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心血管生理学习题集
心血管生理复习题集 1大鼠呼吸面罩死腔问题的解决方法。 答：单管连接法:通过控制以下压力差来解决大鼠呼吸面罩死腔问题： 进气早期：肺内压>面罩内压>出气管内压 进气中末期：面罩内压>肺内压<出气管内压 通气过量也不易造成肺泡的损伤。 2简述如何获得存活率高、纯度高的乳鼠心肌细胞。（PPT2） 答：一、材料：1.乳鼠：出生1-3d；2.液体：培养基、小牛血清、消化酶、缓冲液及75%酒精。3.物品（均需严格消毒）：眼科剪、眼科镊（4套↑）、培养皿（2套↑）、烧杯、离心管、滴管、烧瓶及搅拌子等4超净台5台面：磁力搅拌器6培养箱7其它：离心机、血细胞计数板.二：分离和培养：1.取出心脏放入4℃PBS(磷酸盐缓冲液)内2冲洗和减碎心脏：将心脏剪为0.5-1mm大小，放入盛有胶原酶、胰酶、透明质酸酶的器皿中；3心肌消化及细胞收集：放入烧瓶60-80rmp，约5分钟后清离，第二次离心约10分钟，上清吸入含培养基和血清的离心管内，收集心肌细胞离心，1000rmp、10分钟，去除上清，加入新的培养基和血清。4细胞接种：放入培养皿、培养板。三、纯化：①差速贴壁法②化学试剂抑制法③密度梯度离心法：Percoll ④流式细胞仪法⑤免疫磁珠四：鉴定：1细胞形态：倒置显微镜：细胞形态：未贴壁呈圆形；贴壁后呈梭形、多角形，胞核1～2个、呈圆形、具有1～2清晰的核仁，细胞大小均匀生长迅速。搏动：频率130～150次/分。单个细胞自行蠕动；当生长成片后可见呈岛屿状搏动当生长成片后可见呈岛屿状搏动。透射电镜：细胞完整胞膜皱褶整齐细胞中肌丝线粒体清晰、分布均匀，细胞核完整。2.心肌细胞纯度；3. 心肌细胞成活率测定：0.4%台盼蓝染色（1：9），免疫细胞化学肌动蛋白胞浆阳性表达等。四、注意事项：1培养基pH值：7.0～7.4，大部分培养基应放在-20℃保存，少部分在4℃。2消化时搅拌速度很重要，千万要越慢越好，所有操作尽量轻柔。3消化酶的选择：胰蛋白酶、胶原酶加透明质酸酶。4消化程度：过度：肌原蛋白萎缩，细胞死亡率增加或贴壁能力减弱；不足：细胞易聚集成团状→细胞↓。5接种密度：过多：细胞易发生营养不良；过少：心肌细胞黏附延展后不能相互接触。6.心肌细胞接种密度：:形态学观测：1×108 /L 以下形态学观测：1×10 /L 以下提取mRNA或蛋白：5x 108 /L ～6x 108 /L 细胞搏动：大于1×109 /L。7.无论什么方法，无菌操作时关键。 3简述评定心脏收缩和舒张功能的主要指标。（P100） 答：⑴评定心脏收缩功能的主要指标：1每搏输出量（SV）和射血分数（EF）2.心排出量与心排血指数3.心脏做功4.心室功能曲线5.左室收缩压峰值（LVSPP）6.dp/dt和dp/dt max7.心肌收缩成分缩短速度（V CE）和收缩指数（CI）8压力-压力变化率环（LVP-dt/dp环）9压力-容积环10.心室收缩末期压力-容积关系11.心室射血期环肌纤维缩短程度12心室直径变化速率（dD/dt）及心室容积变化速率（dV/dt）13心缩间期（STI） ⑵评定心脏舒张功能的主要指标：1.左室舒张末压（LVEDP）2 .-dp/dt和-dp/dt max；3.等容舒张时间室内压下降的时间常数（T）4.充盈量、充盈速率和充盈分数5.非创伤性心脏舒张功能的测定（常用的有心尖搏动图、新阻抗微分图、超声心动图） 4简述离体心脏功能测定的方法与关键性注意事项。除测定心功能外，离体心脏还能进行哪些方面的研究。（P590） 答：离体心功能测定的方法：（1）Langendorff mode 主动脉逆行灌流法（2）Working heart mode工作心脏模型（3）Papillary muscle 乳头肌（4）skinned fibers 去膜肌纤维（5）Single cardiomyocyte 单个心肌细胞 离体心脏功能测定的方法主要是可视化动缘探测系统，其工作原理：1、分离心肌细胞：Ca2+在心肌细胞的连接上起重要作用，无Ca2+液体灌流心脏可带走大量Ca2+，心肌细胞间糖蛋白被破坏，桥粒和链接随之分解。通常使用酶解法，如胰酶、胶原酶等。经20-30分钟酶液消化后，细胞间质（GCM）大部分被消化，但细胞间链接，如缝隙链接等未完全断开，心脏仍保持大体形态，呈松弛状，通过机械作用可将细胞分开。收集分离所得心肌细胞，用由低到高逐步更换介质中Ca2+浓度的方法，使Ca2+达1.0mmol/L以上，获得钙耐受心肌细胞。 2.动缘探测系统检测心肌细胞机械功能及钙瞬变：主要根据心肌细胞边缘或肌小节周围背景的对比度差异，以光探针锁定细胞边缘或肌小节的相对位置，并跟踪、记录、锁定对象相对位置的变化，即所谓“动员探测”。常用的探光剂为fura-2/AM。（乙酸羧甲基酯衍生物形式）。通过“负载”的过程，用双波长荧光法指标。 3.具体步骤：在倒置显微镜载物台上的细胞灌流小室中（可保持恒温）滴入1-2滴吹散均匀的钙耐受心肌细胞悬液，以含氧台氏液灌流（1ml/min,25℃，Ph7.2）。通过灌流小室底部镶嵌的一对铂电极，给予细胞0.5Hz,5ms波宽，幅度60V的电场刺激，心肌细胞随之有节律的收缩。细胞收缩影像通过40×物镜传输到IonOptix MyoCam摄像系统（采样帧率为60帧/s）并呈现在监视器上，该系统每16.7ms快速扫描一次影响区，故可实时采集并准确记录心肌细胞或肌小节收缩幅度及收缩/舒张等指标。心肌细胞钙瞬变检测。主要检测指标：fura-2荧光强度（FFI），fura-2荧光强度变化（FFI峰值-FFI基线值，△FFI），Ca2+达峰值时程（TTPCa），荧光衰减时程（FDT）及舒张Ca2+减少50%时程（T50DCa）等。 注意事项：（1）心肌细胞的分离质量差1. 酶的选择2. 灌流液的pH、温度3. 控制消化时间4.正确选择心肌细胞：①细胞呈长杆状。②边缘折光性好③无自发的收缩④方向与长轴同⑤与小室底粘附⑥收缩稳 5 分钟。5. 维护和清洗灌流系统6心肌细胞不回应电场刺激7细胞边缘选择与图像属性调整8检测不到荧光信号或强度不够。（1）主动脉逆行灌流法：要求实验条件维持在：灌流压－60 mmHg；前负荷－水囊内压7 mmHg；节奏 6 Hz (360次/分)（2）心收缩功能参数数据分析注意事项：5-15 次/分心跳；数据处理要求时间；一项实验大约10 - 20分钟；采取双盲方法 可视化动缘探测系统检测心肌细胞机械功能的应用1 药物干预 2 疾病模型：缺血／再灌注、高血压、2型糖尿病3转基因、基因敲除等研究. 5试列举至少三个重要的离体心功能观测指标。 答：1、PTA：最大收缩幅度,2、TS, 收缩时程(50 70 90%)，3.TR, 舒张时程(50 70 90%) 4.±dL/dt, 收缩/ 舒张速率。2.钙瞬变的主要检测指标：fura-2荧光强度（FFI），fura-2荧光强度变化（FFI峰值-FFI基线值，△FFI），Ca2+达峰值时程（TTPCa），荧光衰减时程（FDT）及舒张Ca2+减少50%时程（T50DCa）等。 6简述调节肌浆网钙离子释放通道的因素有哪些？(p238) 答：肌浆网膜释放钙离子是分别通过激活膜上两种钙离子释放通道（Ryanodine受体和IP3受体）完成的。Ca2+ 通道都是配体激活的通道：1.IP3受体，当与质膜肌醇磷酸分解产物IP3特异性结合后被激活；2.Ryanodine受体：分布于肌浆网终池上的Ca2+释放通道，该受体与TX小管（即横管）膜上的二氢吡啶受体（即L型Ca2+ 通道）存在密切的功能联系。在兴奋-收缩偶联过程中，T小管膜除极或小量钙内流可引起肌浆网Ryanodine受体通道开放，即所谓的除极诱发Ca2+ 释放和钙诱发的钙释放。 7正常心（节）律的标准是什么？ 答： 1.起源于SAN(窦房结) 2.60-100次/分 3.R-R间期变异<0.12s 4.P-R间期0.12-0.20s 5.QRS≤0.10s-0.11s 8简述血浆脂联素水平的特点及影响脂联素水平的因素。 答：1.正常人血中脂联素（APN）含量较丰富，浓度: 3～17μg/ml，约占血浆总蛋白量的0.01％，为其它常见激素的3倍。血浆浓度稳定：