第9章_常见植物的脱毒与快速繁殖技术
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第二节果树脱毒与快繁
(三)、苹果茎尖脱毒快繁技术
1、材料与消毒:带芽或茎尖的茎段;常规消毒, 用无菌水洗3~5次 ;切茎尖约0.1~0.5mm。 2、芽的诱导:MS或LS+BA2+300~500CH或 LH+3%蔗糖的培养基上,诱导芽的分化。 3、继代增殖培养:MS+BA0.5~1+CH300 培养 基上增殖。 4、生根培养:1/2MS或 White,Nitsh附加IAA1、 IBA0.2和GA33 等。
第二节果树脱毒与快繁
(三)、葡萄无病毒苗的培养
葡萄受到26种病毒的危害。由于病 毒的危害,葡萄的长势减弱,产量降 低,果实的糖分含量减少,风味变劣。 葡萄卷叶病是危害最大的病毒病。
第二节果树脱毒与快繁
(三)、葡萄无病毒苗的培养
1、热处理脱毒: (1)葡萄无性系处理:材料臵于38℃,CO21200×10-6的 人工空气侯箱内。经30min处理,较易从枝条尖端或休眠 芽中除去扇叶病毒。 (2)将感染材料的修面芽插入健康指示植物的蔓中,然 后在38℃的环境中保持2个月,以后取出枝条和接种芽继 续生长。 (3) 直接将葡萄蔓浸泡在50℃的 温水中10~20min,可 以治疗皮尔斯病,但不能治疗黄点病及卷叶病。
第9章常见植物的脱毒 与快速繁殖技术
第二节 果树的脱毒与快繁
葡萄
苹果
草莓
第二节果树脱毒与快繁
一、苹果的脱毒与快繁
(一)、苹果的形态特性和生物学特性
苹果(Malus pumila)属落叶乔木,树木高大。果实为 假果。 苹果喜凉;喜光;适合在微酸性到中性土壤中栽种。
第二节果树脱毒与快繁
(二)、脱毒技术
第一节 蔬菜脱毒与快繁
2.茎尖培养脱毒
(1)茎尖消毒
一般在室内发芽,芽经热处理(38℃)2 周。然后取1厘米的茎尖,水洗干净,无菌 条件下先用70%的酒精浸组织15-20秒,再 用2%次氯酸钠溶液浸泡4--5min,然后用 无菌水冲洗3次。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
取材和接种
把消毒芽在解剖镜下逐层剥去幼叶,露 出圆滑的生长点,留1-2个叶原基,0.2— 0.3毫米,随即接种于MS液体培养基上, 每升加0.1mgNAA 、 0.2mgGA3、0.5BA, 2%蔗糖,p H值5.8。
(二)、马铃薯脱毒技术
通过微茎尖组织培养技术能从马铃薯体 内脱除PLRV、PVY、PVA、PAF、PVG、 PVM、PSW等病毒。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
我国马铃薯栽培现状
全国现有马铃薯播种面积300多万公顷, 每年需合格种薯45亿公斤,脱毒原种4亿 公斤,脱毒小薯或微型薯45亿粒。
我国的马铃薯平均单产仅为13.60吨/公顷, 是世界单产最高国这瑞士(48.80吨/公顷) 的1/4。最主要的因素就是种薯质量差,品 种布局不合理。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
3.接种液制备及接种
叶片洗净后。在消毒的研钵中研成糊状,用纱 布滤出汁液,再用蒸馏水稀释10倍作为接种物 (混入600目的金刚砂)。 用左手心紧靠在鉴定寄主植物的背面,以右 手指蘸取接种液,均匀的在叶背面擦过,以不造 成叶片产生伤痕为度,最后把叶面上多余的接种 物用清水洗净,放臵在15~24的防虫室中, 一般5-10天可发病。
第二节果树脱毒与快繁
二、葡萄的脱毒与快繁
(一)、形态特征和生物学习性 葡萄属落叶木质藤本植物,葡萄 地上部分的茎细。节上具有卷须, 可向上攀援。叶近圆型或卵型, 3~5裂。 葡萄原产于温带地区,不太抗寒。 葡萄的根系抗寒力很弱,在-5~ -7℃时即受冻。
第二节果树脱毒与快繁
(二)、葡萄的组织培养
第一节蔬菜脱毒与快繁
(二)、番茄的组织培养
1、外植体:幼嫩叶片 。 2、消毒:用0.1%升汞浸泡4min,再用无菌水冲洗3-4次 。
3、愈伤组织培养条件:MS + BA2mg/L + IAA1mg/L ,温 度25℃,每天光照10h,光照度2000lx 。
4、分化培养:分化培养基MS+BA4中。
5、生根培养:MS+IAA2 mg/L。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
1.脱毒种薯生产程序
微茎尖组织培养-----诱导出苗-----联免疫 吸附试验法或指示植物方法鉴定-----脱毒试 管基础苗。 固体、液体培养基相结合-----扩繁基础 苗----在防虫网室栽植或封闭温室扦插----原原种(或称脱毒小薯)。原原种----原种 1代----原种2代----良种1代-----良种2代。
第9章常见植物的脱毒 与快速繁殖技术
第一节 蔬菜的脱毒与快繁
蕃茄
马铃薯
第一节 蔬菜脱毒与快繁
一、马铃薯的组织培养
第一节 蔬菜脱毒与快繁
微型薯
第一节 蔬菜脱毒与快繁
马铃薯是一种全球性的重要经济作物。 适应性广,营养价值高,耐贮藏适运输, 既是一种重要的粮食作物也是一种调节市 场供应的重要蔬菜。马铃薯原产于拉丁美 洲,当被发现可以食用后,很快传到世界 各地,成为栽培很广的一种作物。
本章教学目的与要求
(1)掌握马铃薯的生物学习性,掌握马铃薯脱毒培养的过程以及 马铃薯脱毒苗的鉴定方法;掌握番茄的生物学特性及快速繁 殖方法; (2)掌握苹果的脱 毒方法与快繁技术;掌握葡萄的脱毒与快技 术;掌握草莓的脱 毒与快繁技术; (3)掌握兰花、香石竹、菊花、非洲菊、矮牵牛、百合等花卉 的生物学特性,组培快速繁殖方法及自然繁殖法; (4)掌握甘薯的生物学特性,脱毒与快繁的方法及技术; (5)掌握芦荟、桔梗等药用植物的快繁技术; (6)掌握毛白杨、河北杨等绿化苗木的快繁技术。
第二节果树脱毒与快繁
(四)苹果花粉培养
1、选材与预处理:选取中心花蕾吐红,周围花 蕾明显增大,但花序尚未分离的花蕾,臵于冰 箱中1-3℃预处理。 2、消毒:70%的酒精浸约0.5min,再在10%漂 白粉上清夜中浸15~20min。 3、胚状体诱导:接种到MS+2,4-D0.4 + KT0.2 + IAA4 + 3~8%蔗糖培养基上,25~30℃下 培养。 4、生根:同茎尖脱毒中所用方法。
1、病毒种类:苹果褪绿叶斑病毒、苹果茎痘病毒和 苹果茎沟病毒等 。 2、微尖嫁接脱毒:砧木:去顶的离体培养幼苗, 接穗:试管培养的无毒新稍;嫁接后培养生叶, 移栽即可。 3、热处理脱毒:把植株臵于38 ℃下25-50天。 4、茎尖培养脱毒:把0.1-0.3mm的茎尖离体培养。 5、脱毒苗的鉴定:抗血清法,电子 显微镜法, ELISA法、指示植物法。
第二节果树脱毒与快繁
(三)、葡萄无病毒苗的培养
2、组织培养脱毒技术 (1)、茎尖接种后变绿、增大期的培养:在25℃,相对 湿度80%,16h的长日照条件下水培生成的嫩茎取0.2~ 0.3mm 茎尖接种于 1/2MS,添加NAA0.1,BA1.0,Kt0.5, 腺嘌呤4.0,蔗糖30g/L,琼脂6.0,pH5.8培养基上。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
马铃薯继代培养基:
MS+NAA0.2-0.5+D-泛酸钙10,3%蔗糖;
20-25℃,3000-4000LX,14-16hr光照;
每3周继代一次,单芽茎段约1厘米;
原则试管苗用2年—3年。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
马铃薯试管苗
第一节 蔬菜脱毒与快繁
(3) 驯化
炼苗室温度:白天23~27℃,夜间不低于14℃。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
2、 生物学习性
马铃薯性喜冷气候,不耐高温和霜冻。 发芽适温为12~18℃。 地上茎叶生长温度为17~21℃。 块茎形成要求昼温14~24℃,夜温12~14℃。 结薯期要求12h左右的短日照和疏松、湿润、肥 沃以及通气良好的土壤条件。土壤板结,薯块表 面粗糙和薯形不整。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
植物组织培养
第9章 常见植物的脱毒与 快速繁殖技术
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第9章 常见植物的脱毒 与快速繁殖技术
本章主要内容(4学时)
蔬菜的脱毒与快繁 果树的脱毒与快繁 花卉植物的脱毒与快繁 农作物的脱毒与快繁 药用植物的试管快繁 树木的脱毒与快繁
第9章 常见植物的脱毒 与快速繁殖技术
第一节 蔬菜脱毒与快繁
马铃薯病毒的种类
危害有17种之多,如X病毒、S病毒、 Y病毒、M病毒、A病毒、花叶病毒、纺锤 形块茎病毒等。 马铃薯病毒可使块茎产量减少 50%~80%。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
(一)、马铃薯特性和生物学习性
1、形态特性 (1)根 根系由出生根和匍匐根组成。 (2)茎 分地上部分和地下部分。 (3)叶 全缘,心脏形。 (4)花 为聚伞花序。 (5)果实 浆果。
1、选材接种:从生长旺盛的葡萄新梢顶端取1~2㎝的茎 尖。消毒。分离出约2㎜长的茎尖,接种到培养基上。 2、培养基:MS培养基(无机盐减半为好),再添加 BA1~2,NAA0.01,LH100,蔗糖2%,琼脂0.6%, 而B5培养基愈伤组织化严重,茎尖生长不好。 3、苗分化:BA0.5,同时添加GA30.2,黑暗处理可促 进幼茎的伸成,提高成苗率。 4、根分化:将苗转入MS+IAA0.4+NAA0.05培养基中进 行生根。
第ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ节果树脱毒与快繁
(五)胚培养
1、取材消毒:取授粉30~50d内的幼果,用 70%酒精擦拭。取出种子,剥出幼胚或成熟 胚。 2、启动培养:接种在BA0.25+IAA0.5的1/2MS 培养基上。培养条件为25~30℃和1500~ 2000lx光照14h。 3、分化增殖:移植到加有BA0.5~1.0和CH300 的1/2MS培养基上 ,在光下培养条件同上。 4、生根培养:同茎尖培养。
6、炼苗栽植:将培养有根试管苗的瓶口打开。煅炼3d后 取出,洗去根上带有的培养基,移栽到营养土中,浇透水, 并罩上塑料薄膜,以保温保湿,4-5d后去掉薄膜,新叶长 出时即定植田间。
第一节蔬菜脱毒与快繁
(三)、番茄的胚培养
1、外植体制备:授粉后30-40d收获果皮完整的果实,果 实放入95%乙醇中表面消毒,浸在5%NaCI中5min,用 无菌蒸馏水充分淋洗。果实放在无菌吸水纸上,除去种子 上的胶状复被。 2、培养基:启动:MS+硫胺素0.3mg/L+2,4-D2mg/L+椰 乳100ml/L,pH6.0;继代: MS+ 2,4-D2mg/L;分化: MS+BA1.5mg/L;生根:MS+NAA2mg/L。 3、培养条件:愈伤组织启动和继代,用暗培养,27℃。 芽再生和生根在室温20-30℃.16h/d 的光照,2000lx。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
培养条件:
温度:21~25℃ 光照度:2000-3000 lx 光照时间:12h/d 2-3周长愈伤,4-5周长绿点,3--6月 长成2-3厘米小芽,越慢越好,出芽 很快的扔掉。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
(2) 继代和生根
培养成功的马铃薯脱毒苗,经ELISA(试剂盒) 鉴定后(试管苗应每3月检测一次,每年4次) 采用固体、液体培养基相结合方法扩繁。 取试管苗单节切段扦插在(或平放)固体培 养基上,每瓶可插20个左右茎段,经20d左右发 育成5~10cm高小植株,继续进行切段繁殖,此 法速度快,每月可繁殖5~8倍,试管苗多节接种 在液体培养基上,进行浅层静止液体培养。
第一节蔬菜脱毒与快繁
(四)、马铃薯无病毒株的繁殖
(1) 直接块茎繁殖 (2) 扦插繁殖 (3) 组织培养切段繁殖 A:继代培养 B:低温保存
第一节蔬菜脱毒与快繁
二、番茄的组织培养
(一)、形态特征和生物学习性
番茄的叶片为长羽状, 在叶轴上生有裂片,顶生 裂片,小裂片,间裂片, 这些裂片是叶的深裂,缺 刻的变化。两性花,聚伞 花序,浆果。 蕃茄耐低温,喜光照,对 水分需求量极大,喜肥,
(2) 从畸形叶和茎叶伸长期:采用1/2MS,添加IAA0.2, BA0.1,KT0.5,腺嘌呤4.0,蔗糖30g/L的培养基。
(3)地上部和地下部的伸长期:Galzy(1964)培养基, 添加NAA0.1。
炼苗具体方法:移植前7d左右,将长有3~5片叶、 高2~3cm的试管苗,在不开瓶口的状态下,从培 养室移至温室排好。为防止强光、高温灼伤试管 苗,在温室顶上加盖一层黑色遮阳网。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
(三)、马铃薯无病毒苗的鉴定材料
1、指示植物鉴定 •在马铃薯的病毒鉴定中,汁液鉴定是最常 用的方法,X病毒、S病毒和纺锤块状病毒 很容易通过汁液来接种。 2、鉴定寄主的准备 •马铃薯常用的鉴定寄主植物有苋科的千日 红,茄科的洋酸浆、毛曼佗罗等。寄主植物 应在无虫网室中培养。