单克隆抗体药物的临床前研发 PPT

单 抗 药 物 作 用 机 理
wk.baidu.com 经典靶点
大家学习辛苦了，还是要坚持
继续保持 安静
➢ 单克隆抗体的制备
➢ 抗体的人源化
嵌合抗体：应用DNA 重组技 术将小鼠抗体基因上的可变区与人抗
体基因的恒定区重组, 再将重组后 的基因导入骨髓瘤细胞中表达 CDR 移植抗体（改型抗体）：进 一步用人的编码构架区( FR) 替代鼠 FR, 形成更为完全的人源化抗体, 即 除了3 个CDR 是鼠源的外, 其余全部 是人源结构 完全人源化抗体：1、噬菌体抗体 库技术；2、转基因小鼠技术
特异性与亲和力鉴定：ELISA, WB, FACS, IHC, IP 等
功能鉴定： ADCC, CDC, 中和细胞因子
by抗体生产部门
by药效部门
药效筛选
ADCC—LDH release
药 效 筛 选
% Target Cell Lysis
A D C C A ssay on S K -B R -3 C ells w ith N K 92-C D 16A
热门靶点：免疫检查点 （Immune Checkpoint）如 PD-1、PD-L1、CTLA-4、 Tim3、LAG-3、VISTA等
谢谢！
THANKS FOR ATTENTION.
2015-11-18
Bye Bye
95%以上的B细胞性淋巴瘤中表达 抗CD20单抗可用于治疗B细胞非霍奇金淋巴瘤
单抗药物工作机理： 抗体依赖性细胞介导的毒作用( antibody dependent cell-
mediated cytotoxicity, ADCC) 补体依赖性细胞毒作用( complement dependent
cytotoxicity, CDC) 中和细胞因子
10 0
10 1
A va stin ####
Pharmacokinetics, PK
药动评价 主要评估血清中药物水平，
不被肾脏清除，半衰期长； 单抗的主要代谢结果是降 解为肽段和氨基酸，无需
进行生物转化研究
Anti-drug antibodies, ADA
评估免疫原性， 是否产生ADA
Neutralizing Anti-drug antibody, NAb
400
300
200
100
0 1 0 -2
1 0 -1
10 0
10 1
V E G F ,n g /m l
10 2
10 3
120
H U V E C n e u tra liza tio n a s s a y
100
80
60
40
20
0 1 0 -4
1 0 -3
1 0 -2
1 0 -1
c o n c .,μ g /m l
评估ADA是否 会ce影ll-响ba药se效d
non-cell-based
• 间接法ELISA建立流程
优化案例
使用标准品建立实验时，假设二抗工作浓度已经确定，不同抗原浓度与一抗浓 度正交实验
前 沿 进 展
Keytruda——FDA批准的第一个程序性死亡受体-1（PD-1)单抗
MSD旗下明星药物，旨在 利用人体自身的免疫系统 抵御癌症
70
H erc e p tin (c o n tro l)
60
####
50
40
30
20
10
0
1 0 -4
1 0 -2
10 0
10 2
-10
A b C o n cen tratio n , [ g /m l]
药 效 筛 选
% T arg et C ell L ysis % T arg et C ell L ysis
治疗用酶
单克隆抗体
来源于细菌、酵母、 昆虫、植物和哺乳动 物细胞等各种表达体 系
背景知识
临床试验 药动评价 药效筛选 单克隆抗体的制备 靶点的发现与选择
研发流程
靶点的发现和选择
集中在细胞死亡通路、血管生成、细胞周期调控信号转导等方面
例如： CD20 :表达于B细胞和成熟B细胞，调节B细胞增殖、分化；在
120
100
80
60
40
20
0 -2 0
1 0 -1
10 0 μ g /m l
10 1
10 2
% cell pro liferation rate
% cell viability
药 效 筛 选
V E G F In d u c e d H U V E C P ro life ra tio n
600
500
单克隆抗体药物的临床前研发 PPT
➢ 大分子药物——生物制药
始于1982年用重组DNA技术进行生物合成的人胰岛素(rHI)
举例
激素 (胰岛素，胰高血糖素，生长激素) 造血生长因子(Erythropoietin, colony
stimulating factors) 干扰素 (Interferons-α, -β, -γ) 白介素 (Interleukin-2) 疫苗 (Hepatitis B surface antigen) 肿瘤坏死因子
CDC--CTG
# # # m e d ia te d C D C L y s is o n U 9 3 7 _ N H S C o n c . o p tim iza tio n
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
20%
10%
5%
NHS Conc.
R itu x a n m e d ia te d C D C o n D a u d i