项目六病毒疫苗制作(精)

毒株 鉴定
种毒
动物或鸡胚等 健康动物（SPF鸡胚等）
感染动物（或胚胎）
取已感染组织
原料 配制
保护剂
含毒悬液 纯化病毒悬液
灭活
灭活病毒液
配苗
配苗、乳化
原料 配制
佐剂
分装、冻干 检验
活疫苗
分装 灭活疫苗
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复习思考题
1．选择病毒性疫苗生产用毒种的原则是什么? 2．简述灭活疫苗和活疫苗的生产工艺流程。 3．简述病毒性组织苗的生产工艺流程。
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任务2 病毒性禽胚培养疫苗制造
工序过程
如何完成此 项任务？
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各工序操作要点
工序一、鸡胚选择
受精卵必须来自SPF鸡群，最低也应来源于未用 抗生素药物的非免疫鸡。受精卵从孵育至培养全 过程应保持无菌，接种日龄视病毒而定。
工序二、种毒与毒种继代 工序三、接毒与收获
1．接毒：接毒途径和接毒量，视不同病毒不同。 2．培养 3、收获病毒
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各工序操作要点
工序四、接毒与收获
病毒接种有同步和异步。培养当出现70%~85% 以上细胞病娈时，即可收获。细胞毒液经无菌检 验，毒价测定合格后供配苗用。
工序五、配苗
1．灭活疫苗：不同病毒采用不同灭活剂，有的需加 佐剂，分装。
2．冻干苗：加保护剂或稳定剂、混合、分装、冻干。
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Hale Waihona Puke Baidu
病毒性动物组织疫苗与禽胚培养疫苗生产工艺流程
兽用生物制品技术
主讲教师：任平教授
项目六 病毒性疫苗制造技术
任务1 病毒性组织苗的制备流程 任务2 病毒性禽胚培养疫苗的制备流程 任务3 病毒性细胞培养疫苗的制备流程
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培养目标
知识目标 掌握病毒性组织苗、禽胚苗和细胞 苗的制作工序及制作要点。
能力目标 能够运用此项技术完成某种病毒 疫苗的制作。
素质目标 培养学生团队合作的精神。适应 岗位的能力。
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如何完成此 项任务？
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各工序操作要点
工序一、种毒与毒种继代
制苗用种毒应经毒力、最小免疫量、安全性、无 菌检验合格，多为冻干品。指定部门提供。领取 的种毒应按规定在细胞继代适应后作毒种，并应 按规定控制在一定代数之内。
工序二、营养液配制
分细胞培养用生长液（含5%~10%血清）和病毒 培殖用的维持液（2%~5%血清），不同细胞所需 营养液不同，但内均含多种aa、V和一些有机物、 无机物，并有商品粉剂出售。只需溶解后经除菌 处理即可。
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各工序操作要点
工序四、配苗
收获的胚液、胎儿和绒毛尿囊膜乳剂经无菌检验合 格后配苗。 ➢ 湿苗：于鸡胚液中加青、链霉素（每ml500~1000u） 放置0~10℃，冷处理后分装。 ➢ 冻干苗：按比例加入保护剂（5%蔗糖脱脂乳）、 滤过、加青链霉素、分装、冻干。
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任务3 病毒性细胞培养疫苗制造
工序过程
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任务1 病毒的组织苗制造
工序过程
如何完成此 项任务？
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各工序操作要点
工序一、动物选择
1．清洁级（二级）以上的等级实验动物或无规定人畜共患 病原体的动物。
2．易感性高。 3．品种、年令和体重合乎要求。
工序二、种毒与接种
种毒：致死力强大的自然毒株的脏器组织毒或强毒株的增 菌培养物，也可用弱毒株组织毒种。必须检查合格后使用。 接种途：脑内注射、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、腹 腔注射。
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各工序操作要点
工序三、细胞制备（分原代细胞和继代细胞）
选择依据： 1.病毒的适应性高、毒价高。 2.细胞来源方便，制备简备，生命力强。如猪瘟 兔化弱毒牛睾丸细胞疫苗用犊牛睾丸原代细胞， 狂犬病弱毒细胞适应疫苗，采用BHK21。
制备细胞程序：原代细胞将动物器官用胰蛋白酶消 化，要装培养成单层，如为冻干，可按细胞数分 装，扩增培养。常用细胞培养方法为静止培养和 转瓶培养。微载体培养和悬浮培养我国仍处于试 验之中。用传代细胞培养应注意不要用种瘤细胞。
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各工序操作要点
工序三、观察与收获 根据观察征象和检查的结果选出符合要求的发病动
物按规定方式剖杀，采取收集含毒高器官组织。 工序四、制苗 1．组织灭活疫苗：收获的组织经无菌检验及毒价测
定合格后按比例加入灭活剂制成匀浆，然后按不 同病毒的灭活温度、时间进行灭活或脱毒。 2．弱毒组织疫苗：无菌取组织、称重、剪碎、加保 护剂，过滤、稀释，检查（检菌、毒价）、鉴定、 分装、冻干。