维生素E测定方法
MM_FS_CNG_0793饲料添加剂维生素E粉检验规程滴定法称量法
MM_FS_CNG_0793
饲料添加剂维生素E粉
1.适用范围
本方法适用于以维生素E为原料，加入适当的吸附剂制成的维生素E粉，在饲料工业中作为维生素类饲料添加剂。
2. 分子式、分子量
分子式：C
31H
52 O
3
分子量：(按1983年国际原子量)
3.技术要求
.外观和性状
本品为类白色或淡黄色粉末，易吸潮。
.粒度
本品90％通过三号筛。
.
4.
.外观及粒度
称取样品50g，用肉眼观察颜色，再用三号筛测定。
.鉴别
主要试剂
无水乙醇；
硝酸。
鉴别方法
称取样品约相当于维生素E15mg，加无水乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml，摇匀，在75℃加热约15min，溶液显橙红色。
.维生素E含量测定
主要试剂
95％乙醇；
无水乙醇；
硫酸；
二苯胺：1％(g/ml)硫酸溶液；
硫酸铈；
硫酸铈标准液：L。按中国药典一九八五版二部附录134页制备和标定。
测定方法
称取样品约相当于维生素E (准确至，置于100ml量瓶中，加无水乙醇至刻度。振摇30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，准确吸取续滤液50ml，置于回流瓶中，再加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，准确吸取25ml，加乙醇20ml，水10ml，二苯胺硫酸溶液2滴，用L硫酸铈标准液滴定，滴定速度以每10s 25滴为宜，至溶液由亮黄色转变为灰紫色。持续10s，即为终点，并将滴定结果用空白试验
校正。
计算和结果的表示
所含维生素E 相当于标示量的百分数X 1(％)按式(1)计算：
)1(1008002364.0)((%)01 K
G F V V X 式中：V ──样品溶液消耗硫酸铈标准液的体积，ml ；
V 0──空白溶液消耗硫酸铈标准液的体积，ml ；
F ──硫酸铈标准液浓度校正系数；
──滴定度(每1ml L 硫酸铈标准液相当于的C 31H 52O 3)；
8──样品稀释倍数；
G ──样品重量，g ；
K ──维生素E 的标示量(如5010033100251002010010100
,,,,等)。 .干燥失重的测定
测定方法
称取样品1g(准确至，置于已在105℃烘箱中干燥至恒重的φ50×30mm 的称量瓶中，打开称量瓶瓶盖，放置105℃烘箱中，干燥至恒重。
计算和结果的表示
干燥失重X 2(以重量百分数表示)按式(2)计算：
100)((%)212 G
G G X ………………………(2) 式中：G 1──干燥前的样品加称量瓶重，g ；
G 2──干燥后的样品加称量瓶重，g ；
G ──样品重，g 。
5.验收规则
.本产品应由生产厂的质量检验部门进行检验，生产厂应保证所有出厂的产品均符合本标准的要求，每批出厂的产品都应附有质量证明书。
.使用单位有权按照本标准规定的检验规则和试验方法对所收到的产品进行质量检验，检验其指标是否符合本标准的要求。
.取样方法
取样需备有清洁、干燥、具有密闭性和避光性的样品瓶。瓶上贴有标签，注明生产厂名称、产品名称、批号及取样日期。
抽样时，应用清洁适用的抽样器。每批产品抽样2份，每份抽样量应为检验所需样品的3倍量，装入样品瓶中，一件送化验室检验，另一件应密封保存，以备仲裁分析用。
.如果在检验中有一项指标不符合本标准时，应重新抽样，抽样量是第一次的二倍，进行核验。产品重新检验结果即使只有一项指标不符合标准时，则整批不能验收。
.如供需双方对产品质量发生异议时，可由双方协商选定仲裁单位，按本标准的验收规定和检验方法进行仲裁检验。
6.标志、包装、运输和贮存
.标志
采用鲜明的标签。
标签的内容应包括：品名、批准文号、商标、批号、贮存条件、净重及生产厂名。标示量分别为10％、20％、25％、33％、50%。
.包装
维生素E粉装于适当容器内，封存。包装应符合运输贮藏的要求。每件包装的数量(重量)可根据客户的要求而定。
.运输过程应有遮盖物，避免日晒雨淋、受热及撞击。搬运装卸小心轻放，不得与有毒有害或其他有污染的物品以及具有氧化性的物质混装混运。
.本品应于阴凉干燥处贮存。
.原包装负责期为一年(开封后尽快使用，以免变质)。
7.来源：
GB 7293－87
苹果中维生素C含量的测定
创新性实验 ---苹果中维C含量的测定
前言： 苹果，又名柰、频婆、天然子，苹果为蔷薇科苹果属植物的果实。苹果酸甜可口，营养丰富，是老幼皆宜的水果之一。它的营养价值和医疗价值都很高。每100g鲜苹果肉中含糖类15g，蛋白质0.2g，脂肪0.1g，粗纤维0.1g，钾110mg，钙0.11mg，磷11mg，铁0.3mg，胡萝卜素0.08mg，维生素B1为0.01mg，维生素B2为0.01mg，尼克酸0.1mg，还含有锌及山梨醇、香橙素、维生素C等营养物质。中医认为苹果有生津、润肺；除烦解暑、开胃醒酒、止泻的功效。现代医学认为对高血压的防治有一定的作用。欧洲人说：“一天吃一个苹果，医生远离你”。加拿大人研究表明，在试管中苹果汁有强大的杀灭传染性病毒的作用，吃较多苹果的人远比不吃或少吃的人得感冒的机会要低。所以，有的科学家和医师把苹果称为“全方位的健康水果”或“全科医生”。 维生素是是我们经常听到的一个词语，我们每天都要通过食物摄入各种各样的维生素，维生素同我们的健康是密切相关的，维生素C 是心血管的保护神、心脏病患者的健康元素。维生素C（又称抗坏血酸）普遍存在于水果和蔬菜中，也是一种对人类而言至关重要的物质：人体缺乏维生素C 将导致坏血病，维生素C还能防止传染性疾病，甚至癌症。所以，食品饮料医药、医疗等行业都要测定食品、饮料、药品以及血液中的维生素C的含量。
苹果中含有Vc，不过含量比较低，每100克苹果中Vc的平均含量为4毫克。 维生素C含量的测定方法很多。一般方法有碘量法，2，6-二氯靛酚滴定法;2，4-二硝基苯肼比色法;荧光分光光度法;电化学法和高效液相色谱法。 维生素C广泛存在于植物组织中,新鲜的水果、蔬菜中含量较多。若采用2，6-二氯靛酚滴定法由于果汁具有一定的色泽,滴定终点不易辨认。二甲苯-二氯靛酚比色法虽然适用于测定深色样品还原型抗坏血酸,但由于萃取液二甲苯为有机溶剂,有很强的毒性,既不利于操作人员的健康,也不利于环境保护,故不推荐此测试方法。 而碘滴定法仅需常规滴定设备,条件易于满足。因此,在满足测定范围和测定精度要求的前提下,应尽可能选择不需要昂贵仪器设备条件、简单易行的方法。pH控制在3-5比较适合。 本次实验用的是直接碘量法测定维生素C。 在本次实验中，通过查找资料、设计实验、操作实施，等过程，预期达到如下目的： 1、掌握直接碘量法测定维生素C的原理和方法。 2、掌握维生素C的提取方法。 3、实践各种溶液的配制及其标定操作。 4、通过计算，了解同类但不同品种水果在微量物质的含量上 是否存在显著差异。
紫外分光光度法测定维生素C和维生素E含量
紫外分光光度法测定维生素C和维生素E含量 【摘要】本实验利用紫外分光光度法测定由维生素C和维生素E组成的混合物中各组分的浓度。在这两种组分组成的混合物中，彼此都不影响另一种物质的光吸收性质，根据相互间光谱的重叠的程度采用相对的方法进行定量测定。 【关键词】紫外分光光度法；维生素C；维生素E；浓度 1、引言 维生素C（抗坏血酸）和维生素E(α-生育酚)在食品中能起抗氧化剂作用，即它们在一定时间内防止油脂变性。两者结合在一起比单独使用的效果更佳，因为它们在抗氧化性能方面是“协同的”。因此，它们作为一种有用的组合试剂用于各种食品中。维生素C是水溶性的，维生素E是酯溶性的，它们都能溶于无水乙醇，因此能在同一溶液中，能够利用紫外可见分光光度法测定双组分相同的原理，在紫外光区测定它们。 2、实验原理 根据朗伯—比尔定律，用紫外—可见分光光度法很容易定量测定在此光谱区内有吸收的单一成分。由两种组分组成的混合物中，若彼此都不影响另一种物质的光吸收性质，可根据相互间光谱重叠的程度，采用相对的方法来进行定量测定。例如，当两组分吸收峰部分重叠时，选择适当的波长，仍可按测定单一组分的方法处理；但当两组分吸收峰大部分重叠时，则宜采用解联立方程组或双波长法等方法进行测定。
混合组分中在λ1处的吸收等于组分A 和组分B 分别在λ1处的吸 光度之和A λ1 A+B ，即： A λ1A+B =κλ1A bc A +κλ1B bc B 同理，混合组分在λ2处吸光度之和A λ2A+B 应为： A λ2 A+B =κλ2A bc A +κλ2B bc B 若先用A 、B 组分的标样，分别测的A 、B 两组分在λ1和λ2处的摩尔吸收系数κλ1A 、κλ2A 、κλ1B 、κλ2B ；当测的未知试样在λ1和λ 1处的吸光度A λ1A+B 和A λ2 A+B 后，解下列二元一次方程组： A λ1 A+B =κλ1A bc A +κλ1B bc B A λ2 A+B =κλ2A bc A +κλ2B bc B 即可求得A 、B 两组分各自的浓度c A 和c B 。 c A =（A λ1A+B ·κλ2B ? A λ2A+ B ·κλ1B ）/（κλ1A ·κλ2B ?κλ2A ·κλ1B ） c B =（A λ1 A+B ?κλ1A ·c A ）/κλ1B 一般来说，为了提高检测的灵敏度，λ1和λ2宜分别选择在A 、 B 两组分最大吸收峰处或其附近。 3、紫外分光光度法测定维生素C 和维生素E 含量 3.1、仪器试剂 仪器：紫外-可见分光光度计（天津港东UV-4501S ），石英吸收 池一对 试剂：维生素C （抗坏血酸），维生素E(α-生育酚)，无水乙醇 3.2、实验步骤 3.2.1、 检查仪器 开机预热20min ，并调试至正常工作状态。
维生素E含量测定方法
维生素E（Vitamin E）是一种脂溶性维生素，其水解产物为生育酚，是最主要的抗氧化剂之一。 溶于脂肪和乙醇等有机溶剂中，不溶于水，对热、酸稳定，对碱不稳定，对氧敏感，对热不 敏感，但油炸时维生素E活性明显降低。 含量测定 方法名称：维生素E的测定—气相色谱法。 应用范围：该方法采用气相法测定维生素E的含量。 该方法适用维生素E。 方法原理：供试品和内标均制成甲醇溶液，进入气相色谱仪进行色谱分离并检测维生素E和 内标正三十二烷的吸收值，计算出其含量。 试剂：正己烷 仪器设备：仪器气相色谱仪 色谱柱：以硅酮（OV-17）为固定相，涂布浓度为2%，或以HP-1毛细管柱（100%二甲基聚 硅氧烷）为分析柱；理论塔板数按维生素E峰计算不低于500（填充柱）或5000（毛细管柱），维生素E峰与内标物质峰的分离度应符合要求。 色谱柱和典型色谱条件：柱长30 m，柱内径0.53 mm 或0.32 mm，固定液为100%甲基聚硅 氧烷 柱温：265℃ 检测器：氢火焰离子化检测器，温度300℃ 进样口：温度290℃；分流进样，分流比1：20；进样量1μL 载气：氮气，流速5 mL/min 试样制备： 1、称取供试品 精密称取该品20mg，放置在棕色具有塞子的瓶中。 2、对照品溶液的制备 精密称取维生素E对照品和维生素E对照品25mg，置100mL棕色量瓶中，加异辛烷80mL，避免加热，超声处理1分钟使完全溶解，并加异辛烷至刻度，摇匀，冲氮密塞，避光，0℃以下保存。 3、内标溶液的制备 4、供试品溶液的制备 该供试品精密加内标溶液10mL，密塞，振摇使溶解，即得供试品溶液。 5、校正因子的测定 另取维生素E对照品20mg，精密称定，置棕色具塞中，精密加内标溶液10mL，密塞，振摇 使溶解，取1~3μL注入气相色谱仪，计算校正因子。 注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准 确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。 操作步骤： 分别精密吸取上述供试品溶液与对照品溶液1~3μL 注入气相色谱仪测定、计算，即得。
紫外分光光度计法测定果蔬中维生素C的含量
紫外分光光度计法 测定几种常见果蔬中维生素C的含量 摘要：利用维生素Ｃ对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，用紫外分光光度法测定５种常见果蔬中维生素Ｃ的含量。最大吸收波长为243nm，标准曲线方程为A=0.00537c，相关系数为R^2＝0.99539。9种果蔬中维生素Ｃ含量［ｍｇ·（１００ｇ）－１］分别为：青尖椒111.8、上海青104.2、韭菜82.5、小白菜78.9、西芹59.70、胡萝卜49.8、西兰花28、茄子26.4、山药14.9。该方法简单、快速，结果令人满意。 1.前言 维生素Ｃ又称抗坏血酸，是一种水溶性维生素。能预防牙龈出血及萎缩、提高人体免疫力，对坏血病、动脉硬化、贫血等有一定疗效。天然存在的抗坏血酸有L型和D型2种，后者无生物活性。维生素C 是呈无色无臭的片状晶体，易溶于水，不溶于有机溶剂。在酸性环境中稳定，遇空气中氧、热、光、碱性物质，特别是由氧化酶及痕量铜、铁等金属离子存在时，可促进其氧化破坏。氧化酶一般在蔬菜中含量较多，故蔬菜储存过程中都有不同程度流失。但在某些果实中含有的生物类黄酮，能保护其稳定性。 维生素Ｃ的测定方法主要有紫外分光光度法、红外光谱法、2,6－二氯靛酚滴定法、高效液相色谱法、钼蓝比色法、原子吸收法、碘量法、电位滴定法、荧光光度法、毛细管电泳法、流动注射化学发光法[2-12]等。其中原子吸收法、高效液相色谱法和荧光光度法仪器相对昂贵；碘量法和电位滴定法操作步骤较繁琐，而且受其它还原性物质、样品色素颜色和测定时间的影响；紫外分光光度法是根据维生素Ｃ对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，于243nm处测定样品液与碱处理样品液两者吸光度之差，通过标准曲线方程，即可计算样品中维
维生素E验收标准及检验方法规程
将样品倒入白瓷盘内,在明亮的自然光处观察. 2．含量 2.1试剂 1）四氢呋喃-丙酮溶液：四氢呋喃：丙酮溶液=1：1 2）α－生育酚醋酸酯标准品 3）无水乙醇：不得含有醛类物质 3.1）检查方法：取2ml银氨溶液于试管中，加入用量乙醇，摇匀，再加入10% 氢氧化钠溶液，加热，放置冷却后，若有银镜反应则表示乙醇中有醛。 3.2）取2g硝酸银溶于水中。取4g氢氧化钠溶于温乙醇中。将两者倾入1L乙醇 中，振摇后，放置暗入两天（不时摇动，促进反应），经过滤，置蒸馏瓶 中蒸馏，弃去初蒸出的50ml。当乙醇中含醛较多时，硝酸银用量适当增 加。 2.2仪器 1）超声波振荡器； 2）高效液相色谱仪带紫外检测器； 3）紫外分光光度计； 4）100ml容量瓶； 5）高速离心机； 2.3测定步骤 1）标准溶液的配制：
一100ml溶量瓶中，并定容。将最终稀释液用作标准溶液。 1.2）标准溶液的标定： 于紫外分光光度计中按下面条件测定标准溶液的吸光度： 维生素E标准溶液测定条件：波长：285nm且E 1% 1cm =44 2.4样品的处理： 1）准确称取20.0mg维生素E样品于一100ml容量瓶中，加水约10ml，于65℃超声水浴10min，冷却至室温。 2）加四氢呋喃：丙酮溶液约75ml，常温下超声水浴20min，冷却后，用四氢呋喃：丙酮溶液定容至刻度，离心后取上清液于液相色谱中测定。 2.5高效液相色谱分析 2.5.1色谱条件 1）分析柱：ultrasphere ODS 5μm，4.6mm×25cm； 2）甲醇:色谱纯； 3）紫外检测器波长：285nm； 4）进样量：20μL； 5）流速：1.5ml/min； 6）灵敏度：0.5。 2.5.2样品分析 1）把前标准溶液按上述色谱条件进样3~4次，根据色谱图，计算标准溶液的平均峰面积。 2）将样品溶液按上述色谱条件进样，根据色谱图，计算样品溶液的峰面积。3）计算 A 样 某种维生素含量（mg/g）= ——————×C×100÷1000 A 标×W 样 式中：A 样 ——样品溶液的峰面积； A 标 ——标准溶液的峰面积； W 样 ——样品的质量，g； C——标准溶液的浓度，ug/100g。 3．干燥失重 3.1称取样品1~2g（称准至0.001g）于干燥已知恒重的称量瓶中，于105℃烘箱 干燥1小时。 3.2计算 G 1－G 2 干燥失重 % = ×100 G 1 －G 式中： G1——干燥前称量瓶加试样重，g；广州赢特保健食品有限公司
维生素C含量的测定
实验十一、维生素C 含量的测定 一、实验目的 1、掌握碘标准溶液的配制方法与标定原理。 2、掌握直接碘量法测定维生素C 的原理、方法及其操作。 二、实验原理 用I 2标准溶液可以直接测定维生素C 等一些还原性的物质。维生素C 分子中含有还原性的二烯醇基，能被I 2定量氧化成二酮基，反应式如下： C O C C C C CH 2OH O OH OH H OH H + I 2C O C C C C CH 2OH O OH H H O O + 2HI 由于反应速率较快，可以直接用I 2标准溶液滴定。通过消耗I 2溶液的体积及其浓度即可计算试样中维生素C 的含量。直接碘量法可测定药片、注射液、蔬菜、水果中维生素C 的含量。 等物质的量关系:n(Vc )==n(I 2) 即：3 10)(176 %(2 -?=?I C cV V m 试样） ∴ Vc %= 试样） ()(176.02 m cV I 三、仪器和试剂 (1)仪器 分析天平，250ml 锥形瓶，100ml 量筒，10ml 量筒，酸式滴定管，滴定基管架，25ml 移液管。 (2)试剂 医药维生素C 药片，HAc(2 mol/L )，淀粉(0.5%)，Na 2S 2O 3标准溶液(0.1 mol/L )，I 2标准溶液(0.1 mol/L )。
三、实验步骤 1. 0.05 mol·L -1 I 2标准溶液的配制与标定 将3.3g I 2与5g KI 置于研钵中，在通风柜中加入少量水（切不可多加！）研磨，待I 2全部溶解后，将溶液转入棕色瓶中，加水稀释至250mL ，摇匀。 用移液管移取25.00mL Na 2S 2O 3 标准溶液于250mL 锥形瓶中，加50mL 水、5mL0.5%淀粉溶液，用I 2标准溶液滴定至稳定的蓝色，30s 内不褪色即为终点。平行标定三次。 2. 维生素C 含量的测定 准确称取约0.2g 维生素C 片（研成粉末即用），置于250mL 锥形瓶中，加入新煮沸过并冷却的蒸馏水100mL 、10mL 2mol·L-1 HAc 和5mL0.5%淀粉指定剂，立即用I 2标准溶液滴定至溶液显稳定的蓝色, 30s 内不褪色即为终点。平行滴定3次，计算维生素C 的含量。 四、实验数据记录与处理 试样1 试样2 试样3 维生素C 的质量/g 滴定前液面读数/ml 滴定后液面读数/ml 滴定消耗I 2溶液的体积/ml 维生素C 的含量% 维生素C 的平均含量% 计算公式： %1001000 )()()()(68668622??= O H C O H C I I W M V c C 维生素 式中ｃ——I 2标准溶液的浓度(mol/L)； Ｖ——滴定时所用I 2标准溶液的体积(ml)； Ｍ(Ｃ6Ｈ8Ｏ6)——维生素Ｃ的摩尔质量(g/mol)； Ｗ(Ｃ6Ｈ8Ｏ6)——称取维生素Ｃ的质量(g)。
维生素A和维生素E的测定方法
维生素A和维生素E的测定方法（HPLC） 杨月欣教授等 高效液相色谱法 最小检出量分别为VA：0.8ng；α-E：91.8ng；γ-E：36.6ng；δ-E：20.6ng。 1.原理 食物中的维生素A及维生素E经皂化提取以后，将其不可皂化的部分提取到有机溶剂中。用HPLC法测定维生素A及维生素E的含量。 2. 适用范围 GB12388-90 本法适用于各种食物和饲料的测定 3. 仪器 （1）高压液相色谱仪（带紫外检测器） （2）六孔恒温水浴锅 （3）旋转蒸发器 （4）高纯氮气 （5）高速离心机 4. 试剂 本实验所用试剂皆为分析纯，所用水皆为蒸馏水 4.1 无水乙醇：重蒸，不含有醛类物质 检查方法：取2ml银氨溶液于试管中，加入少量乙醇，摇匀，再加入10%氢氧化钠溶液，加热，放置冷却后，若有银镜反应则表示乙醇中有醛。 脱醛方法：取2g硝酸银溶于少量水中。取4g氢氧化钠溶于温乙醇中。将两者倾入1L乙醇中，振摇后，放置暗处两天（不时摇动，促进反应），经过滤，置蒸馏瓶蒸馏，弃去初蒸出的50ml。当乙醇中： 4.2 10%抗坏血酸溶液（Vc）W/V 临用前配制 4.3 50%氢氧化钾溶液（KOH）W/V 4.4 无水乙醚重蒸，不含过氧化物 4.4.1 过氧化物检查方法：用5ml乙醚加1ml10%碘化钾溶液，振摇1min，如有过氧化物则放出游离碘，水层呈黄色或加4滴0.5%淀粉液，水层呈蓝色。该乙醚需处理后使用。 4.4.2 去除过氧化物的方法：重蒸乙醚时，瓶中放入铁丝或铁末少许。弃去10%初馏液和10%残馏液。4.5 pH 1-14试纸 4.6 无水硫酸钠Na2SO4 4.7 甲醇色谱纯或分析纯重蒸后使用 4.8 重蒸水蒸馏水中加入少量高锰酸钾重蒸后使用 4.9 苯并〔e〕芘标准液称取苯并〔e〕芘（纯度98%），用脱醛乙醇配制成1ml相当于5μg苯并〔e〕芘的内标溶液。 4.10 维生素A标准液视黄醇（纯度85% Sigma公司）用脱醛乙醇溶解维生素A标准品，使其浓度大约为1ml相当于1mg视黄醇。临用前用紫外分光光度法标定其准确浓度。维生素E标准液α-生育酚（纯度95% Sigma公司），δ-生育酚（纯度95% Sigma公司），δ-生育酚（纯度95% Sigma公司）。用脱醛乙醇分别溶解以上三种维生素E标准品，使其浓度大约为1ml相当于1mg。临用前用紫外分光光度法分别标定此三种维生素E的准确浓度。 5. 操作步骤 本实验需避光操作 (1) 样品皂化称取样品于三角瓶中，加30ml无水乙醇，振摇三角瓶，使样品分散均匀。加入5ml 10%抗坏血酸和苯并〔e〕芘标准液2ml，混匀。最后加入10ml氢氧化钾边加边振摇。于沸水浴上回流30min使样品皂化完全。皂化后立即放入冰水中冷却。 (2) 样品萃取将皂化后的样品移入分液漏斗中，用50ml水分2次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中。用10 0ml无水乙醚分两次洗皂化瓶及残渣，乙醚液并入分液漏斗中。轻轻振摇分液漏斗2min，静置分层，弃去水层。然后每次用约100ml水将乙醚液洗至中性，约4-5次。 (3) 浓缩将乙醚提取液经无水硫酸钠（约5g）滤入150ml旋转蒸发瓶内，用约15ml乙醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠2次，并入蒸发瓶内，并将其接在旋转蒸发器上，于55℃水浴中减压蒸馏并回收乙醚，待瓶中乙醚剩下约2ml时，取下蒸发瓶，立即用氮气将乙醚吹干。加入2ml乙醇溶液，充分混合，溶解提取物。将乙醇液移入塑料离心管中，于离心机上以3000转/min离心5分钟。上清液供色谱分析。 (4) 标准曲线的制备将维生素A和维生素E标准品配置成标准溶液（约1mg/ml），制备标准曲线前用紫外分光光度法标定其准确浓度。标准浓度的标定方法取维生素A和维生素E标准液若干微升，分别稀释至10.00ml乙醇中，并分别按给定波长测定各维生素的吸光值。用比吸光系数计算该维生素的浓度。测定条件如下 标准比吸光系数E1%cm 波长λ，nm 视黄醇1835 325 α—生育酚71 294
维生素C不同的测定方法及各种方法优缺点比较
维生素C不同的测定方法及各种方法优缺点比较 目前研究维生素C测定方法的报道较多,有关维生素C的测定方法如荧光法、2，6-二氯靛酚滴定法、2，4-二硝基苯肼法、光度分析法、化学发光法、电化学分析法及色谱法等,各种方法对实际样品的测定均有满意的效果. 为了解国内VC含量测定方法及其应用方面的现状及发展态势.方法以"维生素C 或抗坏血酸和测定"为检索词对1994～2002年中国期刊网全文数据库(CNKI)中的理工A、B和医药卫生专辑进行篇名检索,对所得有关维生素C含量测定的文献数据分别以年代、作者区域、载刊等级、样品类型、测定方法等进行计量分析.结果核心期刊载刊文献占文献总量的45.06％,其中光度法占65.69％,电化法占18.63％,色谱法占12.75％;复杂被测样品文献占文献总量的45.06％,其中光度法占60.92％,色谱法占19.54％,电化法占10.34％.结论目前国内维生素C含量测定仍以光度法为主流,但近年来色谱法,特别是HPLC法上升趋势尤为明显. 一．荧光法 1．原理 样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后，与邻苯二胺（OPDA）反应生成具有荧光的喹喔啉（quinoxaline）,其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比，以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。 脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反应，以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰。本方法的最小检出限为0.022 g/ml。 2．适用范围 本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定 3. 注意事项 3.1 大多数植物组织内含有一种能破坏抗坏血酸的氧化酶，因此，抗坏血酸的测定应采用新鲜样品并尽快用偏磷酸-醋酸提取液将样品制成匀浆以保存维生C。 3.2 某些果胶含量高的样品不易过滤，可采用抽滤的方法，也可先离心，再取上清液过滤。 3.3活性炭可将抗坏血酸氧化为脱氢抗坏血酸，但它也有吸附抗坏血酸的作用，故活性炭用量应适当与准确，所以，应用天平称量。我们的实验结果证明，用2g活性炭能使测定样品中还原型抗坏血酸完全氧化为脱氢型，其吸附影响不明显。 二、2，6-二氯靛酚滴定法（还原型VC）
饲料中维生素E的快速测定方法
饲料中维生素E的快速测定方法 摘要：用简便快捷的方法测定饲料中的维生素E，试剂消耗少，稳定性强，回收率也较为理想。 关键词维生素E 快速测定 维生素E又称生育酚，能维持生殖器官的正常机能，提高母畜生殖能力，促进机体代谢，提高免疫力和抗应激水平，维生素E还有抗氧化作用，可防止脂肪化合物、维生素A、硒(Se)、两种硫氨基酸和维生素C 的氧化作用，提高维生素A的作用。GB／T17812—1999是测定饲料中维生素E含量的传统方法，其原理是用碱液皂化样品，使试样中天然生育酚释放出来，再用乙醚提取未皂化的物质。前处理需经过皂化、提取、浓缩几个步骤，耗时长、过程繁琐、消耗试剂多等局限性。生育酚在碱性环境下极不稳定，在皂化过程中易分解。在提取过程中要用到大量的乙醚，对操作人员的健康伤害大。我们经多次试验，用热的甲醇超声样品，使维生素E溶解到甲醇中，将溶液过膜，上机测定，这种方法操作简便，试剂消耗少，回收率稳定。 1 材料和方法 1.1 方法原理 样品中加入甲醇并于一定温度水浴超声萃取，使维生素E溶解于甲醇中，经高效液相测定，用外标法计算其含量。 1.2仪器设备 高效液相色谱仪（安捷伦1100型），配DAD或VWD检测器；超声波振荡器；电子天平：（精确度分别为0.0001g和 0.00001g）。 1.3 试剂 1.3.1 甲醇（分析纯） 1.3.2 维生素E（dl-α-生育酚）标准溶液 1.3. 2.1 dl-α-生育酚标准储备液：准确称取dl-α-生育酚纯品油剂（USP）100.0mg于100.0mL棕色容量瓶中，用正己烷溶解并稀释至刻度，混匀，4℃ 保存。该储备液浓度每毫升含维生素E1.0mg。 1.3. 2.2 dl-α-生育酚标准工作液： 准确吸取dl-α-生育酚标准储备液（1.3.1.1）1.00mL置于10mL棕色容量瓶中，用氮气吹干，用甲醇稀释至刻度，混匀，再按比例稀释。配制工作液浓度每毫升含维生素E50μg。 1.4 色谱条件 色谱柱为 Zorbax SB-C18 5μm 4.6×150mm（或相当型号色谱柱）,流动相为95％甲醇(色谱纯)，流速1.0mL/min，柱温为室温，检测波长280nm，进样体积20μL。 1.5 试样的提取 称取适量样品与100mL棕色容量瓶中（维生素预混料0.5g,复合预混料 5－10g），加甲醇80mL，置于50℃水 浴中，超声提取15分钟，其中每5min 取出用手振摇一次。超声结束后，取出冷却至室温，用甲醇定容至刻度，混匀。取上层清夜过滤或离心，再经0.45μm膜过滤，供高效液相色谱分析用。 1.6 回收率的测定取适量维生素E标准储备液于100mL棕色容量瓶中,用氮气吹至快干,再称取5g空白样品,使维生素E的含量分别为50μg/g、100μg/g和500μg/g，每个浓度点配制5份样品，求其平均回收率。按1.5项下的方法处理后进行色谱分析，以外标法计算含量，以测得量与添加量之比来计算回收率。同时按GB/T17817
维生素E检测方法研究
液相色谱法检测的生育酚方法报告 一、生育酚简介 又称维生素E，是一种脂溶性维生素，是最主要的抗氧化剂之一。溶于脂肪和乙醇等有机溶剂中，不溶于水，对热、酸稳定，对碱不稳定，对氧敏感，对热不敏感。 维生素E为微带粘性的淡黄色油状物，在无氧条件下较为稳定，甚至加热至200℃以上也不被破坏。但在空气中维生素E极易被氧化，颜色变深。维生素E易于氧化，故能保护其他易被氧化的物质（如维生素A及不饱和脂肪酸等）不被破坏。 维生素E的化学名称为(1)-2、5、7、8-四甲基2-(-4、8、12-三甲基十三烷基)-6-苯并二氢吡喃醇醋酸酯，分子式为C31H52O3，结构式为： 根据其化学结构可分为生育酚及生育三烯酚两类。生育酚主要有四种衍生物，按甲基位置分为α、β、γ和δ四种。其中，α-生育酚：R1，R2=CH3；β-生育酚：R1=H，R2=CH3；γ-生育酚：R1=CH3，R2=H；δ-生育酚：R1，R2=H。维生素E以α-生育酚生理活性最高，β-及γ-生育酚仅为α-生育酚的40%和8%。 二、色谱方法的选择 现行标准中维生素E的检测仅有两个标准——《食品中维生素A和维生素E的测定》（GB/T 5009.82-2003）和《食用植物油中维生素E组分和含量的测定高效液相色谱法》（NY/T 1598-2008），其中前者介绍了液相色谱法和比色法两种方法。 目前有的文献[1]中指出，气相色谱法虽能正确定量维生素E，但是对不同型分离困难，为了使α-维生素E与β-维生素E及γ-维生素E分离，预先要将试样进行三甲基硅烷化或酯化，同时胆同醇等硬脂类对测定有干扰。另外，如果前期样品处理不好，很容易对毛细管柱造成污染。故建议使用液相色谱法。 三、内标法和外标法的选择 1、两种方法的区别： 内标法外标法内标物与待测物相似，且均出峰不需要 标准曲线需要，可两点需要，需多点 优点定量准确操作简便 缺点不容易选择内标物；操作精度高与标准品严格相同的操作条件 2、在《食品中维生素A和维生素E的测定》中采用了内标法，内标物为苯并[a]芘，另外 文献中也有使用正三十二烷及十六酸十六醇酯等。《食用植物油中维生素E组分和含量的测定高效液相色谱法》中使用的外标法，国内大多数检测维生素E的文献中都用的是外标法。根据我部门的实际情况，维生素E的检测一般用于豆油脂肪酸的日常检测和协助营销部门的发货定价，故精度要求不是非常高，而内标法每次检测需用到内标物，而内标物的成本通常偏高，因此，外标法可以满足我部门日常检测的需求。
实验一 紫外分光光度法测定维生素C片中的VC含量
实验一紫外分光光度法测定维生素C片中的V C含量 一、实验目的 1、了解紫外分光光度计的主要结构及工作原理。 2、掌握紫外分光光度计的操作方法及紫外定性定量分析方法 3．掌握紫外分光光度法测定水中维生素C含量的原理与分析条件的选择。 二、实验原理 维生素C是人体重要的维生素之一，它影响胶元蛋白的形成，参与人体多种氧化-还原反应,并且有解毒作用。人体不能自身制造Vc，所以人体必须不断地从食物中摄入Vc，通常还需储藏能维持一个月左右的Vc。缺乏时会产生坏血病，故又称抗坏血酸。 维生素C属水溶性维生素，分子式C6H8O6。分子结构中具有二烯醇结构，其结构如下： 它易溶于水，微溶于乙醇，不溶于氯仿或乙醚。分子中的二烯醇基具极强的还原性，性质活泼，易被氧化为二酮基而成为脱氢抗坏血酸。维生素 C分子结构中有共轭双键，固在紫外光区有较强的吸收。 根据维生素C 在稀盐酸溶液中，Vc吸收曲线比较稳定，在最大吸收波长处，其吸收值A的大小与维生素C的浓度c的大小成正比，符合郎伯—比尔定律：
A=εbc 其中A为吸收度；c为试样中维生素C的浓度，mol·L-1；b为吸收池厚度，cm；ε为摩尔吸收系数，L·mol-1·cm-1。若在最大吸收波长下，首先绘制出维生素C 在最大吸收波长下的标准曲线，然后在相同条件下测定出吸光度A，由测得的吸光度A在标准曲线上查得浓度,换算为药品中含量(mg/片)。。 三、实验仪器与试剂 1．仪器TU1810型紫外分光光度计。电子天平1台，研钵1个，50mL容量瓶7只和500mL容量瓶1只 , 10mL移液管2支，100 mL、1000 mL烧杯2只。 2．试剂维生素C标准品(抗坏血酸)，市售维生素C含片（100mg/片），冰醋酸，蒸馏水。 四、实验步骤 1. 配制维生素C标准贮备液500mL(浓度约为1.5×10-4m ol/L): 称取约0.0132g维生素C标准品于100mL的烧杯中，用超声波助溶后定容于500mL容量瓶中，摇匀，配成贮备液。 2. 配制标准系列： 分别吸取上述贮备液1.00、2.00、4.00、8.00、16.00mL于50mL容量瓶中，用蒸馏水定容。 3. 确定最大吸收 以蒸馏水为参比，在320～220nm范围内测出维生素C的吸收光谱，并确定最大吸收波长。 4. 绘制标准曲线 λ处分别测出吸光度，并绘制以蒸馏水为参比，用上述标准系列溶液在 max 标准曲线。 5．样品测定 取3片Vc片剂研细,准确称取0.02g于100mL烧杯中,以去离子水稀释至 λ处测吸光度。 500mL。移取样品溶液5.00mL于50mL容量瓶中,定容。在 max 五、实验结果和讨论
维生素E测定方法
MM_FS_CNG_0793料添加剂维生素E粉检验规程滴定法称量法 MM_FS_CNG_0793 饲料添加剂维生素E粉 1.适用范围 本方法适用于以维生素E为原料，加入适当的吸附剂制成的维生素E粉，在饲料工业中作为维生素类饲料添加剂。 2.分子式、分子量 分子式：G1H2Q 分子量：472.75（按1983年国际原子量） 3.技术要求 3.1.外观和性状 本品为类白色或淡黄色粉末，易吸潮。 3.2.粒度 本品90%通过三号筛。 3.3.项目和指标 称取样品50g,用肉眼观察颜色，再用三号筛测定。 4.2.鉴别 4.2.1.主要试剂 无水乙醇；硝酸。 4.2.2.鉴别方法 称取样品约相当于维生素E15mg加无水乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml，摇 匀，在75C加热约15min,溶液显橙红色。 4.3.维生素E含量测定 4.3.1.主要试剂 95%乙醇； 无水乙醇； 硫酸； 二苯胺：1% （g/ml）硫酸溶液； 硫酸铈； 硫酸铈标准液：0.01mol/L。按中国药典一九八五版二部附录134页制备和 4.3.2.测定方法 称取样品约相当于维生素E 0.18g（准确至0.0002g），置于100ml量瓶中，加无水乙醇至刻度。振摇30mi n，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，准确吸取续滤液50ml，置于回流瓶中，再加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，准确吸取25ml，加乙醇20ml，水10ml，二苯胺硫酸溶液2滴，用0.01mol/L硫酸铈标准液滴定，
滴定速度以每10s 25滴为宜，至溶液由亮黄色转变为灰紫色。持续 10s ，即为 终点，并将滴定结果用空白试验校正。 433.计算和结果的表示 所含维生素E 相当于标示量的百分数X i （ %）按式⑴ 计算: (V -V 。)F O.002364 8 1OO . G K 式中：V —样品溶液消耗硫酸铈标准液的体积, V ——空白溶液消耗硫酸铈标准液的体积, F ——硫酸铈标准液浓度校正系数； 0.002364 ——滴定度（每 1ml 0.01mol/L 的 G^Q ）; 8——样品稀释倍数； G —样品重量，g ; 竺邑竺20?等) 100'100'100'100'100 丿 4.4.干燥失重的测定 4.4.1.测定方法 称取样品1g （准确至0.0002g ），置于已在105C 烘箱中干燥至恒重的 构0X 30mm 的称量瓶中，打开称量瓶瓶盖，放置 105°C 烘箱中，干燥至恒重。 4.4.2.计算和结果的表示 干燥失重％（以重量百分数表示）按式（2）计算： X 2(%^^^ 10。 .......................... ⑵ 式中：G ——干燥前的样品加称量瓶重，g ； G --- 干燥后的样品加称量瓶重，g ； G 样品重，go 5. 验收规则 5.1. 本产品应由生产厂的质量检验部门进行检验， 生产厂应保证所有出厂的产品 均符合本标准的要求，每批出厂的产品都应附有质量证明书。 5.2. 使用单位有权按照本标准规定的检验规则和试验方法对所收到的产品进行 质量检验，检验其指标是否符合本标准的要求。 5.3. 取样方法 取样需备有清洁、干燥、具有密闭性和避光性的样品瓶。瓶上贴有标签，注 明 生产厂名称、产品名称、批号及取样日期。 抽样时，应用清洁适用的抽样器。每批产品抽样2份，每份抽样量应为检验 所需样品的3倍量，装入样品瓶中，一件送化验室检验，另一件应密封保存，以 备仲裁分析用。 5.4. 如果在检验中有一项指标不符合本标准时， 应重新抽样，抽样量是第一次的 二倍，进行核验。产品重新检验结果即使只有一项指标不符合标准时， 则整批不 能验收。 5.5. 如供需双方对产品质量发生异议时， 可由双方协商选定仲裁单位，按本标准 的验收规定和检验方法进行仲裁检验。 6. 标志、包装、运输和贮存 X,%) (1) ml ； ml 硫酸铈标准液相当于0.002364g 维生素 E 的标示量（如
化学实验报告 实验__直接碘量法测定维生素C的含量
实 验 报 告 姓名： 班级： 同组人： 自评成绩： 项目： 直接碘量法测定维生素C 的含量 课程： 学号： 一、实验目的 1. 熟悉直接碘量法的操作步骤及注意事项。 2. 了解维生素C 的测定原理及条件。 二、实验原理 维生素C 又称抗坏血酸，其分子中的烯二醇基具有较强的还原性，能被I 2定量氧化成二酮基，所以可用直接碘量法测定其含量。反应方程式如下： O HO OH O C H OH CH 2OH + I 2O O C H HO CH 2OH + 2HI O O 在中性或碱性条件下，维生素C 易被空气中的O 2氧化而产生误差，尤其在碱性条件下，误差更大。故该滴定反应在酸性溶液中进行，以减慢副反应的速度。 注意事项： 1. I 2具有挥发性，取完后应立即盖好瓶塞。 2. 维生素C 易被空气氧化而引入误差，所以不要3份同时移取。 3. 滴定近终点时应充分振摇，并放慢滴定速度。 三、仪器和药品 仪器：分析天平，酸式滴定管(25mL ，棕色)，吸量管(2mL)，量筒(15mL 、5mL)，碘量瓶(250mL)。 试剂：维生素C 注射液(20mL : 2.5g)，I 2标准溶液(0.05mol/L)，醋酸（2mol/L ），丙酮，淀粉指示剂（1%）。 四、内容及步骤 精密量取维生素C 注射液1.6mL(约相当于维生素C0.2g)，置于250mL 碘量瓶中，加新煮沸并放冷至室温的蒸馏水15mL 与丙酮2mL ，摇匀，放置5min ，加2mol/L 醋酸4mL 与淀粉指示剂1mL ，用I 2标准溶液(0.05mol/L)滴定，至溶液显蓝色并持续30s 不褪色，即为终点。记录所消耗的I 2标准溶液的体积。平行测定3次，以上平行测定3次的算术平均值为测定结果。 五、实验结果记录与计算
实验三碘量法测定维生素C含量(精)
实验三碘量法测定维生素 C 含量 一.实验目的 1. 学习滴定分析法的基本原理 2. 学习对蔬菜和食品中 Vc 含量进行测定的方法 二.实验原理 1. “滴定” (titration是将已知准确浓度的溶液——标准溶液通过滴定管滴加到待测溶液中的过程。待“滴定”进行到化学反应按计量关系完全作用为止,然后根据所用标准溶液的浓度和体积计算出待测物质含量的分析方法称为滴定分析法。 2. 先使用铜盐与过量的 KI 进行反应生成 CuI2 3.CuI2 不稳定随即分解为 Cu2I2 和游离的碘 4. 生成的碘和维生素 C 反应 , 直到溶液里的 VC 被碘全部氧化为止。 剩余的微量碘与淀粉指示剂生成蓝色。 三.实验试剂 (1 0.01 mol/L 硫酸铜(CuSO4 5H2O (2 30% KI 溶液; (3 1%可溶性淀粉指示剂(m/V (4偏磷酸 -醋酸溶液 四.实验操作步骤 1. 称取 40g 菜花(可分 2-3次研磨 ,加少量石英砂及少量偏磷酸 -醋酸研成匀浆,加偏磷酸 -醋酸定容到 100ml ,颠倒混匀(两个组
做一份 ; 2. 倒入 4个 10ml 离心管中,两两配平后, 8000rpm 离心 5min (每组两个离心管 ; 3. 将上清倒入干净的三角瓶中,待用(此为样品液 ; 4. 吸取 5ml 偏磷酸 -醋酸 , 加 10mL30%KI溶液。再加 10滴淀粉指示剂溶液。随即用标准硫酸铜溶液 (0.01mol/L进行滴定, 边滴定边振摇,直至显示出蓝色(或红棕色 ,且稳定 3sec 不退,记录滴定量 V0(此为空白对照,注意:会很快变色,要逐滴加入 ; 5. 精确吸取 5mL 样品溶液于 100mL 三角瓶中,加 10mL30%KI溶液。再加 10滴淀粉指示剂溶液。随即用标准硫酸铜溶液 (0.01mol/L进行滴定。边滴定边振摇, 直至显示出蓝色 (或红棕色 , 且稳定 3sec 不退,记录滴定量 V1(此为样品值。 6 .计算: L-抗坏血酸含量 (mg/每份 =V ×c V:(V1-V0标准硫酸铜毫升数 c :0.88, 即 1ml0.01mol/l标准硫酸铜溶液相当于 0.88mg 抗坏血酸。五.实验结果 计算 L-抗坏血酸含量 =(mg/100g 实验数据:空白试验消耗的标准硫酸铜 V0=0.1ml 样品溶液消耗的标准硫酸铜 V1=1.2ml L-抗坏血酸含量 =(V1-V0 *C*20*100/40 =(1.2-0.1ml*0.88mg/ml*20*100/40 =48.4(mg/100mg 六.结果讨论
维生素A和维生素E的测定方法
xxA和xxE的测定方法 （HPLC）xx教授等 高效液相色谱法 最小检出量分别为VA：0.8ng；α-E：91.8ng；γ-E：36.6ng；δ-E：20.6ng。 1.原理 食物中的维生素A及维生素E经皂化提取以后，将其不可皂化的部分提取到有机溶剂中。用HPLC法测定维生素A及维生素E的含量。 2.适用范围 GB12388-90本法适用于各种食物和饲料的测定 3.仪器 （1）高压液相色谱仪（带紫外检测器） （2）六孔恒温水浴锅 （3）旋转蒸发器 （4）xx氮气 （5）高速离心机 4.试剂 本实验所用试剂皆为分析纯，所用水皆为蒸馏水 4.1无水乙醇：重蒸，不含有醛类物质 检查方法：取2ml银氨溶液于试管中，加入少量乙醇，摇匀，再加入10%氢氧化钠溶液，加热，放置冷却后，若有银镜反应则表示乙醇中有醛。
脱醛方法：取2g硝酸银溶于少量水中。取4g氢氧化钠溶于温乙醇中。将两者倾入1L乙醇中，振摇后，放置暗处两天（不时摇动，促进反应），经过滤，置蒸馏瓶蒸馏，弃去初蒸出的50ml。当乙醇中： 4.2 10%抗坏血酸溶液（Vc）W/V 临用前配制 4.3 50%氢氧化钾溶液（KOH）W/V 4.4无水乙醚重蒸，不含过氧化物 4.4.1过氧化物检查方法：用5ml乙醚加1ml10%碘化钾溶液，振摇1min，如有过氧化物则放出游离碘，水层呈黄色或加4滴0.5%淀粉液，水层呈蓝色。该乙醚需处理后使用。 4.4.2去除过氧化物的方法：重蒸乙醚时，瓶中放入铁丝或铁末少许。弃去10%初馏液和10%残馏液。4.5 pH 1-14试纸 4.6无水硫酸钠Na2SO4 4.7甲醇色谱纯或分析纯重蒸后使用 4.8重蒸水蒸馏水中加入少量高锰酸钾重蒸后使用 4.9苯并〔e〕芘标准液称取苯并〔e〕芘（纯度98%），用脱醛乙醇配制成1ml相当于5μg苯并〔e〕芘的内标溶液。 4.10维生素A标准液视黄醇（纯度85% Sigma公司）用脱醛乙醇溶解维生素A标准品，使其浓度大约为1ml相当于1mg视黄醇。临用前用紫外分光光度法标定其准确浓度。维生素E标准液α-生育酚（纯度95% Sigma公司），δ-生育酚（纯度95% Sigma公司），δ-生育酚（纯度95% Sigma公司）。用脱醛乙醇分别溶解以上三种维生素E标准品，使其浓度大约为1ml相当于1mg。临用前用紫外分光光度法分别标定此三种维生素E的准确浓度。 5.操作步骤 本实验需避光操作
抗坏血酸(维生素C)的测定方法
抗坏血酸（维生素C）的测定方法（1） 在测定维生素C的国标方法中，荧光法为测定食物中维生素C含量的第一标准方法，2、4－二硝基苯肼法作为第二法。 一、荧光法 1．原理 样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后，与邻苯二胺（OPDA）反应生成具有荧光的喹喔啉（quinoxaline）,其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比，以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。 脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反应，以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰。本方法的最小检出限为0.022 g/ml。 2．适用范围 GB12392-90 本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定 3．仪器 3．1．实验室常用设备。 3．2．荧光分光光度计或具有350nm及430nm波长的荧光计。 3．3．打碎机。 4．试剂 本实验用水均为蒸馏水，试剂不加说明均为分析纯试剂。 （1）偏磷酸－乙酸液：称取15g偏磷酸，加入40ml冰乙酸及250ml水，搅拌，放置过夜使之逐渐溶解，加水至500ml。4℃冰箱可保存7～10天。 （2）0.15 mol/L硫酸：取10ml硫酸，小心加入水中，再加水稀释至1200ml。 （3）偏磷酸－乙酸－硫酸液：以0.15mol/L硫酸液为稀释液，其余同4.1.配制。 （4）50％乙酸钠溶液：称取500g乙酸钠（CH3COONa·3H2O），加水至1000ml。 （5）硼酸-乙酸钠溶液：称取3g硼酸，溶于100ml乙酸钠溶液（4.4）中。临用前配制。（6）邻苯二胺溶液：称取20mg邻苯二胺，于临用前用水稀释至100ml。 （7） 0.04%百里酚蓝指示剂溶液：称取0.1g百里酚蓝，加0.02mol/L氢氧化钠溶液，在玻璃研钵中研磨至溶解，氢氧化钠的用量约为10.75ml，磨溶后用水稀释至250ml。 变色范围：pH=1.2 红色 pH=2.8 黄色 pH＞4.0 兰色 （8）活性炭的活化：加200g炭粉于1L 1+9盐酸中，加热回流1~2h，过滤，用水洗至滤液中无铁离子为止，置于110~120℃烘箱中干燥，备用。 （9）标准 抗坏血酸标准溶液（1mg/ml）：准确称取50mg抗坏血酸，用溶液（4.1）溶于50ml容量瓶中，并稀释至刻度。 抗坏血酸标准使用液（100μg/ml）: 取10ml抗坏血酸标准液，用偏磷酸-乙酸溶液稀释至100ml。定容前试pH值，如其pH＞2.2时，则应用溶液（4.3）稀释。 标准曲线的制备：取下述"标准"溶液（抗坏血酸含量10μg/ml）0.5、1.0、1.5和2.0ml 标准系列，取双份分别置于10ml带盖试管中，再用水补充至2.0ml。 5.操作步骤 5.1 样品制备 全部实验过程应避光。 称取100g鲜样，加100g偏磷酸-乙酸溶液，倒入打碎机内打成匀浆，用百里酚蓝指示剂调试匀浆酸碱度。如呈红色，即可用偏磷酸-乙酸溶液稀释，若呈黄色或兰色，则用偏磷
维生素C的鉴别试验
维生素C 的鉴别试验、含量测定 041410122王磊 实验目的： 分析维生素c 性质，并分析其鉴别和含量测定方法。 药物简介： 生素C 即L-抗坏血酸：一般动物都可以利用体内葡萄糖代谢途径来合成维生素C 。但人类、猿猴、天竺鼠及一些鸟类、鱼类无法自行合成维生素C ，需通过食物来供应身体所需。因此，维生素C 是一种必需的营养素。维生素Ｃ极易受到热、光和氧的破坏。 一、维生素C 的性状检测 本品为白色结晶或结晶性粉末；无臭，味酸；久置色渐变微黄；水溶液显酸性反应。本品在水中易溶，在乙醇中微溶，在三氯甲烷或乙醚中不溶。 熔点：本品的熔点为190~192℃，熔融时同时分解。 比旋度：取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml 中约含0.10g 的溶液，在25℃时，依法测定，比旋度为+20.5°至+21.5°。 二、维生素C 的鉴别试验 （1）方法 取本品0.2g ，加水10ml 溶解后，取溶液5ml ，加硝酸银试液0.5ml ，即生成金属银的黑色沉淀。 （2）方法 取本品0.2g ，加水10ml 溶解后，取溶液5ml ，加二氯靛酚钠试液1～2滴，试液的颜色即消失。 实验原理： 1.与硝酸银反应的原理 维生素C 与硝酸银发生氧化还原反应，产生黑色金属银沉淀。 3 3 2.与2,6-二氯靛酚反应的原理 2,6-二氯靛酚是一种染料，其氧化型在酸性介质中呈玫瑰红色，在碱性介质中显蓝色，与维生素C 反应后生成还原型无色的酚亚胺。反应式如下: 6 5 43 21 O OH HO O C OH H CH 2OH
O H Cl Cl N O O H Cl Cl H OH 三、维生素C 的杂质检查 杂质检查项目包括溶液的澄清度与颜色、炽灼残渣、铁、 铜、重金属、细菌内毒素。 1.溶液的澄清度与颜色 方法：取维生素C 供试品3.0g ，加水15ml ，振摇使溶解，溶液应澄清无色；如显色，将溶液经4号垂熔玻璃漏斗滤过，取滤液，照紫外-可见分光光度法，在420nm 的波长处测定吸光度，不得过0.03。 维生素C 及其制剂在贮存过程中易氧化变色，且颜色随贮存时间的延长而逐渐加深。《中国药典》规定采用测定吸光度的办法控制有色杂质的限量。 2.铁盐、铜盐的检查 方法：（1）铁的检查（原子分光光度法） 供试品溶液的配制：取本品5.0g 两份，分别置25ml 量瓶中，一份中加0.1mol/L 硝酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液(B)； 对照溶液的配制：另一份中加标准铁溶液（精密称取硫酸铁铵863mg ，置1000ml 量瓶中，加1mol/L 硫酸溶液25ml ，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml ，置100ml 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀）1.0ml ，加0.1mol/L 硝酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液(A)。测定方法及判定标准：照原子吸收分光光度法，在248.3nm 的波长处分别测定，应符合规定[若对照溶液(A)和供试品溶液(B)测得吸光度分别为a 和b ，则要求b ﹤（a-b ）]。 （2）铜的检测方法与铁相同。 由于微量的铁盐和铜盐会加速维生素C 的氧化、分解，《中国药典》规定采用原子吸收分光光度法进行铁盐和铜盐的检查。 四、维生素C 的含量测定(碘量法) 1.方法 取本品约0.2g ，精密称定，加新沸过的冷水100ml 与稀醋酸10ml 使溶解，加淀