茯苓质量评价 余生兰

第六章茯苓质量评价

第一节概述

近年来，中药以其独特而显著的疗效越来越受到世界各国的青睐和重视[1]，但是由于中药材所含化学成分的复杂性、技术条件、研究思路和方法等因素的局限[2],使得中药质量评价成为制约中药现代化与产业化的主要障碍[3]。为了保证中药在临床上用药安全、合理、有效，我们必须将中药质量的评价在中药研究、生产及临床应运过程中贯彻和落实。

茯苓来源于多孔菌科Poria cocos (schw.)Wolf的干燥菌核，又名茯兔、茯灵、松薯、松苓等，首次记载于《神农本草经》，并列为上品。茯苓味甘、淡、性平；归心、肺、脾、肾经；具有利水渗湿、健脾安神等疗效。在临床常用于水肿尿少、痰饮眩悸、脾虚食少、心神不安、便溏泄泻、惊悸失眠等病症的治疗。现代医学研究发现茯苓具有抗肿瘤，镇静、免疫调节、利尿和保肝等方面的活性，已越来越引起人们的青睐和关注。我国茯苓主产于湖北、安徽（习称“安苓”）、云南（习称“云苓”）等地。长期以来，茯苓药材主要来自人工栽培。不同产地、不同生长期的茯苓中各种化学成分的有很大差异，其药理作用也存在显著差别。由于茯苓药材在中医临床及人民生活中有着广泛的应用价值，所以其质量评价的重要性不言而喻。近年来，国内外的学者在其化学、药理及临床应用方面颇有成就。茯苓的商品质量评价方面文献记载多采用基源鉴别、性状、显微鉴别、理化鉴别、薄层色谱鉴别、高效液相色谱等方法进行正伪品的鉴别并对其进行品质评定。2015年《中国药典》记载了性状鉴别、理化鉴别、有效成分的定性鉴别及含量测定方法。由此可见，茯苓的质量评价已广受人们的的关注和重视。

综上所述，本章节旨在对茯苓的质量标准规范化进行系统深入研究，以期保证茯苓用药安全、合理和有效。

第二节茯苓质量评价

药品质量标准是一种技术规定，主要针对药品的质量规格及其检测方法，是药品生产、使用、供应、检验和管理部门所必须共同遵守的法定依据，来确保用药安全有效。而根据我国法定生药质量标准《中国药典》，其内容主要包括:名称、来源、性状、鉴别、检查、浸出物、含量测定、性味与归经、功能与主治、用法与用量、注意、贮藏等。

一、化学成分

1.多糖类

茯苓药材中茯苓多糖（Pachymose）为其主要活性成分，前人研究报道多糖含量占84.2%，其中硬朊占0.68%，纤维素含量为2.84%；另有报道，茯苓中β-茯苓聚糖（β-pachyman）为茯苓多糖中的主要成分，占干燥品93%[4]左右。

2.三萜类

到目前为止，中外学者从茯苓干燥菌核、茯苓皮或菌株培养液中分离共得到35中四环三萜化合物，可分为三种类型[5]：羊毛甾-7,9（11）-二烯型三萜（lanosta-7,9-diene type

triterpenes）、羊毛甾-8-烯型三萜（lanosta-8-ene type triterpenes）和3,4-开环-羊毛甾烷三萜烯型（3,4-seco-lanostan-7,9-diene type triterpenes）。除此之外，学者王利亚等[6]研究发现，可以从茯苓乙醚萃取相中分离得到β-香树脂醇乙酸酯；李典鹏等研究发现，从云南茯苓皮中分离在经13C-NMR，1H-NMR,MS确认得到齐墩果酸[7].

3.脂肪酸

中外学者从白茯苓中研究发现，白茯苓中含有的脂肪酸主要含有辛酸（caprylic acid）、十一酸（undecanoic acid）、月桂酸（lauric acid）、十二酸（dodecanoic acid）、棕榈酸（palmitic acid）[8]。

4.其它成分

学者郑虎占[9]研究发现，茯苓中除了含有多糖、三萜和脂肪酸类成分，还含有麦角甾醇，树胶，甲壳质，蛋白质，脂肪，甾醇，卵凝脂，右旋葡萄糖，腺嘌呤，组氨酸，胆碱，无机成分SiO2，Mg，P,Fe，Ca，S，Na，K，Mn，Cl，此外还含有β-茯苓聚糖酶，以及微量蛋白酶；江成萍等[10]通过茯苓多糖中微量及常量元素的分析，发现Ca，Mg，Co，Fe，Zn，P等营养元素比其它保健品中高，同时还含有抗癌症对硒元素及人体必需微量元素Sr、Mn、Cr、Co、Cu、V等，一些非必需的和重金属元素As、Pb、Cd，均未检出，医疗所用微量元素Al含量较高。

二、性状[11]

茯苓个：采挖于7月至8月间，药材除去泥沙后，经“发汗”，摊开晾干至表面被干燥，“发汗”后的茯苓药材再经反复几次晾晒至表面出现皱缩，药材内部的湿气在背阴处干燥后，称作为“茯苓个”。呈类球形、椭圆形、扁圆形或不规则团状，大小不一。表皮薄且粗糙，呈棕褐色至黑褐色，有明显的皱缩纹理。茯苓皮为菌核的外表皮；赤茯苓为近外表皮淡红色的部分；白茯苓为中间白色部分；茯神为中间抱有松根部分。茯苓体重，质坚实，断面呈颗粒性，有的具有裂隙。气微，味淡，嚼之黏牙。

茯苓块：呈立方块状或立方块状厚片，大小不一。为去皮后切制的茯苓,颜色多为为白色、淡棕色或淡红色。

茯苓片：呈不规则厚片，厚薄不一。为去皮后切制的茯苓，颜色多为为白色、淡棕色或淡红色。

三、鉴别

1.理化鉴别

①药典[12]鉴别：常通过观察茯苓粉末灰白色，不规则颗粒状团块及分枝状团块，无色，遇水合氯醛液渐溶化。菌丝无色或淡棕色，细长，稍弯曲，有分枝，直径3-8μm，少数至16μm。

②药典[12]鉴别：取粉末1g，加丙酮10mL，水浴中边加热边振摇，加热10分钟，滤过。滤液蒸干，残渣加1mL冰醋酸溶解，再加浓硫酸1滴，显淡红色，后变淡褐色。

③药典[12]鉴别：取本品片或粉末少许，加碘化钾碘试液1滴，显深红色。

④杨启德[13]报导通过采用茯苓中茯苓酸和麦角甾醇的李伯曼反应（冰醋酸-浓硫酸反应）来鉴别茯苓，结果发现反应液由淡红色变为暗绿色。

⑤阎文玫[14]通过测定茯苓中活性成分在200-320nm的紫外吸收情况，来对茯苓的正伪品进行鉴别。

2.薄层鉴别

①药典鉴别[12]：取本品粉末1g，加乙醚50mL，超声处理10分钟，放冷；过滤，挥干溶剂；残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取茯苓对照药材1g同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法《中国药典》（2015年版四部通则0502）实验，吸取上述溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（20:5:0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷洒2%香草醛硫酸-乙醇溶液（4:1）混合溶液，在105℃使显色完全。供试溶液薄层色谱中，在与对照品溶液薄层色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点。

②肖培根等人[15]采用薄层色谱法，以0.5%CMC 硅胶G板为吸附剂，石油醚-醋酸乙酯(1:1)为展开剂，4%磷钼酸乙醇溶液100℃加热显色，以麦角甾醇、β-谷甾醇为对照品来鉴别。结果显示供试溶液在与对照品溶液薄层色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点。

四、含量测定

1.茯苓多糖含量测定

①照分光光度法（《中国药典》2015年版四部通则0401）测定[13]。

对照品溶液的制备

精密称取干燥至恒重的葡萄糖标准品10.00mg，置于100mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度线，即得0.1g/L的葡萄糖标准品溶液，放置于4℃条件下保存。

供试品溶液的制备

精密称取过60目筛的茯苓样品粉末1.0ｇ于具塞锥形瓶中，加

入50ｍＬ纯水，超声30min后用0.45μｍ微孔滤膜过滤，取续滤液10mL定容至50mL容量瓶，即得供试品溶液。

标准曲线的制备

分别精密移取葡萄糖标准品溶液0.0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ｍＬ于10mL试管中，补加纯水至1mL，再加入5％苯酚溶液1mL，浓硫酸4mL，沸水浴25min，冰水浴15min。取出后,补足减失体积，在490nm处测定其吸光度。

测定法

取茯苓样品，配制供试品溶液。分别精密移取各供试品溶液0.5mL，加纯水至1mL加入5％苯酚溶液1mL，浓硫酸4mL，沸水浴25min，冰水浴15min。取出后，补足减失体积，在490nm处测定其吸光度，根据标准曲线计算不同仿野生栽培茯苓样品中茯苓多糖的百分含量。

本品含多糖不得少于0.418%。

②苯酚-硫酸法测定茯苓中多糖的含量[16]

茯苓多糖的提取与精制

取茯苓粉末11.59g，经120mL石油醚（60-90℃）于索氏器中加热回流四小时，消除单糖及低聚糖。将药渣放入2000mL烧杯中。加入1000mL16mol/L尿素溶液，再与70℃下搅拌24小时，滤去残渣，滤液经减压浓缩至250mL，加750mL甲醇，析出对沉淀依次用甲醇，乙醚和丙酮洗涤三次，最后干燥，即得无定形粉末状的茯苓多糖。

标准曲线的绘制

取新蒸馏得到的苯酚（182℃下的馏分）8g，然后加入蒸馏水120mL，置于棕色瓶中，充分混合即得苯酚试液。精称葡萄糖标准品100.0mg于105℃下干燥至恒重，置于100mL容量瓶中，后加入蒸馏水制成1mg/mL的标准溶液。精密吸取0,10,20,40,60,80,100uL于具刻度比色管中，各加蒸馏水至体积为2.0mL，再各加苯酚试液1.0mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0mL，摇匀后再静置5min，最后沸水浴25min，取出放冷至室温，用空白对照管校零，再于490nm波长测定吸光度。以吸光度为纵坐标，葡萄糖含量为横坐标，绘制出标准曲线。求得回归方程为A=6.788X×10-3C+1.551×10-3，r=0.9986。