白血病与核型分析

常见结构异常的符号及含义
白血病类型的细胞遗传学表现
• 一、慢性粒细胞白血病（CML）
• Ph染色体：ph染色体是9和22号染色体易位后的der(22) t(9;22)(q34;q11) . Ph染色体见于全部的髓系细胞、一部分B系细胞和极少数的T系细胞。这表明ＣＭＬ是 多能造血干细胞突变所致的克隆性疾病。 • • • 由于２２号染色体长臂上的断裂点是变化的，因而导致４种不同大小的ｐｈ染色体： Ⅰ型（最大），断裂点位于２２ｑ１３.３； Ⅱ型（大），断裂点位于２２ｑ１３.１；
6、滴片是染色体制备中影响染色体形态的关键一步。
首先是载玻片要非常干净,否则会影响染色体的分散和分带效果。 其次是滴片的距离、制片的方式都会影响染色体分期效果。烤片的 温度、时间与染色体形态和分带有关。不宜温度过高和烤片时间过长。
常用染色体带纹显示方法
G（Giemsa）带：Giemsa显带，经典方式，常用于临床
4、固定技术是制备良好分散的染色体的重要步骤。 若染色体分散不良 ,可适当加大冰乙酸含量 ,其同时有改善由于低渗 处理不够或固定不充分所造成的缺陷 ,但过量会造成染色体形态变化和影 响分带结果。 染色体形态不良与加固定液速度有关 ,加第一次固定液快或过快 ,可 造成飘带样染色体。
5、固定液每次使用必须新鲜配制 ,否则将会形成酯类 ,从而影响固定效果。
•
（一）急性淋巴细胞白血病（ALL）分型：
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FAB分型：
ALL_L1原始淋巴细胞以胞体小（直径≤12μm）而规则为特点， ALL_L2原始淋巴细胞则以大小不一，（直径≥12μm）和胞核形状不规则见长，
•
ALL_L3原始和幼淋巴细胞以大细胞为主，大小较一致，细胞内有明显空泡，胞浆嗜
碱性，染色深。因与EB病毒感染有关故又称Burkitt细胞，在免疫表型上则为成熟型B 细胞
MIC分型 1986（MIC）
WHO分型 2001（MICM）
急性白血病分型的三个发展阶段
① 70年代（1976. Benne等）法、美、英7位学者 提出FAB分型，其后多次加以修改补充 ② 70年代中用单克隆抗体发现造血细胞表面抗原，对AL进行 免疫表型分析。 ③ C hromosome分析90%AL有核型异常。 ④ 80年代提出MIC分型 (M：morphology, I: immunology, C:Cytogenetics)
血液病与染色体核型分析
虞其红
遗传性血液病
• 血液与遗传的关系是十分密切的，目前发现的遗传性血液病已经在百
种以上，造血和淋巴组织系肿瘤中几乎都是属于染色体病和体细胞遗
传病。 • 在体细胞水平上遗传物质的 异常能扰乱细胞的正常生长发育及分化调 节，从而诱发肿瘤。 • 在白血病中，多数是由染色体易位导致原癌基因的重排。
染色体畸变的类型
1、数目畸变 (numerical aberration)
2、结构畸变 (structural aberration)
1、染色体数目异常
(1).多倍体
(2).非整倍体
2、染色体结构异常
（1）缺失 （2）插入 （3）倒位 （4）易位
（5）重复 （6）环状染色体 （7）等臂染色体 （8）双着丝粒染色体
•
• •
Ⅲ型（中等），断裂点位于２２ｑ１２；
Ⅳ型（最小），断裂点位于２２ｑ１１.３. 其中前两型少见，后两型较多见
2、Ph易位的类型
8%
变异易位
隐匿易位
92%
典型易位t(9;22)(q34;q11)
CML t(9;22)(q34;q11)
CML 不典型Ph易位
慢粒慢性期的染色体改变
30%
t(9;22), -Y;+8;+Ph
•
在肿瘤染色体重排的研究中，恶性肿瘤染色体重排分布和良性肿瘤染色体畸变均是非
随机性的。
•
（二）地域分布
• • • • •
研究地理分布的非随机性，也可发现肿瘤染色体畸变发生率存在地区异质性。 CML中，欧洲和日本+17的频率高于澳大利亚与美国，日本+19的频率是欧美的3倍； AML中，美国-5和-7的频率比澳大利亚高2倍，而在日本则为罕见； 淋巴瘤14q+发生的频率，在欧洲为47%，美国为83%； CLL的t(8；14)在欧洲为 67%,在美国则未见。我国及东南亚较少见。
少；
• 2、肿瘤细胞的染色体核型形态较差，难分析；
• 3、细胞毒性药物的治疗也会影响骨髓细胞培养成功率，最
好是治疗前的标本进行培养；MPD中的骨髓抑制治疗以及MDS 中的支持治疗也往往干扰细胞培养的结果； • 4、不同培养方式，检出率不同，如t(15;17)类型的病例， 需要进行24-48小时的培养才能得到结果。
•
（三）年龄分布
• • •
11q23重排是婴儿AML患者最常见的细胞遗传学异常，而在成人中的发病率仅为5%。 t(1；22)(p13p13)仅限于儿童M7，尤其是婴儿患者。 -5、-7、i(17q)，完整的第8，11，13和14号染色体的三体，以及复杂核型均多见于年 龄较大的患者。
•
t(15;17)\t(8;21)\t(6;9)\t(6;16)t(3;5)等异常核型则常见于年轻患者。
T系
• • 早前T细胞型ALL（T-ALL） 成熟T细胞型ALL（T_ALL）
急性髓性白血病（AML）的FAB分型
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AML共分8型如下：
M0 急性髓细胞白血病微分化型 M1 急性粒细胞白血病未分化型
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M2 急性粒细胞白血病部分分化型
M3 急性早幼粒细胞白血病（APL） M4 急性粒单核细胞白血病（AMML） M4Eo除上述M4型的各特点外，嗜酸性粒细胞在NEC≥5%。 M5 急性单核细胞白血病（AMoL） M6 红白血病（EL） M7 急性巨核细胞白血病
• 易发人群--儿童及35岁以下成人。 • 死亡率：恶性肿瘤中 6位（男性） 8位 （女性）。
白血病分类分形
• 据白血病细胞的成熟程度和自然病程，将白血病分为急性白血病（AL）和慢性白血病 （CL）两大类。
•
根据主要受累的细胞系列将：
•
源自文库
AL分为：急性淋巴细胞白血病（ALL）和急性非淋巴细胞白血病（ANLL） 或急性髓性
白血病染色体畸变与非随机性
（一 ）集中倾向性
•
从理论上说，人类的24种染色体（常染色体加X和Y性染色体）以均等机会参与肿瘤的 畸变，但现实的研究结果并非如此。肿瘤染色体畸变常是涉及其中部分的染色体，畸 变分布不均，且带有某种集中倾向（聚集现象）和 非随机性
•
Mitelman曾对1266例一白血病为主的15种肿瘤进行染色体畸变分析，可见肿瘤染色体 畸变集中在第1、3、5、7、8、9、14、17、20、21、和22号染色体中，而第1、8和 14号染色体则涉及7—8种肿瘤。
46,t(9;22)
70%
CML t(9;22),-Y
慢粒急变期的染色体改变及其意义
• 20%保持46,t(9;22)不变 • 80%除t(9;22)外出现额外异常，依次为2Ph、+8、i(17q)、 +19、+21等
• 少数病例Ph染色体可和t(8;21)、t(15;17)、inv(16)或inv(3) 同时存在
常，它虽和疾病的发生无关，但却赋予疾病更加 恶性的特征
④平衡性和不平衡性
• ④平衡性和不平衡性：
• 平衡性畸变是指白血病患者的染色体异常，常表 现为染色体的结构重排，如相互易位或者是倒位， 而无DAN含量的改变； • 非平衡性畸变是指染色体异常常表现为整条染色 体或部分的增加或丢失，而有DAN含量的改变。
• • • •
①获得性： ②克隆性 ③原发性和继发性 ④平衡性和不平衡性
①获得性
• ①获得性：白血病染色体畸变为后天获得而非先
天遗传。许多研究表明，如同卵双生子之一患 CGL，ph染色体不见于其健康的孪生同胞；白血 病患者所生子女通常缺乏同样的白血病和核型异 常的证据；白血病患者其染色体畸变通常不见于
• 原癌基因重排可以导致癌基因的过量表达而致病，也可由于原癌基因 与易位处的某一基因形成融合性基因而发生白血病。
发病情况
• 我国白血病发病率发病率：1-4/10万，低 于欧美。 ANLL 1.62/10万，ALL 0.69/10 万，CML 0.36/10万，CLL 0.05/10万， 急性比慢性多，成人急非淋多见，儿童急 淋多见，欧美慢淋多见。
•
22q-则广泛存在于白血病中。
骨髓染色体核型分析
• 肿瘤有超过600种染色体结构异常的核型；绝大多数血液肿瘤都有非 随机的染色体畸变； • 血液病: 急性非淋巴细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性 粒细胞白血病、骨髓增生异常综合征：63% • 淋巴瘤：10%
• 实体肿瘤：27%
技术难点
• 1。、由于肿瘤细胞在体外的增殖能力较差，中期细胞数量
皮肤和结缔组织。
②克隆性
• ②克隆性：是指来自同一个恶性转化细胞
的一群白血病细胞具有相同的染色体异常
③原发性和继发性
• ③原发性和继发性：原发性畸变是指发生于疾病早
期，与白血病的发生有关，和白血病的细胞学，免疫学有 关。因而对白血病有分类和标志性的意义并决定其生物学 特征的一类异常。
• 继发性畸变：指病程中由于克隆衍化所致的异
（四）标记染色体分布
• • •
在肿瘤染色体的检测中，标记染色体的分布也是非随机的。 5q-常见于难治性贫血和治疗相关AML和MDS 6q-在ALL中的发生率为20%，在淋巴瘤中的发生率为12%,在CLL、CGL、AML及其他 恶性肿瘤中少见。
• • • • •
7q-常见于所有的白血病，最常见的为AML 14q-主要见于淋巴系肿瘤，少见于其他恶性肿瘤。 t(8;14)在B系白血病和淋巴瘤中是特异的，其断裂位点是专一的。 i(17q)为CML急性期的特征，少见于其他肿瘤。 20q-主要见于真红细胞增多症。
⑤近年 MICM（MIC+分子生物学）分型
急性白血病 （AL）
• 急性白血病是：造血干细胞的恶性克隆性疾病，发病的骨髓中异常的原始细胞及幼稚
细胞（白血病细胞）大量增殖并广泛浸润肝、脾、淋巴结等各种脏器，抑制正常造血。 主要表现为贫血、出血、感染和浸润等征象。
•
[分类] 国际常用的法美英（FAB）分类将AL分为ALL及ANLL（或 急性随性随性白 血病AML）两大类。这两大类再分成多种亚型。
骨髓细胞染色体分析流程图
骨髓细胞
骨髓培养基
秋水仙胺5h
24h
0.5h
染色体制备影响因素分析
1、培养基pH、浓度、小牛血清量及培养箱温度的恒定是培养 成功的关键。
2、适量秋水仙素、适宜的处理时机和时间,是获得良好、足够 分裂相的条件。分裂相的多少和染色体形态及带型处理良好 与否均受其影响。
3、低渗处理是获得分散良好的分裂相的关键步骤 ,低渗过度或 不足都会造成染色体形态不良的结果。 在低渗处理时期细胞十分娇嫩 ,并且表面发黏 ,低渗细胞 混匀时 ,吹打要适宜 ,避免细胞破碎及粘团 ,另外不要将细胞 吸到吸管上部及离心管上部 ,避免细胞丢失。
R（Reverse）带：与G显带带纹相反，可观察染色体的末端缺失
G-banding
R-banding
染色体阅片的七大影响因素
1、染色体分裂指数低 2、染色体形态不理想 3、染色体形态偏长 : 4、染色体形态偏短 5、染色体分带不良 6、染色背景不良 7、培养失败
白血病类型的细胞遗传学表现
• • 由于绝大多数白血病患者都有非随机的染色体畸变，它们对于白血病的诊断 分型、预后估计、治疗方案的选择乃至发病机制的研究都有极为重要的价值。 尽管染色体改变的种类繁多，但具有四种基本特征：
白血病（AML）
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CL分为：慢性粒细胞白血病（CML）、慢性淋巴细胞白血病（CML）及少见类型的白 血病，如毛细胞白血病（HCL）、幼淋巴细胞白血病（pLL）等。
随着血液病在发病机理、 诊断方法以及治疗手段等方面 的进展，急性白血病的诊断技 术也有很大发展，急性白血病 的分型基本上分三个阶段。
FAB分型 1976（M）
另外，由于形态学分型为基础的FAB分型具有一定的局限性，如：T、B淋巴
细胞不能区分，没有没有提供染色体异常和基因重排等对发病机制、治疗选择
和对预后判断重要意义的信息。因此除形态学外还应做免疫学分型。
•
急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）的MIC分型：
B系 • • • • 1、早前B细胞型ALL（早前B-ALL） 2、前B细胞型ＡＬＬ（前B-ALL） 3、普通型ALL（Ｃ－ＡＬＬ） 4、成熟Ｂ细胞型ALL（B-ALL）