转基因产品检测技术简介

Test Strip Bottom (Lቤተ መጻሕፍቲ ባይዱbeled Filter Cover)
Positive Negative
Lateral Flow Strip 检测示意图
Canola +
Cotton +
Soybean +
PCR检测的特点
• • • • • • 利用筛查方法可以涵盖许多GMO。 检测特异性好。 能够检测未经批准的GMO。 检测非编码区的基因成分。 定量PCR可以得出定量检测结果。 在混合样品或深加工产品产品检测结果可 靠 (由于 DNA非常稳定)
15000 2000 500 100
20
25
30
35
Cycle Number
Quantification of Roundup ReadyTM Soya with the LightCycler
Standard Curve Lectin gene 100 % 25 % 6,25 % 1,56 %
Standard Curve GMO gene 6,25 % 1,56 % 0,4 % 0,1 %
谢谢大家！
DNA-生命的分子
DNA: 两条互补双螺旋链 PCR (聚合酶链式反应)
变性
退火
低温
高温
PCR 反应示意图
引物结合
互补链延伸
PCR 反应原理示意图
Primer annealing at 50-70°C
Melting of DNA at ~95°C
Polymerisation at 72°C
第一个循环
• Bt-玉米的定性检测试剂盒:
• Bt Corn Grain Test Kit
TraitCheck Test Kits原理
TraitCheck Kits检测结果解释
Test Strip Top (Reservoir Pad) Result Window
Red Control Line (Assay has Run Properly) Red Test Line (Sample is Positive)
改良植物品质）
医药领域中的转基因植物（利用植物作为生物反应
器，生产药用蛋白、食用疫苗等）
遭受虫害的普通玉米
抗虫的Bt转基因玉米
适合转基因产品检测最佳方法所具备的 要素
1. 检测时间快速 2. 价格便宜 3. 灵敏性、准确性、重复性好 4. 得到定量的结果 5. 国际 上广泛接受或认可 6. 能够检测所有已商品化的转基因作物品种 7. 能够筛查出未经许可的转基因生物品种 8. 适用于原材料和深加工品的检测 9. 具备认可的标准物质
定性测试
定量测试
定性PCR检测
Instruments for Quantitative PCR
ABI PRISM 5700 ABI PRISM 7700
detection of 1 reporter dye
detection of 2 or more reporter dyes
LightCycler
iCycler
detection of 2 reporter dyes
detection of 1- 4 reporter dyes
Fluorescence Signals of Different Amounts of Target DNA
Copy Numbers
Fluorescence Intensity
TMB TMB
Detector Antibody Coated Surface
B
D
Coated Surface
Antigen
Coated Surface
用于RR大豆 和Bt 玉米ELISA检测
96微孔板
TraitCheck Test Kits
• RoundUpReadyTM 大豆的定性检测试剂 盒: • RUR Soybean Leaf and Seed Test Kit • RUR Bulk Soybean Test Kit
分子生物学基础
中心法则
DNA
RNA
蛋白质
次生代谢产物
国际目前检测重点
已发现一些变化 (安全评价)
目前已采用的检测方法
• 核酸水平
• 蛋白质水平
转基因生物（GMO）的检测略图
核酸物质 （DNA） ，位于细 胞核
Nucleus
mRNA（信使 RNA） •由DNA转录而来
蛋白质 • 功能产物
蛋白质检测方法
转基因产品检测技术简介
东北老农
概 念
转基因生物（Genetically
转基因微生物等。
Modified Organisms，简
称GMO）：包括转基因植物，转基因动物，
转基因产品—含有或生产过程中有转基因
生物参与的产品。
转基因植物
Genetically Modified Plant，or Transgenic Plant 概念：运用重组DNA技术将外源基因整合于受 体植物基因组、改变其遗传组成后产生的植物及 其后代。
• ELISA检测 • 试剂条快速检测
核酸检测方法
定性PCR PCR检测 PCR-ELISA
定量PCR
目前应用方法的比较
检测时间少于 10 分钟 成本便宜 灵敏、准确、重复性 得出定量结果 国际上是否认可有效 检测所有商品化品种 检测不同品系 原料 对于加工产品 标准物质 蛋白检测 (ELISA) 否 是 好 是 是/否 否 否 是 否 是/否 蛋白检测 (Lateral Flow) 是 是 好 否 否 否 否 是 否 是/否 基因检测 (PCR) 否 否 好 是 是/否 是/否 是/否 是 是 是/否
与传统的常规育种有何区别？
转基因植物通常至少含有一种非近源物种或 种 的遗传基因。
转基因植物的分类
抗除草剂的转基因植物（最早进入田间生产，目
前栽培面积最大）如 Monsanto 的抗除草剂草甘膦大豆
抗虫转基因植物 如 Syngenta的Bt 176抗虫玉米 抗病转基因植物 （抗病毒，抗真菌，抗细菌） 抗环境胁迫转基因作物 （温度、水分、化学物） 植物发育调节基因工程 （控制果实成熟，雄性不育，
蛋白质检测有关优缺点
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• • •
优点： 检测时间短，价格便宜，适合原材料和初加 工产品 ELISA 检测技术已被认可，广泛用于其他领 域。 缺点： 每次只能检测一种GMO。 不同试剂盒的灵敏度不同 只有部分转基因产品的试剂盒有产品供应
* 酶链免疫反应 (ELISA) A C
HPR
Y Monoclonal Antibody Coated Surface
第二个循环
PCR and TaqMan are registered trademarks of Hoffmann La Roche and Perkin Elmer
PCR检测流程示意图
筛选测试
想证明产品中有 GMO ? 35S 启动子 / NOS 想确认出现了哪种 GMO ? Roundup Ready 大豆 / Bt176 玉米 想确认GMO出现的数量 ?