假蒟甲醇提取物的抑制真菌作用

假甲醇提取物的抑制真菌作用

袁宏球1,孙丹2,张世瑞2

(1.中国热带农业科学院分析测试中心,海南海口571101;2.海南大学植物保护与环境学院,海南儋州571737)摘要　[目的]研究假甲醇提取物对几种植物病原菌的抑制作用。[方法]采用生长速率法测定假叶甲醇提取物对香蕉炭疽病菌等9种植物病原真菌的生物活性。[结果]假叶甲醇提取物在2mg /ml 的浓度下,对9种菌有一定的抑制率,对香蕉炭疽病菌、番木瓜炭疽病菌、香蕉枯萎病菌、西瓜蔓枯病菌的半数有效浓度(E C 50)分别为0.7849、0.7663、0.8913、1.6425m g /m l 。假叶甲醇提取物的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取组分对香蕉炭疽病菌和番木瓜炭疽病菌的活性表明,乙酸乙酯萃取物活性最高,抑制率分别为72.7%和88.3%。假甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物对香蕉炭疽病菌和番木瓜炭疽病菌的EC 50分别为0.5692、0.5446mg /ml 。[结论]证实假叶甲醇提取物中含有具有抑真菌活性的次生物质,该物质溶于石油醚、乙酸乙酯、正丁醇等有机溶剂。关键词　

假;真菌;抑真菌活性中图分类号　S 567.23+9 文献标识码　A 文章编号　0517-6611(2009)17-08044-02A ntifunga l Activities o f the Methanol Extra ct of Pip er s armentosum Y UA N Ho ng -qiu et al (Analys is an d T estin g Center ,C hines e Academ y of Tropical Agricultural Sciences ,Haikou ,Hainan 571101)A bstract [Objecti ve ]The in hibition of all m eth an ol extracts from P ipe r s ar ment os um agains t several plan t pathogenwas researc hed .[Method ]The bio -logical activit y of t he methanol extract of Pip er sa rm ento su m against 9kinds of plant pathogens s uch as banana anthracn os e was assayed wit h growth rate m eth od .[Results ]The res ults s howed t hat all methanol extracts at th e concentration of 2m g /ml displayed anti -fugal activity agains t 9kind s of fun gi .The effective con centration (E C 50)of the m eth an ol extract of the leafstalk against C .mu sa e ,C .pa pa ya e ,F .f sp .Cubence an d D .br yo nia e was 0.7849m g /ml ,0.7663m g /ml ,0.8913m g /ml and 1.6425mg /ml ,resp ectively .The methanol extract from the extraction method of ethyl acetate sho wed the highest anti -fugal activity agains t C .mu sa e and C .pa pa ya e among three treatment m et hod s of p etroleu m et her ,ethyl acetate an d n -b utan ol and its in -hibitory rate was 72.7%and 88.3%an d its E C 50was 0.5692mg /ml an d 0.5446mg /ml ,respectivel y .[Conclusion ]It was con firm ed that th ere was the second ary material ,which had fungicid al activity ,in the m ethan ol extract from Pip er sa rm ento su m and t he secon dary material could be solu ble in petroleum ether ,eth yl acetate ,b utanol and oth er organ ic solvents .Key w ords Pip er s ar men tos um ;Fun gi ;Fun gicidal activit y

作者简介　袁宏球(1963-),男,江西信丰人,副研究员,硕士生导师,从事农药残留检测与分析及海洋生物农药研究。

收稿日期　2009-03-17

假(Pipe r sarme ntosu m )为胡椒科植物,具有广泛的药理活性,国内外学者对其进行了深入的研究。假在我国主要分布在福建、广西、广东、云南、贵州、西藏。云南和广东民间常取其茎叶及果穗治腹胀、腹痛、肠炎腹泻、食欲不振、风湿痛、疝气痛,外用治外伤出血、跌打痨伤、冻疮等。根据《中药大辞典》、《广东中草药》、广州部队《常用中药手册》记载,假根、叶、果穗温中暖胃,驱风行气,化湿消肿;治腹胀腹痛,肠炎腹泻,食欲不振,胃炎,行气通窍,消滞化痰,风湿性关节炎等病症。向同寿等对假挥发油气质联用进行分析,从中分离和鉴定67种有机化合物。笔者就假甲醇提取物对几

种植物病原菌的抑制作用报道如下。1　材料与方法1.1　材料

1.1.1　植物材料。假采自华南热带农业大学儋州校区橡

胶林。

1.1.2　供试菌种。番木瓜炭疽菌(C olletotric hum papayae )、香蕉炭疽菌(C olletotrichum musae )、西瓜蔓枯菌(Didymella bry oni -ae )、香蕉黑星菌(Phyllostic ta musarum )、茄子枯萎菌(Fusarium ox ys porum f .sp .Melon genae )、辣椒枯萎菌(Fusarium ox yspo rum f .sp .vasinfe c tum )、香蕉枯萎菌(Fusariu m ox ys porum f .sp .

Cubence )为中国热带科学院生物所提供;芒果炭疽菌(C ol -le totric hum glo eo spo rioide s Penz )为中国热带科学院植物保护研究所提供。1.2　方法

1.2.1　甲醇提取物的制备。将采集的新鲜假叶子洗干净,阴干,经粉碎机粉碎,密封备用。定量称取假

叶干粉,用甲

醇在通风橱内浸泡提取,滤液用旋转蒸发仪旋转浓缩蒸干,4℃冰箱中保存备用。

1.2.2　假叶粗提物生物测定。采用生长速率法进行测定试验[1]。在无菌条件下用丙酮溶解假叶甲醇提取浓缩物,配制成0.1g /ml 浓度的供试药剂,与培养基按照1∶50的比例加入50℃左右的培养基中,制成浓度为2.0mg /ml 的带毒培养基。供试9种菌种在PD A 培养基上培养。接种时,用直径5mm 的打孔器从菌丝边缘打取菌饼,用接种针把带菌丝的一面接到培养基中央,以丙酮为对照,重复3次,置于28℃下黑暗培养4～5d ,用十字交叉法测量菌落直径(mm ),扣除菌饼的直径,计算抑制率(%)。

菌落直径=测量菌落直径平均值-5抑菌率(%)

=(对照菌落直径-5)-(处理菌落直径-5)处理菌落直径-5

×100

1.2.3　假叶粗提物毒力测定。假叶甲醇提取物对9种植物病原菌的抑菌效果均达到50%以上,将配制好的母液0.1g /ml 逐级稀释加入到培养基中,配制成带毒培养基的浓度分别为2.0、1.5、1.0、0.5g /ml ,对香蕉炭疽病菌、香蕉枯萎病菌、西瓜蔓枯病菌、番木瓜炭疽病菌进行抑菌率试验,生物测定方法同“1.2.2”,利用SAS 软件分析,绘制线性回归方程,计算半数有效浓度(EC 50)。

1.2.4　假叶抑菌活性物质的初步分离。用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇分别萃取假

叶甲醇提取物,合并相应的提取

液,旋转蒸发仪旋转至干。测定不同萃取组分在2mg /ml 浓度影响下的香蕉炭疽病菌、番木瓜炭疽病菌、香蕉枯萎病菌和西瓜蔓枯病菌的活性,生物测定方法同“1.2.2”。1.2.5　数据分析。假

叶甲醇提取物对9种植物病原菌的

抑菌率利用SAS 统计软件分析,采用反正弦平方根转换Dun -

安徽农业科学,Journ al of An hu i A gri .Sci .2009,37(17):8044-8045 责任编辑　张杨林　责任校对　卢瑶