紫外线对枯草杆菌的诱变效应

制备枯草芽孢杆菌菌液
取之前涂布的计算初始菌悬液浓度的3个普通培养 基平板和计算照射后的菌悬液浓度的28个普通培 、养基平板，计算初始菌落数和每个照射强度下的 菌落数，计算致死率。
稀释菌液：10-1—10-5，10-4和 10-5涂布于6个平板，用于计数
紫外线处理：处理组一个平板菌 悬液照射，涂布两个平行，对照 组菌悬液涂布
计算公式：致死率 =（对照1 mL 菌液中活菌数 — 处理后1 mL 菌液中活菌数）/对照1 mL 菌液中活 菌数
取致死率为50%-80%的菌种，1个菌落点植于2 个平行的淀粉培养基平板和1个保存菌种的牛肉膏 蛋白胨培养基平板。点植方法如下图所示：点植 于两线焦点处。
菌种扩繁后，按下图所示方式进行 点植，每个菌种点植于淀粉培养 皿，37℃倒置培养24h。
三、实验步骤
实验前准备：两种培养基的 配制灭菌和各器材灭菌
照射：紫外光照射1min，时间点和稀释倍数分别 是0s（10-5,10-6）,15s（10-4,10-3）,30s（10-3, 10-4）,60s（10-2,10-3）,120s（10-2,10-1）， 240s（0,10-1）涂布完后黑布罩上，倒置培养37℃ 24h
紫外线对枯草芽孢杆菌产酶诱变 效应的遗传分析
第二大组 组长：刘梦雅 组员：孙文静、白娟、毛阿威 指导老师：高飞
一、实验目的
1.了解物理因素对遗传物质的影响； 2.了解紫外线诱变原理，掌握微生物的紫 外线诱变技术。
二、实验原理
物理诱变往往被分为电离辐射和非电离辐射。非电离辐射 最典型的就是紫外线，其电磁波谱位置为40~390nm。而由 于DNA分子的紫外吸收峰位于260 nm。因而波长在 200~300 nm之间的紫外线被用于紫外诱变。紫外诱变时的
剂量与所用紫外灯管的功率以及照射距离、照射时间相关，
实验中往往采用改变照射时间来改变照射剂量。由于照射 致死率在95%~99%的时候回复突变株出现率最高，因而实
践中多用50%~80%的致死率进行诱变。
紫外线诱变的主要作用是使细菌DNA链中相邻二个嘧啶核 苷酸形成二聚体，并阻碍双链的解开和复制，从而引起基 因突变，最终导致表型的变化。
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倒置培养37,1d。
取出1天前培养的初筛的10个淀粉培养基和5 个普通培养基的培养皿。在培养基上滴加碘液 ，测量每个菌落的直径H和水解圈的直径C，计 算H/C的值并排序。
取出第6天复筛的培养皿，加入碘 液，测量菌落直径和水解圈直径， 计算H/C的值。
取H/C的值排序前3的菌种，在之前保留的普通培 养基平板上找到相应的菌种序号及对照组的菌种， 进行扩繁
枯草芽孢杆菌的多数都能产生大量的淀粉酶，较易得到分离。 实验用紫外线对产淀粉酶的枯草芽孢杆菌进行诱变处理。根 据枯草芽孢杆菌在淀粉培养基上透明圈直径的大小来指示诱 变效应。相同条件下，透明圈越大表示淀粉酶活性越强。根 据透明圈的直径（H）与菌落直径（C）之比（H/C）可初步鉴 定酶活力的高低，即比值越大酶活力越高，进而筛选出优良 的生产用菌。 实验采用碘淀粉比色法测淀粉酶活力，操作简便迅速, 实用。 碘一淀粉比色法淀粉经α -淀粉酶催化水解, 生成产物为葡萄 糖、麦芽糖及糊精, 在底物淀粉浓度已知且过量的条件下, 反应后加人碘液与未被催化水解的淀粉结合成蓝色复合物。 其蓝色的深浅与未经酶促反应的空白管比较成比例从而计算 出淀粉的量，推算出酶活力。