坦布苏病毒简介教学教材

坦布苏病毒简介

坦布苏病毒简介

1、坦布苏病毒病概述

2010年4月以来在我国大部分养鸭地区发生了一种以传播迅速、突发性的产蛋急剧下降为主要特点的新鸭病。临床主要表现为：产蛋鸭产蛋严重下降，产蛋率从90％降至10％以内，甚至绝产，给养鸭业造成了严重的经济损失(李玉峰，2011)。该病最初命名为“鸭出血性卵巢炎”，“鸭病毒性脑炎”，“鸭产蛋下降综合症”，“鸭传染性卵巢炎”(黄欣，2011；李玉峰，2011；廖敏等，2011)等。苏敬良等从病鸭中分离出了一种新型黄病毒，并命名为BYD病毒，属于在鸭上首次发现。2012年该病被确诊是鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus，DTMUV)。到目前为止，更有报道本病在蛋鸡、鸡群及鹅群(傅光华等，2011；黄欣梅，2011)中发现。关于本次在鸭上传播的鸭黄病毒，病毒学家，法国马赛第二大学的访问学者Ernest Gould表示，由蚊子造成的传播不应该是一种必然的结果，并指出这种病毒传播期间的温度变化与由蚊子传播的其他黄病毒并不一致。（鸭子在早春的寒冷气候中开始患病，而推测起来，蚊子种群在此时还很虚弱，而疾病的暴发则会一直持续到秋季。）

鉴于该病为鸭群新发生的疫病，除该病的病原学外，其致病机理、免疫机理、快速诊断技术和防制措施等，都有待进一步深入研究。

2、病原学

鸭出血性卵巢炎的病原与恩他耶病毒群的坦布苏病毒(Tem-busu virus，TMUV)印尼和泰国病毒株的核苷酸同源性为87%～91%，氨基酸同源性为98%～99%；而与同群的Ntaya病毒、Sitiawan病毒、Theiler's murine encephalomye-litis virus(TMEV)、Bagaza病毒的核苷酸同源性大于70%，国际上

对黄病毒属成员的分类标准为NS5基因3'端长约1 kb的区域中同种病毒的核苷酸序列同源性大于84%。因此确定该病原为黄病毒科黄病毒属恩他耶病毒群的TMUV。鸭坦布苏病毒（Duck Tembusu virus，DTMUV）属于黄病毒科（Flaviviridae）、黄病毒属（Flavivirus）。TMUV的病毒粒子直径40~50nm，有脂质囊膜（胡旭东等，2011）。病毒基因组为单股正链RNA，大小为10.9kb。

2.1 病毒基因组结构

鸭坦布苏病毒基因组为不分节段的单股正链RNA，分子量约为 3.8×106 (Shustov, A V et al., 2007)，由10990个核苷酸构成(Yun, T et al.,2012)。病毒基因组由3’非编码区（3’untranslated region，UTR），5’非编码区（5’non-coding region，NCR）及一个开放性阅读框（open reading frame，ORF）组成。3’非编码区由618个核苷酸构成，与其他黄病毒不同，3’非编码区还含有一个poly （A）尾，包括起始、调节基因组复制和转录的保守二级或三级RNA元件。5’非编码区由94个核苷酸构成，在黄病毒属中该结构保守性较差，其主要功能是在RNA复制过程中作为正链合成的起始位点。病毒基因组的开放性阅读框（ORF）包含10230 nt，编码一个大多聚蛋白，由3426个氨基酸构成，可以裂解为3个结构蛋白（C、M、E蛋白）和7个非结构蛋白（NS1，NS2A，NS2B，NS3，NS4A，NS4B，NS5）(Mukhopadhyay, S et al.,2005)。E、NS1、NS3、NS5蛋白具有保守性和抗原性。C蛋白的氨基酸同源性低，含有大量的碱性氨基酸，参与病毒组装过程。E蛋白是DFV主要表面蛋白，具有促使病毒与宿主细胞结合及膜融合功能，能诱导产生中和抗体。DFV的非结构蛋白NS1是黄病毒中最大的，是病毒感染过程中产生的主要免疫原，但NS1免疫不能诱

导无明显的抗病毒抗体产生，发生抗体增强效应的可能性较小(Tang Y，et al.,2011)。NS3蛋白具有丝氨酸蛋白酶、核苷三磷酸酶/RNA解旋酶活性，参与蛋白质水解加工及病毒复制，与病毒的致病性密切相关(郑杰，2007)。NS3与NS2组成病毒复制体，感染动物可产生抗NS2-3抗体，但抗NS2-3抗体不具有病毒中和活性(郑杰，2007)。基因组RNA就是DTMUV特异性RNA，具有感染性、携带全部遗产信息、在病毒增殖过程中，直接起mRNA作用，既可复制子代RNA，又可翻译出病毒蛋白。

2.2 生物学特性

TMUV对乙醚及去氧胆酸盐敏感。56℃加热15分钟灭活。最适pH为8.0-8.5，pH10以上使其灭活。对酸敏感。TMUV在胰酶处理后，感染性丧失。鸭坦布苏病毒可以在鸭胚、鸡胚、鸭胚成纤维细胞及部分传代细胞系如Vero细胞中繁殖。将鸭坦布苏病毒经尿囊腔接种鸡胚和鸭胚，3-5d后可致鸡胚和鸭胚死亡。接种CEF盲传5代不会产生病变，而将鸭源胚毒第1代接种DEF就在48h 出现了明显CPE。适应DEF后的病毒，通常在36-48h就会产生CPE，随时间延长，CPE会更加明显，表现为细胞圆缩和脱落，细胞折光性增强，细胞变圆以及细胞融合，最终崩解死亡。通过H.E.染色便可见细胞破碎，并有大量红染颗粒。通过RT-PCR检测，接种病毒的CEF为阴性，而接种DEF后检测为阳性（李玉峰等，2011）。

3 鸭坦布苏病毒的研究现状

1997年，温立斌等(温立斌，2001)从石家庄、邢台、邯郸等地发现康贝尔鸭产蛋下降，有神经症状，分离到有囊膜RNA病毒，经初步鉴定，疑似黄病毒，初步命名为“鸭病毒性脑炎”。曹贞贞等(曹贞贞，2010)于2010年将种鸭和

蛋鸭发病死亡病例暂命名为“鸭出血性卵巢炎”。2011年，苏敬良、高福等(苏敬良等，2011)经过大量的研究工作，测序分析将其命名为白洋淀（BYD）病毒。

李玉峰等(李玉峰，2011)发现，除种鸭外，商品肉鸭也发病。黄欣梅等(黄欣梅，2011)报道鸭鹅均发病，将其命名为“脑炎-卵巢炎综合征”。随后，傅光华等(傅光华等，2011；黄欣梅，2011)报道本病在蛋鸡、鸡群中发现。

截至2011年12月15日，GenBank数据库收录了9株鸭源、1株鹅源、1株鸡源共11株DTMUV的基因序列。

毒株名称GenBank登录号分离来源

YY5株(HQ641390.1)鸭

BYD-1株(JF312912.1)鸭duck/SD/CHN/2010株(JF738022.1)鸭Fengxian株(HQ833331.1)鸭

Huabei株(JF523187.1)鸭CJD05/CHN/2010株(JF795477.1)鸭HBJL株(JF423123.1)鸭

JS804株(NC015843.1)鹅

JM株(JN811559.1)鸭

FS株(JN811558.1)鸭muscovy/SD/China/2011株(JN232077.1)鸭

11株鸭坦布苏病毒的多聚蛋白、NS5、E基因核苷酸序列同源性均大于98%。

其中BYD-1、JS804、FS、JM、muscovy/SD/China/2011、CJD05等6株病毒完成了全基因组或聚蛋白基因序列分析。E基因遗传进化分析发现，11株鸭坦布苏病毒分属于2个分支，其中CJD05、Fengxian、JS804、muscovy/SD/China/2011等4株的亲缘关系相近，与泰国蚊源株THCar同属一个分支；而BYD-1、FS、JM、duck/SD/CHN/2010等4株的亲缘关系相近，属于另一个分支。NS5基因遗传进化分析结果表明，11株DFV分属于2个分支，其中Huabei与其它10株亲缘关系较远，与Tembusu virus note N2 revived 14/6/82