急性白血病流式细胞术免疫分型的特点及临床意义

·论著·
作者简介：王桂芝，主任医师，
E-mail ：zhanghw1205@163．com 急性白血病流式细胞术免疫分型的特点及临床意义
王桂芝，秦文华
（中平能化集团总医院病理科，平顶山467000）
［摘要］目的探讨急性白血病流式细胞术免疫分型的特点及临床意义。

方法100例急性白血病，采
用流式细胞术进行急性白血病免疫表型检测。

结果
①用特异性抗体将急性淋巴系白血病分为T 细胞系列
急性淋巴细胞白血病（T-ALL ）和B 细胞系急性淋巴细胞白血病（B-ALL ）。

②用特异性抗体使急性髓细胞白血病（AML ）的分型更明确。

③发现急性淋巴细胞白血病（ALL ）中伴髓系抗原表达（My-ALL ）、AML 中伴淋系抗原表达（Ly AML ）和混合型白血病。

结论
免疫学分型能反映白血病细胞的特征，提高了诊断的准确性。

［关键词］白血病；免疫表型分型；流式细胞术
中图分类号：R733．71
文献标识码：A
DOI ：10．3969/J．issn．1672-6790．2012．02．011
Investigation of immunophenotype in acute leukemia via flow cytometry
WANG Gui-zhi ，QIN Wen-hua （Patho-logical Center of General Hospital of Pingdingshan Coal Group ，
Pingdingshan ，467000）［Abstract ］Objective To explore immunophenotyping specificities in acute leucocythemia via flow cytome-try．Methods
Flow cytometry was used to have immunophenotyping of acute leucocythemia tested and assist in mak-
ing the diagnosis leukemia detection．Results
（1）Acute lymphocytic leukemia was divided into T cells in series of
acute leukemia （T-ALL ）and B cell lines acute leukemia （B-ALL ）by using specific antibodies．（2）with specific an-tibodies ，
acute myelogenous leukemia （AML ）can be diagnosed more clear．（3）Acute lymphocytic leukemia （ALL ）with myeloid antigen expression （My-ALL ），AML antigen expression from Ly （AML ）and mixed leukemia were found．Conclusion
Immunophenotype can reflect the heterogeneity of leukemia cells more distinctly and consequent-ly ，enhance the exactness of diagnosis．
［Key words ］Leukemia ，Immunophenotyping ，flow cytometry
急性白血病（AL ）长期以来主要通过骨髓细胞形态学和细胞组织化学进行诊断，
但仍有患者由于细胞形态不典型、细胞发育幼稚等导致难以明确诊
断和分型。

随着国际上白血病诊断手段的迅速发展，至今流式细胞术（FCM ）已被认为是白血病的临床检测的首选方法。

白血病免疫分型是MIC 分型的重要组成部分，是形态学分型的重要补充和进一步深化。

对白血病细胞抗原的分析研究有助于准确判断被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度，为诊断、治疗及预后提供依据。

本研究对AL 患者采用流式细胞术进行免疫表型检测，协助诊断白血病。

1资料与方法1．1
临床资料为本院2009年5月至2011年8月收治的100例AL 患者，男58例，女42例；年龄1 75岁，平均年龄36岁。

所有患者均经骨髓细胞形态学检查，组化染色诊断为AL ，同时抽取患者骨
髓进行流式细胞术免疫分型。

形态学检查（FAB 分
型）初诊急性淋巴细胞性白血病（ALL ）14例，急性非淋巴细胞性白血病（ANLL ）81例，急性粒-淋混合
型白血病1例，4例形态学检查难以确诊。

1．2
主要试剂选用三色直接标记的荧光抗体，以
IgGl-FITC /IgGl-PE /CD45-PC5为阴性对照的抗体组合：CDl3-FITC /CD33-PE /PC5-CD45、CD7-FITC /CD117-PE /PC5-CD45、CD4-FITC/CD8-PE/PC5-CD45、CD20-FITC/CD34-PE/PC5-CD45、CDl9-FITC/CD5-PE/PC5-CD45、CD14-FITC/CD64-PE/PC5-CD45、HLA-DR-FITC /CD11b-PE /PC5-CD45、CD10-FITC /CD22-PE /PC5-CD45、CD38-FITC /CD56-PE /PC5-CD45，胞内抗体组合为cMPO-FITC /cCD79a-PE /cCD3-ECD /PC5-CD45，溶血素及透膜剂。

上述所有试剂及鞘液均购自美国Beckman-Coulter 公司。

1．3主要仪器美国BECKMAN 公司产EPICS XL 型流式细胞仪。

1．4实验方法取患者经肝素或EDTA 抗凝的骨
髓1ml，根据骨髓增生程度及外周血白细胞数，部分样本用0．9%氯化钠注射溶液稀释至细胞数（1 10）ˑ109/L备用。

分别经细胞膜表面标记方法及细胞浆标记方法处理后上机行FCM免疫表型检测。

CD45/SSC双参数散点图设门方法进行三色和四色流式细胞术免疫分析。

采用Cell Quest软件对检测结果进行分析：①膜表面抗原≥20%为阳性；②胞浆抗原及CD34、CD117≥10%为阳性；③AL免疫分型标准参照欧洲白血病免疫特征研究组（EGIL）的积分标准。

1．5统计学处理采用SPSS14．0软件对所得结果进行统计，采用χ2检验。

2结果
采用CD45/SSC双参数散点图设门方法，区分骨髓或外周血中的淋巴细胞、单核细胞、粒细胞、有核红细胞和幼稚细胞群。

用四色胞内抗体组合cM-PO-FITC/cCD79a-PE/cCD3-ECD/PC5-CD45流式细胞术免疫分析，MPO是髓系特异性抗原，CD79a是B淋巴系特异性抗原，CD3是T淋巴系特异性抗原，来区分T淋巴系、B淋巴系和髓系。

干祖系抗原CD34、HLA-DR、CD38分析分化阶段。

根据异常细胞表达的抗原再具体分析其亚型。

2．1ALL免疫分型
2．1．1ALL免疫分型亚型诊断依据CD34、HLA-DR、cCD79a、CD19、CD10、CD20、CD22、CD7、cCD3等淋巴系抗原的表达，诊断为ALL，其中CD34、HLA-DR、cCD79a、CD19、CD20、CD22抗原阳性诊断B-ALL8例（χ2=19．89，P＜0．05）；CD34、HLA-DR、CD5、CD7、cCD3抗原阳性诊断T-ALL6例（χ2= 22．98，P＜0．05），见表1。

2．1．2ALL伴髓系抗原的诊断14例ALL中有2例伴髓系抗原CD13、CD33表达诊断为My+ALL。

2．2AML免疫分型亚型
2．2．1AML免疫分型各亚型诊断在86例AML 中，M2占18．6，M3和M4各占17．6，M1占15．1，M5占39．5。

依据CD34、HLA-DR的表达与否，鉴别诊断M3与M2。

依据CD14表达情况，鉴别诊断M4、M5。

其中2例M5不表达CD34而表达CD38（χ2=59．13，P＜0．01），见表2。

2．2．2AML伴淋系抗原的诊断86例AML中有20例伴淋系抗原CD7、CD19表达，诊断为Ly+ AML。

M2的交叉表达现象最多见，其次为M5。

2．2．3急性混合型白血病的诊断急性混合型白血病（BAL）3例占3．0，其中B/M2例，T/M1例，主要表达CD13、CD33等抗原。

3讨论
用FCM进行白血病免疫分型是对形态学诊断的补充和有力佐证。

传统形态学检查是诊断白血病的基础，但有局限性，其检测灵敏度低、主观性强。

当遇到形态学难以诊断的白血病，只有靠免疫分型来辅助诊断。

目前白血病免疫分型主要用FCM进行检测，其原理是利用荧光素标记的单克隆抗体作
表1ALL免疫分型结果
分型例数
T淋巴系列阳性
CD3CD5CD7CD79a
B淋巴系列阳性
CD22CD10CD19CD20
髓系抗原阳性
CD33CD13
干-祖细胞阳性
CD34HLA-DR
ALL14
T-A LL6656000001064 B-A LL8000856871186
表2AML免疫分型结果
分型例数
淋巴系列阳性
CD5CD7CD22CD19
髓系抗原阳性
CD64CD33CD13CD14CD117
干-祖细胞系阳性
CD34HLA-DR
ANLL86
M11300000870131312 M2160623016100161614 M31200000121101100 M41100005910371010 M534214000332216152832
分子探针，多参数分析白血病细胞的细胞膜和细胞质或细胞核的免疫表型，从而能高速、多参数、客观地定性、定量地检测白血病细胞，可供检测的标本种类是骨髓、外周血、脑脊液及其他体液［1］。

如采用CD45/SSC双参数散点图设门方法，能清楚地区分骨髓或外周血中的淋巴细胞、单核细胞、粒细胞、有核红细胞和幼稚细胞群。

该方法在AL 免疫分型中的地位已得到充分肯定。

CD45是人类白细胞共同抗原，表达于所有的白细胞膜，但在红细胞和血小板上缺如，其表达强度因白细胞种类、分化成熟程度及增殖状态而异。

CD45表达量顺序为淋巴细胞、单核细胞、粒细胞、原始幼稚细胞。

SSC反映细胞的颗粒性，SSC由大到小依次为中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞与原始/幼稚细胞、红细胞［2］。

故当CD45与散射光结合时，即能将原始细胞与正常的淋巴细胞、单核细胞、粒细胞明显区分开。

AL免疫分型的诊断：（1）ALL免疫分型亚型的诊断：按EGIL提出的ALL免疫学分型［3］，本研究依据B细胞系CD19、CD1O、CD20、CD22和T细胞系CD7、CD5、CD3、CD4等的表达情况，将ALL分为T-ALL和B-ALL及T/B双表型。

CD19、CD7虽被认为是B-ALL、T-ALL的敏感指标，但这两个指标带有跨系表达，特异性不强。

（2）AML免疫分型的诊断：AML这类白血病细胞的免疫表达种类繁杂。

本研究依据髓系特异性抗原CD117［4］、AML的高敏感性抗原CD13、CD33和特异性标记抗原cMPO阳性［5］，诊断为髓系白血病。

（3）AML免疫分型亚型的诊断：白血病细胞的分化发育丧失严格的规律性，部分可同时表达髓系和淋系抗原。

传统形态学检查不能区分此类白血病，而FCM免疫分型具有显著优势。

由于细胞发生克隆增殖的阶段不同，白血病细胞在分化抗原表达方面具有高度的异质性、异源性等特点，在免疫上表现为系列特异抗原的异常表达或非系列相关抗原的表达。

AML的诊断主要依据EGIL积分标准，达不到者则归于Ly AML或My ALL［6］。

（4）My ALL和Ly AML的诊断：最常见的单个髓系抗原在ALL的表达，依次为CD13、CD33、CD14。

本组资料中，髓系抗原阳性率的ALL占20．0%，CD13、CD33的阳性率为12．5%。

本研究淋系抗原均以CD7表达最常见，CD7表达阳性率为28．0%，其次为CD19。

应用免疫分型诊断白血病的意义在于：①诊断ALL的类型及分化阶段。

②诊断AML的亚型。

③诊断急性未分化白血病、一些少见类型白血病和混合型白血病。

④诊断ALL伴髓系标志与AML伴淋系标志。

⑤指导治疗和判断预后［7］。

目前，FCM免疫分型在AL中的作用愈来愈受到重视，本研究初步总结了100例AL FCM免疫分型的表达规律，今后将通过大样本的研究进一步探讨FCM免疫分型与治疗、预后的关系。

相信随着新的更加特异的McAb的不断出现，将对急性白血病诊断和亚型区分更加精细。

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（收稿日期：2011-09-17）。