7种红曲霉的扫描电镜观察
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117t h H os p it al of PL A
Objective : To st udy t he supermicro2morp holo gy of Mo nascus f ungi. Met hods : 7 species of standard st rains Mo nascus f ungi for p reparing Ho ngqu were cultivated o n carry sheet glass and o bserved and co m2 pared af ter p ret reat ment using t he scanning elect ro n micro scope. Result s : There exiss so me differences amo ng several co mmo n Mo nascus f ungi in supermicro2morp hologic character s including hyp ha ,co nidium ,cleistot he2 cium ,asco spores and so o n ,which serve as depo sing t he evidences to classif y and identif y Mo nascus f ungi. Co nclusio n : This st udy may serve as depo sing t he evidences to classif y Mo nascus f ungi and to identif y Ho ngqu.
Key words Mo nascus ,scanning elect ro n micro scope ,identificatio n
红曲霉是一类十分重要的药用真菌 ,系中药红 发白红曲霉 、巴克红曲霉 、烟色红曲霉 、紫红曲霉 、红
曲的基原菌 ,在分类学上属不整囊菌纲 ( Plecto myh2 色红曲霉 、锈色红曲霉和变红红曲霉等 7 种 48 株保
Байду номын сангаас
11 2 方法 将红曲霉标准真菌接种于麦芽汁琼脂培养 L 磷酸盐缓冲液漂洗 3 次 ,转入 1 %锇酸溶液中固定
基上 ,30～32 ℃培养 7d ,使菌种复壮。将生长良好的菌 1h ,再用上述缓冲液漂洗 3 次 ,经 50 %、70 %、90 %和
丝作麦芽汁琼脂 (含 017 %琼脂) 载片培养[4] ,载片下置 100 %乙醇梯度脱水 ,置醋酸异戊酯中 20min ,取出 ,
参考文献 [ 1 ] 邢旺兴 ,程荣珍 ,宓鹤鸣 ,等. 几种常见红曲霉的生理学
特性研究. 药学实践杂志 ,2001 ,19 (4) :231 [ 2 ] 宋洪涛 ,宓鹤鸣 ,郭涛. 中药红曲的研究进展. 药学实践
杂志 ,1999 ,17 (3) :54 [ 3 ] 中国微生物菌种保藏委员会. 中国菌种目录. 北京 :轻工
圆球形 ,直径 23～63μm
卵形 ,41 3～51 4 ×31 6 ～51 5μm
5035 分枝 ,分隔 ,2 ×7μm
梨形 ,单个或成链 ,11 7～41 1 × 61 5～9μm
球形 ,直径 42～78μm
卵形 ,31 6～41 3 ×41 4 ～61 5μm
几种红曲霉菌的菌丝直径 2～8μm ,具横隔 ,分 枝 ,含有空泡及油滴 。分生孢子梗由菌丝生出 ,在其 顶部产生分生孢子 ,单生或 2～10 个成链 ,大多为梨 形 ,少数为卵球形 4～12μm 。闭囊壳球形 ,直径 25～ 75μm ,具柄 ,闭囊壳内散生众多子囊 ,成熟后子囊壁 解体 ,孢子剩留在薄壁的子囊壳内 。子囊孢子卵形 或椭球形 ,2～71 5μm 。 3 讨论 31 1 红曲霉属的菌丝具横隔和分枝 ,内含有空泡及 油滴 ,有些种的菌丝在电镜下已皱缩 ,表面呈纵纹 , 如 5032 ;有的已断裂 ,如 5017 ;有的在横隔处膨大形 成多种形态的奇形菌丝 ,如 5015 。 31 2 红曲霉属的分生孢子单生或 2～10 个成链 ,大 多为梨形 ,少数为卵球形 。根据孢子大小及表面纹 饰可分为 3 型 : 光滑型 ,包括 5015 和 5035 ; 细网纹 型 ,包括 5016 和 5032 ;粗网纹有 5017 、5021 和 5029 。 31 3 红曲霉的闭囊壳即被子器均为球形 , 大小不 一 ,具柄 ,柄的长短也不一 ,有些种的闭囊壳外有菌 丝包裹 ,如 5015 ;有的在闭囊壳表面呈现出粗网纹 , 如 5015 、5021 、5029 和 5032 ;有的在闭囊壳表面呈现
5017
分枝 ,分隔 ,多己断裂 ,2 ×7μm
梨形 ,少见 ,多单个 ,51 2～7 ×8 ～9μm
圆球形 ,直径 25～40μm
卵形 21 5 ×6μm
5021 分枝 ,分隔 ,3 ×8μm
少见 ,梨形 ,表面网纹 ,单个或 成链 ,51 2～7 ×8～10μm
圆球形 ,直径 25～60μm
卵 形 , 31 6 ～ 41 7 × 61 8μm
业出版社. 1983 :360. 361 [4 ] 陈驹声. 近代工业微生物学 (下册) . 上海 :上海科学技术
出版社. 1982 :553 [ 5 ] 诸葛健 ,王正祥. 工业微生物实验技术手册. 第 2 版. 北
京 :中国轻工业出版社 ,1994 :202 (收稿日期 2004204201)
中 ( HM G - CoA) 还原酶抑制剂[2] 。然而 ,对红曲霉的
标准株进行了扫描电镜的观察和比较研究 ,为该属 真菌分类提供资料并为红曲的生药鉴定提供佐证 。
药 基础研究尚不深入 ,红曲霉的命名尚有不完备之处 , 1 材料与方法
研 至今国际上不能形成统一的标准 ,对某些独立的种 , 仍有异议 。如中国微生物菌种保藏管理委员会现有
出细网纹 ,如 5016 、5017 和 5035 。子囊孢子卵形或 椭球形 , 大 小 不 一 , 可 大 致 分 成 2 型 : 5016 、5017 、 5021 和 5035 的 子 囊 孢 子 相 对 较 小 为 Ⅰ类 ; 5015 、 5029 、5032 的子囊孢子较大为 Ⅱ类 。
本项研究应用扫描电镜技术 ,发现红曲霉属的 超微结构形态是有一定差异 ,为红曲霉的属下分类 , 提供了证据 ,为真菌的分类工作增添新的内容 ;同时 亦可作为红曲生药的鉴别依据 。
5029
分枝 ,分隔 ,多己断裂不 完整 ,11 7 ×71 2μm
链 ,5～71 8 ×81 5～101 5μm
圆 球 形 , 直 径 31 ～ 63μm ,成熟者多已破裂
卵 形 , 41 3 ～ 51 4 × 61 5μm
5032
分 枝 , 分 隔 , 21 7 × 71 2μm
梨形 ,表面网纹 ,单个或成链 ,7 ～81 1 ×81 5～101 5μm
含 20 %甘油的无菌棉球以保湿 ,32 ℃培养 10d ,备用。
临界点干燥[5] 。用 Eiko IB23 型离子溅射仪喷金后
11 3 扫描电镜观察 取红曲霉菌已培养 10d 的载 置 H IAC H I S2520 扫描电镜下 (20 KV) 进行观察 。
片培养物 , 将粘有菌丝的盖玻片轻轻揭下 , 然后在 2 结果
cetes) 、散囊菌目 ( Eurtotiales) 、红曲科 ( Mo nascace2 存菌株 , 其中 有 22 株只 是通 称为 红 曲 霉 , 未 予 分
ae) [1] 。近年来的研究发现 ,红曲霉能产生被认为是 种[3] ;因此 ,我们对几种常见的制造红曲用的红曲霉
当今最有前途的降脂药物 - 羟甲基戊二醛辅酶 A
11 1 菌株 实验用红曲霉菌的名称及来源 ,见表 1 。
究
表 1 实验用红曲霉菌株的名称及来源
序号 1 2 3 4 5 6 7
菌株 橙色红曲霉 5015 变红红曲霉 5016 发白红曲霉 5017 巴克红曲霉 5021 红色红曲霉 5029 紫红红曲霉 5032 烟色红曲霉 5035
种名 M onascus auranti acus L ee M. serorubesceus S ato M. albi d us S ato M. barkeri Dangerd M. ruber v an Tie g hem M. p u r p ureus W ent M. f uli gi nos us S ato
79
21 5 %戊二醛溶液中固定 12h ,用 p H71 2 的 01 1mol/
扫描电镜观察到的红曲霉超微结构特征见表 2 。
表 2 红曲霉的扫描电镜观察结果
菌号
菌丝
分生孢子
被子器
子囊孢子
5015
分枝 ,分隔 ,横隔处膨大 形成奇形菌丝 ,3 ×8μm
梨形 ,很少 ,单个或成链 ,表面 光滑 ,51 4 ×71 5μm
来源 由汾酒酒曲分离 由古田红曲米中分离 原大连科学研究所 M171 由广州酒曲分离 M146 四川食品工业研究所 3. 530 上海工业微生物研究所 M212 由茅台酒厂分离
3 国家中医药管理局重点课题基金资助 (97Z027) 78
浙江中医学院学报 2005 年 1 月第 29 卷第 1 期
圆 球 形 , 直 径 35 ～ 75μm ,有菌丝包裹
卵形 ,31 6～41 5 ×31 9 ～51 4μm
5016 分枝 ,分隔 ,2 ×5μm
梨形 ,少见 ,单个或成链 ,表面 网纹 ,6～7 ×8～11μm
圆球 形 , 量 少 , 直 径 25 ～60μm
卵 形 , 31 6 ～ 51 7 × 61 8μm
观察和比较 。结果 :不同种红曲霉之间在菌丝 、分生孢子 、闭囊壳和子囊孢子等超显微特征方面存在一定的差异 ,据此可对红曲 霉进行区分和鉴别 。结论 :红曲霉的扫描电镜观察为该属真菌的分类提供依据并为中药红曲的生药鉴定提供佐证 。
关键词 红曲霉 扫描电镜 鉴别
Study on the Physiological Characteristics of Seven Monascus Fungi by Scanning Electron Microscope Yu Yan2 ling , Xing Wangxing △ , Chen Shijing T CM H os pi t al of Z hej i an g Prov i nce , H an g z hou ( 310006) △T he
浙江中医学院学报 2005 年 1 月第 29 卷第 1 期
7 种红曲霉的扫描电镜观察 3
俞艳玲 邢旺兴 △ 陈士景 △ 浙江中医学院附属医院 杭州 310006 △中国人民解放军第 117 医院
摘要 目的 :研究红曲霉的超显微特征 。方法 :玻片法培养 7 种常见制备红曲用红曲霉标准株 ,预处理后进行扫描电镜的
Objective : To st udy t he supermicro2morp holo gy of Mo nascus f ungi. Met hods : 7 species of standard st rains Mo nascus f ungi for p reparing Ho ngqu were cultivated o n carry sheet glass and o bserved and co m2 pared af ter p ret reat ment using t he scanning elect ro n micro scope. Result s : There exiss so me differences amo ng several co mmo n Mo nascus f ungi in supermicro2morp hologic character s including hyp ha ,co nidium ,cleistot he2 cium ,asco spores and so o n ,which serve as depo sing t he evidences to classif y and identif y Mo nascus f ungi. Co nclusio n : This st udy may serve as depo sing t he evidences to classif y Mo nascus f ungi and to identif y Ho ngqu.
Key words Mo nascus ,scanning elect ro n micro scope ,identificatio n
红曲霉是一类十分重要的药用真菌 ,系中药红 发白红曲霉 、巴克红曲霉 、烟色红曲霉 、紫红曲霉 、红
曲的基原菌 ,在分类学上属不整囊菌纲 ( Plecto myh2 色红曲霉 、锈色红曲霉和变红红曲霉等 7 种 48 株保
Байду номын сангаас
11 2 方法 将红曲霉标准真菌接种于麦芽汁琼脂培养 L 磷酸盐缓冲液漂洗 3 次 ,转入 1 %锇酸溶液中固定
基上 ,30～32 ℃培养 7d ,使菌种复壮。将生长良好的菌 1h ,再用上述缓冲液漂洗 3 次 ,经 50 %、70 %、90 %和
丝作麦芽汁琼脂 (含 017 %琼脂) 载片培养[4] ,载片下置 100 %乙醇梯度脱水 ,置醋酸异戊酯中 20min ,取出 ,
参考文献 [ 1 ] 邢旺兴 ,程荣珍 ,宓鹤鸣 ,等. 几种常见红曲霉的生理学
特性研究. 药学实践杂志 ,2001 ,19 (4) :231 [ 2 ] 宋洪涛 ,宓鹤鸣 ,郭涛. 中药红曲的研究进展. 药学实践
杂志 ,1999 ,17 (3) :54 [ 3 ] 中国微生物菌种保藏委员会. 中国菌种目录. 北京 :轻工
圆球形 ,直径 23～63μm
卵形 ,41 3～51 4 ×31 6 ～51 5μm
5035 分枝 ,分隔 ,2 ×7μm
梨形 ,单个或成链 ,11 7～41 1 × 61 5～9μm
球形 ,直径 42～78μm
卵形 ,31 6～41 3 ×41 4 ～61 5μm
几种红曲霉菌的菌丝直径 2～8μm ,具横隔 ,分 枝 ,含有空泡及油滴 。分生孢子梗由菌丝生出 ,在其 顶部产生分生孢子 ,单生或 2～10 个成链 ,大多为梨 形 ,少数为卵球形 4～12μm 。闭囊壳球形 ,直径 25～ 75μm ,具柄 ,闭囊壳内散生众多子囊 ,成熟后子囊壁 解体 ,孢子剩留在薄壁的子囊壳内 。子囊孢子卵形 或椭球形 ,2～71 5μm 。 3 讨论 31 1 红曲霉属的菌丝具横隔和分枝 ,内含有空泡及 油滴 ,有些种的菌丝在电镜下已皱缩 ,表面呈纵纹 , 如 5032 ;有的已断裂 ,如 5017 ;有的在横隔处膨大形 成多种形态的奇形菌丝 ,如 5015 。 31 2 红曲霉属的分生孢子单生或 2～10 个成链 ,大 多为梨形 ,少数为卵球形 。根据孢子大小及表面纹 饰可分为 3 型 : 光滑型 ,包括 5015 和 5035 ; 细网纹 型 ,包括 5016 和 5032 ;粗网纹有 5017 、5021 和 5029 。 31 3 红曲霉的闭囊壳即被子器均为球形 , 大小不 一 ,具柄 ,柄的长短也不一 ,有些种的闭囊壳外有菌 丝包裹 ,如 5015 ;有的在闭囊壳表面呈现出粗网纹 , 如 5015 、5021 、5029 和 5032 ;有的在闭囊壳表面呈现
5017
分枝 ,分隔 ,多己断裂 ,2 ×7μm
梨形 ,少见 ,多单个 ,51 2～7 ×8 ～9μm
圆球形 ,直径 25～40μm
卵形 21 5 ×6μm
5021 分枝 ,分隔 ,3 ×8μm
少见 ,梨形 ,表面网纹 ,单个或 成链 ,51 2～7 ×8～10μm
圆球形 ,直径 25～60μm
卵 形 , 31 6 ～ 41 7 × 61 8μm
业出版社. 1983 :360. 361 [4 ] 陈驹声. 近代工业微生物学 (下册) . 上海 :上海科学技术
出版社. 1982 :553 [ 5 ] 诸葛健 ,王正祥. 工业微生物实验技术手册. 第 2 版. 北
京 :中国轻工业出版社 ,1994 :202 (收稿日期 2004204201)
中 ( HM G - CoA) 还原酶抑制剂[2] 。然而 ,对红曲霉的
标准株进行了扫描电镜的观察和比较研究 ,为该属 真菌分类提供资料并为红曲的生药鉴定提供佐证 。
药 基础研究尚不深入 ,红曲霉的命名尚有不完备之处 , 1 材料与方法
研 至今国际上不能形成统一的标准 ,对某些独立的种 , 仍有异议 。如中国微生物菌种保藏管理委员会现有
出细网纹 ,如 5016 、5017 和 5035 。子囊孢子卵形或 椭球形 , 大 小 不 一 , 可 大 致 分 成 2 型 : 5016 、5017 、 5021 和 5035 的 子 囊 孢 子 相 对 较 小 为 Ⅰ类 ; 5015 、 5029 、5032 的子囊孢子较大为 Ⅱ类 。
本项研究应用扫描电镜技术 ,发现红曲霉属的 超微结构形态是有一定差异 ,为红曲霉的属下分类 , 提供了证据 ,为真菌的分类工作增添新的内容 ;同时 亦可作为红曲生药的鉴别依据 。
5029
分枝 ,分隔 ,多己断裂不 完整 ,11 7 ×71 2μm
链 ,5～71 8 ×81 5～101 5μm
圆 球 形 , 直 径 31 ～ 63μm ,成熟者多已破裂
卵 形 , 41 3 ～ 51 4 × 61 5μm
5032
分 枝 , 分 隔 , 21 7 × 71 2μm
梨形 ,表面网纹 ,单个或成链 ,7 ～81 1 ×81 5～101 5μm
含 20 %甘油的无菌棉球以保湿 ,32 ℃培养 10d ,备用。
临界点干燥[5] 。用 Eiko IB23 型离子溅射仪喷金后
11 3 扫描电镜观察 取红曲霉菌已培养 10d 的载 置 H IAC H I S2520 扫描电镜下 (20 KV) 进行观察 。
片培养物 , 将粘有菌丝的盖玻片轻轻揭下 , 然后在 2 结果
cetes) 、散囊菌目 ( Eurtotiales) 、红曲科 ( Mo nascace2 存菌株 , 其中 有 22 株只 是通 称为 红 曲 霉 , 未 予 分
ae) [1] 。近年来的研究发现 ,红曲霉能产生被认为是 种[3] ;因此 ,我们对几种常见的制造红曲用的红曲霉
当今最有前途的降脂药物 - 羟甲基戊二醛辅酶 A
11 1 菌株 实验用红曲霉菌的名称及来源 ,见表 1 。
究
表 1 实验用红曲霉菌株的名称及来源
序号 1 2 3 4 5 6 7
菌株 橙色红曲霉 5015 变红红曲霉 5016 发白红曲霉 5017 巴克红曲霉 5021 红色红曲霉 5029 紫红红曲霉 5032 烟色红曲霉 5035
种名 M onascus auranti acus L ee M. serorubesceus S ato M. albi d us S ato M. barkeri Dangerd M. ruber v an Tie g hem M. p u r p ureus W ent M. f uli gi nos us S ato
79
21 5 %戊二醛溶液中固定 12h ,用 p H71 2 的 01 1mol/
扫描电镜观察到的红曲霉超微结构特征见表 2 。
表 2 红曲霉的扫描电镜观察结果
菌号
菌丝
分生孢子
被子器
子囊孢子
5015
分枝 ,分隔 ,横隔处膨大 形成奇形菌丝 ,3 ×8μm
梨形 ,很少 ,单个或成链 ,表面 光滑 ,51 4 ×71 5μm
来源 由汾酒酒曲分离 由古田红曲米中分离 原大连科学研究所 M171 由广州酒曲分离 M146 四川食品工业研究所 3. 530 上海工业微生物研究所 M212 由茅台酒厂分离
3 国家中医药管理局重点课题基金资助 (97Z027) 78
浙江中医学院学报 2005 年 1 月第 29 卷第 1 期
圆 球 形 , 直 径 35 ～ 75μm ,有菌丝包裹
卵形 ,31 6～41 5 ×31 9 ～51 4μm
5016 分枝 ,分隔 ,2 ×5μm
梨形 ,少见 ,单个或成链 ,表面 网纹 ,6～7 ×8～11μm
圆球 形 , 量 少 , 直 径 25 ～60μm
卵 形 , 31 6 ～ 51 7 × 61 8μm
观察和比较 。结果 :不同种红曲霉之间在菌丝 、分生孢子 、闭囊壳和子囊孢子等超显微特征方面存在一定的差异 ,据此可对红曲 霉进行区分和鉴别 。结论 :红曲霉的扫描电镜观察为该属真菌的分类提供依据并为中药红曲的生药鉴定提供佐证 。
关键词 红曲霉 扫描电镜 鉴别
Study on the Physiological Characteristics of Seven Monascus Fungi by Scanning Electron Microscope Yu Yan2 ling , Xing Wangxing △ , Chen Shijing T CM H os pi t al of Z hej i an g Prov i nce , H an g z hou ( 310006) △T he
浙江中医学院学报 2005 年 1 月第 29 卷第 1 期
7 种红曲霉的扫描电镜观察 3
俞艳玲 邢旺兴 △ 陈士景 △ 浙江中医学院附属医院 杭州 310006 △中国人民解放军第 117 医院
摘要 目的 :研究红曲霉的超显微特征 。方法 :玻片法培养 7 种常见制备红曲用红曲霉标准株 ,预处理后进行扫描电镜的