微柱凝胶技术操作规程

微柱凝胶技术操作规程 SXYJ-GZ-0228

1目的规范微柱凝胶技术检测操作。

2适用范围采用微柱凝胶技术进行抗人球蛋白试验。

3职责检测者负责按此程序进行微柱凝胶技术操作。

4材料与设备Biovue工作站系统（包括孵育器、离心机）、微柱凝胶卡（Anti-IgG,-C3d;polyspecific）、低离子增强液（BLISS液）、微量加量枪、吸头等、KUBOTA KA-2200型离心机、0.9%无菌生理盐水；根据检测需要准备相应的抗血清及试剂红细胞。5操作方法

5.1待检标本的准备及要求

5.1.1患者血清准备不抗凝血样3-5ml，退缩充分，离心3000rpm/5min分离出血清备用。

5.1.2红细胞悬液的准备 EDTA抗凝血样3400rpm/2min（KA-2200型离心机Ⅲ档离心2次）压积红细胞。取另一小试管作好标记加入190ul生理盐水，加入压积红细胞10ul，混匀，配制成4%红细胞悬液；或加入1ml生理盐水，加入压积红细胞10ul，混匀，配制成0.8%红细胞悬液。

5.2直接抗人球蛋白试验

5.2.1取微柱凝胶卡，做好标记，揭开铝箔封条；

5.2.2加入4%待检红细胞悬液10 ul；

5.2.3离心5min，观察结果。

5.3间接抗人球蛋白试验（添加法）

5.3.1打开孵育器将温度设定为37℃；取微柱凝胶卡，做好标记，揭开铝箔封条；

5.3.2每孔加BLISS液50ul；

5.3.3加入10ul4%红细胞悬液、或者20ul抗体筛选试剂红细胞（sanquin公司）、或者25ul

反定型试剂O细胞（北京金豪公司）；

5.3.4加入患者血清或试剂抗血清40ul；

5.3.537℃孵育15min，离心5min，观察结果。

5.4间接抗人球蛋白试验（重悬法）

5.4.14%红细胞1ml加入3ml生理盐水，900g离心5min，弃上清加入4mlBLISS液，配制

成浓度为1%的红细胞悬液；

5.4.2打开孵育器将温度设定为37℃；取微柱凝胶卡，做好标记，揭开铝箔封条；

5.4.3加入1%的红细胞悬液40ul，加入患者血清或试剂抗血清40ul；

5.4.437℃孵育15min，离心5min，观察结果。

5.5间接抗人球蛋白试验（酶处理法）

5.5.1打开孵育器将温度设定为37℃；取微柱凝胶卡，做好标记，揭开铝箔封条；

5.5.2加入4%的酶处理红细胞悬液10ul，加入患者血清或试剂抗血清40ul；

5.5.337℃孵育15min，离心5min，观察结果。

6结果判定凝集强度判定参考下图标准

阳性结果红细胞凝集为阳性结果，表明红细胞表面存在相应的抗原。无论是否发生凝集，溶血的存在视为阳性结果。

阴性结果无溶血及红细胞未凝集是阴性结果，表明红细胞表面不存在相应的抗原。

7注意事项

7.1微柱凝胶卡室温保存，应在剥除铝箔纸1小时之内使用试剂卡。如果柱内的试剂液面位

于或低于玻璃珠的顶端，请勿使用该试剂卡。

7.2加样时请勿让移液器吸头接触到反应腔的侧壁，一旦发生触碰，请在向下一反应腔中加

样之前更换吸头。

7.3加样后应确保反应物在反应腔中进行孵育，离心前反应物不能与微柱中的抗人球蛋白试

剂相混合。

7.4质量控制设置阳性对照——用含有IgG抗体的人血清或血浆及相关抗原阳性的红细胞

进行抗IgG活性分析。然后BLISS添加法或重悬法执行实验；设置阴性对照——使用不含有非期待红细胞抗体的人血清和血浆及未致敏的红细胞。然后按照BLISS添加法或重悬法执行实验。

7.5实验结束后，从微柱的正、反两面判读凝集和/或溶血结果，在有较强阳性反应的试剂

卡一侧读取并记录反应强度。

8依据

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