谷氨酸脱羧酶抗体检测试剂盒酶联免疫法说明书

谷氨酸脱羧酶抗体检测试剂盒（酶联免疫法）说明书
【产品名称】
通用名称: 谷氨酸脱羧酶抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名称: Test Kit for Antibody to Glutamic Acid Decarboxylase (ELISA)
【包装规格】
48人份/盒。

【预期用途】
本试剂盒用于体外定性检测人血清中谷氨酸脱羧酶(GAD)抗体水平。

GAD抗体是Ⅰ-型糖尿病特异性标志性抗体之一。

用于Ⅰ-型糖尿病、缓进型或称隐匿型Ⅰ-型糖尿病（LADA）辅助诊疗 [8]。

【检验原理】
本试剂盒应用间接酶联免疫吸附试验原理。

在微孔板预包被GAD抗原, 加入样本稀释液及待检样本进行温育, 样本中存在GAD抗体与包被抗原形成“包被抗原-抗体”复合物, 洗板去除不与包被抗原结合物质; 加入酶结合物（辣根过氧化物酶标识抗人IgG抗体）进行第二次温育, 酶标二抗将与“包被抗原-抗体”复合物结合, 形成“包被抗原-IgG抗体-酶标二抗”复合物; 再次洗板后加入显色剂, 复合物上连接HRP催化显色剂反应, 生成蓝色产物。

终止反应后, 变为黄色。

若样本中无GAD抗体, 不显色或很浅色。

【关键组成成份】
表1. 谷氨酸脱羧酶抗体检测试剂盒（酶联免疫法）组成成份
【储存条件及使用期】
1. 储存条件: 2～8℃避光贮存。

2. 使用期: 12个月。

3. 打开后包被板条用自封袋密封, 2～8℃避光贮存不超出2周。

【适用仪器】
含波长450nm酶标仪。

【样本要求】
1. 本试剂使用样本为人血清。

2. 不能检测含有叠氮钠样本, 因叠氮钠抑制辣根过氧化物酶活性; 不能检测含有悬浮纤维蛋白或聚集物、重度溶血样本。

3. 样本中应无微生物。

无菌分离样本可在2～8℃贮存1周, 低于-18℃贮存三周, 避免反复冻融。

4. 使用前请将样本置于室温（10～30℃）平衡30分钟以上, 冷冻样本试验前需解冻至室温（10～30℃）并混匀。

【检验方法】
1. 配液: 用蒸馏水或去离子水将1瓶浓缩洗涤液全部稀释至450ml。

2. 样本稀释: 取90μl生理盐水于塑料试管中, 再加10μl样本混匀。

阴、阳对照已经1: 10 稀释可直接使用。

3. 编号: 将样本对应微孔按序编号, 每板设阴性对照3孔、阳性对照2孔和空白孔1孔（双波长测定可不设空白孔）。

4. 加样: 每孔加100μl（或2滴）样本稀释液, 空白孔不加。

分别在对应孔中加稀释过样本或阴、阳对照10μl, 轻轻振荡混匀。

5. 温育: 用封板膜封板后放入37±1℃温箱温育45±1分钟。

6. 洗涤: 小心揭掉封板膜, 用洗板机洗涤5次（也可手工洗板）, 每次浸泡30秒, 洗涤时各孔均需加满洗涤液, 最终一次在吸水纸上尽可能拍干。

7. 加酶: 摇匀后每孔加100μl（或2滴）酶结合物, 空白孔不加, 轻轻振荡混匀。

8. 温育: 用另一张封板膜封板后放入37±1℃温箱温育30±1分钟。

9. 洗涤: 操作同第6步。

10. 显色: 每孔先加50μl（或1滴）显色剂A, 然后加50μl（或1滴）显色剂B（包含空白孔）, 37±1℃避光显色10±1分钟。

11.测定: 每孔加50μl（或1滴）终止液终止反应, 轻轻振荡混匀, 10分钟内在波长450nm下分别测定各孔吸光值A值。

（单波长酶标仪需空白孔调零, 双波长酶标仪不需空白孔调零）
【阳性判定值】
1. 阴性对照质控正常范围: 正常情况下, 阴性对照孔A值≤0.1 （若有1孔阴性对照A值大于0.1应舍弃, 若有两孔或两孔以上阴性对照A值大于0.1, 应反复试验。

若阴性对照平均A值小于0.05, 则按0.05计算）。

2. 阳性对照质控正常范围: 正常情况下, 阳性对照孔A值≥0.60 （若有1孔阳性对照A值小于0.6应舍弃, 若两孔阳性对照A值都小于0.6, 应反复试验）。

3. 界限值（CUTOFF值）计算: CUTOFF值 = 0.25 + 阴性对照平均A值。

4. 阴性判定: 样本A值＜CUTOFF值者为GAD抗体阴性。

5. 阳性判定: 样本A值≥CUTOFF值者为GAD抗体阳性。

注: 本试剂盒界限值是基于150例健康人血清吸光度（A）值平均值+2SD而得出。

【检验结果解释】
1. 因GAD抗体仅是Ⅰ-型糖尿病血清学关键指标之一, GAD抗体阴性并不排除Ⅰ-型糖尿病, 还需结合其她临床指标判定。

2. GAD抗体阳性需用其她方法进行Ⅰ-型糖尿病确定。

【检验方法不足】
1. 本试剂盒不能作为定量试剂使用。

2. 仅用于人血清样本检测。

【产品性能指标】
1.外观: 试剂盒各组份齐全、完整。

标识应清楚、易识别。

液体试剂透明、无渗漏、无沉淀或絮状悬浮物。

抗原包被板包装袋应密封性好, 无破损、无漏气现象。

2.净含量: 各液体组份净含量不少于标示值。

3. 临界值:
3.1 对临界值阳性参考品（A值为0.40）检测, 检测次数≥20, 结果阳性率应≥95%。

3.2 对临界值阴性参考品（A值为0.20）检测, 检测次数≥20, 结果阴性率应≥95%。

4. S/CO值反复性: 对反复性参考品（A值为0.60）检测20次, 变异系数CV≤15%。

5. 批间差: 抽取三个批次试剂盒, 每个批次40人份, 按3项临界值要求检测, 各浓度反应结果应一致。

【注意事项】
1. 本试剂盒仅用于体外诊疗, 操作应严格根据说明书进行。

2. 使用前请将试剂盒平衡至室温（10～30℃）。

3. 加液时提议使用加样器, 若使用滴瓶滴加, 请将滴瓶垂直, 挤出头2滴舍弃, 再依次加入。

4. 加样器要定时校准; 加入不一样本或不一样试剂组分时, 应更换加样器吸头, 以防交叉污染。

5. 所用样本、质控、废液和废弃物都应按传染物处理。

阴阳性对照质控为人血清, 已灭活, HBsAg、 HIV-1/2抗体、 HCV
抗体及梅毒抗体四项检测为阴性, 但不排除其传染性。

6. 终止液为2M H2SO4, 使用时注意安全。

【参考文件】
1. Henry J, De Aiapurua, Harrison LC, et al. An ELISA for antibodies to recombinant glutamic acid decarboxylase in IDDM [J]. Diabetes,1992,41:1182
2. Karlsen AE, Hagopian WA, Petersen JS, Boel E, Dyrberg T,Grubin ce, et al.Recombinant glutamic acid decarboxylase (representing the single isoform expressed in human islets) detects IDDM-associated 64,000-Mr autoantibodies [J]. Diabets 1992,41:1355-9
3. Tuomilehto J, Zimmet P, Mackay IR, Koskela P, Vidgren G, Toivanen L, et al. Antibodies to glutamic acid decarboxylase as predictors of insulin-dependent diabetes mellitus befor clinical onset of disease [J]. Lancet 1994;343:1385-5
4. 中国生物制品规程（）[M].中国生物制品标准化委员会编. 化学工业出版社, .6
5. 医学统计学 [M]. 颜虹主编. 人民卫生出版社, .7
6. 免疫学与免疫学检验 [M]. 刘辉主编. 人民军医出版社, .8
7. 临床检验操作规程（第3版）[M]. 中国卫生部医政司. 东南大学出版社, .10
8. 检验与临床: 现代试验诊疗学（第2版）[M]. 刘人伟编著. 化学工业出版社..1
【基础信息】
注册人/生产企业名称: 北京利米生物科技有限企业
住所: 北京市丰台区科技园富丰路4号工商联科技大厦A座1001室邮政编码: 100070
联络方法: 电话: 传真:
售后服务单位名称: 北京利米生物科技有限企业联络方法: 电话: 传真:
生产地址: 北京市丰台区科技园富丰路4号工商联科技大厦A座1001室
生产许可证编号: 京药监械生产许0092
【医疗器械注册证编号/产品技术要求编号】
京械注准2400062
【说明书核准日期及修改日期】
1月16日。