液基薄层细胞制片技术与宫颈细胞学诊断

・专家论坛・液基薄层细胞制片技术与宫颈细胞学诊断

马博文　(新疆医科大学肿瘤医院,乌鲁木齐　830011)

[摘要]　通过对宫颈细胞学诊断的历史回顾,介绍了液基薄层细胞制片技术在国内外开展的情况及其利弊,提出

我国医疗单位引进时应注意的问题,对Bethesda系统给予评价和介绍,强调我国细胞诊断学专业应规范诊断标准、

加强专业人员培养、建立质量控制体系及整合资源。

[关键词]　液基薄层细胞制片;　宫颈细胞学;　诊断

[中图分类号]　R36113　[文献标识码]　A　[]1007-8096(2006)01-0001-07

1　历史回顾

早在1858年德国著名医师Rudolph Virchow (1821—1902)首先将细胞理论应用于病理学,被公认为是细胞病理学的奠基人。追根溯源,细胞学从细胞(cellula)的发现到细胞学说的形成,都是作为一种研究生物学的方法而独立于其他学科。不仅如此,它更早于病理组织学的出现。由于显微镜的改进,尤其是19世纪初消色差物镜的使用,使细胞学成为一门新兴的学科,细胞学被称之为“组织学之前对细胞的研究”。Virchow利用显微镜研究病理组织和细胞,从而确立了病理学领域的一个主要学派———细胞病理学派,并在他的细胞谱系理论中假定,目前的细胞来源于预先存在的细胞(这些细胞是在一个未打破的血流系中),这与当今的干细胞理论惊人地相似。无论如何,这种研究“由细胞单位特性而表现出正常的或病理的现象”的方法科学,自一开始就与病理学结下了不解之缘。

自Papanicolaou(1883—1962)将宫颈细胞学用于对宫颈癌的诊断并于1943年发表了用阴道涂片诊断子宫癌的著名论文以来,诊断细胞学被接受为医学中通用而有效的学科。作为“现代细胞学之父”, Papanicolaou于20世纪20年代公布了用细胞学方法评估激素的事实;1928年他建议将这种方法用于宫颈癌的诊断。同年的早些时候,Babes独立地宣布了同样的事实。细胞学被认为是有价值的诊断工具。

从那时起,有关细胞学技术、结果和在身体各系统应用之报道的数量在美国和世界多数地区占据了优势。细胞学技术现在已得到了认可和接受。

Papanicolaou的贡献是巨大的,巴氏涂片已成为宫颈细胞学的代名词。直到今日,全世界每年大约要做1亿个巴氏测试。准确的诊断和筛查使宫颈癌的死亡率有了很大程度的降低,使晚期癌的发生率大幅度下降,早期癌则不断被发现。迄今为止,没有一种诊断手段具有如此巨大的潜能!

细胞学说形成以后,由于出现了供显微镜组织切片的新技术,使组织学得到长足发展,但百余年来细胞学的进展是缓慢的,这中间的原因有历史的,有观念的,也有技术难度的,但无论如何细胞学被越来越多地得到认可。宫颈涂片与细胞学诊断在经历了半个多世纪的坎坷经历后终于出现了应用型的制片机———液基薄层细胞制片装置。

2　液基薄层细胞制片技术

早在20世纪60～70年代,就有不少欧、美医疗单位将滤膜手工制片用于诊断细胞学,并且对膜的性质描述也和当前过滤膜基本相同。目前所使用的几种制片装置和方法并非有什么特别要求而难控制,只是开发商把这一过程机械化了。

液基薄层细胞制片技术是指薄层制片自动装置制备细胞学标本(涂片或印片)的技术。这些装置研发于20世纪末期,主要有两家美国公司的产品,即Thin Prep薄层制片技术装置(又称T CT)和Auto Cyte PREP液基细胞薄层制片技术装置(又称LCT)。分别于1997年和1998年开始投产。T CT和LCT技术均是液基薄层细胞技术的细胞学制片装置(制片机),如同病理组织切片机一样,只是制片的机器。211　Thin Prep薄层制片技术　Thin Prep薄层制片技术是美国赛迪(CY TIC)公司研制和生产的用于制作细胞学标本的装置,TP涂片在恒定的面积(约2 cm2)上,均匀地分布着很薄的一层细胞,克服了传统制片技术存在的材料太厚、细胞重叠、背景模糊和染色不佳等问题,同一个标本可重复制片。

保存细胞的溶液瓶是内装乙醇为主的保存液的

塑料小瓶,室温中保存细胞可达1周以上。转送细胞过滤器(T ran Cyto filter)是一次性使用的塑料柱状桶,其一端开放与过滤器的盖相结合,另一端为平滑有孔的滤膜,根据其原理,又被称为微孔滤膜法制片技术。

该机制片过程分为3个步骤:①分散:仪器旋转瓶内的过滤柱状桶分离随机聚合在一起的细胞微粒;②收集:轻微的负压作用于滤膜上,将细胞吸附在滤膜表面;③转送:过滤柱状桶又转到玻片上,由于细胞的自然吸附性和玻片的静电作用,细胞对玻片比对滤膜更具附着力。玻片与滤膜分开并放入固定液容器中,固定后进行常规染色。

细胞稀少,显示较薄,但边缘部细胞较多,足以供诊断需要。

212　Auto Cyte PREP液基薄层细胞制片技术　Auto Cyte PREP液基细胞薄片装置是美国三路影像公司(T ripath Imaging Inc)的产品,这种装置与Thin PreP 都属细胞学自动制片装置。但其设计原理不同,该装置在自动制片前有一步离心过程,而非Thin Prep 装置的微孔滤膜技术,离心沉淀后的细胞更集中,经机器搅拌后采用自然沉淀法制成分布均匀的巴氏涂片。从观察效果看,与Thin Prep稍有不同,但不影响诊断,同时可进一步由Auto Pap细胞自动扫描图像分析设备进行电脑阅片及初筛,有进一步发展的潜力。两项同做显然收费较高。

Auto Cyte PREP机一次可制作48张涂片,耗时约2h,制成的涂片内容物为直径约113cm的圆形薄层物,其细胞分布均匀,有少量重叠但无牵拉变形,细胞无退化变性,染色效果好,符合诊断要求。同一病例可重复做涂片。观察时由于细胞的沉降有先后,产生的景深问题,需要不停转动微调,拍摄时取景有模糊之处,总体显示不在一个平面上。

213　CytoFast(赛涂)液基薄层细胞制片系统　是由意大利H ospitex公司生产,已经通过欧洲CE认证,该产品在欧洲上市以来已经广泛应用了10年,证实是一种好的液基薄层细胞制片装置。

赛涂系列有赛涂和赛涂S A两种,由震荡仪、细胞密度仪、离心制片机组成,其核心技术为:定量标准化细胞采集技术和比重离心制片技术。通过细胞密度仪测定每份样本中的细胞密度,由机内微电脑控制,根据细胞密度自动调整取样量,电脑控制进行自动加样,保证每张涂片的细胞量恒定在7万～10万个,薄层分布在直径17mm的阅片范围,可以保证制片细胞的均匀性,且可以方便阅读,真正地保证了涂片质量,有利于病理专家做出准确的诊断。

赛涂系列最大制片速度可达到36张/h,一次可以制片6张,每日制片量可达280张,完全可以保证各类医院的检测量。其操作简单易学,良好的自动化程度与工作效率完全适合大型医疗机构的使用。该装置有3种不同价位的机型可供不同标本量的医疗单位选择使用。

CytoFast所制作的涂片面积适中,细胞分布均匀,无重叠现象。尤其难能可贵的是在镜下观察时细胞的分布不存在“景深”问题,也就是说细胞在一个平面上,对于医师进行显微镜观察很方便,同时也有利于拍摄。

近年来,除上述已进入中国市场的较好的国外厂家生产的液基细胞制片装置外,还有一些半自动或手动的液基薄层细胞技术在陆续进入。

214　国产液基薄层细胞制片装置　近年来也陆续出现了国产的液基薄层细胞制片装置,湖北孝感宏翔科技开发公司获准生产的国产制片机,已经生产出改进型,使该产品的制片质量接近国外同类产品,更值得一提的是其耗材成本低,使其竞争力增强,有利于该装置的普及。

215其他液基薄层细胞制片技术　随着液基薄层细胞制片技术的推广,出现了多种人工和半自动的液基制片术。

Cytospin离心机式制片装置,又称细胞离心涂片机(Cytospin),是利用离心旋转的原理制备细胞学涂片的一种仪器,由于其兼有离心、过滤、旋转、转送等综合功能,成为细胞学实验室必备的仪器设备。该仪器每次可处理多个标本,对体液标本或细胞悬液标本较多的实验室来说,发挥的作用较大。

传统的细胞悬液标本需离心沉淀处理,程序较复杂,耗时长(一个小标本的处理时间在15min左右)。1956年Seal最先将微孔薄膜滤过技术(millipore filter)应用于收集混悬液中的癌细胞。近期由国内研制开发的细胞采集器简化了涂片的程序,缩短了标本处理的时间(一个标本的处理时间为3min左右)。

细胞采集器的关键技术是微孔滤膜技术,其孔径大小均等,几何形状确定,可截留大于孔径的任何微粒。宫颈标本使用孔径8μm的微孔滤膜,可获取包括上皮细胞在内的有形成分的浓缩制样,细胞成