丁酸氯维地平原料药细菌内毒素检查方法的建立

0. 25
130712
0. 25
0. 21
2. 3 丁酸氯维地平溶液制备 丁酸氯维地平在水中不溶，无 法直接制备水溶液进行细菌内毒素试验，但经考察发现可溶 于乙醇、二甲基亚砜，因此分别以无水乙醇和二甲基亚砜为溶 剂，将丁酸氯维地平溶解后再进行细菌内毒素方法学实验。 2. 4 供试品溶液干扰预试验 2. 4. 1 无水乙醇处理样品： 称取丁酸氯维地平 40mg，加入无 水乙醇 10mL，充分震摇溶解制成丁酸氯维地平贮备液，此时 的供试品溶液为澄明液体。再将贮备液用 BET 水稀释，分别 使成为 0. 8，0. 4，0. 2，0. 1，0. 05mg·mL －1 ，将此系列稀释溶液 记为 NPC（ 此系列稀释溶液中的乙醇浓度分别为 20% ，10% ， 5% ，2. 5% ，1. 25% ，以 下 均 同） 。同 时 在 1. 6，0. 8，0. 4，0. 2， 0. 1mg·mL － 1 中添加等体积的细菌内毒素工作标准品溶液制 成 2. 0λ 的浓度系列记为 PPC 管。在供试液稀释过程中，随
试品内毒素溶液，分别取两个厂家的鲎试剂与上述内毒素溶 液依法进行干扰试验，试验结果（ 见表 3） 。
表 3 丁酸氯维地平细菌内毒素干扰试验结果
鲎试剂批号 1402121
1406051
130712
供试品批号
BET 水 LW-20131023 LW-20131108 LW-20131212
BET 水 LW-20131023 LW-20131108 LW-20131212
着细菌内毒素检查用水的加入，供试液会出现均一浑浊，为验 证经无水乙醇处理和均一浑浊出现对细菌内毒素的影响，另 精密称取丁酸氯维地平 40mg，加入 50EU·mL － 1 的细菌内毒 素工作标准品 0. 1mL，再加入无水乙醇 9. 9mL 溶解，振摇混 匀后得澄明液体，再用 2. 0λ 细菌内毒素工作标准品溶液稀 释，使其成为 0. 8，0. 4，0. 2，0. 1，0. 05mg·mL －1 的系列，此系 列溶液记为内毒素回收管。取灵敏度分别为 0. 25EU·mL － 1 的两个不同厂家的鲎试剂，分别与上述 PPC 和 NPC 系列溶液 进行反应。并以细菌内毒素检查用水设立阳性对照（ PC） 和 阴性对照（ NC） ，依法进行干扰试验预试验。结果见表 2。可 见，丁酸氯维地平在 0. 2mg·mL － 1 （ 乙醇浓度 5% ） 及其以下 稀释浓度时对试验无干扰，而且此浓度内毒素回收管均为阳 性，说明无水乙醇的处理和均一沉淀的析出在一定程度内未 对细菌内毒素干扰预试验结果产生影响。 2. 4. 2 二甲基亚砜处理样品： 同 2. 4. 1，用二甲基亚砜处理 样品（ 见表 2） 。预试验结果表明，丁酸氯维地平注射液稀释 至 0. 2mg·mL － 1 时即不再对试验产生干扰。无水乙醇和二 甲基亚砜均可作为丁酸氯维地平的溶剂来进行细菌内毒素试 验，但考虑到二甲基亚砜熔点较低，低温下易凝固，最后选择 无水乙醇作为溶剂。
GONG Wei，WANG Jian-dong（ Shaoxing institute for Food and Drug Control，Shaoxing 312071，China）
ABSTＲACT： OBJECTIVE To establish a method for bacterial endotoxin test of clevidipine butyrate. METHODS Clevidipine butyrate was dissolved with absolute ethyl alcohol and then diluted by BET water. According to
表 2 丁酸氯维地平细菌内毒素干扰预试验结果（ 无水乙醇处理样品 /二甲基亚砜处理样品）
鲎试剂 批号
供试品批号
供试品浓度（ mg·mL － 1 ）
PC
NC
0. 8
0. 4
0. 2
0. 1
0. 05
1402121 LW-20131023
NPC
－ －/－ － － －/－ － － －/－ － － －/－ － － －/－ －
++
－－
PPC
－ －/－ － － －/－ － + +/+ + + +/+ + + +/+ +
内毒素回收管 － － / － － － － / － － + + / + + + + / + + + + / + +
130712 LW-201Leabharlann Baidu1023
NPC
－ －/－ － － －/－ － － －/－ － － －/－ － － －/－ －
内毒素浓度（ EU·mL － 1 ）
0. 25
0. 125
++++
+－－－
++++
－－－－
++++
－－－－
+++－
－－－－
++++
－－－－
++++
－－－－
+++－
－－－－
++++
+－－－
++++
+－－－
++++
－－－－
++++
+－－－
++++
－－－－
0. 06 －－－－ －－－－ －－－－ －－－－ －－－－ －－－－ －－－－ －－－－ －－－－ －－－－ －－－－ －－－－
BET 水 LW-20131023 LW-20131108 LW-20131212
供试品浓度 （ mg·mL － 1 ）
/ 0. 2 0. 2 0. 2
/ 0. 2 0. 2 0. 2
/ 0. 2 0. 2 0. 2
0. 5 ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
·41·
海峡药学 2015 年 第 27 卷 第 10 期
附录细菌内毒素检查法的要求复核所用鲎试剂，结果均符合
规定（ 见表 1） 。
表 1 鲎试剂灵敏度复核结果
批号 标示灵敏度（ EU·mL － 1 ） 复核灵敏度（ EU·mL － 1 ）
1402121
0. 25
0. 21
1406051
0. 25
丁酸氯维地平为供注射用原料药，在水中不溶，无法采用 一般的家兔法进行热原项目检查。鲎试剂与细菌内毒素的反 应一般都是在水溶液中进行，也无法直接用细菌内毒素检查 用水溶解本品进行细菌内毒素凝胶法检查。本试验根据中国 药典 2010 年版二部“细菌内毒素检查法”〔2〕和“化学药品注 射剂安全性检查法应用指导原则〔3〕，以及相关细菌内毒素检 查的文献〔4，5〕，考虑以乙醇和二甲基亚砜为溶剂，将氯维地平 溶解后进行细菌内毒素检查方法学研究，并采用外加细菌内 毒素的方法，研究无水乙醇和二甲基亚砜溶液溶解丁酸氯维 地平是否对细菌内毒素产生干扰。 1 实验材料 1. 1 样品 丁酸氯维地平（ 原料药，批号： LW-20131023； LW-
ChP. 2010 edition VolⅡAppendix ⅪE，the interference test and bacterial endotoxin test of different batches of samples were carried out. ＲESULTS There was no interference in test when dissolved clevidipine butyrate by ethyl alcohol，and diluted to 0. 2mg·mL －1 by BET water. CONCLUSION The bacterial endotoxin test can be used for the quality control of clevidipine butyrate. Endotoxin Limit is 4. 7EU·mg － 1. KEY WOＲDS： Clevidipine Butyrate； Bacterial Endotoxin Test； Absolute ethyl alcohol
Strait Pharmaceutical Journal Vol 27 No. 10 2015
丁酸氯维地平原料药细菌内毒素检查方法的建立
公 伟，王建东（ 浙江绍兴市食品药品检验所 绍兴 312071）
摘要： 目的 对难溶于水的原料药丁酸氯维地平建立细菌内毒素检查方法。 方法 以无水乙醇溶解丁酸氯维地平，再用细菌内毒用水稀释 后，按《中国药典》2010 年版二部附录细菌内毒素检查法，对不同批号的样品进行了干扰试验和细菌内毒素检查。 结果 丁酸氯维地平溶液稀 释至 0. 2mg·mL － 1 浓度时对试验无干扰作用。结论 采用无水乙醇作为稀释溶剂，可建立丁酸氯维地平的细菌内毒素检查法，细菌内毒素限
值为 4. 7EU·mg － 1 。
关键词： 丁酸氯维地平； 细菌内毒素检查； 无水乙醇
中图分类号： Ｒ926 文献标识码： A 文章编号： 1006-3765（ 2015） -10-0570-0041-03
Establishment of Bacterial Endotoxin Test for Clevidipine Butyrate
作者简介： 公 伟，女。学历： 硕士研究生。职称： 主管药师。联系电 话： 13777311688，E-mail： gongwei0717@ 163. com
20131108； LW-20131212） ，上海信谊药厂有限公司生产。 1. 2 仪器与试药 鲎试剂（ TAL） ： 批号 1402121，1406051，灵 敏度 0. 25 EU·mL － 1 ，规格 0. 1mL / 支，湛江安度斯生物有限 公司产品； 批号 130712，灵敏度 0. 25 EU·mL － 1 ，规格 0. 1mL / 支，厦门市鲎试剂实验厂有限公 司。细 菌 内 毒 素 检 查 用 水 （ BET 水） ： 批号 1407080，规格 5mL / 支，湛江安度斯生物有限 公司 产 品。细 菌 内 毒 素 国 家 标 准 品 （ ＲSE） ： 批 号 150601201377，规格 70EU / 支，中国药品生物制品检定所产品。自动 漩涡混合器： 天津药典标准仪器厂生产。ET-96 细菌内毒素 凝胶法试验仪： 天津市天大天发科技有限公司。 2 方法与结果 2. 1 供试品细菌内毒素限值的确定 根据 L = K / M，L 为供 试品细菌内毒素限值，K 为人用每公斤每小时最大可接受的 内毒素剂量，注射剂为 5 EU / （ kg·h） ，M 为人用每公斤体重 每小时的最大剂量，人均体重按 60kg 计算。根据丁酸氯维地 平注射液的说明书： 大多数患者接受的最高剂量为 16mg· h － 1 ，也有少数情况可以使用 32mg·h － 1 的短期高剂量，因此 丁酸氯维地平原料的内毒素限值 L = 9. 375EU·mg － 1 。根据 中国药典 2010 年版二部“化学药品注射剂安全性检查法应用 指导原则”，由于药物和适应症（ 如抗感染、抗肿瘤、心血管药 等急重病症用药、儿童老人用药、复合用药、大输液等） 的不 同，限值可适当严格，以保证用药安全。所以最终确定限值 L 为 1 /2 × 9. 375EU·mg － 1 = 4. 7 EU·mg － 1 。 2. 2 鲎试剂灵敏度的复核 按照《中国药典》2010 年版二部
丁酸氯维地平是由 AstraZeneca 制药公司于 2002 年开发 的一种新型静脉注射用二氢吡啶类钙通道拮抗剂，美国 FDA 于 2008 年 8 月批准 The Medicines Company 公司的丁酸氯维 地平静脉注射用乳剂（ 商品名 Cleviprex） 上市，用于降低不宜 口服或口服治疗无效患者的血压，也可用于治疗外科手术后 急性血压升高。其显著特点是起效快，作用消除快，递增剂量 可快速、精确的 控 制 血 压，由 于 药 效 短 和 较 好 的 风 险 利 益 关 系，该药已成为抗高血压治疗的新选择〔1〕。
++
－－
PPC
－ －/－ － － －/－ － + +/+ + + +/+ + + +/+ +
内毒素回收管 － － / － － － － / － － + + / + + + + / + + + + / + +
2. 5 供试品溶液干扰试验 根据预试验结果，取不同浓度的 丁酸氯维地平将同一支标准品制成 2λ，λ，0. 5λ 和 0. 25λ 的供