磷脂脂肪酸的测定方法

PLFA分析采用温和碱性甲酯化方法[100]。

实验步骤：
1）称3g土壤与15ml 0.2M甲醇化的KOH混匀，放入离心管中。

2）在37°C培养1h，每10min漩涡震荡一次。

3）加入3ml 1.0M冰醋酸10ml正己烷，分层。

4）4800r离心15min。

5）取上清移至试管，在氮气下吹干。

6）将试管内磷脂脂肪酸溶解于0.5ml 1:1甲基叔丁基醚:正己烷，转移到气质联用色谱分析用小管待分析。

将处理好的样品用Agilent 6890GC/5973MS气质联用仪进行分析，参数设定如下：
色谱柱：利用处理后的石英毛细管柱(0.25mm×30m×0.25μm)。

样口温度为250°C，不分流进样。

采用恒流模式，流速为0.8ml/min，载气为高纯氦气。

程序升温：80°C (保持2min)，以50°C /min的速度升至150°C (保持2min)，以
2.5°C /min的速度升至195°C (保持3min)，再以2.5°C /min的速度升至
240°C (保持5min)。

电离方式：EI(70eV)。

离子源温度：150ºC。

四极杆温度：230ºC。

接口温度：280°C。

扫描方式：SIM。

C14:0是外标物。

磷脂脂肪酸含量计算公式
PLFA(nmol/g土样)=（PPLFA×S×V）/(POSTD×D×R×W)
式中PPLFA和POSTD分别是样品和标准物质的峰值面积，S为外标标准物质的浓度（ng ul-1），V为样品的测定体积（ul），R为分取倍数，D为稀释倍
数，W为烘干土质量（g）。