临床微生物学检验：肠杆菌科概述、大肠埃希菌

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• 肠杆菌科细菌鉴定
3) 血清学鉴定：肠杆菌科中的某些腹泻病原菌如埃希菌
属，志贺菌属，沙门菌属及耶尔森菌属等的鉴定除生化 反应外，尚需用已知的特异性抗血清（多价和单价因子 血清）与分纯的菌落进行凝集反应以分群及定型鉴定后 才能作出最终报告。
4) 分子生物学鉴定：PCR等，可鉴定至科、属、种、 血清型和肠毒素基因等。甚至可区分致病菌株和 非致病菌株。
解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质→菌落淡黄色；大 肠杆菌等肠道非致病菌分解乳糖产酸，菌落呈红色 4. 铁离子：与硫化氢生成硫化亚铁黑色沉淀。
肠道病原菌:小,无色或淡黄色,半透明或不透明菌落
肠道非致病菌:大,红色菌落
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伤寒杆菌
SS平板（空白）
大肠杆菌
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麦康凯（Mac）、 EMB（Eosin Methyl Blue， 伊红美蓝)、中国兰平板
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SS平板（Salmonella-Shigella）
分离肠道病原菌的强选择培养基
成分和作用：
1. 基础培养基：提供氮源和碳源 2. 胆盐、枸橼酸钠、煌绿：可抑制肠道非致病菌、部分真
菌和革兰阳性球菌的生长，而对肠道致病菌抑制作用弱。 3. 乳糖、中性红（pH6.8-8.0，红→橙黄） ：致病菌不分
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•乳糖发酵试验（初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌）
肠道致病菌
多不发酵乳糖
肠道非致病菌
多发酵乳糖
•肠道杆菌IMViC试验和苯丙氨酸试验特性
埃希菌属 沙门菌属 志贺菌属 克雷伯菌属 变形杆菌属
吲哚 甲基红 V-P 枸橼酸盐 苯丙氨酸
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共同特性
葡萄糖发酵（＋）
触酶试验（＋）
3. 生化反应
• 发酵葡萄糖 • 氧化酶阴性 • 触酶阳性 • 硝酸盐还原阳性
氧化酶试验（－） 硝酸盐还原试验（＋）
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三、生物学特性
抗原结构
鞭毛抗原（H） K或Vi抗原 菌体抗原（O）
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O抗原和H抗原：是肠杆菌科血清分群和分 型的依据
表面抗原（K、Vi抗原）：可阻断O抗原与 相应抗体之间的反应，加热（100℃， 30min)处理可消除。
伤口和中枢神经系统感染，菌血症
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肠杆菌科细菌引起不同部位感染
中枢神经系统（埃希菌属）
下呼吸道（克雷伯菌属、肠杆菌 属、埃希菌属 ）
血液（埃希菌属 、克雷伯菌属 、肠杆菌属） 胃肠道（某些埃希菌 、沙门菌属、 志贺菌属、耶尔森菌属） 泌尿道（埃希菌属 、变形杆菌属、 克雷伯菌属、摩根菌属）
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三、源自文库物学特性
第八章 肠杆菌科 （Enterobacteriaceae）
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第一节 概述
• 掌握
1.肠杆菌科细菌共性 2.肠杆菌科细菌鉴定原则 3.肠杆菌科临床意义
• 熟悉
肠杆菌科细菌的分类
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自然界分布广泛、生物学性状近似的一大群革兰阴性 杆菌 。
种，类众多，约40种以上可以在临床标本中检出 多数是人和动物肠道的正常菌群，少数为致病菌 易培养、繁殖快
共同特性
1.形态染色结构
• 革兰阴性杆菌或球杆状
• 多数有鞭毛
• 多数有菌毛
鞭毛
• 无芽孢
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三、生物学特性
共同特性
伤寒沙门菌菌落特征 （血平板）
2.生长条件
需氧或兼性厌氧 营养要求不高
（中等大小、灰白或淡黄色、湿润、光滑菌落）
变形杆菌菌落特征（Mac）
大肠埃希菌 菌落特征
（普通平板）
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三、生物学特性
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一、分类
生化反应 抗原分析 核酸杂交 33个菌属，120多个菌种 序列分析
DNA G+C的mol% : 39-59
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二、临床意义
致病物质
1.菌毛或菌毛样结构 2.荚膜或微荚膜 3.内毒素 4.外毒素（肠毒素）
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二、临床意义
所致疾病
1.肠道感染 急、慢性肠道感染、腹泻、食物中毒等
2.肠道外感染 鼠疫（烈性传染病），泌尿道、呼吸道、
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三、生物学特性
抵抗力
• 耐低温，不耐热（60℃，30min，杀死） • 水中生存期较长，不耐干燥 • 化学消毒剂敏感 • 耐胆盐和抵抗某些染料的作用（伊红、美兰等）
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三、生物学特性
变异
通过
接合 转化、转导 溶源性转换
引起
耐药性变异 毒力性变异 生化反应性变异
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四、微生物学检验
肠杆菌科细菌分离鉴定流程
标本
抗体检测
分离培养
Mac或EMB或中国兰/SS （可疑菌落）
镜检（革兰染色）
已知Ab检测 未知Ag (玻片 凝集试验)
涂片染色氧化酶/MIU/KIA
血清学鉴定
药敏试验 分子生物学鉴定 生化鉴定
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肠杆菌科细菌鉴定步骤
科的鉴定：革兰阴性杆菌，氧化酶阴性 属、种的鉴定：
各种生化反应特征 血清学试验 鉴定到属种
志贺菌在Mac上菌落
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• 肠杆菌科细菌鉴定
1) 常规生化鉴定: 为实验室最常用的方法。各菌属(种)主要生化特 性有助于鉴定细菌。
2) 鉴定试剂盒: 选用标准化和商品化的微生物鉴定试剂盒， 以细菌生化特性不同为基础，与编码技术结合， 可人工、仪器读取结果，自动化。
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肠杆菌科与其它革兰阴性杆菌区别
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•分离培养培养基的选择：
1.肠道外标本： 1）正常无菌标本（血、脑脊液等）先肉汤增菌后
再转种血平板和Mac平板。 2）痰、分泌物等标本：接种血、巧克力平板和Mac。 2.肠道标本： 1）肛拭：GN肉汤增菌后转种至肠道选择性培养基 2）粪便：直接接种肠道选择性培养基。 3）如疑耶尔森菌感染可用耶尔森菌选择琼脂(CIN)。
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•标本采集
① 肠外标本:采自不同的感染部位如血液、体液、 呼吸道、伤口、尿液及其他各种标本。
② 肠道标本:疾病早期留取新鲜粪便，挑取粘液 脓血部分进行培养。应在2h内进行，以利志贺 菌等检出。如不能及时培养应冷藏待检。
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•标本直接检查：
1.粪便标本：形态及染色性多无鉴别意义 2.其他标本：革兰阴性杆菌
分离肠道病原菌的弱选择培养基
成分：与SS类似，但不含铁离子，抑制剂只含胆盐， 可抑制革兰阳性菌生长，不抑制肠道细菌生长。 •肠道病原菌:半透明或不透明,无色或灰白、淡黄色
小菌落 •肠道非致病菌:红色（Mac） 、紫黑色(EMB)、蓝色
(中国蓝）混浊较大菌落。
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大肠杆菌在Mac上菌落
大肠杆菌在Mac上
5）噬菌体鉴定试验
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• 抗体检测
肥达试验：伤寒的辅助诊断
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• 抗菌药物敏感试验
1.常用方法：K-B纸片扩散法、药敏板或仪器检测 2.药物选择： 3.特殊耐药检测：（超广谱β-内酰胺酶或AmpC酶）。