以壳聚糖-戊二醛为载体柔性固定假丝酵母脂肪酶candidarugosalipase

好于游离酶。
关键词：壳聚糖；假丝酵母；初始酶活力；固定化
中图分类号：0629.8
文献标识码：A
文章编号：1671-0460（2019） 08-1686-04
Immobilization of Candida Rugosa Lipase by Using Chitosan-Glutaraldehyde as Support
1687
壳聚糖，济南海得贝，冰醋酸、六偏磷酸钠、
Fo—空白对照组消耗0.05g mL 'HCl体积，mL。
聚乙烯醇、正庚醇、环己烷、无水乙醇、丙酮、戊
(注：0.05 g-mf1 NaOH溶液由邻苯二甲酸氢钾溶液标定，0.05 g-mL'1 HC1溶液由碳酸钠溶液标定)
二醛均为国产分析纯。Candida rugosa脂肪酶：酶的 稳定温度2〜8 °C,最佳反应温度为37 °C,适于水 解橄榄油等短链底物。
酶活可达240 |x -g-'o Chitosan-GA固定化酶循环使用4次后保留了 20%左右的初始酶活力。固定化酶在水相中
保存185 <1后保留了 40%以上初始酶活力。固定化酶在有机溶剂（正庚醇）中浸泡120 h后固定化酶酶活保留
32.2%,而游离酶只保留原始酶活的&5%。Chitosan-GA载体固定化脂肪酶在水相和有机相中的保存稳定性都
而解决酶蛋白的不稳定性问题1"。 脂肪酶在有机溶剂中具有高的催化活性和立体
选择性，因而已广泛应用于制备具有光学活性的醇、 脂肪酸及其酯等纯手性医药和农药的中间体叫
本文通过研究实现制备Chitosan-GA载体，固 定化商品脂肪酶并优化固定条件；Chitosan-GA载 体固定化实验室自产耐有机溶剂脂肪酶并优化固定 条件。
1.3.3游离酶活力的测定
同1.3.2节的空白实验，仅将补加“1 mL缓冲液”
换成“1 mL酶液”，及加入3滴酚駄指示剂后用
NaOH溶液滴至瓶中溶液变成红色，用HC1溶液滴
定至无色，并记录消耗HC1溶液的体积数。
2018-11-20 周蕊（1984-）,女，陕西省西安市人，实验师，理学硕士，2010年毕业于南京工业大学微生物学专业，研究方向：从事生物化工研 发及教学工作:E-mail： 58086722@qq.como
第48卷第8期
周蕊，等：以壳聚糖-戊二醛为载体柔性固定假丝酵母脂肪酶candidd rugose lipase
第48卷第8期 2019年8月
当
代
化Fra Baidu bibliotek
工
Contemporary Chemical Industry
Vol.4& No.8 August, 2019
以壳聚糖-戊二醛为载体柔性 固定假丝酵母脂肪酶Candida rugosa lipase
周蕊，邢炎华，王燕
（陕西国际商贸学院，陕西 西安712046）
摘
要：以壳聚糖-戊二醛（Chitosan-GA ）为载体固定假丝酵母脂肪酶Candida rugosa lipase （ CRL ）最高
1.2固定化材料 1.2.1 Chitosan-GA 载体(Chi-GA )的制备
根据文献"制备Chitosan ( Chi)小球：将壳聚 糖5 g溶解于200 mL 8%的醋酸得到2.5%的壳聚糖 的醋酸溶液，并加入20 mL氢氧化钠溶液(0.5 g mL-1 ),将所得壳聚糖的醋酸溶液调至pH=6。注
固定化酶是用固体材料将酶束缚或限制于一定 区域内，酶仍能进行其特有的催化反应，并可回收 及重复使用的一类技术冋。与游离酶相比，固定化 酶具有更多优点叫
酶的“柔性固定化”就是在固定化载体上，接 上一些有足够长度的且是亲水的分子链，即所谓的
“柔性链”，接有柔性链的柔性载体的引入，在制备 固定化酶的过程中，当酶与柔性载体相碰撞结合时， 就会因柔性链的缓冲作用，使酶保持构象不变以减 少酶的活力损失；另外，在柔性固定化酶与底物作 用时，被固定到柔性载体上的酶可以更好地保留酶 游离态的均相催化活性，还能使酶蛋白构象因受微 环境的改变而发生折叠、失活处于亚稳态时，当施 加反折叠措施，酶恢复正常构态时，因柔性而位垒 更低，更易于恢复，即可增加酶的自恢复能力，从
1实验部分
1.1仪器与试剂 细胞破碎仪，Biosafer 250-88,赛飞（中国）有
限公司；恒温振荡器，THZ-82,北京国华仪器；真 空干燥器，2K-82A,上海试验仪器总厂；磁力加热 搅拌器，79-1,常州国华电器有限公司。
基金项目 收稿日期 作者筒介
陕西省教育厅项目，项目号：18JK0950。
ZHOU Rui, XING Yan-hua, WANG Yan
(Shaanxi Institute of International Trade & Commerce, Shaanxi Xi'an 712046, China)
Abstract: Chitosan support was synthesized by coupling glutaraldehyde (Chitosan-GA) onto the surface. And then Candida rugosa lipase(CRL) was immobilized on this support. The highest activity of immobilized lipase was 240 p g1. The immobilized lipase remained 20% of initial activity even after 4 times of reuse. The drop in the activity of the immobilized lipase after 185 days storage at 4 °C did not exceed 60%. Immobilized enzyme is much more stable than free enzyme in aqueous phase and organic phase. Key words: Chitosan; Candida mycoderma; Initial enzyme activity; Immobilization