氯化胆碱测定之原理与方法
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渣
• 天然矿物：沸土、膨泣土、海泡石、膨化珍珠岩 • 人工合成化合物：二氧化硅、水合硅酸
• 氯化胆碱对其他维生素有破坏作用，特别是有金属元素存在时，对
Vitamin A、D、K的破坏较快，因此在复方制剂中不建议加入胆碱
• 添加氯化胆碱后之补助饲料应尽快使用
氯化胆碱含量测定
过氯酸无水滴定法 • 氯化胆碱与醋酸汞反应，氯化胆碱转化为醋酸盐
胆碱之生理作用Leabharlann Baidu
• 磷脂质(phospholipids)成份之一, 增进脂质传递及细胞建构 • 合成乙酰胆碱(acetylcholine;神经传导物neurotransmitter)之前驱物
(precursor)
• 参与动物体内的甲基化反应，是重要的甲基供给体
氯化胆碱之制备
• 环氧己烷法
• 三甲胺(trimethylamine)与环氧己烷(ethylene
简介
• 主要的胆碱盐有氯化胆碱(choline chloride)、氯化琥珀胆碱(succinyl
choline chloride)、溴化氨酰胆碱(hexabiscarbacholine )、氯化乙酰胆碱 (acetylcholine chloride) 、磷酰胆碱(phosphorylcholine) 、氯化氨甲酰胆 碱(bethanechol chloride )等，以氯化胆碱最常做为饲料添加剂
简介
• • • • •
1 mg choline chloride = 0.87 mg choline 分子式：HOCH2CH2N(CH3)3Cl CAS No：67-48-1 分子量：139.63 CA name：2-hydroxy-N,N,N-trimethylethanaminium chloride
凯氏定氮法
• 凯氏法所测得的氮含量并不全是氯化胆碱中所含氮，还有其他物质
所含的氮
• 含有硝酸盐，亚硝酸盐，尿素，脲醛聚合物等含氮化合物，均会使
检测结果偏高
四苯硼钠重量法
• Pb2+、 Ag+、钾盐、铵盐、有机胺、生物碱及其他四级胺盐类化合物
均能与四苯硼钠生成沉淀而干扰测定，使结果偏高
雷氏盐 Reinecke salt （二氨基四硫代氰酸铬 铵） 重量法
• 常见掺假物：三甲胺盐酸盐(trimethyl amine hydrochloride; C3H10NCl ) 、
氯化铵(ammonium chloride; NH4Cl) 、氯化钠(sodium chloride; NaCl) 、 氯化钾(potassium chloride; KCl) 、硝酸盐(nitrate)、亚硝酸盐(nitrite) 、 尿素(urea)、脲醛聚合物(ureaformaldehyde polymer)
氯化胆碱测定之原理 与方法
大纲
• 氯化胆碱之简介 • 含量测定方法介绍
• • • • • •
过氯酸无水滴定法
银量法
凯氏定氮法 四苯硼钠重量法
雷氏盐重量法
离子层析法
简介
• • • •
属于水溶性维生素B群(Vitamin B4) 因幼畜自身尚无合成胆碱的功能，体内所需胆碱全部依赖外界供给 胆碱最早于1940年由猪胆汁中被分离出来 胆碱是生物体代谢的中间产物，它常以氯化物等盐的形式存在
• 环六次甲基四胺 (hexamethylene tetramine)不会被碱分解，能与雷氏盐
反应生成粉红色沉淀，使测定结果偏高
• 采用酸碱水解雷氏盐重量法测定
• 即先将样品加2M 硫酸溶液10mL 煮沸30min ，使环六次甲基四胺分解后，再加
碱煮沸去氨，在 pH6左右与雷氏盐反应，形成的粉红色沉淀用重量法即可检测 出氯化胆碱的含量
oxide)反应
• 生成液体氯化胆碱
• 方法简单，成本低质量好，但设备要求耐酸耐腐蚀
• 氯乙醇法
• 三甲胺、氯乙醇(chloroethanol)与水加热反应 • 生成晶体氯化胆碱
• 氯化胆碱质量优劣以三甲胺残留来衡量
• 粉末状氯化胆碱是以液体状态均匀浸渍在载体，再经干燥除水而成
• 载体种类：
• 农产副产品：小麦麸皮、玉米芯粉、玉米杆粉、稻壳粉、花生壳粉、薯类淀粉
0.33045: 氯化胆碱分子量与沉淀物分子比值
10: 样品溶液稀释倍数
The Council on Pharmacy and Chemistry of American Medical Association (AMA)
离子层析法（Ion Chromatography）
• 利用离子交换原理将带有不同电荷、离子半径和结构等有差异的离
银溶液滴定至砖红色，同时做空白 • Ｘ＝C（V－V 0） × 0.1396/（M× 50/100）× 100
C: 硝酸银标准溶液的实际浓度(M) V: 消耗硝酸银标准溶液体积(ml) V0: 空白试验消耗硝酸银标准溶液体积(ml) M: 检品质量(g) 0.1396: 氯化胆碱莫耳质量(g/m mol)
过氯酸无水滴定法
• 氯化铵、氯化钠、氯化钾、三甲胺盐酸盐等也能与过氯酸反应，所
以该检测方法对氯化胆碱不具特异性
• 在合成氯化胆碱过程中，其中间产物三甲胺盐酸盐的残留量每多1％，
用此法测定时，所测得之氯化胆碱含量就会多1.4％
银量法
• 由于该方法测定的是氯离子，可溶性氯化物或三甲胺盐酸盐均会使
测定结果偏高
雷氏盐 (二氨基四硫代氰酸铬铵; Reinecke salt)重 量法
• 试液中氯化胆碱与雷氏盐(二氨基四硫代氰酸铬铵)反应，形成结晶沉
淀，用重量法测定氯化胆碱含量
• W 2 ＝［( m 2 -m 1 )/m］× 10× 0.33045× 100
m 2: 沉淀(g)
m 1: 空白试验沉淀(g) m: 检品(g)
C: 高氯酸标准溶液实际浓度(M) V: 消耗高氯酸标准溶液体积(ml) V0: 空白试验消耗硝酸银标准溶液体积(ml) M: 检品质量(g) 0.1396: 氯化胆碱莫耳质量(g/m mol)
银量法
• 分析检品中氯含量来确定氯化胆碱的含量 • 称取0.5g样品于250mL定量瓶中，加50mL水摇匀后，加0.5mL铬酸钾，用0.1M硝酸
子分离
• 测定胆碱离子
测定方法之盲点
• 不肖厂商为获取高额利润，于产品中掺假以降低成本。 • 利用检测方法之非特异性，掺入在标准规定条件下亦能发生此反应
且现象基本相同的物质，以致无法正确反映出氯化胆碱的真实含量。
• 根据氯化胆碱的分子式C5H14NClO（分子量：139〃63），纯氯化胆
碱氮含量为10％，氯含量为25.4％
凯氏定氮法
• 称取样品1g左右于带有白色定性滤纸的漏斗中，用水冲洗10次左右，
取出滤纸烘干，以凯氏定氮法测定含氮量N1，同时称0.5g～0.6g直接 测定含氮量N2。
• 氯化胆碱含量= （N2-N1）/10.03 × 100%
四苯硼钠(Sodium tetraphenylboron)重量法
• 称取样品约1g于100mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度摇匀，过滤，
离子层析法（Ion Chromatography）
• 可能有不同化合物与氯化胆碱有同样或相近滞留时间
结论
• 多重测试方法以确定含量
• 离子层析法是未来趋势
和难电离的氯化汞，在醋酸中以高氯酸对生成的 醋酸盐进行滴定
• 称取80℃下干燥3h的样品0.7g于250mL三角瓶中，加40mL甲醇，充分摇动
30min后过滤，再分别用20mL、15mL、15mL甲醇洗涤沉淀3次，将滤液和 洗液合并，在水浴上蒸发至干，以20mL冰醋酸溶解后，加2mL醋酸酐， 10mL醋酸汞和两滴结晶紫指示剂，用0.1M过氯酸溶液滴定至蓝色，同时做 空白 • X＝（V－V0）C× 0.1396/M× 100
精确量取滤液10mL于100mL烧杯中，加20mL水，一滴AlCl3三氯化铝 （10％），20mL四苯硼钠（四苯硼钠C24H20BNa 2g加水溶解稀释至 100mL，加2滴0.5M NaOH摇匀放置24h，过滤，可保存5天），不断 振摇30min，用预先烘干称重坩埚过滤，水洗烧杯4次，每次10mL左 右，并将滤液一并过滤，将沉淀在105℃烘干2h，取出放入干燥器内 冷却，称重。 • 氯化胆碱含量=[沉淀质量(g)× 0.3298× 100]/样品质量(g)× 10 • 1g沉淀=0.3298g氯化胆碱。
• 天然矿物：沸土、膨泣土、海泡石、膨化珍珠岩 • 人工合成化合物：二氧化硅、水合硅酸
• 氯化胆碱对其他维生素有破坏作用，特别是有金属元素存在时，对
Vitamin A、D、K的破坏较快，因此在复方制剂中不建议加入胆碱
• 添加氯化胆碱后之补助饲料应尽快使用
氯化胆碱含量测定
过氯酸无水滴定法 • 氯化胆碱与醋酸汞反应，氯化胆碱转化为醋酸盐
胆碱之生理作用Leabharlann Baidu
• 磷脂质(phospholipids)成份之一, 增进脂质传递及细胞建构 • 合成乙酰胆碱(acetylcholine;神经传导物neurotransmitter)之前驱物
(precursor)
• 参与动物体内的甲基化反应，是重要的甲基供给体
氯化胆碱之制备
• 环氧己烷法
• 三甲胺(trimethylamine)与环氧己烷(ethylene
简介
• 主要的胆碱盐有氯化胆碱(choline chloride)、氯化琥珀胆碱(succinyl
choline chloride)、溴化氨酰胆碱(hexabiscarbacholine )、氯化乙酰胆碱 (acetylcholine chloride) 、磷酰胆碱(phosphorylcholine) 、氯化氨甲酰胆 碱(bethanechol chloride )等，以氯化胆碱最常做为饲料添加剂
简介
• • • • •
1 mg choline chloride = 0.87 mg choline 分子式：HOCH2CH2N(CH3)3Cl CAS No：67-48-1 分子量：139.63 CA name：2-hydroxy-N,N,N-trimethylethanaminium chloride
凯氏定氮法
• 凯氏法所测得的氮含量并不全是氯化胆碱中所含氮，还有其他物质
所含的氮
• 含有硝酸盐，亚硝酸盐，尿素，脲醛聚合物等含氮化合物，均会使
检测结果偏高
四苯硼钠重量法
• Pb2+、 Ag+、钾盐、铵盐、有机胺、生物碱及其他四级胺盐类化合物
均能与四苯硼钠生成沉淀而干扰测定，使结果偏高
雷氏盐 Reinecke salt （二氨基四硫代氰酸铬 铵） 重量法
• 常见掺假物：三甲胺盐酸盐(trimethyl amine hydrochloride; C3H10NCl ) 、
氯化铵(ammonium chloride; NH4Cl) 、氯化钠(sodium chloride; NaCl) 、 氯化钾(potassium chloride; KCl) 、硝酸盐(nitrate)、亚硝酸盐(nitrite) 、 尿素(urea)、脲醛聚合物(ureaformaldehyde polymer)
氯化胆碱测定之原理 与方法
大纲
• 氯化胆碱之简介 • 含量测定方法介绍
• • • • • •
过氯酸无水滴定法
银量法
凯氏定氮法 四苯硼钠重量法
雷氏盐重量法
离子层析法
简介
• • • •
属于水溶性维生素B群(Vitamin B4) 因幼畜自身尚无合成胆碱的功能，体内所需胆碱全部依赖外界供给 胆碱最早于1940年由猪胆汁中被分离出来 胆碱是生物体代谢的中间产物，它常以氯化物等盐的形式存在
• 环六次甲基四胺 (hexamethylene tetramine)不会被碱分解，能与雷氏盐
反应生成粉红色沉淀，使测定结果偏高
• 采用酸碱水解雷氏盐重量法测定
• 即先将样品加2M 硫酸溶液10mL 煮沸30min ，使环六次甲基四胺分解后，再加
碱煮沸去氨，在 pH6左右与雷氏盐反应，形成的粉红色沉淀用重量法即可检测 出氯化胆碱的含量
oxide)反应
• 生成液体氯化胆碱
• 方法简单，成本低质量好，但设备要求耐酸耐腐蚀
• 氯乙醇法
• 三甲胺、氯乙醇(chloroethanol)与水加热反应 • 生成晶体氯化胆碱
• 氯化胆碱质量优劣以三甲胺残留来衡量
• 粉末状氯化胆碱是以液体状态均匀浸渍在载体，再经干燥除水而成
• 载体种类：
• 农产副产品：小麦麸皮、玉米芯粉、玉米杆粉、稻壳粉、花生壳粉、薯类淀粉
0.33045: 氯化胆碱分子量与沉淀物分子比值
10: 样品溶液稀释倍数
The Council on Pharmacy and Chemistry of American Medical Association (AMA)
离子层析法（Ion Chromatography）
• 利用离子交换原理将带有不同电荷、离子半径和结构等有差异的离
银溶液滴定至砖红色，同时做空白 • Ｘ＝C（V－V 0） × 0.1396/（M× 50/100）× 100
C: 硝酸银标准溶液的实际浓度(M) V: 消耗硝酸银标准溶液体积(ml) V0: 空白试验消耗硝酸银标准溶液体积(ml) M: 检品质量(g) 0.1396: 氯化胆碱莫耳质量(g/m mol)
过氯酸无水滴定法
• 氯化铵、氯化钠、氯化钾、三甲胺盐酸盐等也能与过氯酸反应，所
以该检测方法对氯化胆碱不具特异性
• 在合成氯化胆碱过程中，其中间产物三甲胺盐酸盐的残留量每多1％，
用此法测定时，所测得之氯化胆碱含量就会多1.4％
银量法
• 由于该方法测定的是氯离子，可溶性氯化物或三甲胺盐酸盐均会使
测定结果偏高
雷氏盐 (二氨基四硫代氰酸铬铵; Reinecke salt)重 量法
• 试液中氯化胆碱与雷氏盐(二氨基四硫代氰酸铬铵)反应，形成结晶沉
淀，用重量法测定氯化胆碱含量
• W 2 ＝［( m 2 -m 1 )/m］× 10× 0.33045× 100
m 2: 沉淀(g)
m 1: 空白试验沉淀(g) m: 检品(g)
C: 高氯酸标准溶液实际浓度(M) V: 消耗高氯酸标准溶液体积(ml) V0: 空白试验消耗硝酸银标准溶液体积(ml) M: 检品质量(g) 0.1396: 氯化胆碱莫耳质量(g/m mol)
银量法
• 分析检品中氯含量来确定氯化胆碱的含量 • 称取0.5g样品于250mL定量瓶中，加50mL水摇匀后，加0.5mL铬酸钾，用0.1M硝酸
子分离
• 测定胆碱离子
测定方法之盲点
• 不肖厂商为获取高额利润，于产品中掺假以降低成本。 • 利用检测方法之非特异性，掺入在标准规定条件下亦能发生此反应
且现象基本相同的物质，以致无法正确反映出氯化胆碱的真实含量。
• 根据氯化胆碱的分子式C5H14NClO（分子量：139〃63），纯氯化胆
碱氮含量为10％，氯含量为25.4％
凯氏定氮法
• 称取样品1g左右于带有白色定性滤纸的漏斗中，用水冲洗10次左右，
取出滤纸烘干，以凯氏定氮法测定含氮量N1，同时称0.5g～0.6g直接 测定含氮量N2。
• 氯化胆碱含量= （N2-N1）/10.03 × 100%
四苯硼钠(Sodium tetraphenylboron)重量法
• 称取样品约1g于100mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度摇匀，过滤，
离子层析法（Ion Chromatography）
• 可能有不同化合物与氯化胆碱有同样或相近滞留时间
结论
• 多重测试方法以确定含量
• 离子层析法是未来趋势
和难电离的氯化汞，在醋酸中以高氯酸对生成的 醋酸盐进行滴定
• 称取80℃下干燥3h的样品0.7g于250mL三角瓶中，加40mL甲醇，充分摇动
30min后过滤，再分别用20mL、15mL、15mL甲醇洗涤沉淀3次，将滤液和 洗液合并，在水浴上蒸发至干，以20mL冰醋酸溶解后，加2mL醋酸酐， 10mL醋酸汞和两滴结晶紫指示剂，用0.1M过氯酸溶液滴定至蓝色，同时做 空白 • X＝（V－V0）C× 0.1396/M× 100
精确量取滤液10mL于100mL烧杯中，加20mL水，一滴AlCl3三氯化铝 （10％），20mL四苯硼钠（四苯硼钠C24H20BNa 2g加水溶解稀释至 100mL，加2滴0.5M NaOH摇匀放置24h，过滤，可保存5天），不断 振摇30min，用预先烘干称重坩埚过滤，水洗烧杯4次，每次10mL左 右，并将滤液一并过滤，将沉淀在105℃烘干2h，取出放入干燥器内 冷却，称重。 • 氯化胆碱含量=[沉淀质量(g)× 0.3298× 100]/样品质量(g)× 10 • 1g沉淀=0.3298g氯化胆碱。