血清-灭火补体

血清灭活

——仁者见仁智者见智

➢一般以56℃、30分钟来处理已解冻的血清,因为此加热步骤,可以使补体去活化,而补体所参与的反应有: 溶细胞活性,平滑肌的收缩,肥大细胞和血小板组胺的释放,增强吞噬作用,淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和激活.

实验显示,即使对血清进行正确的热灭活处理,对大多数的细胞而言也是不需要的.经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低.

而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是"小黑点",常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者认为是微生物的分裂扩增.

因此若非必须,可以不需要做热处理这一步.如此一来,不但节省宝贵的时间,更确保血清的质量.

➢血清灭活主要是灭活补体，但是如果温度过高，血清中的一些生长因子可能活性降低甚至丧失，不但不会改善细胞的生长，反而降低了支持细胞生长的能力。所以要做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。

根据我们实验室的经验，进口的血清一般不灭活，细胞生长不会有任何影响；但是国产血清，比如我们最常用的杭州四季清血清，还是按56℃，30分钟灭活一下比较放心。

➢一定要灭活,即使是进口血清也一定灭活！我3月份定的Gibco新生牛血清，按照说明没有灭活，结果实验一直做不出，分析了2个月，最后发现相同条件下，用我分装的未灭活血清做不出，而用别人的灭活的Gibco新生牛血清却非常好，因此，有时候血清中未检出的成分一定要灭活，否则浪费财力物力！

➢一般来说，像巨噬细胞或者能被补体激活的而影响实验过程或者结果的细胞，血清在使用前必须灭火，还有就是原代细胞，这类细胞必须使用灭活血清；但是像其他细胞株，没必要的。因为灭火过程中不仅会灭火补体，还能损伤血清中的其他物质，不利于细胞生长。(I agree with this opinion!!!)