改良碳青霉烯灭活试验

改良碳青霉烯灭活试验（Modified Carbapenem Inactivation Method, mCIM）检测肠杆菌科细菌中的碳青霉烯酶
一.何时检测？基于流行病学或感控目的。

备注：即使mCIM结果呈阳性，亦无需修改碳青霉烯类药敏试验结果。

目前不推荐mCIM试验用于常规检测。

二.方法：美罗培南灭活试验
三.试剂和材料
1.TSB （2 ml）
2.美罗培南纸片（10ug）
3.1-ul和10-ul接种环
4.营养肉汤（如MH肉汤、TSB肉汤）或MHA平板（100mm或150mm）
5.美罗培南敏感质控株-大肠埃希菌（ATCC25922）
四.步骤
1.取1ul接种环的过夜培养纯菌落于2ml TSB肉汤中
2.震荡混匀10-15秒
3.每管放入一张含10ug美罗培南的无菌纸片，确认纸片浸没于菌悬液中
4.35℃±2℃大气环境孵育4小时±15分钟
5.孵育结束时，立即用营养肉汤或生理盐水制备0.5麦氏浊度的大肠埃希ATCC 25922菌悬液（直接菌悬法）
6.菌悬液制备和平板涂布必须15分钟内完成，干燥3-10分钟
7.用10ul接种环将美罗培南纸片从TSB肉汤中取出，将纸片贴于试管内壁，轻轻按压以挤去纸片上多余水分，然后将纸片取出贴于已涂布有大肠埃希菌ATCC25922的MHA平板上。

100mm的MHA平板最多贴4张纸片，150mm的MHA平板最多贴8张纸片（图1）。

8.倒置平板，35℃±2℃大气环境孵育18-24小时
9.量取抑菌圈直径
图1. 10ul接种环取出美罗培南纸片（a）；将纸片贴于试管内壁并挤去多余水分（b）；同一接种环取出纸片（c）并贴于MHA平板上（d）
五.结果解释：见图2a和2b
1.碳青霉烯酶阳性：美罗培南抑菌圈直径为6-15mm 或直径为16-18mm但抑菌圈内有散在菌落。

若待测株产生碳青霉烯酶，纸片中的美罗培南被该酶降解，结果为无抑菌圈或抑制大肠埃希菌ATCC 25922的活性降低。

2.碳青霉烯酶阴性：抑菌圈直径≥19mm。

若待测菌株不产碳青霉烯酶，纸片中的美罗培南不被水解，仍能抑制大肠埃希菌ATCC 25922的生长。

3.中性：抑菌圈直径为16-18mm，无法判断是否存在碳青霉烯酶（见备注）
图2a. 阴性对照BAA1706（A）和阳性对照BAA1705（B）
图2b. 碳青霉烯酶产生株。

备注：mCIM结果阳性
六.备注：
1.中性结果
a)检查待测菌株和大肠埃希菌ATCC 25922的纯度
b)检查美罗培南的质控结果
c)重复mCIM试验
d)如果结果仍为中性，建议检测碳青霉烯酶基因
2.某些菌株可能出现美罗培南抑菌圈内出现散在菌落，若抑菌圈直径≤18mm，结果判定为阳性；若抑菌圈直径≥19mm，结果判定为中性结果。

3.CLSI目前只推荐该标准方法用于肠杆菌科细菌中碳青霉烯酶的检测
七.报告：
1.阳性：报告“检测到碳青霉烯酶”
2.阴性：报告“未检测到碳青霉烯酶”
3.中性：报告“无法判断是否产碳青霉烯酶，联系实验室进行讨论”
八.附加试验和报告
1.报告mCIM结果用于感染控制或要求提供流行病学相关信息
2.即使mCIM结果呈阳性，亦无需修改碳青霉烯类药物敏感性试验结果
九.质控：
1.每天测试阳性和阴性质控对照株
2.碳青霉烯酶阳性株：肺炎克雷伯菌ATCC BAA1705
3.碳青霉烯酶阴性株：肺炎克雷伯菌ATCC BAA1706
4.美罗培南纸片的质控按CLSI要求执行
5.资料来源：CLSI M100S-27th。