引物合成常见问题

Q10.如何保存引物？

引物合成后，经过一系列处理和纯化步骤，旋转干燥而成无色或白色絮状干粉。

干粉：运输时常温运输，-20℃可以保存一年。

储存液：配好后分装成几管，避免反复冻融，-20℃可以保存半年。

工作液：常规使用，4℃保存，也可-20℃保存，但应避免反复冻融。

修饰荧光引物：需要避光保存，尽快使用为宜。

Q11.引物定量不准是怎么回事儿？

我们偶尔收到用户投诉定量不准的报告，出现这种情况的可能性有：

（1）定量错误、分装错误、引物抽干或收样过程中意外丢失。这种可能性有，但是很少，因为作为专业

的引物合成公司，我们的生产人员都是经过严格的专业培训，这种错误是要求谨慎避免甚至杜绝的。一般情况下，引物都有留样备份，接到用户投诉后，我们都会找出留样重新定量，一般都没有问题，如确实存在问题，则可安排重新准备一份。

（2）系统误差，我们认为10%左右为允许误差。使用过程中，引物工作浓度范围很宽，定量上的少许偏差不影响实验。

（3）用户收到引物干粉时，打开引物管盖前没有离心或其他误操作导致引物干粉部分丢失。

（4）用户没有能够正确理解引物OD数的含义，没有能够正确使用分光光度计，特别是使用微量测定；用户没有将OD读数，正确地转换成母液中OD数。这种情况比较常见。

例如，验证标2OD引物量是否准确，简单的做法是：加入1ml水，彻底溶解混匀后，取100ul,加入

900ul水，用光径为1cm的石英比色杯，波长260nm,此时光吸收的读数为0.2。

Q12.最长可以合成多长的引物？

我们合成过100base的引物，但是产率很低。除非需要，建议合成片段长度不要超过80base。引物越长，

出现问题的概率就越大，按照目前的引物合成效率，大于80base的粗产品，全长引物的百分比不高，后

续处理还有丢失很多，最后的产量很低。

Q13.为什么修饰引物的产量要比一般引物低，价格要高?

主要因为是修饰单体稳定性较差，偶连时间长，效率低，最后得到的产量自然低于一般的引物。修饰引物通常需要PAGE或HPLC纯化，纯化过程损失大。修饰引物使用的原料是一般引物原料的几百倍，所以产品的价格也高。

Q14.引物片段退火后不能连接到载体上是什么问题？

连接反应需要引物的5’磷酸基团。如果需要将合成的引物退火直接连接相应的载体上，引物需要磷酸化。磷酸化的产物如果还不能连接载体上，需要检查载体的酶切效果，需要改善引物退火的条件。SiRNA分子

具有特殊的对称结构，退火的难度较大，退火时需要提高退火温度。

Q15.如果测序发现引物突变，是否有补偿？该如何处理？

如果出现测序发现引物位置碱基错误的情况，我们可以免费重合一次，没有其他任何补偿或赔偿，不承担其他连带责任，这是国际行规。原因我们在前面已提到，化学合成效率不可能达到100%。

如果遇到这种情况，首先和我们联系，我们会检查合成序列是否和原始订单一致，如果确认引物合成序列没有输错，我们建议重新挑取克隆测序，您可能会找到正确克隆的。根据我们经验，40个碱基以下的引物，测1-2个克隆就可以了；40个以上的特别是用于全片段拼接合成的，就需要多测一些了。一般情况下，每

个克隆突变的位点都不一样，正确的总是有的，就是如何找到它。您也可以要求我们将引物免费重合一次，