乙肝疫苗PPT课件
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10
重组酵母乙肝疫苗
重组酵母乙肝疫苗主要以美国 Merck 公司公司为 代表。在国内主要厂家是：北京天坛生物，深圳康 泰生物，大连高新，华兰生物。
11
重组酵母的构建
12
使用重组酵母的原因
（1）酵母对培养基的要求低，价廉易得。 （2）.酵母细胞生长快，故生产率高。 （3）.动物细胞生长慢，容易染菌，对操作要求严。 （4）.酵母系统容易放大，动物细胞系统放大难。
5
血源乙肝疫苗的制备：是以密度梯度离心为主， 结合盐析和超滤为辅的综合纯化方法。
1
在HBs Ag阳性血 浆内加入氯化钙， 除去纤维蛋白。加 入硫酸铵经低速离 心收集沉淀即为 HBs Ag的粗提物。
2
精提纯，采用超速 离心技术。可将HBs Ag与球蛋白有效分 离，再通过以蔗糖为 介质的速率区带离心 才能彻底分离。
18
乙肝疫苗纯度的测定
疫苗纯度的测定 乙肝疫苗是通过肌肉注射的方式进 入人体系统，为了降低疫苗内杂质含量对人体产生的 不良影响，必须进行疫苗的纯度检测。乙肝疫苗表面 抗原的纯度检定是疫苗质量控制的关键手段之一。目 前分析测定重组乙型肝炎疫苗纯度的HPLC常用方法是 应用TSK-G5000PW分子筛。
乙肝疫苗
1
乙肝人群现状
乙肝是乙型肝炎病毒（HBV）感染引起的一种传染性疾病。HBV不仅 能引起急性肝炎、慢性肝炎，更为严重的是它与肝硬化、肝癌的发生有
密切关系。据世界卫生组织(WHO)报道，全球约有20亿人感染过乙肝病 毒(HBV)，3.5 亿人患有慢性肝病，其中 15.25%发展为肝硬化和肝癌，
由于核心抗原在血中不易测到，试剂盒也不过关，所以还剩两 对半抗原抗体，这就是人们常说的“乙肝两对半”检查，或称 “乙肝五项”检查。平常所说得大三阳，为急性或慢性乙肝， 病毒复制活跃，传染性强。小三阳为急性或慢性乙肝，但传染 性较弱。
乙肝两对半，是用来排查机体有无感染乙肝病毒，对于乙肝 传染性强弱仅能做一个初步的估计指标。HBV-DNA检查，是 用来检查乙肝患者体内的乙肝病毒数量、复制指标，能够能为 精确的判断出乙肝病毒在体内的复制、传染强弱情况。
3
表面抗原的灭活， HBs Ag经胃酶消化 后通过洗涤浓缩，将 残存的微量杂蛋白彻 底去除。
6
血源乙肝疫苗
自1985年以来，我国一直采用 接种血源乙肝疫苗预防乙肝，血 源乙肝疫苗对控制我国乙肝大面 积流行曾起了很大作用，但是， 由于血源乙肝疫苗需用乙肝病毒 表面抗原携带者的血浆为原料， 它具有一些自身无法克服的缺点 。
每年因此疾病死亡50 万~75 万人.。我国乙肝的感染率约 60%，乙肝表 面抗原的携带率约 10%，即有1.2 亿人携带乙肝病毒；每年约有 30 万 人最终将死于乙肝有关的慢性疾病。
2
如何判断是否感染乙肝？
乙肝两对半是国内医院最常用的乙肝病毒 (HBV)感染检测血 清面标抗. 志体物、。e抗乙原型和肝e炎抗病体毒、免核疫心学抗标原记和一核共心3抗对体，。即表面抗原和表
血源乙肝疫苗 基因工程疫苗
从乙型肝炎病毒携带者血浆中分 离乙肝表面抗原(HbsAg)，经处理 后而制成。
基因工程乙肝疫苗是采用基因 工程技术生产的，即构建含有乙肝 表面抗原基因的重组质粒，然后转 染相应的宿主细胞，如酵母、 CHO细胞，生产乙肝表面抗原蛋 白。利用重组酵母生产的叫重组酵 母乙肝疫苗，利用CHO细胞生产 的叫重组CHO乙肝疫苗。
3
乙肝疫苗
“ 乙肝疫苗是一种预防乙型肝
炎的疫苗 ，乙肝疫苗接种后， 可刺激免疫系统产生保护性抗 体，这种抗体存在于人的体液 之中，乙肝病毒一旦出现，抗 体会立即作用，将其清除，阻 止感染，并不会伤害肝脏，从 而使人体具有了预防乙肝的免 疫力。因此乙肝疫苗成为生活 中不可缺少的一把保护伞。
”
4
乙肝疫苗可分为
7
血源乙肝疫苗的缺点：
1
乙肝表面抗原携带者由于已感染乙肝病毒，在 此情况下，再抽取其血浆作为乙肝疫苗原料，对
携带者的身体健康有损害；
2
疫苗的生产受到乙肝病毒表面抗原携带者血
浆来源和质量限制，无法大规模稳定生产；
8
血源乙肝疫苗的缺点：
3
在表面抗原阳性血浆的采集、运输和加工过程
中，存在着引发血源性传染病流行的可能性；
17Baidu Nhomakorabea
基因重组乙肝疫苗
CHO细胞属哺乳动物细胞类，它是基因工程表达系统中最高等 的宿生细胞，其表达产物更接近于天然产品。同重组酵母乙肝疫苗 相比，重组CHO细胞乙肝疫苗具有以下特点：
CHO细胞表达的重组乙肝疫苗是高等真核细胞表达产物，其天然 结构较低等的真核细胞酵母表达的HBs Ag蛋白更适合人体吸收， 生产过程中不同于酵母使用硫氰酸盐处理，安全性好。
19
国产与进口乙肝疫苗的区别：
“主要区别： 因采用的毒株和培养工艺不一样，所以会引起：产生抗体数量的多少，防疫
时间的长短，副反应的大小等方面的差异。国内的疫苗一般可维持5年左右的
免疫（保护）作用，进口的可以达到15年以上 ，这里所讲不是我们老百姓所
说的保护性抗体存在15年，而是人体的细胞记忆 。
在血源乙肝疫苗的生产过程中，虽采用三步
4
灭活工艺，但三步灭活不足以将血源中所有已
知和未知的潜在致病因子全部灭活，难以最大
限度地保证血源乙肝疫苗受种者绝对安全；
9
血源乙肝疫苗的缺点：
如上所述，为了灭活乙肝病毒，需采用三步 灭活工艺，但三步灭活对疫苗的免疫原性有影响 。因此，由于血源乙肝疫苗的内部矛盾性，决定 了血源乙肝疫苗只能作为一种过渡性疫苗， 1997年卫生部专门下发57号文件，具体部署用 基因工程乙肝疫苗取代血源乙肝疫苗事宜。
13
酵母乙肝疫苗生产工艺
14
酵母乙肝疫苗生产工艺
15
基因重组乙肝疫苗
主要厂家：长春生物制药研究所，兰州生物技术研
究所，武汉生物技术研究所，成都生物技术研究所， 华北制药集团，北京华尔盾公司。
16
基因重组乙肝疫苗
重组[中国仓鼠 卵 巢 细 胞 (CHO细胞)乙肝疫苗]是采用基因工程技 术将无传染性的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的S基因片段克隆到载 体，用重组载体转染真核生物CHO细胞，通过细胞培养、增殖、分 泌出HBsAg到培养液中，收集分泌液，经高速离心、纯化、除菌 后，加入佐剂吸附(氢氧化铝)而制成。
重组酵母乙肝疫苗
重组酵母乙肝疫苗主要以美国 Merck 公司公司为 代表。在国内主要厂家是：北京天坛生物，深圳康 泰生物，大连高新，华兰生物。
11
重组酵母的构建
12
使用重组酵母的原因
（1）酵母对培养基的要求低，价廉易得。 （2）.酵母细胞生长快，故生产率高。 （3）.动物细胞生长慢，容易染菌，对操作要求严。 （4）.酵母系统容易放大，动物细胞系统放大难。
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血源乙肝疫苗的制备：是以密度梯度离心为主， 结合盐析和超滤为辅的综合纯化方法。
1
在HBs Ag阳性血 浆内加入氯化钙， 除去纤维蛋白。加 入硫酸铵经低速离 心收集沉淀即为 HBs Ag的粗提物。
2
精提纯，采用超速 离心技术。可将HBs Ag与球蛋白有效分 离，再通过以蔗糖为 介质的速率区带离心 才能彻底分离。
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乙肝疫苗纯度的测定
疫苗纯度的测定 乙肝疫苗是通过肌肉注射的方式进 入人体系统，为了降低疫苗内杂质含量对人体产生的 不良影响，必须进行疫苗的纯度检测。乙肝疫苗表面 抗原的纯度检定是疫苗质量控制的关键手段之一。目 前分析测定重组乙型肝炎疫苗纯度的HPLC常用方法是 应用TSK-G5000PW分子筛。
乙肝疫苗
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乙肝人群现状
乙肝是乙型肝炎病毒（HBV）感染引起的一种传染性疾病。HBV不仅 能引起急性肝炎、慢性肝炎，更为严重的是它与肝硬化、肝癌的发生有
密切关系。据世界卫生组织(WHO)报道，全球约有20亿人感染过乙肝病 毒(HBV)，3.5 亿人患有慢性肝病，其中 15.25%发展为肝硬化和肝癌，
由于核心抗原在血中不易测到，试剂盒也不过关，所以还剩两 对半抗原抗体，这就是人们常说的“乙肝两对半”检查，或称 “乙肝五项”检查。平常所说得大三阳，为急性或慢性乙肝， 病毒复制活跃，传染性强。小三阳为急性或慢性乙肝，但传染 性较弱。
乙肝两对半，是用来排查机体有无感染乙肝病毒，对于乙肝 传染性强弱仅能做一个初步的估计指标。HBV-DNA检查，是 用来检查乙肝患者体内的乙肝病毒数量、复制指标，能够能为 精确的判断出乙肝病毒在体内的复制、传染强弱情况。
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表面抗原的灭活， HBs Ag经胃酶消化 后通过洗涤浓缩，将 残存的微量杂蛋白彻 底去除。
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血源乙肝疫苗
自1985年以来，我国一直采用 接种血源乙肝疫苗预防乙肝，血 源乙肝疫苗对控制我国乙肝大面 积流行曾起了很大作用，但是， 由于血源乙肝疫苗需用乙肝病毒 表面抗原携带者的血浆为原料， 它具有一些自身无法克服的缺点 。
每年因此疾病死亡50 万~75 万人.。我国乙肝的感染率约 60%，乙肝表 面抗原的携带率约 10%，即有1.2 亿人携带乙肝病毒；每年约有 30 万 人最终将死于乙肝有关的慢性疾病。
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如何判断是否感染乙肝？
乙肝两对半是国内医院最常用的乙肝病毒 (HBV)感染检测血 清面标抗. 志体物、。e抗乙原型和肝e炎抗病体毒、免核疫心学抗标原记和一核共心3抗对体，。即表面抗原和表
血源乙肝疫苗 基因工程疫苗
从乙型肝炎病毒携带者血浆中分 离乙肝表面抗原(HbsAg)，经处理 后而制成。
基因工程乙肝疫苗是采用基因 工程技术生产的，即构建含有乙肝 表面抗原基因的重组质粒，然后转 染相应的宿主细胞，如酵母、 CHO细胞，生产乙肝表面抗原蛋 白。利用重组酵母生产的叫重组酵 母乙肝疫苗，利用CHO细胞生产 的叫重组CHO乙肝疫苗。
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乙肝疫苗
“ 乙肝疫苗是一种预防乙型肝
炎的疫苗 ，乙肝疫苗接种后， 可刺激免疫系统产生保护性抗 体，这种抗体存在于人的体液 之中，乙肝病毒一旦出现，抗 体会立即作用，将其清除，阻 止感染，并不会伤害肝脏，从 而使人体具有了预防乙肝的免 疫力。因此乙肝疫苗成为生活 中不可缺少的一把保护伞。
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乙肝疫苗可分为
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血源乙肝疫苗的缺点：
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乙肝表面抗原携带者由于已感染乙肝病毒，在 此情况下，再抽取其血浆作为乙肝疫苗原料，对
携带者的身体健康有损害；
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疫苗的生产受到乙肝病毒表面抗原携带者血
浆来源和质量限制，无法大规模稳定生产；
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血源乙肝疫苗的缺点：
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在表面抗原阳性血浆的采集、运输和加工过程
中，存在着引发血源性传染病流行的可能性；
17Baidu Nhomakorabea
基因重组乙肝疫苗
CHO细胞属哺乳动物细胞类，它是基因工程表达系统中最高等 的宿生细胞，其表达产物更接近于天然产品。同重组酵母乙肝疫苗 相比，重组CHO细胞乙肝疫苗具有以下特点：
CHO细胞表达的重组乙肝疫苗是高等真核细胞表达产物，其天然 结构较低等的真核细胞酵母表达的HBs Ag蛋白更适合人体吸收， 生产过程中不同于酵母使用硫氰酸盐处理，安全性好。
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国产与进口乙肝疫苗的区别：
“主要区别： 因采用的毒株和培养工艺不一样，所以会引起：产生抗体数量的多少，防疫
时间的长短，副反应的大小等方面的差异。国内的疫苗一般可维持5年左右的
免疫（保护）作用，进口的可以达到15年以上 ，这里所讲不是我们老百姓所
说的保护性抗体存在15年，而是人体的细胞记忆 。
在血源乙肝疫苗的生产过程中，虽采用三步
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灭活工艺，但三步灭活不足以将血源中所有已
知和未知的潜在致病因子全部灭活，难以最大
限度地保证血源乙肝疫苗受种者绝对安全；
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血源乙肝疫苗的缺点：
如上所述，为了灭活乙肝病毒，需采用三步 灭活工艺，但三步灭活对疫苗的免疫原性有影响 。因此，由于血源乙肝疫苗的内部矛盾性，决定 了血源乙肝疫苗只能作为一种过渡性疫苗， 1997年卫生部专门下发57号文件，具体部署用 基因工程乙肝疫苗取代血源乙肝疫苗事宜。
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酵母乙肝疫苗生产工艺
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酵母乙肝疫苗生产工艺
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基因重组乙肝疫苗
主要厂家：长春生物制药研究所，兰州生物技术研
究所，武汉生物技术研究所，成都生物技术研究所， 华北制药集团，北京华尔盾公司。
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基因重组乙肝疫苗
重组[中国仓鼠 卵 巢 细 胞 (CHO细胞)乙肝疫苗]是采用基因工程技 术将无传染性的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的S基因片段克隆到载 体，用重组载体转染真核生物CHO细胞，通过细胞培养、增殖、分 泌出HBsAg到培养液中，收集分泌液，经高速离心、纯化、除菌 后，加入佐剂吸附(氢氧化铝)而制成。