临床微生物实验室基本操作总体流程
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结果审核和批准 危急值报告
分析前 分析中 分析后
临床医师和护士
采集时间
• 根据研究表明细菌通常在寒战和发烧前1小时入血 • 考虑到可操作性，血培养标本应同时采集或在尽量短的
间隔期内采集。
• 间隔式采血法仅适用于确诊持续性菌血症
如：细菌性心内膜炎或其他脉管内感染 如导管相关性感染
虽然血培养阳性率与体温变化看上去相关性不大，但临 床仍应遵从“（下一次）用药前”或“停药24小时后”采 血！
临床微生物实验室基本操作总体 流程
标本前处理 标本筛选 药敏试验 报告
实验室质量控制环节
分析后
危急值 报告
标本采集、 运送
分析前
标本合格判定 培养基、试剂
仪器设备
分析中
室间质评
微生物结果的影响因素
针对性的检验申请 病人准备 标本的采取 标本的运输
标本的保存和处理
4-15% 18.5-47%
标本检验
下呼吸道标本 Lower Respiratory Tract Specimens
下呼吸道标本
Lower Respiratory Tract Specimen
自然咳痰 诱导痰 气管内吸取物 肺部组织
支气管肺泡灌洗液 保护性毛刷 支气管灌洗液
下呼吸道标本收集
•所有病人的下呼吸道标本应在采集后立即送至微生物室，并于
许多不着色的有折射的杆状细菌
血培养污染
Blood Culture Contamination
血培养存在的主要问题
•如果皮肤定植的细菌没有被杀死，这
些细菌将通过针头被吸入血培养瓶并 在瓶中生长
•这些细菌(主要为凝固酶阴性葡萄球
菌) 引起导管相关性败血症 (住院患者 血培养第一位)
•医生不能将真的凝固酶葡萄球菌感染
和皮肤定植菌“污染”相区分，因此 他们很可能会用万古霉素治疗患者。
外一个血培养标本，以帮助阳性结果判读。
•不主张换针头入瓶 •有血的培养瓶不可放入冰箱
和冻箱保存。
血培养的运送
• 采集后血培养瓶应立即送往实验室（2小时内） • 接种前后的血培养瓶不得冷藏或冷冻。 • 任何延误送入自动连续监测血培养仪的行为将会延误或阻止细 菌生长的检测； • 血培养瓶保留在室温不得超过数小时；
传统的人造纤维拭子
鼻拭子
•深部鼻拭子一般与咽拭子的信息等值。 •相对于诊断深部感染，鼻拭子更适用
于侦测健康携带者。
•深部鼻拭子可用于诊断化脓链球菌和
白喉棒状杆菌感染，或金黄色葡萄球菌 与化脓性链球菌暴发感染时调查用。
鼻窦炎标本
采集脓液或窦吸出液/盐水清洗 液进行革兰氏染色和需氧、厌氧 平板培养。
1小时内接种 •室温下放置>1h会降低肺炎链球菌、流感嗜血杆菌的分离率而 定植于上呼吸道的非致病菌则会过度生长。 •下呼吸道标本勿放冰箱或运输时勿置于冰块中
痰液标本
•采集时间：用抗生素前 •采集方法：
自然咳痰：必须用清水漱口3次，应包括咽喉部，立即用力咳出痰， 于灭菌容器或输送培养基中。
支气管镜或支气管毛刷:由医生采集，建议直接种入输送培养基。
你看见多少种形态？
呼吸道标本中未被染色的，有折射的杆菌=抗酸 杆菌
呈链排列的革兰阳性球菌？或革兰阳性分枝杆菌？
肺中的结节吸出物，不规则“球菌”，分叉，无短链，链的末端的呈尖状，都 证明是分枝状的革兰阳性杆菌，可能是放线菌或诺卡菌（通常来自脑或肺组织 的标本）
呼吸道标本的涂片评估模式
肺炎-可接受的
推荐的血培养组合的数量
血培养次数
• 怀疑菌血症的成人患者：采集2-3套血培养标本（不同部位） 。 • 婴幼儿患者：采集2次血培养标本（不同部位） • 除特殊情况外，在采取血培养后的2-5天内，无需重复采取血培
养。
• 可疑为持续性菌血症：如心内膜炎、导管相关血流感染，间隔
(1--24h)几次取血监测、捕捉、指导治疗。
污染细菌
血培养污染定义为在几次血培养中单个血培养下 列细菌阳性: 凝固酶阴性葡萄球菌 棒状杆菌 微球菌 丙酸杆菌 芽孢杆菌
上呼吸道标本
Upper Respiratory Tract Specimens
咽拭子运送培养基
•可以运送需氧、厌氧、苛养菌 • 4℃或RT • 24或48小时
尼龙植绒拭子
采血量
•成年患者：推荐的采血量为每套不少于10ml，每瓶 不少于5ml；
•婴幼儿患者：推荐的采血量，每瓶不少于2ml。
•备注：如果实验室收到采血量不足的标本仍需进行培养，则需在
报告单上注明：“送检血液标本量未达到要求，会影响结果的灵 敏度”。
血培养的采集
•从静脉取血； •不宜从静脉导管或静脉留置口取血； •如必须从留置导管内采血，应同时从外周静脉采集另
很少的鳞状上皮细胞 <10个每低倍视野
不合格标本
许多鳞状上皮 >10个/低倍视野
评述
可以在玻片上看到许多鳞状上皮细胞，说明在采集时受 到了上呼吸道分泌物的污染或口水的污染。
很多的中性粒细胞
很少有或没有中性粒细胞 免疫抑制的病人也会出现中 性粒细胞减少
中性粒细胞和上皮细胞都很少的标本需要培养
很多中性粒细胞混合wk.baidu.com形态多样的细 菌（革兰氏阴性杆菌，纺锤形，革兰 氏阳性球菌）
吸入性肺炎标本革兰氏染色的典型形式，培养只会培养 出正常菌群，所以革兰氏染色是用于诊断的方法。
许多或中等量的中性粒细胞，以一种 形态的细菌为主
酵母菌样，酵母菌是一种很 少引起肺炎的细菌，常由口 腔污染
成双革兰氏阳性球菌，短链=肺炎链球菌 革兰氏阳性菌成群排列=金黄色葡萄球菌 革兰氏阴性球杆菌（小）=流感嗜血杆菌 革兰氏阴性杆菌大且肥厚=肺炎克雷伯菌或其他肠道菌 革兰氏阴性双球菌=卡他莫拉菌
细胞内细菌
柱状纤毛上皮细胞
肺泡巨噬细胞
滑石颗粒
见于迁延长时间的呼吸道疾病
淀粉样小体
弹性纤维
库什曼螺旋体
呈链排列的革兰阳性球菌和革兰阴性球杆菌。缺乏鳞状上 皮细胞提示混合厌氧菌感染
几种细菌的混合形态，缺乏鳞状上皮细胞=混合厌氧菌感染。如果是呼吸道标本 可能是吸入性肺炎。报告临床医生“提示吸入性肺炎”
•运送要求
于2小时内送达检验室 如无法马上送出，标本置于4℃保存
标本质量
脓痰
唾液or诱导痰 (?)
粘液样痰 带血痰
用革兰氏染色来评估 呼吸道标本是否合格
痰标本>10鳞状上皮细胞/每低倍视野=拒收
有PMN的痰标本，中性粒细胞多，且鳞状上皮细胞特别少=接受，进行培 养
粘液丝
胞内细菌 ——提示感染
分析前 分析中 分析后
临床医师和护士
采集时间
• 根据研究表明细菌通常在寒战和发烧前1小时入血 • 考虑到可操作性，血培养标本应同时采集或在尽量短的
间隔期内采集。
• 间隔式采血法仅适用于确诊持续性菌血症
如：细菌性心内膜炎或其他脉管内感染 如导管相关性感染
虽然血培养阳性率与体温变化看上去相关性不大，但临 床仍应遵从“（下一次）用药前”或“停药24小时后”采 血！
临床微生物实验室基本操作总体 流程
标本前处理 标本筛选 药敏试验 报告
实验室质量控制环节
分析后
危急值 报告
标本采集、 运送
分析前
标本合格判定 培养基、试剂
仪器设备
分析中
室间质评
微生物结果的影响因素
针对性的检验申请 病人准备 标本的采取 标本的运输
标本的保存和处理
4-15% 18.5-47%
标本检验
下呼吸道标本 Lower Respiratory Tract Specimens
下呼吸道标本
Lower Respiratory Tract Specimen
自然咳痰 诱导痰 气管内吸取物 肺部组织
支气管肺泡灌洗液 保护性毛刷 支气管灌洗液
下呼吸道标本收集
•所有病人的下呼吸道标本应在采集后立即送至微生物室，并于
许多不着色的有折射的杆状细菌
血培养污染
Blood Culture Contamination
血培养存在的主要问题
•如果皮肤定植的细菌没有被杀死，这
些细菌将通过针头被吸入血培养瓶并 在瓶中生长
•这些细菌(主要为凝固酶阴性葡萄球
菌) 引起导管相关性败血症 (住院患者 血培养第一位)
•医生不能将真的凝固酶葡萄球菌感染
和皮肤定植菌“污染”相区分，因此 他们很可能会用万古霉素治疗患者。
外一个血培养标本，以帮助阳性结果判读。
•不主张换针头入瓶 •有血的培养瓶不可放入冰箱
和冻箱保存。
血培养的运送
• 采集后血培养瓶应立即送往实验室（2小时内） • 接种前后的血培养瓶不得冷藏或冷冻。 • 任何延误送入自动连续监测血培养仪的行为将会延误或阻止细 菌生长的检测； • 血培养瓶保留在室温不得超过数小时；
传统的人造纤维拭子
鼻拭子
•深部鼻拭子一般与咽拭子的信息等值。 •相对于诊断深部感染，鼻拭子更适用
于侦测健康携带者。
•深部鼻拭子可用于诊断化脓链球菌和
白喉棒状杆菌感染，或金黄色葡萄球菌 与化脓性链球菌暴发感染时调查用。
鼻窦炎标本
采集脓液或窦吸出液/盐水清洗 液进行革兰氏染色和需氧、厌氧 平板培养。
1小时内接种 •室温下放置>1h会降低肺炎链球菌、流感嗜血杆菌的分离率而 定植于上呼吸道的非致病菌则会过度生长。 •下呼吸道标本勿放冰箱或运输时勿置于冰块中
痰液标本
•采集时间：用抗生素前 •采集方法：
自然咳痰：必须用清水漱口3次，应包括咽喉部，立即用力咳出痰， 于灭菌容器或输送培养基中。
支气管镜或支气管毛刷:由医生采集，建议直接种入输送培养基。
你看见多少种形态？
呼吸道标本中未被染色的，有折射的杆菌=抗酸 杆菌
呈链排列的革兰阳性球菌？或革兰阳性分枝杆菌？
肺中的结节吸出物，不规则“球菌”，分叉，无短链，链的末端的呈尖状，都 证明是分枝状的革兰阳性杆菌，可能是放线菌或诺卡菌（通常来自脑或肺组织 的标本）
呼吸道标本的涂片评估模式
肺炎-可接受的
推荐的血培养组合的数量
血培养次数
• 怀疑菌血症的成人患者：采集2-3套血培养标本（不同部位） 。 • 婴幼儿患者：采集2次血培养标本（不同部位） • 除特殊情况外，在采取血培养后的2-5天内，无需重复采取血培
养。
• 可疑为持续性菌血症：如心内膜炎、导管相关血流感染，间隔
(1--24h)几次取血监测、捕捉、指导治疗。
污染细菌
血培养污染定义为在几次血培养中单个血培养下 列细菌阳性: 凝固酶阴性葡萄球菌 棒状杆菌 微球菌 丙酸杆菌 芽孢杆菌
上呼吸道标本
Upper Respiratory Tract Specimens
咽拭子运送培养基
•可以运送需氧、厌氧、苛养菌 • 4℃或RT • 24或48小时
尼龙植绒拭子
采血量
•成年患者：推荐的采血量为每套不少于10ml，每瓶 不少于5ml；
•婴幼儿患者：推荐的采血量，每瓶不少于2ml。
•备注：如果实验室收到采血量不足的标本仍需进行培养，则需在
报告单上注明：“送检血液标本量未达到要求，会影响结果的灵 敏度”。
血培养的采集
•从静脉取血； •不宜从静脉导管或静脉留置口取血； •如必须从留置导管内采血，应同时从外周静脉采集另
很少的鳞状上皮细胞 <10个每低倍视野
不合格标本
许多鳞状上皮 >10个/低倍视野
评述
可以在玻片上看到许多鳞状上皮细胞，说明在采集时受 到了上呼吸道分泌物的污染或口水的污染。
很多的中性粒细胞
很少有或没有中性粒细胞 免疫抑制的病人也会出现中 性粒细胞减少
中性粒细胞和上皮细胞都很少的标本需要培养
很多中性粒细胞混合wk.baidu.com形态多样的细 菌（革兰氏阴性杆菌，纺锤形，革兰 氏阳性球菌）
吸入性肺炎标本革兰氏染色的典型形式，培养只会培养 出正常菌群，所以革兰氏染色是用于诊断的方法。
许多或中等量的中性粒细胞，以一种 形态的细菌为主
酵母菌样，酵母菌是一种很 少引起肺炎的细菌，常由口 腔污染
成双革兰氏阳性球菌，短链=肺炎链球菌 革兰氏阳性菌成群排列=金黄色葡萄球菌 革兰氏阴性球杆菌（小）=流感嗜血杆菌 革兰氏阴性杆菌大且肥厚=肺炎克雷伯菌或其他肠道菌 革兰氏阴性双球菌=卡他莫拉菌
细胞内细菌
柱状纤毛上皮细胞
肺泡巨噬细胞
滑石颗粒
见于迁延长时间的呼吸道疾病
淀粉样小体
弹性纤维
库什曼螺旋体
呈链排列的革兰阳性球菌和革兰阴性球杆菌。缺乏鳞状上 皮细胞提示混合厌氧菌感染
几种细菌的混合形态，缺乏鳞状上皮细胞=混合厌氧菌感染。如果是呼吸道标本 可能是吸入性肺炎。报告临床医生“提示吸入性肺炎”
•运送要求
于2小时内送达检验室 如无法马上送出，标本置于4℃保存
标本质量
脓痰
唾液or诱导痰 (?)
粘液样痰 带血痰
用革兰氏染色来评估 呼吸道标本是否合格
痰标本>10鳞状上皮细胞/每低倍视野=拒收
有PMN的痰标本，中性粒细胞多，且鳞状上皮细胞特别少=接受，进行培 养
粘液丝
胞内细菌 ——提示感染