第二章 酶学基础1
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2、考虑动力学因素的影响
pH、温度、离子强度、效应物浓度、E浓度、底物浓度 （1） 确定最适反应条件，温度，pH值； （2）在一定条件下，将一定量的酶液与底物溶液混合均匀，
记下反应开始时间； （3）反应到一定的时间，取出适量的反应液运用各种生化
检测技术，测定产物的生产量或底物的减少量。
具体方法：
A．终点法 是使酶促反应进行一定时间后，终止其反应， 再用化学或物理方法测定产物或底物变化的量。
通常测定在一定时间内最适于酶的条件下酶 促反应产物的生成量。如蛋白酶的活力，可据酶 催化酪蛋白水解生成的酪氨酸与酚试剂作用的蓝 色反应，再用比色法测定之。
2. 测定完成一定量反应所需的时间
测定酶所催化的一定量底物的减少或一定量 产物的生成所需的时间，酶活力与之成反比。
测定步骤：
1、根据酶催化的专一性 根据酶的专一性，选择适宜的底物，并配制成一 定浓度的底物溶液
指在一定条件下催化本身RNA分子同时进行剪切和 连接反应的R-酶。
1）含Ⅰ型IVS的R酶
与四膜虫rRNA前体的间隔序列IVS结构类似，在 催化rRNA前体的自我剪接时，需要鸟苷（5'-鸟 苷酸）和Mg2+。
2）含Ⅱ型IVS的R酶
与细胞核mRNA前体的IVS相似，在催化mRNA 前体的自我剪接时，需要Mg2+，不需要鸟苷、5'鸟苷酸。
如: EC 3.1.3.1代表
第三大类酶----水解酶类 第三大类中的第一亚类
作用于酯键的酶 该亚类中的第三亚类
磷酸单酯 该次亚类中的第一号酶
即:碱性磷酸酶
二、核酸类酶的分类
根据催化反应的类别分为三类： 1、剪切酶 2、剪接酶 3、多功能酶 根据催化反应的底物分为两类： 1、自我催化，即分子内催化 2、分子间催化
B．动力学法 是连续测定酶反应过程中底物、产物或辅酶的 变化量，可以直接测定酶促反应的初速度。
终止反应的方法：
A 沸水浴 B 加入适宜的酶变性剂，如：三氯乙酸 C 迅速远离反应最适 pH 值 D 冰浴
测定反应液中物质的变化量：
可采用光学检测法（分光光度法），化学检测法（化 学滴定法）,华勃氏呼吸仪等生化检测技术。
分子活力、克分子活力 转换数(Kcat) 定义：1个酶分子在最适条件下，1分钟转化底物
的分子数，即指每mol酶每分钟催化S转 变为P的mol。 催化周期 转换数的倒数，指酶进行一次催化所需的时间， 单位为（ms）T＝1/ Kcat
第三节 酶的结构与功能
一、活性部位
活性中心（active site） 指酶分子中直接和底物结合，并和酶 催化作用直接有关的部位。
（二）分子间催化的R-酶
1、作用于其它RNA分子的R-酶 1） RNA剪切酶：催化于其它RNA分子进行剪切反
应的R-酶。 1983年S. Altman发现： 核糖核酸酶P（RNAase P）的M1RNA组分具有该酶 的催化特性： 催化tRNA前体剪切除去RNA片断，形成成熟的 tRNA。该酶的蛋白质部分无催化活性。
亚类. 每一大类根据底物中被作用的基团或键的特 点分为若干亚类，依次序1、2、3……编号
次亚类.每一亚类根据被作用的键的特点分为若干 次亚类，依次序1、2、3…编号
具体种酶. 在同一次亚类中，不同的具体种的酶也 用1、2、3…编号，把它们区分开，表示酶在该次 亚类中的排号
分类编号：四个数字, 用‘ ’隔开, 冠以EC (Enzyme Commission)
（一）分子内催化的R-酶
指催化本身RNA分子进行反应的一类核酸类酶，均为
RNA前体。
根据催化反应类型分为：
1.自我剪切酶：指催化本身RNA进行剪切反应的R-酶。
RNA前体
成熟RNA分子 ＋ 另一个RNA片断
如：T4噬菌体RNA前体（215 nt） （139 nt）＋ 76 nt片断
成熟RNA
2. 自我剪接酶
2）多功能的R－酶
指能够催化其他RNA分子多种反应的核酸类酶。
四膜虫（Tetrahynena）细胞26S rRNA前体的 IVS（间隔序列，414个核苷酸） 两次环化得 到较小的环状分子，开环得到5'-末端失去19个核 苷酸的线状IVS，即L-19IVS（395nt） 具有多种催化功能，可催化其它RNA分子间发生 多种反应。 功能多样化：
A 具有RNA剪接作用 2CpCpCpCpC === CpCpCpCpCpCp + CpCpCpC
B 具有末端剪切作用 CpCpCpCpC === CpCpCpC + Cp
C 限制性内切酶作用 --CpUpCpUpGpN === --CpUpCpUp + GpN
D 转磷酸作用 CpCpCpCpCpCp + UpCpU === CpCpCpCpCpC + UpCpUp
E 去磷酸作用 CpCpCpCpCpCp === CpCpCpCpCpC + Pi
2 作用于DNA的R－酶 3 作用于多糖的R－酶 4 作用于氨基酸酯的R－酶
第二节 酶活力的测定方法源自文库
一、酶活力测定一般原则 酶活力 反应速度
二、初速度 initial velocity
三、测定物质的选择
1. 测定一定时间内的化学反应的量
第二章 酶学基础
第一节 酶的分类
按照酶的化学组成，酶有两大类别： 蛋白类酶（P酶）：主要由蛋白质组成 核酸类酶（R酶）：主要由核糖核酸组成
一、蛋白类酶的分类
六大类酶： 按酶促反应性质将生物体所有的酶分为六大类，分别用
1、2、3、4、5、6 编号 1. 氧化还原酶类:Oxido-reductases 2. 转移酶类:Transferases 3. 水解酶类:Hydrolases 4. 裂合酶类:Lyases 5. 异构酶类:Isomerases 6. 合成酶类:Ligases
酶分子上的 氨基酸残基
结合基团
非必需基团（非贡献残基） 接触残基
活性中心
四、酶活力单位
（一）酶活力单位定义 一个酶活力单位(Active Unit) 定义：在特定条 件下，一分钟内催化1 mol底物反应所需的 酶量。
（二）比活力 Specific activity 比活力定义：每毫克酶蛋白所含酶活力单位数
五、转换数 Turnover number，T.N.值
与催化周期
pH、温度、离子强度、效应物浓度、E浓度、底物浓度 （1） 确定最适反应条件，温度，pH值； （2）在一定条件下，将一定量的酶液与底物溶液混合均匀，
记下反应开始时间； （3）反应到一定的时间，取出适量的反应液运用各种生化
检测技术，测定产物的生产量或底物的减少量。
具体方法：
A．终点法 是使酶促反应进行一定时间后，终止其反应， 再用化学或物理方法测定产物或底物变化的量。
通常测定在一定时间内最适于酶的条件下酶 促反应产物的生成量。如蛋白酶的活力，可据酶 催化酪蛋白水解生成的酪氨酸与酚试剂作用的蓝 色反应，再用比色法测定之。
2. 测定完成一定量反应所需的时间
测定酶所催化的一定量底物的减少或一定量 产物的生成所需的时间，酶活力与之成反比。
测定步骤：
1、根据酶催化的专一性 根据酶的专一性，选择适宜的底物，并配制成一 定浓度的底物溶液
指在一定条件下催化本身RNA分子同时进行剪切和 连接反应的R-酶。
1）含Ⅰ型IVS的R酶
与四膜虫rRNA前体的间隔序列IVS结构类似，在 催化rRNA前体的自我剪接时，需要鸟苷（5'-鸟 苷酸）和Mg2+。
2）含Ⅱ型IVS的R酶
与细胞核mRNA前体的IVS相似，在催化mRNA 前体的自我剪接时，需要Mg2+，不需要鸟苷、5'鸟苷酸。
如: EC 3.1.3.1代表
第三大类酶----水解酶类 第三大类中的第一亚类
作用于酯键的酶 该亚类中的第三亚类
磷酸单酯 该次亚类中的第一号酶
即:碱性磷酸酶
二、核酸类酶的分类
根据催化反应的类别分为三类： 1、剪切酶 2、剪接酶 3、多功能酶 根据催化反应的底物分为两类： 1、自我催化，即分子内催化 2、分子间催化
B．动力学法 是连续测定酶反应过程中底物、产物或辅酶的 变化量，可以直接测定酶促反应的初速度。
终止反应的方法：
A 沸水浴 B 加入适宜的酶变性剂，如：三氯乙酸 C 迅速远离反应最适 pH 值 D 冰浴
测定反应液中物质的变化量：
可采用光学检测法（分光光度法），化学检测法（化 学滴定法）,华勃氏呼吸仪等生化检测技术。
分子活力、克分子活力 转换数(Kcat) 定义：1个酶分子在最适条件下，1分钟转化底物
的分子数，即指每mol酶每分钟催化S转 变为P的mol。 催化周期 转换数的倒数，指酶进行一次催化所需的时间， 单位为（ms）T＝1/ Kcat
第三节 酶的结构与功能
一、活性部位
活性中心（active site） 指酶分子中直接和底物结合，并和酶 催化作用直接有关的部位。
（二）分子间催化的R-酶
1、作用于其它RNA分子的R-酶 1） RNA剪切酶：催化于其它RNA分子进行剪切反
应的R-酶。 1983年S. Altman发现： 核糖核酸酶P（RNAase P）的M1RNA组分具有该酶 的催化特性： 催化tRNA前体剪切除去RNA片断，形成成熟的 tRNA。该酶的蛋白质部分无催化活性。
亚类. 每一大类根据底物中被作用的基团或键的特 点分为若干亚类，依次序1、2、3……编号
次亚类.每一亚类根据被作用的键的特点分为若干 次亚类，依次序1、2、3…编号
具体种酶. 在同一次亚类中，不同的具体种的酶也 用1、2、3…编号，把它们区分开，表示酶在该次 亚类中的排号
分类编号：四个数字, 用‘ ’隔开, 冠以EC (Enzyme Commission)
（一）分子内催化的R-酶
指催化本身RNA分子进行反应的一类核酸类酶，均为
RNA前体。
根据催化反应类型分为：
1.自我剪切酶：指催化本身RNA进行剪切反应的R-酶。
RNA前体
成熟RNA分子 ＋ 另一个RNA片断
如：T4噬菌体RNA前体（215 nt） （139 nt）＋ 76 nt片断
成熟RNA
2. 自我剪接酶
2）多功能的R－酶
指能够催化其他RNA分子多种反应的核酸类酶。
四膜虫（Tetrahynena）细胞26S rRNA前体的 IVS（间隔序列，414个核苷酸） 两次环化得 到较小的环状分子，开环得到5'-末端失去19个核 苷酸的线状IVS，即L-19IVS（395nt） 具有多种催化功能，可催化其它RNA分子间发生 多种反应。 功能多样化：
A 具有RNA剪接作用 2CpCpCpCpC === CpCpCpCpCpCp + CpCpCpC
B 具有末端剪切作用 CpCpCpCpC === CpCpCpC + Cp
C 限制性内切酶作用 --CpUpCpUpGpN === --CpUpCpUp + GpN
D 转磷酸作用 CpCpCpCpCpCp + UpCpU === CpCpCpCpCpC + UpCpUp
E 去磷酸作用 CpCpCpCpCpCp === CpCpCpCpCpC + Pi
2 作用于DNA的R－酶 3 作用于多糖的R－酶 4 作用于氨基酸酯的R－酶
第二节 酶活力的测定方法源自文库
一、酶活力测定一般原则 酶活力 反应速度
二、初速度 initial velocity
三、测定物质的选择
1. 测定一定时间内的化学反应的量
第二章 酶学基础
第一节 酶的分类
按照酶的化学组成，酶有两大类别： 蛋白类酶（P酶）：主要由蛋白质组成 核酸类酶（R酶）：主要由核糖核酸组成
一、蛋白类酶的分类
六大类酶： 按酶促反应性质将生物体所有的酶分为六大类，分别用
1、2、3、4、5、6 编号 1. 氧化还原酶类:Oxido-reductases 2. 转移酶类:Transferases 3. 水解酶类:Hydrolases 4. 裂合酶类:Lyases 5. 异构酶类:Isomerases 6. 合成酶类:Ligases
酶分子上的 氨基酸残基
结合基团
非必需基团（非贡献残基） 接触残基
活性中心
四、酶活力单位
（一）酶活力单位定义 一个酶活力单位(Active Unit) 定义：在特定条 件下，一分钟内催化1 mol底物反应所需的 酶量。
（二）比活力 Specific activity 比活力定义：每毫克酶蛋白所含酶活力单位数
五、转换数 Turnover number，T.N.值
与催化周期