正交试验设计优选多聚甲醛的解聚方法_武晓琼

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72
黑曲 霉 72 72 72 72 72 72
生孢梭菌
100
+ － － －－－ － － －
200
+ － － －－－ － － －
未冲洗 + － － － － － － + －
100
+ － － －－－ － － －
200
白色假丝酵母菌 未冲洗 + － － － － － － + －
色葡萄球菌的方法是可行的。由此，建立的替加氟注射液无菌检 查方法为： 将规定量样品薄膜过滤后，真菌培养管和需氧菌、厌氧 菌培养管及阳性对照管每膜采用不少于 100 mL 的冲洗液冲洗 后，再加入适宜的培养基，以金黄色葡萄球菌作为阳性对照菌，依 法进行无菌检查。
评分 ( y) 1 2 3 4 4 3 4 3 5
来源 A B C D( 误差)
l 6． 89 0． 89 3． 56 0． 22
表3 v 2 2 2 2
方差分析结果
MS 3． 45 0． 45 1． 78 0． 11
F 31． 32 4． 05 16． 18 1． 00
P ＜ 0． 05 ＞ 0． 05 ＞ 0． 05
关键词： 多聚甲醛; 正交试验; 解聚
中图分类号： Ｒ979． 7； Ｒ944． 1
文献标识码： A
文章编号： 1006 － 4931 (2014 )12 － 0062 － 03
Optimization of Depolymerization Method of Paraformldehyde by Orthogonal Experimental Design
corded with the specification． Conclusion This method is quick and simple，can be directly used in the preparation of diluted
formaldehyde and is suitable for the promotion in the preparation rooms．
method was adopted with the depolymerization status as the index，the main factors influencing the depolymerization： temperature，heating
time and shaking time were optimized． Ｒesults Paraformldehyde was completely depolymerized at 95 ℃ for 120 min，the content ac-
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2014 年 7 月 20 日 第 23 卷第 14 期 Vol． 23，No． 14，July 20，2014
China Pharmaceuticals
·制剂技术· Preparation Technology
稀甲醛溶液是标准制剂，收载于《中国医院制剂规范·西药 制剂（ 第二版） 》[1 ]。其处方组成是甲醛溶液、纯化水，用于消毒、防 腐、保存标本，配制工艺简单，要求避光、密闭，在不低于 9℃ 的温 度下保存。但在实际配制时，往往由于甲醛溶液久贮或冷处（ 9℃ 以下） 贮存，而聚合成多聚甲醛，呈白色浑浊或产生白色沉淀，需 取上清液测定实际含量折算后方能使用，且浑浊或沉淀的部分被 弃去，常造成原料浪费、污染环境。笔者采用正交试验设计优选了 多聚甲醛的解聚方法，收到较好的效果，现报道如下。 1 仪器与与试药
摘要： 目的 优选多聚甲醛快速简单的解聚方法。方法 采用正交试验法，以解聚状态为考察指标，对影响解聚的主要因素 ( 温度、加热时
间、振摇时间 ) 进行优选。结果 加热至 95℃ 左右、120 min 时多聚甲醛完全解聚，含量符合规定。结论 该方法快速、简单，可直接用于稀
甲醛的配制，适用于医院制剂室推广。
Wu Xiaoqiong，Yan Hui，Yang Feng，Jia Yang
（ Department of Pharmacy，General Hospital of Beijing Military Ｒegion， Beijing，China 100700）
Abstract： Objective To optimize the fast and simple depolymerization method of paraformldehyde． Methods The orthogonal experiment
注射剂作为药品的一种重要剂型，被广泛应用于临床，由于 其直接注入人体体内而发挥疗效，因此其安全性显得更为重要。 现阶段注射剂的质量越来越受到高度关注，而注射剂的灭菌是关 系到药品质量、保证用药安全的重要工艺步骤之一，应选择合适 的灭菌方法，既能杀灭、除去微生物而达到灭菌的目的，又能保持
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药物稳定。因此，无菌检查是检查灭菌效果的主要手段，也是注射 剂质量控制的重要指标。
A 1 1 1 2 2 2 3 3 3 2． 00 3． 67 4． 00 2． 00
因素
B
C
1
1
2
2
3
3
1
2
2
3
3
1
1
3
2
1
3
2
3． 00
2． 33
3． 00
3． 67
3． 67
3． 67
0． 67
1． 33
D( 空白) 1 2 3 3 1 2 2 3 1
3． 33 3． 00 3． 33 0． 33
根据以往试验经验及有关资料，温度、加热时间、振摇时间对 解聚程度有很大的影响。为减少试验次数，现将温度（ 因素 A） 、加 热时间（ 因素 B） 、振摇时间（ 因素 C） 作为可变因素进行考察，每 个因素各取 3 个水平，采用正交试验，按 L9（ 34） 表安排试验。因 素水平见表 1，其中因素 D 设计成空白列，以便进行方差分析。
+ － － －－－ － － －
注 : + / － 表 示 有 生 长 ，但 比 较 微 弱 ; + 表 示 生 长 良 好 ; － 表 示 不 生 长。表 2 同。
表 2 薄膜过滤法冲洗量考察结果
试验菌
供试品组试验菌生长结果
阳性对照
冲洗量
1d 2d 3d 4d 5d 6d 7d 1 2
黑曲霉
未冲洗 + － － － － － － + －
显著性 ＊＊＊
＊ ＊
注: F0． 1( 2． 2) = 9． 00，F0． 05( 2． 2) = 19． 00，F0． 01( 2． 2) = 99． 00。
25 mL 与溴麝香草酚蓝指示液 2 滴，滴加氢氧化钠滴定液（ 1 mol / L） 至溶液显蓝色； 再精密加氢氧化钠滴定液（ 1 mol / L） 25 mL，瓶口
100
+ － － －－－ － － －
200
+ － － －－－ － － －
枯草芽孢杆菌 未冲洗 + － － － － － － + －
样品 厂家
A B C D E F
金黄色 葡萄球菌
24 24 24 24 24 24
样品阳性组试验菌生长良好时间( h)
大肠 枯草芽 生孢 白色假丝
埃希菌 孢杆菌 梭菌 酵母菌
水平 1 2 3
表 1 正交试验因素水平表
因素 A( ℃ ) 85 90 95
因素 B( min) 60 90
120
因素 C( min) 0
10 20
D( 空白) － － －
2． 2 评分标准 为 便 于 客 观 、准 确 地 评 价 各 因 素 影 响 多 聚 甲 醛 解 聚 的 程 度 ，
以甲醛溶液的性状变化作为指标进行评价，指标设为 1 ～ 5 分： 无变化（ 最差） 为 1 分，沉淀物变薄呈片状物为 2 分，片状物变成 絮状物为 3 分，絮状物变成泡沫状为 4 分，全部解聚成澄清液（ 最 好） 为 5 分，分值越高越好。一般而言，含量测定应作为正交试验 的考察指标，但在预试验中，对解聚后的甲醛溶液多次进行含量 测定，各次测定结果无明显差异，故本试验中甲醛溶液含量测定 不作为评价指标。 2． 3 评价指标测定
出版社，2010: 附录Ⅺ H． [ 2 ] 钱文静，张 玫 ． 常见抗菌药品无菌检查中有关冲洗量的探讨 [ J ] ．
江苏药学与临床研究，2005，13( 3) : 63 － 65． [ 3 ] 姚 华，李秋菲，李惠娥，等 ． 伊曲康唑注射液无菌检查方法研究 [ J] ．
中国药业，2009，18( 3) : 20 － 21． (收稿日期： 2013 － 12 － 13； 修回日期： 2014 － 02 － 14 )
Key words： paraformldehyde； orthogonal experiment； depolymerization
檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨
表 1 薄膜过滤法冲洗量考察结果
表 3 各厂家产品试验菌生长情况考察结果
以表 1 列出的因素水平及评价指标安排试验，分组顺序见表 2。取一定量的多聚甲醛溶液，按规定的温度和时间，置水浴锅中 加热，取出溶液观察解聚情况。结果见表 2。 2． 4 方差分析
结果见表 3。对表 2 进行直观分析，通过 Ｒj 值可以看出，在 影响解聚条件的因素中，温度影响最大，振摇时间影响次之，加热 时间影响最小，顺序依次为 A ＞ C ＞ B。方差分析表明，因素 A 为 主要影响因素，因素 C 和因素 B 影响不显著，故解聚的最佳条件 为 A3C1B3，即加热温度为 95 ℃ ，加热时间为 60 min，振摇时间为 20 min。 2． 5 验证试验
取 3 个批号的甲醛溶液，按 2． 3 项下方法进行解聚，并按药 典方法对解聚后的甲醛溶液进行含量测定 [3 ]。取解聚后的甲醛溶 液约 1． 5 mL，精密称定，置锥形瓶中，加水 10 mL、过氧化氢试液
序号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 Ⅰj Ⅱj Ⅲj Ｒj
表 2 L9( 34) 正交试验及结果
·制剂技术· Preparation Technology
China Pharmaceuticals
2014 年 7 月 20 日 第 23 卷第 14 期 Vol． 23，No． 14，July 20，2014
正交试验设计优选多聚甲醛的解聚方法
武晓琼，闫 荟，杨 锋，贾 阳
（ 中国人民解放军北京军区总医院药剂科，北京 100700）
JYC － 21FS39 型电磁炉（ 九阳股份有限公司） ； HH － S6 型电 热恒温水浴锅（ 北京科伟永兴仪器有限公司） 。甲醛溶液（ 湖南尔 康制药有限公司，批号为 20100701，20110504，20111001，因低温 久贮产生的白色絮状、片状沉淀占原装容积的 2 / 5 以上） ； 纯化 水，过氧化氢试液，溴麝香草酚蓝指示液，氢氧化钠滴定液，盐酸 滴定液（ 北京军区总医院制剂中心，自制） 。 2 方法与结果 2． 1 正交试验设计[2 ]
试验菌
冲洗量
供试品组试验菌生长结果
阳性对照
( mL ) 1 d 2 d 3 d 4 d 5 d 6 d 7 d 1 2
金黄色葡萄球菌 未冲洗 － + / － + － － － － + －
100
+ － － －－－ － － －
200
+ － － －－－ － － －
大肠埃希菌 未冲洗 + － － － － － － + －
本试验中按照方法验证的一般程序 [2 ]，对替加氟注射液的无 菌检查法进行了系统研究。由于本品为氟尿嘧啶的衍生物，属于 抗肿瘤类药物，对各试验菌均无明显抑菌作用，且各厂家产品处 方工艺均存在一定的差异，故先选取处方较复杂的陕西省秦光制 药厂（ 处方为无水碳酸钠、无水亚硫酸钠、活性炭） 的 1 批样品进 行 试 验 。试 验 过 程 中 发 现 ，本 品 对 金 黄 色 葡 萄 球 菌 有 较 弱 的 抑 制 作用，而对其他试验菌无抑菌作用。故选取金黄色葡萄球菌作为 阳性 敏 感 菌 ，并 通 过 加 大 冲洗 量 的 方 法 优 化 试 验 条件 。通过 试 验，确定取规定量样品、薄膜过滤后用 0． 1% 蛋白胨缓冲液冲洗 100 mL 时，能够很好地消除其抑菌作用。同时，用所建立的方法 对其他 5 个厂家的 5 批样品进行方法确认，结果均能达到检查要 求，最终确定该方法适合于替加氟注射液整个品种的无菌检查。 参考文献： [1] 国家药典委员会 ． 中华人民共和国药典( 二部) [M]． 北京: 化学工业