生物碱类成分分析2

HPLC色谱柱中的硅醇基酸性较大，使保留时间延长，峰行
变宽，拖尾。
改进流动相：
①加入硅醇基抑制剂，竞争或部分阻断硅醇 剂的影响，最常用硅醇基抑制剂是二乙胺、三乙胺（TEA) 等。 ②合适的pH下，加入低浓度离子对试剂， 通过与生物碱类成分生成离子对而掩蔽其碱性基团。常用 离子对试剂：辛烷磺酸钠或十二烷基磺酸钠。注意：清洗 柱子，避免过夜，保证色谱柱的寿命。 ③加入季铵盐试剂，掩蔽固定相表面的硅 醇基，如在水－甲醇中加入0.01mol/L的溴化四甲基胺。 ④加入电解质缓冲盐，通过改变流动相离 子强度，稳定pH值及促进离子对相互作用，起到改善峰形 及分离效果的作用。
PC—正相色谱，BAW系统展开剂，固定相为滤纸中的
水，不能用含硫酸的做显色剂。
§总生物碱含量测定
• 化学分析法：样品供试品溶液中总生物碱成
分纯度较高，常用与处方药味较少，内含成分 较简单的中药制剂。
• 分光光度法：多用单波长光度法，要求干扰
成分在测定波长基本无吸收。样品分离、净化
（化学法、柱色谱法、TLC、PC法等）
试品制备及分析方法建立及条件 选择的依据
紫外光谱：共轭体系，紫外吸收
§定性鉴别
• 一般理化鉴别
沉淀反应：酸性条件下或酸性稀醇下，生物碱能与一些 试剂生成沉淀。（注意多肽，鞣质，蛋白质等假阳性）
在碱性系统或碱性环 境下展开
• 色谱鉴别 TLC—吸附剂：硅胶，氧化铝（不能用酸性）
展开剂：氯仿，苯等及一些相应极性的调节剂 HPLC— 高效液相色谱法对结构十分相似的生物碱有很 显色剂：改良的碘化铋钾，碘蒸汽等 好的分离效果，在恒定的高效液相色谱条件下，各生 注意 物碱有一定的保留时间，可作为定性鉴别的参数。 此外还可用某些生物碱的特殊颜色反应，如麻黄 优点：快速，灵敏，微量等 碱与印三酮
分光光度法
• 离子对萃取比色法：
酸性染料比色法：
B+H+
BH+
HIn
H++In-
Leabharlann Baidu
BH+ +In- BH+ In本法测定的关键在于：
介质的pH值，
酸性染料的性质，
有机溶剂的性质。
分光光度法
• 离子对萃取比色法：
雷氏铵盐比色法：
BH+ +[Cr(NH3)2(SCN)]2 [Cr(NH3)2(SCN)]2
§结构特征及理化性质
• 结构特征 ：大多含有C 、H、 O、 N • 理化性质 ：
物理性状：结晶性固体；液体、小分子固体（挥
发性、升华性），多无色 溶解性：多样化 沉淀反应：生物碱沉淀试剂，定性（蛋白质、多 肽、鞣质，避免假阳性）
显色反应：用于纯品，少用于制剂中生物碱分析 碱性：多呈碱性，碱性强成盐，弱游离，供
化学分析法
• 酸碱滴定法（主要使用）
（1）游离生物碱：多不溶于水，可先将生物 碱溶于过量标准酸溶液中,再用标准碱溶液回滴； （2）生物碱盐:在水或乙醇介质中，用强酸 溶液滴定。一般使其溶于90％乙醇溶液中，可用 标准酸乙醇液滴定，用酚酞作指示剂。 酸碱滴定法测定中药制剂中生物碱的含 量，因中药复方制剂中成分复杂，样品溶液需进 行净化处理。 （ 氧化铝）
改进固定相：
封尾技术，即键合反应结束后，用三甲基氯硅烷等进 行后续处理，尽量减少残余羟基，增加覆盖度。
常用检测器：紫外检测器。
§常见生物碱类成分分析
• 疏风定痛丸中的士宁的含量测定—HPLC
主讲： 讲稿整理： ppt制作: 姚许芳，冯玲玲，陈静 文献整理：付晓艳，楼夏莲 文献查阅：张秀秀，高慧珍
将沉淀分离，溶于丙酮，于520～526nm波长处比 色测定吸收度，换算生物碱的含量。
分光光度法
• 离子对萃取比色法：
异羟污酸铁比色法：含有酸酯键结构的生物碱， 在介质中加热，酯键水解，产生羧基与羟胺生成 异羟污酸，与Fe3+ JDS 生成紫红色配合物，在一 定浓度下符合Beer定律，比色法进行含量测定。
注意
表一
按操作方法分类
两种重量分析法异同比较表
（ 1） （ 2）
操作方法
将生物碱从中药制剂中提取， 加入某些试剂，使 用适宜的方法使其生成沉淀，干 生物碱生成不溶性盐沉 燥后直接称重。 淀，称量沉淀，计算生 物碱含量。 计算简便，不用换算因数，也 取样量少，灵敏度高 不必考虑生物碱的分子量。
优点 ①挥发性生物碱 计算方法复杂，繁琐， ②蒸发提取溶剂或加热、干燥时 影响因素较多，干扰多 能分解破坏以及加碱使生物碱 游离时可发生水解的不宜使用 （沉淀试剂、PH、T、 ③取样量大、操作时易乳化、费 以及与试剂生成沉 时。
注意！
供试品溶液中必须不存在其他酯类成分
§单体生物碱的含量测定
• TLC：简便、快速
样品需纯化，吸附剂、展开剂及显色与鉴别相似， 要求更严格
• HPLC: 适用于单体生物碱成分的含量测定
液—液分配色谱，液—固分配色谱，离子交换色谱
• GC：只适用于有挥发性，遇热不分解的生物碱类。
如麻黄碱、槟榔碱、苦参碱、颠茄类生物碱等 （！！生物碱盐在急速加热器中产生的酸对色谱柱和检测器不利 ）
生物碱类成分分析
熟悉生物碱类成分结构特征及理化性质
※掌握生物碱类制剂定性鉴别常用方法
※掌握生物碱类制剂定量分析常用方法
§概述
• 定义：生物碱是生物界除生物体必须的含氮化合
物（如氨基酸、蛋白质和B族微生素等）之外的所 有含氮有机化合物，因其结构中氮原子上的未共 享电子对而大多具有碱性。

绝大多数具有显著的生理活性 中药材中生物碱多以有机酸盐的状态存在
淀的非生物碱成分）
缺点
分光光度法
• 直接测定法：
不经化学反应，利用生物碱物质自身的光吸 收直接进行比色测定的方法。 适用：一般用于药味较少，内含成分简单，干 扰不大的中药制剂中总生物碱的含量测定。（戊 己丸、驻车丸）
戊 己 丸 和 驻 车 丸
分光光度法
• 离子对萃取比色法：
在一定的PH介质中，有机碱与一些酸性染料 或磺酸类、酸类的阴离子，定量结合为有色离子 对，定量地溶于某些有机溶剂中，然后在一定波 长下，测定有机溶剂或经碱化后释放出来的染料 的吸收度，按分光光度法计算含量。 适用：中药制剂中微量生物碱成分的含量测 定。