流感病毒Real—time RT—PCR核酸检测及流行情况分析

流感病毒Real—time RT—PCR核酸检测及流行情况分析

目的分析鄂尔多斯市2012年流感检测结果，

Abstract：Objective To analyze the results of detection on influenza virus in Ordos in 2012，in order to provide scientific basis for prevention and control of flu in this area. Methods Influenza throat swab specimens were collected from sentinel hospital for virus nucleic acid detection by Real-time RT-PCR. Results：A total of 281 throat swab specimens were detected，35 were positive for influenza virus nucleic acid，at a percentage of 12.46%. In which there was 16 cases of B type flu，at a percentage of 5.69%，15 cases of seasonal H3，at a percentage of 5.34%，2 cases of new H1N1，at a percentage of 0.71%，2 positive of A type undentified，at a percentage of 0.71%. The detection positive rate were 11.36%、27.50%、37.50% in January ，February and March，were 5.00% in October and December，no positive sample was detected in other month. Conclusion The survey showed that the major epidemic seasons were winter and spring，the major epidemic strains of the flu were B type and H3 type.

Key words：Surveillance of influenza ；Virus nucleic acid；Real-time RT-PCR

流行性感冒簡称流感，是由流感病毒引起的急性上呼吸道传染病。流感潜伏期短，传播迅速，且抗原易变异，人群对变异株普遍易感，因此控制难度大[1]。目前，对人类危害较重的流感病毒株是A型和B型，其中A型流感病毒抗原变异率高，容易造成世界范围内大流行[2]。2009年，甲型H1N1流感就是由于流感病毒变异形成的一种与猪流感病毒高度同源的新型变异株引起的流感大流行[3]。通过流行病学和病原学监测，可以帮助做好流感流行趋势和优势毒株的预测，及早采取相应措施，对防止流感流行具有重要意义[4]。鄂尔多斯市疾病预防控制中心流感监测网络实验室2012年全年共对281份流感病例咽拭子标本进行了病毒核酸的检测，现将结果报告如下：

1资料与方法

1.1一般资料

1.1.1标本来源哨点医院（鄂尔多斯市中心医院）按照《全国流感监测方案（2010版）》要求采集流感样病例咽拭子标本。流感样病例指发热（体温≥38℃），伴有咳嗽或咽疼症状之一，同时缺乏其他的实验室诊断依据[5]。

1.1.2主要试剂和仪器流感病毒RNA提取试剂盒（QIAamp viral RNA Mini Kit ）为德国QIAGEN公司产品、Real-time RT-PCR扩增试剂盒（AM1005）为美国ABI公司产品、检测引物由上海生工合成；主要检测仪器有ABI Step-one plus型荧光扩增仪、QL-866型震荡器，等。

1.2方法

1.2.1核酸提取按照QIAGENR Neasy Mini kit 操作说明进行。

1.2.2 Real-time RT-PCR检测Real-time RT-PCR反应体系配置按AgPath-IDTM One-Step RT-PCR Kit说明进行，反应程序参照《甲型H1N1流感监测方案（第二版）》[5]。

1.2.3结果判定在阴阳对照成立下，CT值≤37且有典型的S型曲线报告为检测结果阳性。

2结果

2.1流感病毒Real-time RT-PCR检测结果

2.2流感病毒检测情况及阳性检出时间分布2012年1～3月，阳性检出率均在10%以上，1月份检测数44例，阳性数5例阳性率11.36%，其中乙型4例、季节性A3型1例；2月份检测数40例，阳性数11例，阳性率27.50%，其中乙型7例、季节性H3型3例，3月份检测流感样品40例，阳性数14例，阳性率35.00%，其中乙型3例、季节性H3型9例，4～9月未检出流感阳性样品，10月和12月阳性率均为5%，10月检出2例乙型流感阳性样品，12月各检出新甲型H1N1型型和季节性H3型各1例。月检出情况见表1。3讨论

实时荧光RT-PCR技术的应用对提高流感检测的灵敏度、快速准确地处置流感疫情具有重大意义，在2009年防控甲型H1N1全球大流行中发挥了重要作用。实时荧光RT-PCR是在常规RT-PCR方法的基础上进行改良的方法，该法采用特异性标记的荧光探针，利用荧光信号的积累实时监测整个PCR进程，使每个循环变得”可见”，通过扩增曲线和CT值来判定结果。由于省去了电泳、凝胶成像等步骤，使整个检测过程较RT-PCR缩短了2～3h。同时，实时荧光RT-PCR实现了PCR的密闭操作，能有效防止PCR产物的污染，提高了检测结果的可靠性，而且克服了常规RT-PCR易污染以及强致癌物溴化乙啶对操作人员危害的缺点，在病毒检验中具有广泛的应用价值[6，7]。

流感病毒检测结果表明：鄂尔多斯市流感主要集中在冬春季。2012年1月～3月以季节性H3型和乙型为主要流行株，均占流感流行株的45.00%（14/31）。3月份阳性率最高，达到37.50%，其次为2月份，阳性率为27.50%，说明在春季出现了一个流感流行的小高峰。4～9月没有流感流行，10月和12月又分别检出2列乙型和1列H3型，呈散发流行。《全国流感监测方案（2010年版）》[5]中规定，北方地区流感实行全年监测，但以冬春季为主。此监测结果更进一步说明了监测方案的科学性，且与北京市西城区李达[8]等的研究结果相一致。据报道的我国南方地区流感监测结果显示，南方各省在夏季呈现季节性高峰，部分地区在冬季出现一较小的峰值[9]。鄂尔多斯市此次流感监测结果与南方地区的流感流行特征有所区别，呈现典型的北方地区的流感流行特征。提示北方地区冬春季要加强流感监测，做好流感防控工作。