８９～
［４］Ｍｉｌｌｅｒ
ｃｏｕｎｔ
Ｖ，Ｓｔａｓｚｅｗｓｋｉ Ｓ，Ｓａｂｉｎ Ｃ，ｅｔ ａ１．ＣＤ４
ａｓ ａ
ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ～
ａｎ—
ａｓ２ ｓｅｓｓｅｄ ｗｉｔｈ ｑｕａｎｔｉｔａ—
ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ－ｄｅｆｉｎｉｎｇ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｄ‘ ｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ—ｒｅｌａｔｅｄ ｌｅｓｃｅｎｔ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｉｎｔｅｒｎ
ｉｌｌｎｅｓｓｅｓ［Ｊ］．Ｔｈｅ
Fra Baidu bibliotek
Ａｄｕｌｔ ａｎｄ Ａｄｏ～
ｏｆ ＨＩＶ Ｄｉｓｅａｓｅ
Ｐｒｏｊｅｃｔ Ｇｒｏｕｐｌ Ａｒｃｈ
ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｌ［Ｊ１．Ｊ
前应先用仪器生产厂家的质控品校准仪器．质控品通过测试后 方可检测标本。依据试验所用荧光单克隆抗体所带荧光素选 择对应的通道，建立分析窗口。专门设置的分析窗口取决于流 式细胞仪荧光性的范围通道特性与所使用的抗体组合。分析
窗口的荧光范围由相应通道的特性决定。设计分析窗口在特 定设置情况下，通过流式检测的荧光范围。 ２．２设备设备中移液器一定要定时进行校准，使用移液器 吸或吹样时用力都要均匀连续，保证取样的准确性。
１ ３０２．
（收稿Ｆｊ期：２００８—０８—２７）
ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞检测内部质量控制
乔恩发，陈会超，杨
【关键词】ＣＤ４
莉，马艳玲（云南省疾病预防控制中心性病艾滋病防制中心
Ｔ淋巴细胞；
６５００２２）
人类免疫缺陷病毒；
文献标志码：Ｂ
内部质控 文章编号：１６７２—９４５５（２００９）０３—０２３５－０２
中图分类号：Ｒ４４６．６３
Ａｃｑｕｉｒ
Ｉｍｍｕｎｅ Ｄｅｆｉｃ Ｓｙｎｄｒ Ｈｕｍ Ｒｅｔｒｏｖｉｒｏｌ，１９９６，１１
（２）：１６１—１６９．
［２Ｊ
Ｈａｎｓｏｎ ＤＬ，Ｃｈｕ ＳＹ，Ｆａｒｉｚｏ ＣＤ４＋Ｔ—ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ
ａｔ
ＫＭ，ｅｔ
ａ１．Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ
ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ａｃｑｕｉｒｅｄ ｉｍｍｕｎｏ～
Ｇｏｌｄｍａｎ ＡＩ，Ｃａｒｌｉｎ ＢＰ，Ｃｒａｎｅ ＬＲ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｏｆ ＣＤ４ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｄｄｌ
ｏｒ
ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
ｏｆ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｕｓｉｎｇ
仪器
应按照生产厂家的要求进行校准。正式检测标本
ｄｄＣ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ ＨＩｖ