抗菌药物敏感性试验

C组药物
某些医院潜在局部或广泛流行的耐药菌株 对数种手选药物（特别是同类的如β-内酰 胺类或氨基糖甙类）耐药
治疗对基本药物过敏的患者
治疗少见菌的感染
流行病学调查为目的向感染控制部门报告
试验方法—纸片扩散法
改良Kirby-Bauer法(K-B法)
试验材料
培养基
非苛氧菌用Mueller-
Hinton（M-H）琼脂
置35℃孵育2-6 h 用无菌生理盐水或肉汤校正，使其浊度至
0.5号麦氏管
直接调制菌悬液法 生长法的简便替代法
从孵育16-24h 的非选择性琼脂培养基上用接种 环挑取单个新鲜菌落，悬浮于生理盐水或肉 汤中震荡混匀
与标准比浊管比浊，以有黑字的白纸为背景调整 其浊度相当于0.5号麦氏管。
平板接种
药敏试验原理
纸片扩散法
把含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测 试细菌的琼脂平板上
纸片中药物吸收琼脂水分溶解后通过弥散 作用形成递减的浓度梯度
纸片周围一定距离范围内试验菌生长受抑 制，从而形成无菌生长的透明圈即抑菌环。
抑菌环大小反映测试菌对测定药物的敏感 程度
抑菌环大小除与细菌的敏感性有关外还与 其它诸因素相关。
15min内将平板倒置放温箱孵育。
注意
纸片一旦贴下就不可再挪动位置，因纸 片中的药物已扩散到琼脂中。 需要时应在适当的地方贴新纸片
孵育
必须用35℃孵箱（苛氧菌药敏平板应置 于5% CO2 环境）
箱内平板最好单独摆放，不超过两个叠 在一起，否则中间的平板因达不到孵箱 温度而产生预扩散的作用。
平板孵育规定时间（一般为18-24h）后读 取结果，葡萄球菌和肠球菌必须孵育24h以 检测苯唑西林和万古霉素的耐药性。
药敏试验中常用试验药及其代表的药物
试验药物
菌种
代表药物
苯唑西林 葡萄球菌属
所有β-内酰胺类包括酶抑制 剂复合药和碳青霉烯类
四环素
除葡萄球菌和 不动杆菌以外 的所有菌属
多西环素、米诺环素、金霉 素、地美环素、土霉素、美 他环素
红霉素
革兰阳性球菌 罗红霉素、克拉霉素、阿齐 霉素、地红霉素
克林霉素 所有菌属
B组 首选试验选择性报告。包含一些 临床上重要的、特别针对医院感染的 药物
C组 替代性和补充性药物 U组 补充性试验，仅用于治疗泌尿道
药物选择
表中小框内是一组类似药物，其结果解释 和临床效力相似，不必个个试验。
“或”字表示一群相关药物，其抗菌谱和 解释结果几乎完全相同，交叉耐药性和交叉 敏感性也完全相同，通常只选择一种药进行 试验。
稀释法
定量测定抗菌药物活性 抗菌药物与肉汤或琼脂培养基混合稀释后
种入试验细菌，孵育过夜。 以能抑制细菌生长的最低浓度为最低抑菌
浓度（MIC） 将MIC与机体血清或体液中可获得药物浓度
相比较来确定恰当的临床疗效
MIC的对数与抑菌环直径关系 ——近似线性负相关
CLSI药物选择原则
A组 常规和首选药物，其结果应常规 报告
药物纸片 直径6mm纸片，每片吸水
量约20μl
菌液比浊管
0.5号麦氏
（McFarland）标准比浊管， 菌液
操作方法
菌液制备 挑取已纯化的4~5个菌落制备菌悬液
生长法
挑选琼脂平板上3~5个形态特征一致的菌 落，用接种环接触每个菌落顶部
转移至4~5mL 适宜的液体培养基中（如 胰酶消化大豆胨肉汤）
抗菌药物敏感性试验 （药敏试验）
内容
简介
药物选择及报告
K-B 法
操作方法
报告方式
影响因素
稀释法
E test
联合药敏试验
2010年CLSI更新内容简介
目的
指导临床医生针对各类临床感染患者选择 最佳抗菌药物
一定区域内积累对公共卫生有关的重要耐 药的微生物流行病学资料
根据细菌对药物敏感谱进行菌种鉴定
磺胺异恶唑
所有菌属
所有磺胺类
萘啶酸（敏感） 肠杆菌科
头孢噻吩/头孢 肠杆菌科 唑啉（敏感）
所有喹诺酮类敏感 所有头孢菌素敏感
万古霉素 氨苄西林
革兰阳性杆菌 肠球菌属
替考拉宁 青霉素
B组药物
细菌对A组同类药物耐药，可选择性报告 报告指征 特定的标本来源 多种细菌感染 多部位感染 对A组药过敏、耐受或无效 以流行病学调查为目的向感染控制部门报告
Βιβλιοθήκη Baidu 结果判断
在清楚抑菌环内有独立的菌落生长提示 接种的菌落不纯，需要重新分离、鉴定和
药敏试验 抗菌药物选择出的高频突变耐药株
变形杆菌属的菌株可扩散到某些抗菌药物 的抑菌环内，故在明显抑菌环内有薄膜状 爬行生长可以忽略。
林可霉素
青霉素G
葡萄球菌属 淋病奈瑟菌
苯氧甲基青霉素、苯氧乙 基青霉素、氨苄西林、阿 莫西林、巴氨 西林、氨环 己西林、海他西林、 羧苄
西林、美洛西林、阿洛西 林、替卡西林、哌拉西林
头孢噻吩 肠杆菌科 氨苄西林 所有菌属
头孢匹林、头孢拉啶、头 孢氨苄、头 孢克罗、头孢 羟氨苄
阿莫西林、巴氨西林、氨 环己西林、海他西林
孵育16-18h 后检查每一块平板 如果划线满意，接种物准确无误，抑菌圈
应为正圆形，菌落应融合生长 出现明显单个菌落表示接种量太少 重复试
验
抑菌环直径测量
可用直尺或游标卡尺，读取最接近的整毫 米数
测 量 时 应 将 尺 子 置 于 倒 置 的 平 板 上 ， 置 平 板在黑色无反射光背景上方几厘米处并用反 射光照明。
用无菌棉拭子蘸取菌液 在管壁上方旋转挤压几次去掉过多水分 用拭子涂布整个M-H培养基表面，反复
几次，每次将平板旋转60° 最后沿平皿周边绕两圈以保证涂布均匀
制备好的菌液必须在15min内使用 贴纸片前可将培养皿盖半开3-5min以使
表面过多水分被吸收但不超过15min
加贴纸片 将接种好的平板敞开盖子倒置在室温下 干燥3-5min 使平板上的水分被琼脂完 全吸收。 用镊子取纸片一张贴在琼脂平板表面， 轻压使其与琼脂完全接触。纸片中心 间距≥24mm,纸片中心距平皿边缘 ≥15mm。直径90mm的平板最好贴6张。
含血的药敏琼脂 应移去平板盖后用反 射光照明平板，于表面上方测量抑菌环。
测量抑菌环直径时 抑菌环边缘以见不到细 菌明显生长为限，测量的是完全抑制的区域 直径（包括纸片直径）
按 抑 菌 环 直 径 判 断 细 菌 的 敏 感 性 ， 应 依 据 CLSI的解释标准，报告细菌对测试药物敏 感、中介、耐药。