临床微生物实验室质量控制及质量保证(ppt 58页)

血琼脂
巧克力 琼脂
孵育条件 需氧或CO2， 24小时
需氧或CO2， 48小时
已知菌株（ATCC)
化脓链球菌19615 肺炎链球菌6035 大肠埃希菌25922 淋病奈瑟菌43069 流感嗜血杆菌10211
SS琼脂
需氧，24小时
鼠伤寒沙门菌14028 福氏志贺菌12022 粪肠球菌29212 大肠埃希菌25922
加入后培养基由无色
变为红色
质控要求：每批试剂使用前应使用相应
阴性和阳性反应（标准）菌株做质控
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试剂质量控制
过氧化氢酶试验
具体要求： 每批次或使用当 天用相应的标 准菌株作阴、 阳性对照控。
血浆凝固酶试验 氧化酶试验
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β-内酰胺酶
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过氧化氢酶（H2O2）
区别链球菌属/葡萄球菌属，少见G-菌、G+菌
生化管
阳性质控菌株
阴性质控菌株 阳性质控结果
靛基质
大肠埃希菌
肺炎克雷伯菌 加入吲哚试剂后两者 液面接触处由无色变 为红色
枸橼酸盐培养基 弗劳地枸橼酸杆菌 大肠埃希菌
培养基由淡绿色变为 深蓝色
硝酸盐培养基 大肠埃希菌
鲍曼不动杆菌 将甲液和乙液等量加 入后培养基由淡灰色
变为红色
V-P培养基
肺炎克雷伯菌
大肠埃希菌 将甲液和乙液按3：1
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培养基质量控制
• 肉眼检查培养基的颜色、均一性、厚度、 气泡等
• 无菌试验 <100块随机选取5%的量， >100块则任意选取10块平板或管装培养基 35℃，培养24小时，无菌生长为合格。
• 生长试验
• 生长抑制试验（必要时）
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常用培养基已知菌生长试验
大肠埃希菌ATCC35218 接种液：生长法或直接菌落悬
(用于β-内酰胺类药/β- 液
内酰胺酶抑制剂）
孵育：35℃；空气；16-18h
铜绿假单胞 铜绿假单胞ATCC27853
及不动杆菌 大肠埃希菌ATCC35218 (用
属
于β-内酰胺类药/β-内酰胺
酶抑制剂）
同上
葡萄球菌属 金黄色葡萄球菌ATCC25923 培养基：Mueller-Hinton琼脂
质控工作
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. 包括新员工培 训、老员工的再 培训以及员工工
作能力评估
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分析前质量控制
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分析前质量控制
建立质量控制标准（SOP) 制定自检测申请、标本采集开始到发出检测结
果报告止的全过程的操作和管理程序 微生物检验标本质量控制
• 实验室应给标本采集者提供标本采集和运 送的指导手册
立刻送检2-3小时
用运送培养基 >4小时
贮存温度 室温或37 室温 避免冷藏
冷藏 室温
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有可靠的标本质量评价方法
分类
门诊或难以 6 取材可培养
最好，适于 5
培养
4
不适于培养，3 重新留取标 2 本
1
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白细胞 <25
鳞状上皮细胞 <25
>25 >25 >25 10-25 <10
• 修正 -肠杆菌科—头孢唑啉折点 -肠杆菌科—碳青霉烯类折点 -铜绿—氨曲南和头孢菌素折点（再评价） -附录A—罕见AST结果的核实 • 增加 -表格—β溶血链球菌组可诱导克林霉素耐药 -厌氧菌表格 -肠杆菌科细菌天然耐药
• 使用厂家规定的标准菌株做质控，应符 合预期结果
• 当新仪器启用时、新批号试剂启用时、 结果出现问题时都需要做质控
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设备质量控制
• 天平、pH计、离心机、加样枪、温度计、 生物安全柜、高压锅等需进行校准
• 冷藏和培养等设备应进行温度监控并记 录
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药物敏感试验质量控制
小时
福氏志贺菌12022
金黄色葡萄球菌25923
需氧，24 小时
需氧，24 小时
金黄色葡萄球菌25923
大肠埃希菌25922 白色假丝酵母菌
预期结果 分解乳糖，菌落红色 不分解乳糖，菌落无色透明 不生长 分解乳糖，菌落蓝色 不分解乳糖，菌落无色
不生长 生长
生长 不生长
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常用生化反应培养基的质量控制标准
大肠埃希菌ATCC35218 (用 于β-内酰胺类药/β-内酰胺 酶抑制剂）
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接种液：生长法或直接菌落悬液
孵育：35℃；空气；16-18h
如测试苯唑西林、甲氧西林时，孵育
时间应增至24h
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纸片扩散法药物敏感试验质量控制
连续质控检测1次/天共30天，获30个检测值 如：1、≤3个值超出范围，可行每周一次质控
<10 10-25 >25 >25 >25
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有可靠的标本质量评价方法
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不合格标本拒收
除非不能再采集的标本，否则不予检测； 如果培养或检测，要对结果进行说明。
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样本拒收标准
1）样本上无病患标签或病患标签与检验申请单不符； 2）样本以不当的温度、运送培养基及容器运送； 3）样本量不足、已被防腐剂固定或运送时间过长； 4）样本外漏、容器破损及明显受污染的标本； 5）样本的检验项目申请不适合进行； 6）特殊的难以再次获得标本，与临床医师联系后再
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药物敏感试验的规则
目前，我国绝大多数临床微生物 实验室均参考美国国家临床实验室标 准委员会(CLSI)出版的对各类细菌进 行常规药敏试验和报告时的选药指南
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CLSI (clinical and laboratory standards institute)
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临床微生物实验室质量控制环节
标本留取运送
分 析 前
标本合格判定 培养基、试剂
仪器设备
分析中
人员
分析后
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结果报告
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人员资质
人员
人员能力
人员培训
具备相关教育背景， 每年接受专业技术及知
识培训， 熟悉微生物实验室操作 规程、消毒灭菌及生物
安全知识。
.
包括其对诸如分 析前、中、后特 定阶段的专业经 验和熟练试验技 术 。并直接参与
阳性对照：金黄色葡萄球菌ATCC 25923 阴性对照：粪肠球菌ATCC29212
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血浆凝固酶试验
区别金黄色葡萄球菌/凝固酶阴性葡萄球菌
阳性对照：金黄色葡萄球菌ATCC 25923 阴性对照：表皮葡萄球菌ATCC12228
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氧化酶
氧化酶试验 G-菌区别， 肠杆菌科/非发酵菌/弧菌科/少见G-菌等
定量评价细菌数量的培养（尿标本） （运送时间）
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微生物检验标本的运送及贮存条件
标本 血 脓、脑脊液、胸水、心包 积液、腹水、滑液关节鼻 窦分泌物
支气管肺泡液、痰、其他 分泌物、便等 眼、耳、鼻、尿道、生殖 道、直肠、伤口拭子
运送 血培养瓶 短时间内运送：标本 在带帽的注射器内保 证厌氧条件 长时间内运送： 使用运送培养基
对收集和运送标本的容器控制 无菌、无防腐剂、足够大、安全严密、不易破碎、 选择合适的运送培养基
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标本收集和运送的质量控制
正确的运送方式
标本因冷藏及pH改变或在氧气中暴露，可 能减少很多种细菌的存活时间
脑膜炎需球进菌行，微淋病生奈物瑟学菌检，测流的感所嗜血有杆标菌本，，肺炎 链曲球菌菌及，厌应沙养在门菌收菌集，后志2贺小氏时菌内，送霍到乱弧实菌验，室空肠弯
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药物敏感试验质量控制
药物敏感试验（仪器法） 使用厂家规定的标准菌株对相应试剂进行 质控 •每批试剂至少1次 •当试验结果异常、不稳定，或缺少经验的 人员操作时，应增加质控的频率。
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纸片扩散法药敏试验质量控制条件及质控菌株
细菌类别 质控菌株
试验条件
肠杆菌科 大肠埃希菌ATCC25922 培养基：Mueller-Hinton琼脂
- 美国临床实验室标准化研究所
- 已被我国卫生部指定为部颁标准 - 每年有新版
CLSI
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实验室应该认真浏览CLSIM100内 容，将新的推荐内容融入到实验室 的常规测试中，使之形成可行的操 作规范
M100每年更新一次 M02,M07每三年更新一次
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2011年CLSI主要变化
• 实验室应持续监测标本采集和运送过程 • 实验室应对标本质和量进行评估 • 不合格标本拒收
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标本采集和运送
标本采集和运送是细菌培养成功的 最最重要的环节
但由于标本的采集和运送常有护士或医生或 病人自己完成,所以也是最不容易控制的环节，
造成的后果是:标本污染、阳性率低
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Fra Baidu bibliotek
标本收集基本原则
1）在抗菌药物使用前采集标本 2）采样时严格执行无菌操作 3）采样后立即送检 4）棉拭子标本宜用运送培养基 5）标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂。 6）送检标本应注明来源和检验目的
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标本收集和运送的质量控制
向临床提供标本采集说明(sop)
• 不同部位标本的采集方法 • 采集最佳时间、次数 • 标本采集量正确时间、部位、方法等
做相应处理
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分析中质量控制
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分析中质量控制
培养基
主要试剂 自制生化鉴定试剂
对临床微生物实验室 室内质控的基本要求
染色液
只能满足分析中对主要 培养基、试剂的质控需要
细菌、酵母菌鉴定系统是试验室进行相应操作
药物敏感试验
的应做到或至少要做到
仪器设备
纸片扩散法：每周至少1次；更换药物或培养 基时要做质控。
常见菌：大肠埃希菌ATCC25922, 金黄色葡萄 球菌25923,绿脓假单胞菌27853 质控
手工法（稀释法）：每周至少1次，最好每次试验做控。 解释：常规试验通常使用微量肉汤稀释法，标准做法是每
批试验标准菌株与临床分离株同时做。金黄色葡萄球菌 29213, 大肠埃希菌ATCC25922绿脓假单胞菌27853 质控
临床微生物实验室质量控制及质量保证(ppt 58页)
微生物实验室质量控制
为保证检测结果的准确性、可靠性，临床细菌室 室内质控需要： • 对人员进行评估 • 建立质量控制标准、选择和适的质控物 • 对标本质量进行评价 • 对试剂、培养基、仪器设备进行监测 • 对检测过程进行监控 • 对检测结果和结果的临床应用进行评估
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设备质量控制
• 新设备的检查，包括如安全性、配件、 有无破损等
• 新设备比对实验（与旧设备比对或与参 考设备或方法比对）
• 设备运行记录、维护保养记录、维修记 录
• 制定和执行标准操作规程 • 培训操作人员
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手工、半自动、自动鉴定系统
• 使用厂家规定的标准菌株对相应试剂进 行质控，每批试剂至少1次
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染色液质控
• 革兰染色： • G+: 金黄色葡萄球菌ATCC25923 • G-: 大肠埃希菌ATCC25922 • 抗酸染色要: 求:每批试剂并每周 • 阳性:Mube.trculosisATCC25177 • 阴性:大肠埃希菌ATCC25922
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• 照片 革兰氏 抗酸
2、≥4个值超出范围，继续做每天一次质控 3、每当试剂、药敏纸片、培养基改变时， 应重新行30天的质控 4、每周一次质控时如某周出现一次失控，则 应连续做5次质控。零失控时作每周一次质控， 否则行连续30次质控
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药物敏感试验质量控制
药敏纸片保存：药敏纸片应在有干燥剂 的容器内低温（-20 ℃ ）保存。少量日 常工作用纸片4 ℃保存。药敏纸片从冰箱 取出后，应平衡至室温，从而减少暖空 气与冷的纸片接触产生的冷凝。纸片应 在有效期内使用，过期应该丢弃。
阳性对照：绿脓假单胞菌ATCC27853 阴性对照：大肠杆菌ATCC25922
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β内酰胺酶
判断苛养菌流感嗜血杆菌、卡他布兰汉菌和淋病奈瑟菌 对青霉素、阿莫西林和氨苄西林的敏感性。
阳性对照：金黄色葡萄球菌ATCC25923 阴性对照：流感嗜血杆菌ATCC29247
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预期结果
生长， 溶血 生长，α溶血 生长 生长 生长
生长 生长 部分生长或抑制 部分生长或抑制
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常用培养基已知菌生长试验
麦康凯琼脂 中国蓝琼脂
营养琼脂 沙保罗琼脂
孵育条件 已知菌株（ATCC)
需氧，24 大肠埃希菌25922
小时
福氏志贺菌12022
金黄色葡萄球菌25923
需氧，24 大肠埃希菌25922
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培养基的质量控制
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培养基的质量控制
购买有质量保证标准的商品培养基， 保存制造商质量控制性能合格的证明文件
购买无质量保证标准的商品或自制培养基， 每批号产品检测相应的性能，如无菌试验、
生长试验、生长抑制试验等
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最好使用标准菌 ATCC 美国典型菌株保藏中心 NCTC 英国国家典型菌种保藏中心