重组酵母乙肝疫苗产品介绍ppt课件
重组乙肝疫苗汉逊酵母的介绍ppt课件
检测正确表达目的产 物的酵母
5.筛选和鉴定经转化处理的酵母细胞，获得外源基因高效表达的 基因工程菌。
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菌种的制备及发酵
重组酵母细胞 小三角瓶
用成功构造的基因工程菌进行扩大培养，经过逐级放大至发 酵罐。原料以碳水化合物为主，不含有毒物质，并加入少量有机 和无机氮源；能容易进行大量有效的乙肝病毒表面抗原的生产； 生产过程中，通常常温进行，操作温和，不考虑防爆问题；生产 过程中考虑防止杂菌的污染。
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疫苗保存
疫苗的稳定性较差，一般在2~8℃下能保存12个月，但当温度升高后，效力很快降低。 在37℃下，许多疫苗只能稳定几天或者几个小时，非常不利于在室温下运输。为了使疫苗 的稳定性提高，可用冻干的方法使之干燥。这样，疫苗的有效期往往可延长1倍或以上，在 室温下其效价的损失亦较慢。 冻干要点是： （1）冷冻，即将疫苗冷冻至共熔点以下。 （2）真空升华，即在真空状态下降水分直接由固态升华为气态。 （3）升温缓慢，即升温的过程尽量缓慢，不使疫苗在任何时间下有融解的情况发生。 （4）冻干好的疫苗应在真空或充氮气后密封保存，使其残余水分保持在3%以下。这样的 疫苗能保持良好的稳定性。
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重组酵母的构建
获取目的基因
1.根据已经测定的编码乙肝病毒表面抗原决定簇基因序列，用化 学合成法直接合成目的基因
构建重组质粒 导入宿主细胞
2. 用DNA连接酶将含有外源基因的DNA片段连接到质粒分子上， 构成DNA重组分子。
3.借组细胞转化手段将DNA重组分子导入酵母细胞内。
培养酵母细胞
4.短时间培养转化酵母细胞，以扩增DNA重组分子。
大三角瓶
发酵过程中，可采用分批补料或连续流加补料以保证最优生 长和维持细胞浓度、生长速度和营养供应之间的适当平衡。可添 加诱导剂如乳糖到发酵液中去以诱导可调节启动子的表达。
基因工程乙肝疫苗ppt课件
答敏感性不同，所以有的人打疫
苗容易产生抗体，而部分人不会
产生抗体。乙肝疫苗第一针后大
概有30%左右的人产生抗体，而
第二针后有50%～70%左右，第
三针后90%左右产生抗体。
打乙肝疫苗前的注意事项有以下几点
•
•
1、有支气管哮喘和血清病的人、对青霉素等药物过敏者和过敏性荨麻疹
患者不能接种乙肝疫苗
•
2、成年人接种乙肝疫苗最好注射在上臂三角肌处，此处的接种成功率最
应用前景
• 基因工程乙肝疫苗较之于血液乙肝疫苗主要区别之一在于它生产来源 不同。它有着许多血源乙肝疫苗不可比拟的优势。
•
自1985年以来，我国一直采用接种血源乙肝疫苗预防乙肝，血源
乙肝疫苗对控制我国乙肝大面积流行曾起了很大作用，但是，由于血
源乙肝疫苗需用乙肝病毒表面抗原携带者的血浆为原、乙肝患者和乙肝病毒携带者不需要接种乙肝疫苗
•
4、非正常出生的婴儿(包括剖腹产)和出生后体质较差的婴儿最好推迟接种
时间
•
5、发烧患者和先天性免疫疾病患者或某些重症患者，应根据医院判断是
什么是基因工程乙肝疫苗？
• 基因工程乙肝疫苗（酵母重组）是一种乙肝 表面抗原（HbsAg）亚单位疫苗，它是采用 现代生物技术将乙肝病毒表达表面抗原的基 因进行质粒构建，克隆进入酵母菌中，通过 培养这种重组酵母菌来表达乙肝表面抗原亚 单位。这种乙肝表面抗原亚单位具有原料易 得、产量大、安全、高效等特点。美国默克 公司研究的此产品最早获美国FDA批准。国 内生产此产品技术均从其引进。
应用学科
免疫学（一级学科）；应用免疫（二级学科 ）；免疫预防（三级学科）
• 发展概况
重组酵母乙肝疫苗首先在美国默克公司研 制成功，并于1986年被美国FDA批准通过。 1991年，我国自行研制的第一个基因工程 疫苗—哺乳动物细胞生产乙肝疫苗获准生 产。我国当前已能大规模生产乙型肝炎表 面抗原重组疫苗，分别称酵母重组和CHO（ 中国仓鼠卵巢细胞）重组疫苗，免疫效果 比同剂量的血源疫苗优良，并且十分安全 ，可以放心使用。
乙肝疫苗接种ppt课件
Mannucci PM,et al. Am J Hematol. 1988 Dec;29(4):211-4. Assad S, et al. Vaccine.2000;18:57-67
乙肝疫苗在血友病患者中的应用
研究结果：
接种3剂后，98％的患者体内产生抗-HBs滴度≥10IU/L，GMT
追查所有感染患者：共19例/239例
队列分析评估感染途径
院内获得性感染爆发源的研究： 160bp的核心区基因序列比较
Hepatitis B vaccination indications
Medical indications: hemodialysis patients or patients who receive clotting factor concentrates. Occupational indications: health-care workers and public-safety workers who have exposure to blood in the workplace; and persons in training in schools of medicine, dentistry,nursing, laboratory technology, and other allied health professions. Behavioral indications: injection drug users; persons with more than one sex partner during the previous 6 months; persons with a recently acquired sexually transmitted disease (STD); all clients in STD clinics; and men who have sex with men.
重组乙肝疫苗(汉逊酵母)的介绍
重组酵母的构建
获取目的基因
1.根据已经测定的编码乙肝病毒表面抗原决定簇基因序列，用化 学合成法直接合成目的基因
构建重组质粒 导入宿主细胞
2. 用DNA连接酶将含有外源基因的DNA片段连接到质粒分子上， 构成DNA重组分子。
3.借组细胞转化手段将DNA重组分子导入酵母细胞内。
培养酵母细胞ຫໍສະໝຸດ 4.短时间培养转化酵母细胞，以扩增DNA重组分子。
2. 乙肝疫苗的发展： 第一代乙肝疫苗
（血源性乙肝疫苗）
第二代乙肝疫苗 （基因工程疫苗）
cho细胞乙肝疫苗
重组酿酒酵母乙肝疫苗 （第一代重组酵母乙肝疫苗 ） 重组汉逊酵母乙肝疫苗 （第二代重组酵母乙肝疫苗）
3.汉逊酵母为甲基营养型酵母，基因组易操作，培养基廉价，有分泌型表达模式，正确的 折叠和修饰，产量理想，发酵液产出杂蛋白少，产物易于纯化，无热源和其他病原体，安 全性好
疫苗保存
疫苗的稳定性较差，一般在2~8℃下能保存12个月，但当温度升高后，效力很快降低。 在37℃下，许多疫苗只能稳定几天或者几个小时，非常不利于在室温下运输。为了使疫苗 的稳定性提高，可用冻干的方法使之干燥。这样，疫苗的有效期往往可延长1倍或以上，在 室温下其效价的损失亦较慢。 冻干要点是： （1）冷冻，即将疫苗冷冻至共熔点以下。 （2）真空升华，即在真空状态下降水分直接由固态升华为气态。 （3）升温缓慢，即升温的过程尽量缓慢，不使疫苗在任何时间下有融解的情况发生。 （4）冻干好的疫苗应在真空或充氮气后密封保存，使其残余水分保持在3%以下。这样的 疫苗能保持良好的稳定性。
9.用丁基琼脂糖进行疏水层析，纯化后的抗原用硫氰酸盐处理以 完成二硫键的交联
10. 再与氢氧化铝共沉淀，此时抗原吸附在氢氧化铝上
生物技术制药乙肝疫苗制备ppt课件
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分离纯化
无菌过滤
离子交换层析
氢氧化铝共沉淀
凝胶层析
无菌过滤
超滤
硫氰酸盐处理
微滤
疏水层析
细胞破碎
微滤
超滤
硅胶吸附
பைடு நூலகம்
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细胞破碎 微滤 超滤
乙肝疫苗的制备
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乙型病毒性肝炎
乙型病毒性肝炎是由乙肝病毒 （HBV）引起的、以肝脏炎性病变 为主，并可引起多器官损害的一种 疾病。乙肝广泛流行于世界各国， 主要侵犯儿童及青壮年，少数患者 可转化为肝硬化或肝癌。因此，它
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乙肝疫苗的概念
乙肝疫苗是用于预防乙肝的特 殊药物。疫苗接种后，可刺激 免疫系统产生保护性抗体，这 种抗体存在于人的体液之中， 乙肝病毒一旦出现，抗体会立
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无菌过滤
氢氧化铝共沉淀
纯化后的抗原再与氢氧化铝共 沉淀，在共沉淀时，抗原吸附 在氢氧化铝上。
分装
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疫苗纯度的测定
乙肝疫苗是通过肌肉注射的方式进 入人体系统，为了降低疫苗内杂质 含量对人体产生的不良影响，必须 进行疫苗的纯度检测。
对重组酵母乙肝疫苗，现有的 HPLC检测系统DTT应结构式用0.1mol/L DTT （DTT即DL-Dithiothreitol，中文名
母细胞，以扩DNA 增
重组分子。
筛选和鉴定经转化处理
的酵母细胞，获得外源
检 基检因测高正效确表表达达的基目因的工产物 检
程菌 的酵母（检）
0.0
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GSK-乙肝疫苗(安在时成人)
名称：乙肝疫苗（安在时成人）介绍：［药品名称］通用名：重组（酵母）乙型肝炎疫苗商品名：安在时（EngerixB）英文名：Hepatitis B Vaccine Made by Recombined DNA Techniques in Yeast汉语拼音：Chongzu （Jiaomu）Yixing Ganyan Yimiao［成分和性状］主要成分1剂量（1.0ml）含有吸附的20微克重组乙肝病毒表面抗原（S蛋白）。
辅料: 氢氧化铝、聚山梨醇脂20、氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、注射用水。
性状:重组（酵母）乙型肝炎疫苗装于玻璃小瓶或预充注射器,为注射用悬液。
小瓶和预充注射器由I型中性玻璃制成,符合欧洲药曲规定。
贮存状态下的容特呈现细微白色沉淀和无色透明上清液。
振摇后疫苗稍呈混浊。
［接种对象］重组（酵母）乙型肝炎疫苗适用于乙型肝炎病毒的易感者，进行主动免疫，预防乙肝病毒感染引起的乙型肝炎。
［作用与用途］用重组（酵母）乙型肝炎疫苗进行预防乙型肝炎的主动免疫, 预防乙肝病毒感染引起的乙型肝炎。
［规格］20微克/1.0毫升/支［免疫程序和剂量］剂量学剂量20μｇ剂量疫苗（1.0ml 悬液）：用于成人和15岁以上儿童接种。
初免程序为达到最佳免疫效果，需连续进行三次肌肉注射。
推荐有两种初免程序：加速程序，即0、1、2月免疫程序。
该程序可快速诱导保护性抗体的产生。
在12个月时应进行第4剂量加强免疫。
第2针与第3针间隔较长的程序，即0、1、6月免疫程序。
该程序提供保护所需的时间较长，但可诱导较高滴度的抗-HBs抗体。
在某些特殊情况下成人需要更快的产生保护性抗体，例如到高流行区旅行者，在出发前一个月开始接种本品，可以使用0、7、21天3剂肌肉注射程序。
当应用这一程序时，推荐在首剂接种后12个月进行第4剂量加强免疫。
（见血清阳转率的药效学特征）。
加强剂量虽然接受全部初免程序的健康个体是否需要加强剂量尚未明确，但是应该注意到当前一些官方免疫程序推荐接种加强剂量。
重组乙型肝炎疫苗(酿酒酵母)
重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）Chongzu Yixing Ganyan Yimiao (Niangjiu Jiaomu) Hepatitis B Vaccine Made by Recombinant DNA Techniques inSaccharomyces Cerevisciae Yeast本品系由重组酵母菌表达的乙型肝炎(简称乙肝)病毒表面抗原（HBsAg）经纯化、加入铝佐剂制成，用于预防乙型肝炎。
1 基本要求生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”有关要求。
2 制造2.1 生产用菌种2.1.1 名称及来源生产用菌种为美国默克公司以DNA重组技术构建的表达HBsAg的重组酿酒酵母原始菌种，菌种号为2150-2-3（pHBS56-GAP347/33）。
2.1.2 种子批的建立应符合“生物制品生产和检定用菌毒种管理规程”规定。
由美国默克公司提供的菌种经扩增1代为主种子批，主种子批扩增1代为工作种子批。
2.1.3 种子批检定主种子批及工作种子批应进行以下项目的全面检定。
2.1.3.1 培养物纯度培养物接种于哥伦比亚血琼脂平板和酶化大豆蛋白琼脂平板，分别于20~25℃和30~35℃培养5~7天，应无细菌和其他真菌被检出。
2.1.3.2 HBSAg基因序列测定应与美国默克公司提供菌种的HBSAg基因序列保持一致。
2.1.3.3 质粒保有率采用平板复制法检测。
将菌种接种到复合培养基上培养，得到的单个克隆菌落转移到限制性培养基上培养，计算质粒保有率，应不低于95%。
PR%= [A /（A+L）] ×100式中PR为质粒保有率，（％）；A为在含腺嘌呤的基本培养基上生长的菌落数，CFU/皿；A+L为在含腺嘌呤和亮氨酸的基本培养基上生长的菌落数，CFU/皿2.1.3.4 活菌率采用血细胞计数仪器，分别计算每毫升培养物中总菌数和活菌数，活菌率应不低于50%活菌率=活菌数/总菌数×100%2.1.3.5抗原表达率取种子批菌种扩增培养，采用适宜的方法将培养后的细胞破碎，分别用Lowry法测定破碎液的蛋白质含量，并采用酶联免疫法或其他适宜方法测定HBsAg含量。
基因工程乙肝疫苗ppt课件
接种第三针。为达到最佳的效果，应按时全程接种。
接种乙肝疫苗的人群
• 处于HBV感染高度危险状态的易感者（未 感染过HBV的人）应接种乙肝疫苗。主要 包括： ①全部新生儿及幼儿园未接种过 乙肝疫苗的孩子； ②传染科、口腔科、 血液室、透析室和经常接触血液的工作 人员； ③新加入某一群体的人员，如新 入伍的战士、新入学的大学生； ④从事 食品服务行业者及保育工作人员； ⑤发 育障碍者，收容所中的患者和工作人员 ； ⑥血液透析患者； ⑦使用血液制品 者； ⑧器官移植前的患者；需长期应用 免疫抑制剂者； ⑨乙肝病毒携带者的家 庭接触者； ⑩注射毒品成瘾者；长期教 养机构中的犯人。
Bye bye~
部专门下发57号文件，具体部署用基因工程乙肝疫苗取代血源乙肝疫
苗事宜。
乙肝疫苗的制备
目的基因的获取
编码乙型肝炎表面抗原的基因的获取
一般的目的基因的获取方法有：
反转录法 化学合成法
反转录—聚合酶链反应法
工程菌的构建
CHO(中国仓鼠卵巢）细胞的特点 ①具有准确的转录后修饰功能 ,表达的糖基化药 物蛋白在分子结构、 理化特性和生物学功能方面最 接近于天然蛋白分子 ②具有产物胞外分泌功 能 ,便于下游产物分离纯化; ③具有重组基因的高效 扩增和表达能力; ④具有贴壁生长特性 ,且有较高的 耐受剪切力和渗透压能力 ,可以进行 悬浮培养 ,表达fibrob2last) ,很少分泌自身的内源蛋白 ,利 于外源蛋白的后分离
自身无法克服的缺点：
•
其一，乙肝表面抗原携带者由于已感染乙肝病毒，在此情况下，
再抽取其血浆作为乙肝疫苗原料，对携带者的身体健康有损害；
•
其二，疫苗的生产受到乙肝病毒表面抗原携带者血浆来源和质量
重组乙型肝炎疫苗(酿酒酵母)
重组乙型肝炎疫苗(酿酒酵母)【药品名称】通用名称：重组乙型肝炎疫苗(酿酒酵母)英文名称：Recombinant Hepatitis B Vaccine （Saccharomyces cerevisiae）【成份】本品系由重组酵母表达的乙型肝炎表面抗原（HBsAg）经纯化、加佐剂吸附后制成【适应症】用于预防乙型肝炎。
【用法用量】(1)本疫苗注射时要充分摇匀。
(2)注射部位为上臂三角肌肌内。
(3)新生儿第1针在出生后24小时内注射，1个月及6个月后注射第2.3针;其他人群免疫程序为第0、1.6个月，剂量均为5微克/支。
【不良反应】本品很少有不良反应，个别人可能有中、低度发热或注射局部微痛，24小时内即自行消失。
【禁忌】患有发热、急性或慢性严重疾病患者及对酵母成分过敏者禁止使用。
【注意事项】(1)用前摇匀。
(2)安瓿破裂、有摇不散的块状物时不得使用。
(3)应备有肾上腺素，以防偶有过敏反应发生时使用。
【药物相互作用】暂不明确【药理作用】1 基因工程疫苗能诱导抗体产生，通过主动免疫方式使人体获得对乙肝病毒的抵抗力。
临床上证明本疫苗所产生的抗体几何平均滴度远高于有效保护水平（>10 miu/mL）。
2 用每支5 μg的剂量，经三次接种，即可达到满意的免疫效果，保护率在95%以上，母婴阻断率达85%以上，能有效降低乙型肝炎的感染和病毒携带率，为控制乙肝传播的重要手段和预防肝细胞癌的有效方法之一。
3 基因工程疫苗完全不同于血源乙肝疫苗，不需要乙肝病毒携带者的血浆作为生产原料，因此更安全、高效。
本品是一种乙型肝炎表面抗原亚单位疫苗，系采用现代生物技术将乙肝病毒表面抗原基因，克隆进入酵母菌中，通过培养这种重组酵母菌来获取乙型肝炎表面抗原。
【贮藏】于2～8避光保存。
【批准文号】国药准字S2*******【生产企业】企业名称：深圳康泰生物制品股份有限公司生产地址：深圳市南山区科技工业园科发路6号。
乙型肝炎疫苗
重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）外文名称Recombinant Hepatitis B Vaccine (Saccharomyces cerevisiae)剂型注射剂批准文号S2*******药品类型生物制品规格每1次人用剂量1.0 ml/60μg目录1基本信息2成分和性状3接种对象4作用与用途5规格6免疫程序与剂量7不良反应8注意事项9贮藏10包装11有效期12执行标准13批准文号1基本信息为使更多的人群免受乙肝病毒的侵害，解决低无应答人群按常规免疫剂量接种乙肝疫苗后没有产生保护性抗体的问题，60μg/1.0ml/支规格的重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）可用于低无应答人群的免疫预防。
2成分和性状本品系由重组酿酒酵母表达的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）经纯化，加氢氧化铝佐剂制成。
为乳白色混悬液体，可因沉淀而分层，易摇散，不含任何防腐剂。
有效成分：乙型肝炎病毒表面抗原。
辅料：氢氧化铝、氯化钠。
3接种对象本疫苗适用于对乙型肝炎疫苗常规免疫无应答的16岁及以上年龄的乙型肝炎易感者。
以上所述“无应答者”系指按照常规免疫剂量和程序接种3剂乙型肝炎疫苗后，经采血确认其抗体水平未达到阳转者（≥10mIU/ml为阳转标准）。
4作用与用途接种本规格疫苗后，可刺激对常规剂量和程序接种无应答人群的机体产生抗乙型肝炎病毒的免疫力。
用于预防乙型肝炎。
[2]5规格每支1.0 ml。
每1次人用剂量1.0 ml，含HBsAg 60μg。
6免疫程序与剂量（1）于上臂三角肌肌内注射。
（2）根据目前临床研究结果，推荐无应答者接种1剂（60μg），经采血确认其抗体水平仍未达到阳转者再考虑接种第2剂，两剂间隔至少4周以上。
7不良反应基于国内已完成的1105例16岁以上无应答者的临床试验结果汇总分析（详见【临床试验】），60μg（445例）、30μg（439例）和10μg（221例）疫苗组不良反应总体发生率分别为33.03%、31.21%、29.86%。
重组乙型肝炎疫苗ppt课件
• 乙肝病毒属DNA病毒科，有三种外壳的基因编码。
乙肝病毒具有五种抗原抗体系统：即表面抗原抗 体(HBsAg与抗-HBs)、e抗原抗体(HBeAg与抗HBe)、核心抗原抗体(HBcAg与抗-HBc)、x抗原抗 体(HBxAg与抗-HBx)和HBv-DNA。有临床意义的 主要有HBsAg与抗-HBs、HBeAg与抗-HBe和抗HBc，简称“两对半”。 临床主要表现为食欲减退、恶心、厌油、乏 力、巩膜黄染、黄色尿、肝脏肿大、肝区痛等。
重组乙型肝炎疫苗
背景
• 乙型肝炎是由病毒引起的，约占所有病毒性
肝炎的40﹪，它可以急性发病，也可以形成 慢性肝炎，并进而引发肝硬化，肝癌，而其 中很大一部分人可以是健康的病毒携带者， 不出现症状，但表面抗原（HbsAg）阳性， 或者同e抗原（HbeAg）阳性，常常是重要 的传染源。在我国，人口众多，而这样的慢 性病毒携带者约有一亿人，是对公共卫生的 一个重要威胁。
乙肝疫苗的发展
• （一）联合疫苗： • 联合疫苗具有减少注射针次、接种副反应及
提高接种覆盖率的优点。已上市的联合疫苗如SB 公司的百白破-乙肝四联疫苗、甲-乙肝联合疫苗， MSD公司的流感嗜血杆菌乙型肝炎偶联疫苗等。 我国全细胞百白破-乙肝四联疫苗和无细胞百白破 -乙肝四联疫苗已完成临床前研究，甲-乙肝联合 疫苗的开发研究制也在进行。
（三） CHO疫苗
• 本疫苗系用基因工程技术将乙型肝炎表面
抗原基因片段重组到中国仓鼠卵巢细胞 (CHO)内，通过对细胞培养增殖，增殖分泌 乙肝表面抗原(HBsAg)于培养液中，经纯化 加佐剂氢氧化铝后制成。疫苗外观有轻微 乳白色沉淀。
国产酵母乙肝疫苗的效果
• 研究证明：国产血源乙肝疫苗的保护效果至少维
• 对应用0、1、2月程序免疫的400名小学生进行了
乙型肝炎的免疫预防ppt课件
编辑课件
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七、阻断母婴传播免疫程序
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八、未检测出抗体原因
• 1、疫苗贮存不当导致氢氧化铝胶体呈块状， 其接种效果将完全无效；
• 2、使用前未充分摇匀，使疫苗液体中的氢 氧化铝胶体完全悬浮均匀，其接种效果将 明显降低；
• 3、疫苗注射入脂肪层内；
• 4、有免疫缺陷；
• 5、目前检测表面抗体所用的包被抗原为血 源性抗原，而且现在使用的乙肝疫苗为基 因疫苗，故检测灵敏度较低。
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九、特殊情况接种
• 在意外接触HBV感染者的血液和体液后的预防：
• 1、血清学检测，应立即检测HBsAg、抗-HBs、 ALT等，并在3和6个月复查。
• 2、主动和被动免疫
• 如已接种过乙肝疫苗，且已知抗-HBs≧10mIU/ml 者，可不进行特殊处理。如未接种过乙肝疫苗， 或虽接种过乙肝疫苗，但抗-HBs≦10mIU/ml或抗HBs水平不详，应立即接种HBIG200-400IU，并 同时在不同部位接种一针乙肝疫苗，于1和6个月
• 如果出生后24小时内未能接种，仍需 按照上述0、1、6的要求尽早接种。如 果第2针或第3针滞后于接种程序的规 定，应尽快补种。第2针与第1针的间 隔时间不能少于1个月，如果第2针滞 后时间较长，第3针与第2针间隔时间 不能少于2个月，并且第1针和第3针间 隔时间要在4个月以上。
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三、接种率评价
后分别接种第2和第3针乙肝疫苗(各20μg）.
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十、乙肝疫苗免疫效果
• 乙肝疫苗除可预防乙肝外，还可预防丁型肝 炎，因为丁型肝炎病毒必须依赖乙肝病毒才 能复制，但不能预防其它类型的肝炎。接种 第1针后有50%左右产生HBsAb ，而接种第 2针后有80%左右，完成3针次95%能产生 保护性抗体，母婴阻断率90％以上。但仍 有很少部分由于遗传因素，不能产生保护作 用。
乙肝疫苗生产发展简介 PPT
n80年代中期----基因工程乙肝疫苗（第二代乙肝
疫苗）。包括：
• 重组酿酒酵母乙肝疫苗，表达水平不理想—
50mg/L。5ug/0,5ml的成人剂量偏低，抗体滴度 偏低。
• 重组CHO细胞乙肝疫苗，表达水平低，2-5mg/L，
母婴阻断效果不理想
• 重组牛痘病毒乙肝疫苗。表达水平低，1-3mg/L，
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
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• 10, 大连高新（汉信）生物制药有
限 公 司 从 1998 年 开 始 重 组 汉 逊 酵 母 乙 肝 疫 苗 的 研 制 工 作 ， 在 2002 年6月获得了国家药品监督管理局 颁 发 的 “ 新 药 证 书 ” ， 在 2003 年 开始商业化生产。
母总蛋白）
• 纯化收率：20% • 发酵罐工作体积：500L • 一次发酵所得抗原量：
50mg/Lх500L=25g
• 纯化后所得抗原量25gх20%=5g • 可生产疫苗量
5,000,000/5=1,000,000支
北京天坛和新乡华兰表达 水平和抗原产量的比较
汉逊酵母和啤酒酵母的比较
重组汉逊酵母的特点 （甲基营养型酵母）
无法实现工业化生产。
n90年代初期---重组汉逊酵母乙肝疫苗。更先进的
基因工程乙肝疫苗。
国外主要的乙肝疫苗生产厂家
国内主要的乙肝疫苗生产厂家
国内乙肝疫苗生产厂家工艺比较
• 华兰：菌种好，表达水平高，纯化
收率高，所以，总体而言，华兰公 司的技术更为先进。
• 基本技术资料： • 菌种：重组酿酒酵母 • 表达水平：50mg/L • 表达效率：1,35%(表面抗原蛋白/酵
• 8, 1989 年 北 京 生 物 制 品 研 究 所 与
依生生物产品课件---乙肝
两大特性：
• 特性一：快----产生抗体更快 • 特性二：久----保护性更久
产品特性一：快
快----产生抗体更快
• 中国药品生物制品检定所检测，CHO疫苗 第一针注射完平均第8天产生抗体。
• 汉逊酵母疫苗第一针后平均第25天后产生 抗体。 CHO细胞：8天 汉逊酵母细胞：25天
----中国药品生物制品检定所十一五课题
世界乙型肝炎的流行趋势
中国、非洲发展中国家
• 全球 3.5 亿携带者 • 大约 75% 携带者分布在亚洲 • 全球第 9 大死因
HBsAg Prevalence (%)
7: High 2-7: Intermediate <2: Low
HBV感染的流行现状
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乙型肝炎的防控
• 对慢性乙型肝炎应积极进行干预治疗。 • 接种乙肝疫苗
• 只有在抗体滴度大于10mIU/mL的情况下才 能起到有效免疫的作用。
• 建议健康者定期到医院检查乙肝抗体滴度， 当体内抗体滴度小于10mIU/mL的话，需要 及时的续种乙肝疫苗。
CHO疫苗与酵母类疫苗比较
CHO疫苗
酵母疫苗
细胞 我国专有技术，国家Ⅰ类 技术 新药
采用 我国乙肝流行株adr亚型的 流行株 HBsAg基因，针对性更强
免疫成效
2、儿童应用方面 • 江苏省卫生防疫站曾经对CHO细胞乙肝疫苗
在中小学生（1-15岁）人群 进行了效果考评 ，平均阳转率达到97.16%，平均抗体滴度为 400.42mIU/mU。
专家建议
• 加强免疫前的无应答儿童，用CHO细胞乙肝 疫苗再免疫后产生保护性抗体者达99. 32%。
• 产生保护性抗体者表明对乙肝疫苗无应答儿童 ，可通过一次加大剂量和/或更换疫苗种类达 到产生保护性抗体的目的。
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筛选出无应答者1209名
讨 论
1
• 本次研究人群HBsAg携带率4.77％，提示我国自 1986年使用乙肝疫苗以来成人HBV感染得到一定 控制 • 全程免后抗体保护性阳性率97.33％与国外同类研 究报道92.0～97.8%较一致,但高于国内众多研究 报道的72.4～90.0% • 全程免后重组乙肝疫苗无应答率2.67％ • 无应答人群应剔除HBsAg 或抗-HBc阳性者
60μg 第1针
第 2针 第 3针 83.26 （358/430） 89.53 （385/430） 92.79 （399/430）
30μg
70.82 （301/425） 81.65 （347/425） 87.06 （370/425）
10μg
70.23 （151/215） 74.88 （161/215） 78.60 （169/215）
国家食品药品监督管理局药品注册批件.60微克重组乙型肝炎(酵母)疫苗说明书
60ug乙肝疫苗产品介绍
60ug乙肝疫苗效果分析 二、 60ug乙肝疫苗产品特点
一、
背景资料
乙肝疫苗
儿 童
1992年纳入新生儿 计划免疫，2002 年调查显示3～12 岁儿童HBsAg阳性 率2.07%，较1992 年7.12%下降了 70.93%
对无/弱应答者用60ug、30ug和10ug乙肝疫苗进行三
针免疫，按随机、双盲、不同剂量对照等原则进行临
研究对象
入选标准
－ 16岁及以上，本人（或其监护人）知情同意，并 签署知情同意书 － 从未接种过乙肝疫苗 － 经查问为健康者，对本制品的各种成分无过敏史 － 依从性良好 － 非妊娠期、哺乳期女性 － 入选前任何时间未接受过γ球蛋白或免疫球蛋白
入选受种者43,600人
疫苗接种现场
疫苗接种现场
筛选期接种情况
2006年11月
第一针接种10μg乙肝疫苗43599人
2006年12月
第二针接种10μg乙肝疫苗40967人
2007年5月 2007年6月
第三针接种10μg乙肝疫苗37221人 第三针免后一个月采血30341人 经血样检测
2007年6~7月
重组酵母乙肝疫苗产品介绍
2010年修改版要点
流行病学部分
增加2006年全国乙肝血清流行病学调查结果 预防部分 乙肝疫苗接种对象：增加15岁以下儿童补种 无应答者处理：增加60 μ g乙肝疫苗接种
增加入学和就业体检不检测HBV标志物；乙肝疫 苗免疫前可以不筛查HBV标志物
中华医学会肝病学分会，中华医学会感染病学分会。中国病毒病杂志，2011,1:9-23
大量研究显示， 成人全程免疫 后仍有5～ 10%未能出现 抗体保护性阳 转,称为无应答 人群
试验设计总体思路
筛查4~5万表面抗原阴性并未接种乙肝疫苗的成人
用金标法现场筛查出表面抗原阴性者约3万人
用10ug乙肝疫苗进行三针全程接种 筛查10ug乙肝疫苗全程接种后的无/弱应答者
在10ug乙肝疫苗全程接种后1个月用金标法现场筛查表面抗 体，估计金标法现场筛查表面抗体 2~3万人；对初筛表面抗 体阴性者约5千人采集静脉血用放免定量表面抗体检测法确 证其表面抗体达不到保护性水平（未产生抗-HBs或抗体滴 度<10mIU/ml），即无/弱应答者 最终筛查出10ug乙肝疫苗全程接种后无/弱应答者1500人。
现有的国产及进口基因重组乙肝疫苗
生产单位 大连汉信 疫苗名称(种类) 重组乙肝苗（汉逊酵母） 剂型 10μg/0.5ml/支 5μg/0.5ml/支
天坛生物 华药金坦 国内
深圳康泰
重组乙肝苗（酿酒酵母） 重组乙肝苗（CHO）
10μg/1.0ml/支 10μg/0.5ml/支
20μg/1.0ml/支 10μg/0.5ml/支 5μg/0.5ml/支
重组乙肝苗（酿酒酵母）
60μg/1.0ml/支
北京华尔盾 益可欣 重组乙肝苗（CHO） 重组乙肝苗（汉逊酵母） 重组乙肝苗（酿酒酵母） 10μg/支 20μg/支 10μg/0.5ml/支 20μg/ml 10μg/0.5ml/支 20μg/1.0ml/支
进口
葛兰素史克
不同剂量乙肝疫苗接种成人后阳转率比较
讨 论
2
• 年龄增大和男性是无应答的危险因素
• 各年龄组SPR和无应答率具有显著差异:重组乙肝 疫苗在16岁以上成人免后表现为随着年龄的增加 抗体保护性阳性率降低,无应答率增加
• 对55岁以上人群接种乙肝疫苗后建议进一步检测 抗体,若抗-HBs<10mIU/ml,建议复种
试验疫苗
• 研究用试验疫苗与对照疫苗均由申办者提供 • 试验用苗为深圳康泰生物制品股份有限公司研制的重组乙肝 疫苗（酵母），用于预防乙型肝炎，分为以下剂量： • 筛选期疫苗： 10μg/ml/支乙肝疫苗，批号：20050312 试验期疫苗： 60μg/ml/支乙肝疫苗，批号：20060401-1 30μg/0.5ml/支乙肝疫苗，批号：20060402-1 • 对照疫苗： 10μg/ml/支乙肝疫苗，批号：20050926-6 • 用于本临床试验的试验疫苗与对照疫苗为安瓿，内容物性状 和内外包装形态完全一致，仅外包装统一标识的编码不同。
成 人
计划免疫外人群 1992～1995年全 国病毒性肝炎血清 流行病学调查表明， 一般人群 HBsAg 阳性率为9.7 %
背景资料
seroprotection SPR nonresponsors
无 应 答
抗-HBs≥
10mIU/ml为 抗体保护性 水平，WHO 定义为抗体 保护性阳转
人群中免后出 现抗体保护性 阳转的比例称 为抗体保护性 阳转率 seroprotectio n rate ,SPR
研究方法和程序
• 受试者筛选：按0、1、6的接种程序，对16岁及其 以上年龄、健康人群全程接种10μg乙肝疫苗。筛 选出抗-HBs的峰值期抗-HBs<10 mIU/ml的无应答 者1209名，作为临床试验拟招募对象。 • 免疫程序：按0、1、2免疫程序，共接种三针。 • 安全性评价：每针接种后留观30分钟；6、24、 48、72小时系统性观察及7、14、21和28天随访 观察其局部以及全身反应； • 免疫原性评价：免疫原性观察于每针接种后1个， 分别采集受试者静脉血5.0ml，检测HBsAg、抗HBs、抗-HBc。