淡紫拟青霉丝氨酸蛋白酶基因克隆表达及抗血清的制备
淡紫拟青霉γ-actin基因cDNA全长的克隆与序列分析
利用 同源克隆的策略 对淡紫拟 青霉 （ ａｃｌ ｃｓ ｉ ｃ ｕ ） －ｃｉ 因进行 克隆 ， 得 了淡紫拟青 霉 ７ａ— Ｐ ｅｉ ｍｙ ｅ ｌ ａｉ ｓ ７ａｔ ｏ ｌ ｎ ｎ基 获 －ｃ
ｔ ｉ 因 ｃ ＮＡ 全 长 。该 基 因 ｃ ｎ基 Ｄ ＤＮＡ 的 ＯＲ Ｆ长 １１ ８ｂ ， ２ ｐ 编码 ３ ５个 氨 基 酸 ， 有 ａｔ ７ 具 ｃｉ 因的 保 守特 征 序 列 。 由该 ｎ基 基 因推 导 的氨 基 酸序 列 与 多 个子 囊 茵 的 ７ａｔ －ｃｉ 白序 列 相 似 性 达 ９ 以上 。 系统 进 化 树 显 示其 系统 发 育 关 系与 ｎ蛋 ８
ｒ ｇ ｏ ｓｏ ｃ ｉ ｅ ｅａ ｄ ｈ ｄ ｈ ｇ ｍｉ ｏ ａ ｉ ｅ ｕ ｎ ｅ ｉ ｅ ｔ ｙ ｗｉ ｔ ｅ ，ａ ｔｎ ｇ ｎ ｅ ｕ ｎ ｅ ｒ ｍ ｏ ｅａ ｃ — ｅ ｉ ｎ ｆａ ｔｎ ｇ ｎ ｎ ａ ｉ ｈ ａ ｎ ｃｄ ｓ ｑ ｅ ｃ ｎ ｉ ｔ ｏ ｈ ｒ） ｃ ｉ ｅ ｅ ｓ ｑ ｅ ｃ ｓ ｏ ｓ ｍ ｓ ｏ ｄ ｔ ｈ 一 ｆ ｍｙ ｅ ｅ ．Ｔｈ ｉ ｅ ｔｔ ｓｗｅ ｅ ｍ ｏ ｅ ｔ ａ ８ ．Ｔｈ ｈ ｌ ｇ ｎ ｔｃｔ ｅ ａ ｅ ｎ ） ａ ｔｎ ｇ ｎ ｕ ｐ ｒｅ ｒ ｄ ｔｏ ａ ｃｔｓ ｅ ｒｉ ｎ ｉｉ ｒ ｒ ｈ ｎ ９ ％ ｄ ｅ ｅ ｐ ｙ ｏ ｅ ｅ ｉ ｒ ｅ ｂ ｓ ｄ ｏ ， ｃ ｉ ｅ ｅ ｓ ｐ ｏ ｔ ｄ ｔ ａ ｉ ｎ ｌ 一 ｉ
ｂ ｒ ｎ ｌｔ ｄ ｉ ｔ ｏ ｙ ｅ ｔ ｅ ｏ ７ ｍｉ ｏ ａ ｉ ｓ ｒ ｓ ｕ ｓ ｅ ｔ ａ ｓａ ｅ ｎ ｏ ａ ｐ ｌ ｐ ｐ ｉ ｆ ３ ５ ａ ｎ ｃ ｄ ｅ ｉ ｅ ．Ｔｈ ｅ ｕ ｅ ｒ ｔ ｉ ｏ ｔ ｉ ｅ ｉ ｈ ｙ ｃ ｎ ｅ ｖ ｄ ｄ ｄ ｅ ｄ ｄ ｃ ｄ ｐ ｏ ｅ ｎ ｃ ｎ ａｎ ｄ ｈ ｇ ｌ ｏ ｓ ｒ ｅ
抗青霉素单克隆抗体
抗青霉素单克隆抗体的制备及检测摘要: 将半抗原青霉素和载体蛋白偶联后免疫BALB/c小鼠, 应用杂交瘤技术建立稳定分泌抗青霉素mAb的杂交瘤细胞株。
常规制备腹水, 用辛酸硫酸铵法纯化, 并对纯化的mAb进行特异性鉴定，成功地制备了抗青霉素的mAb。
青霉素因其高效、低毒的特点在临床上被广泛应用, 但其结构中的β内酰胺环很不稳定, 在溶液状态尤其是碱性条件下易开环与蛋白、多肽的氨基发生亲核反应生成稳定的青霉噻唑蛋白, 形成临床主要的过敏原。
青霉素类抗生素的过敏反应发生率居各种药物之首[1], 青霉素不纯物0.01 μg即可使青霉素高度敏感者产生严重的过敏反应[2]。
生理条件下青霉素开环后大约95%与蛋白质共价结合形成青霉噻唑基（benzyl penicilloyl, BPO）主要抗原决定簇。
理论上连接有两个青霉噻唑基的蛋白、多肽就可能与IgE 分子形成桥式结构从而引发I型超敏反应。
青霉素的这种不稳定性使得在制备过程中添加有青霉素的生物制品以及食品中都可能残留有青霉噻唑蛋白, 而目前的检测方法通常是针对游离的有抗菌活性的青霉素, 尚无专门针对具有免疫原性且有潜在致敏危险的青霉噻唑蛋白的检测方法。
功能：采用杂交瘤技术制备了稳定分泌抗青霉素mAb的杂交瘤细胞, 产生的抗体对青霉噻唑蛋白特异性强、灵敏度高, 有望对药品、食品中可能残留的青霉噻唑蛋白进行痕量检测。
1 材料和方法[3]1.1 材料青霉素钾标准品,相对分子质量（Mr）为372.49, 纯度为99.9%; 牛血清白蛋白（BSA）、卵清蛋白（OA）、多聚赖氨酸（PolyLLysine, PLL）; DMEM培养液, 新生牛血清; HAT、 HT、弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂、 Ig亚类试剂盒, 聚乙二醇（PEG）4000, BCA蛋白浓度测定试剂盒。
小鼠骨髓瘤细胞, BALB/c 雌鼠（6~8周龄）。
1.2 方法1.2.1 完全抗原的制备①免疫原的制备: 将25 mg青霉素钾溶于pH9.6 Na2CO3缓冲液中, 充分混匀后加入5 mg牛血清白蛋白BSA（或卵清蛋白OA）, 调节pH值至11, 37℃搅拌过夜, 在0.01 mol/L PBS中充分透析至透析液中不再检出有抑菌活性。
梅毒螺旋体青霉素结合蛋白的克隆及表达
ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｐｒｅｐａｒｉｎｇ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｖａｃｃｉｎｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｏｆ ＴｐＮ４７ ｗａｓ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｂｙ ＰＣＲ ａｎｄ。ａｆｔｅｒ Ｔ—Ａ ｃｌｏｎｉｎｇ，ｉｎ－
ＴｐＮ４７枷ｇ阴．Ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｅａｅｄ ｉｎｔｏ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｐＥＴ一２２ｂ．Ｔｈｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｌａｓＩｎｉｄ Ｗａｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＩＰＴＧ ｔｏ ｅｘｐｒｅｓｓ
分别于ｌ、２、３和４ｈ收集培养菌液各ｌｍｌ于离心管中。４℃ｒｍｐ 离心２ｍｉｎ，弃上清，收集培养体经超声波破碎菌体后，于４℃１ ０００ｒｍｐ离心１５ｍｉｎ，分别取少量上清和沉淀加入等体积２×加 样缓冲液，１００℃煮沸５ｒａｉｎ，取１５出进行ＳＤＳ—ＰＡＧＥ电泳检测 表达产物。 １．２．７ 重组体表达产物检测 取诱导表达的大肠杆菌各 ３０ｐ．ｇ（湿重），加入９０一裂解液，０．２４山５０ｍｍｏｌ／ＬＰＭＳＦ和２． ４止溶菌酶（１０ｍｅ＂ｍ１），不时进行搅拌２０ｒａｉｎ，再边搅拌边加入 １２０１上ｇ去氧胆酸，置３７℃并不时进行搅拌，至裂解液变粘稠时， 加入ｏ．６１出ＤＮＡ酶Ｉ（１ｍｅ＇ｍ１），置于室温直到裂解液不粘稠 时，４。Ｃ １２ ０００９离心１５ｍｉｎ，去上清，沉淀重悬于９倍体积含０． ５％ＴｒｉｔｉｏｎＸ一１００和１０ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ（ｐＩ－１８．０）的裂解液中，室 温放置５ｒａｉｎ，再４。Ｃ １２ ０００９离心１５ｍｉｎ，吸出上清备用。再将 沉淀重悬于２０一水中，一２０。Ｃ保存备用。取上清和沉淀悬液 各７．５一加入７．５—２×ＳＤＳ加样缓冲液，１０００ｃ煮沸５ｍｉｎ，取 １５止ＳＤＳ—ＰＡＧＥ电泳检测表达产物。 ２结果 ２．１目的基因的克隆和鉴定将ＰＣＲ产物经ｌ％琼脂糖凝胶 电泳，在ｌ ３００ｂｐ左右位置处可见一条清晰的特异性条带，与 预期片段大小（１ ３５０ｂｐ）相符，将重组质粒ｐＥＴＪＫＭ／ＴｐＮ４７经 ＢａｍＨ Ｉ酶和Ｈｉｎｄ １１Ｉ双酶切后得到２个片段，其大小分别约为 ５．４ｋｂ和１．３５ｋｂ与预期一致（图１）。序列测定结果与基因库 报到的序列完全一致。 ２．２重组质粒ＴｐＮ４７一ｐＥＴＪＫＭ在宿主菌Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＩ－ＩＳａ中，经 ＩＰＴＧ诱导表达出一分子量为４７ＫＤ的蛋白质，见图２。
一种淡紫拟青霉用液体培养基及淡紫拟青霉菌剂制备方法[发明专利]
![一种淡紫拟青霉用液体培养基及淡紫拟青霉菌剂制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/39dbb406effdc8d376eeaeaad1f34693dbef1063.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202110143352.2(22)申请日 2021.02.02(71)申请人 吉林农业大学地址 130000 吉林省长春市新城大街2888号(72)发明人 于晓斌 程志强 高峰 赵春莉 刘文丛 杨桂霞 (74)专利代理机构 吉林省中玖专利代理有限公司 22219代理人 姜姗姗(51)Int.Cl.C12N 1/14(2006.01)C12N 3/00(2006.01)C12R 1/79(2006.01)(54)发明名称一种淡紫拟青霉用液体培养基及淡紫拟青霉菌剂制备方法(57)摘要本发明提供了一种淡紫拟青霉用液体培养基及淡紫拟青霉菌剂制备方法，是将菌糠、水、氯化锌和硝酸钠混匀后经高压蒸汽灭菌得到，每克菌糠中加入水6‑8毫升，每克菌糠中加入氯化锌0.04‑0.06g ，每克菌糠中加入硝酸钠0.08‑0.12g，再将淡紫拟青霉接种液接入液体培养基中，在27～31℃培养4～6d后收获淡紫拟青霉菌剂。
本发明原材料为农业废料，经济易得，培养方法操作简单，生产成本较低，产孢量高。
权利要求书1页 说明书4页CN 112680366 A 2021.04.20C N 112680366A1.一种淡紫拟青霉用液体培养基，其特征在于：是将菌糠、水、氯化锌和硝酸钠混匀后经高压蒸汽灭菌得到，每克菌糠中加入水6‑8毫升，每克菌糠中加入氯化锌0.04‑0.06g，每克菌糠中加入硝酸钠0.08‑0.12g。
2.如权利要求1所述的一种淡紫拟青霉用液体培养基，其特征在于：所述的菌糠为以木屑为基质的木耳菌糠、平菇菌糠、滑子蘑菌糠。
3.如权利要求1所述的一种淡紫拟青霉用液体培养基，其特征在于：所述的每克菌糠中加入水6毫升，每克菌糠中加入氯化锌0.05g，每克菌糠中加入硝酸钠0.10g。
4.如权利要求1所述的一种淡紫拟青霉用液体培养基，其特征在于：所述的高压蒸汽温度为121℃，水蒸汽压力为0.11MPa。
淡紫拟青霉新菌株及其制备方法和应用[发明专利]
![淡紫拟青霉新菌株及其制备方法和应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/74c8fd2cbb4cf7ec4bfed0e1.png)
专利名称：淡紫拟青霉新菌株及其制备方法和应用专利类型：发明专利
发明人：康洪波,孙洪录
申请号：CN201710589111.4
申请日：20170719
公开号：CN107488592A
公开日：
20171219
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开一种淡紫拟青霉新菌株及其制备方法和应用，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏日期为2016年12月28日，保藏编号为CGMCC No.13379。
本发明包括以下制备步骤：制备淡紫拟青霉种子液；将种子液接入到固体增殖培养基中在无菌有氧条件下进行增殖培养，培养温度设定为25～45摄氏度，培养时间设定为5～10天；将增殖培养后的培养基进行干燥，得到淡紫拟青霉原菌菌剂。
本发明提供的淡紫拟青霉新菌株应用于农作物线虫防治。
该淡紫拟青霉新菌株具有良好的杀灭线虫卵的能力，经过测定，其发酵物中几丁质酶活性较高，可用于防治作物根部线虫病害。
申请人：聊城市福沃嘉生物肥料有限公司
地址：252400 山东省聊城市鲁西经济开发区莘县莘亭办事处北安街66号
国籍：CN
代理机构：北京献智知识产权代理事务所(特殊普通合伙)
更多信息请下载全文后查看。
用啤酒厂废液生产淡紫拟青霉菌剂的方法[发明专利]
![用啤酒厂废液生产淡紫拟青霉菌剂的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/dde7911b700abb68a882fbc8.png)
专利名称：用啤酒厂废液生产淡紫拟青霉菌剂的方法专利类型：发明专利
发明人：潘沧桑,林竞
申请号：CN95118468.7
申请日：19951027
公开号：CN1149393A
公开日：
19970514
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一种用啤酒厂废料生产杀虫剂的方法，将纯化后的淡紫拟青霉菌种接种在真菌培养基斜面上，经培养后再接种到由麦芽槽，废啤酒酵母及麦芽槽榨出汁配成的培养液中，经振荡培养再吸附到麦芽槽与废酵母膏组成的固体培养基上，在15～30℃下培养5～15天，制成的淡紫拟青霉菌剂作为一种杀虫剂，可用于许多农作物的线虫防治，能有效降低虫口密度，提高作物产量。
且用啤酒厂的废料制造该菌剂，既可使废料资源化，又减少环境污染。
申请人：厦门大学
地址：361005 福建省厦门市思明南路422号
国籍：CN
代理机构：厦门大学专利代理事务所
更多信息请下载全文后查看。
一种稳定表达丝氨酸蛋白酶的单克隆细胞株及其制备方法及含该细胞
专利名称：一种稳定表达丝氨酸蛋白酶的单克隆细胞株及其制备方法及含该细胞株的试剂盒和应用
专利类型：发明专利
发明人：周佳彬,郑杰,米梦柔,候野,张凌云,陈晓娟
申请号：CN201910256904.3
申请日：20190401
公开号：CN110616216A
公开日：
20191227
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种稳定表达丝氨酸蛋白酶基因的单克隆细胞株及其制备方法及含该细胞株的试剂盒和应用。
将稳定表达丝氨酸蛋白酶基因的单克隆细胞株在培养板中培养，将细胞培养液去除；猪瘟病毒原液倍比稀释并将稀释后的病毒液加入去除细胞培养液的培养板中；继续培养通过CPE 的现象对猪瘟病毒TCID50进行判定，TCID50的计算方法按照Reed‑Muench两氏法进行计算。
本发明用于猪瘟病毒的直观检测，利用该检测试剂盒检测猪瘟病毒的TCID50，不需要荧光显微镜和猪瘟检测抗体，猪瘟病毒TCID50的结果判定简单且实验重复性好等优点。
申请人：北京鼎持生物技术有限公司,珠海鼎安生物制品有限公司
地址：100176 北京市通州区经海路科创14街11号院4号楼3层
国籍：CN
代理机构：北京方安思达知识产权代理有限公司
更多信息请下载全文后查看。
淡紫拟青霉多功能生防的分子基础与相关菌的功能评价的开题报告
淡紫拟青霉多功能生防的分子基础与相关菌的功能评价的开题报告一、选题背景近年来，生物防治技术在农业生产中得到广泛应用。
其中，拟青霉属是一种重要的生防菌，能对各种植物的病原菌和病害进行生物防治。
淡紫拟青霉（Trichoderma asperellum）是拟青霉属中一种重要的菌种，具有多重功能，如增强植物免疫力、促进植物生长和提高土壤肥力等。
淡紫拟青霉多功能生防的分子基础是许多国内外科研工作者一直关注的研究方向。
然而，随着技术的不断发展，单一的分子分析已经难以满足研究的需要。
因此，本研究计划通过集成多种分子分析技术，对淡紫拟青霉多功能生防的分子基础进行深入探究，并评价相关菌的功能。
二、研究计划本研究计划分为以下几个步骤：1. 多种分子分析技术的集成本研究将采用多种分子分析技术，如代谢组分析、基因组分析、蛋白质组分析和转录组分析等，对淡紫拟青霉进行全面深入的研究。
2. 分子基础的解析利用多种分析技术，分别从代谢、基因、蛋白和转录层面，对淡紫拟青霉多功能生防的分子基础进行解析。
研究关键代谢通路、基因表达模式、蛋白质组成和转录调控机制等。
3. 相关菌的功能评价通过评价淡紫拟青霉的功能特性，如对植物病原菌的防治效果、对植物生长的促进作用、对土壤微生物群落的影响等，从而评价相关菌的功能。
三、研究意义和预期成果本研究的意义在于深入探究淡紫拟青霉多功能生防的分子基础，并评价相关菌的功能。
一方面可以为淡紫拟青霉在生物防治中的应用提供科学依据；另一方面，对拟青霉属及其他微生物多功能生防的分子基础的研究也将有助于推进生物防治技术的发展。
预期成果方面，本研究将得出淡紫拟青霉多功能生防的分子基础，揭示其对植物和土壤微生物的功能特性，进而评价其在生物防治中的应用前景。
同时，本研究还将提供淡紫拟青霉菌株资源，为深入研究其在农业生产中的应用提供基础支持。
产黄青霉谷胱甘肽转移酶基因的克隆、表达与功能研究的开题报告
产黄青霉谷胱甘肽转移酶基因的克隆、表达与功能研究的开题报告一、研究背景与意义青霉素是一种广泛使用的β内酰胺类抗生素，但它的使用已受到耐药性的限制。
产黄青霉是一种分泌黄色青霉素和绿色环霉素的真菌，其抗生素类似于青霉素。
研究其代谢途径和代谢产物有助于更好地开发和利用这些药物。
谷胱甘肽转移酶（GSMT）是一种关键酶，能够促进代谢途径中的废弃物清除，从而维持许多细胞的正常功能。
目前，关于产黄青霉GSMT的研究仍然很有限。
因此，克隆、表达和功能研究产黄青霉GSMT基因，对更好地理解代谢途径和代谢产物，以及开发更有效的抗生素等具有重要的意义。
二、研究内容本研究拟从产黄青霉的基因组中克隆GSMT基因，并进行表达和功能研究。
主要内容如下：1. 从产黄青霉中获取GSMT基因序列；2. 克隆和构建GSMT表达载体；3. 表达GSMT基因，并进行纯化；4. 鉴定纯化的GSMT酶活性和酶动力学特性；5. 探究GSMT在代谢途径中的作用。
三、研究方法1. 克隆GSMT基因：从产黄青霉中提取总RNA，逆转录成cDNA，利用PCR扩增GSMT基因；2. 构建GSMT表达载体：利用PCR扩增GSMT基因，将其克隆到表达载体中，并通过序列检测确认正确性；3. 表达和纯化GSMT蛋白：将GSMT载体转化到大肠杆菌中，诱导表达后将其纯化；4. 酶活性测定和酶动力学特性分析：测定纯化GSMT的酶活性和酶动力学特性，包括pH值和温度对酶活性的影响，最适反应条件，酶动力学参数等；5. 代谢途径的作用探究：研究GSMT在产黄青霉代谢途径中的作用。
四、预期结果1. 从产黄青霉中克隆GSMT基因，构建表达载体；2. 成功表达和纯化GSMT蛋白；3. 鉴定纯化的GSMT酶活性和酶动力学特性；4. 探究GSMT在代谢途径中的作用，为产黄青霉代谢途径和代谢产物研究提供新的理解和线索；5. 丰富和完善产黄青霉的基因组学和代谢研究，对进一步探索药物代谢途径和开发更有效抗生素具有重要的意义。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
ｗｓ Ｉ】 ． ｈ ｐｅ ｅ ｅｉ ｒｅ ａ ｓ ｅ ｅ ｅａ Ⅱ ｔｅ ｈ ｈｐ ｐ ｅ ｅ ｎｉｅ ｌｔｏ ｈｉ ｍｚ ｇ ａ ｉ ［ｅｕ］ ａ ａａ 】 １ｅ ｘｒ ｓ ｓ ｃ ｌ ｏ ｉ ｂ ｎ ｒ ｕ ｄｔ ｐ ｐｒ １ａ ｉ ｎｗｉ ｒ ａ ｄｔ ｔＳＭｌｈ ， ｅ ｓ ｄ ｐ ａ ｐ ｔｎ ｒ ｄ ｗ ｅ ｓ ｏ ｒ ｅ ｅ ｎｇ ｃ ｅ ｒ ｈ ａ － ｌ ｌ ｒ￣ 咖 ｉｎ ｂ ｔ Ｒ ｓ ｔ ｉ ｒｂ ． ｌ
维普资讯
安徽农业科学 ． ｕ ａ ｏＡ ｈｉ ．ｃ ２０ 。 （ ）１７３ １７４ １ １ Ｊ ｒ ｌ ｆ ｎ Ｉ Ａ Ｓｉ ０ ８３ ２ ： ８ — ０ ８ 。 ８４ ｏｎ ｌ ． ６ ５ ０ ０
责任编辑
孙红忠
责任校对
况玲玲
淡紫 拟青 霉 丝 氨酸 蛋 白酶基 因克 隆 表达 及 抗 血 清 的 制备
Ｃｌｎｎ ｎ ｐ ｅｓｏ ｆＰＬ ｅ ＇ ｏ ｉｇ ａ ｄ Ｅｘ ｒ ｓｉｎ ｏ ｇｎｅｆｍｎ ｅ ｉ ｍｙ ｅ ｉ ｃｎ ｓ ａ ｄ ｔ ｔｓｒ ｎ Ｐ ｅ ａ ａｉｎ ｉ Ｐａ ｃｌ ｏ ｃ ｓｌａ ｉｕ ｎ Ｉｓ Ａｎ ｉｅｍ ｒ ｐ ｒ ｔ ｌ ｏ
ＪＡ Ｉ Ｃ ｉａ ｇｅ ｌ （ ｅａｔ ｎ ｆＬｆ Ｓ ｉ ｃ ，Ｃ ｏｇｉｇＵ ｉｅ ｉ ｆ ｔ ａｄＳｉ ｃｓ ｈｎｑｎ ０ １０ ￣－ ｎ ｔａ ｆ Ｄ ｐｒ ｔ ｉ ｃ ｎｅ ｈｎ ｑ ｎ ｒ ｔ ｏ Ａｒ ｎ ｃｅ ｅ ，Ｃ ｏｇｉ ４ ２６ ） ｍｅ ｏ ｅ ｅ ． ｖ ｓｙ ｓ ｎ ｇ Ａ ｓ ａｔ 【 ｂ ｃｖ ］ ｈ ｒ ｏｅ ａ ｔ ｅ ｌ ｅ ｈ ｍ ｔ ｄ ｆ ｍ Ｅｃｅ ｃ ｉ ｅ ｉｏ ａｅｔ ｄ ｎ ｇ ｎ ｐｅ ｉ Ｐ ｎ ｆ ｍ ｔ ｆ ｇｓ ｂｔ ｃ ｒ Ｏ ｊ ｔ ｅ １ ｅ ｏ ｓ ｗ ｓ ｏ ｘ ｏ ｔ ｅ ｏｓ ｏ ｕ ｇ ｓｈｒ ｈ ｌｔ ｍ ｋ ｈ ｏ ￣ ｄｅ ｒ ｓ ｎ ｆ Ｌｇ ｅ ｒ ｈ ｕ ｕ ｅｉ ｐｐ ｐ ｒ ｅ ｈ ｒｓ ｉ ａｏ ｅ ｎ ａ ｘ ｓｏ ｏ ｅ ｏ ｅ ｎ ｏ Ｐｅｉｍ ｃ ｌ ｃ ｕ ｄ ｏ ａｅ ｈ ｔｅｕ ｒ ａ ｔ ｎ ［ ｅ ｏ ］ ｉｏ ｐｉｅ ｗ ｓ ｅｉ ｅ ｃ ｊ ｔ ｔ Ｌｇｎ 粕ｃ ｔ ｔ ａ — ｆ ａ ｌ ｙｅ ｉ ｉ ｓ ｎ ｔ ｍ ｋ ｔ ａ ｉ ｒ ｃｏ ｓ ｌ ｎ ａ ａ ｅ ｎｓ ｍｐ ｐｒ ｉ ． Ｍ ｔ ｄ Ａｐ ｒ ｆ ｒ ｒ ａ ｄｓ ｎｄ ｃ０ ｎ ｏ ｈ ｅａｏ ｈ ａ ｍ ｓ ｇ ａ 柑 ｇ ｅＰ ｅ ｅ ｌ ｅ ｈ ｄ ｅ ｅ ｓ ａｈ Ｔ
摘要 ［ 目的］ 索利 用大肠杆 菌进行 丝氨酸蛋 白酶 咒 基 因的克 隆与表达及 抗 血清 制备 的方 法。 ［ 探 方法 ］ 据报 道 的 ＰＪ 白基 因序 列 根 Ｉ蛋 设计 １ 引物 ， 过 Ｒ －Ｃ 对 通 ＴＰ Ｒ扩增 获得 咒 基 因片段 ， 对重组载 体进 行 构建 、 定和序列 分析 ， 鉴 用表 达的特 异蛋 白条带制备抗 原 。 免疫 家免 制备抗 血清。 ｌ 果］ 结 通过 Ｒ －Ｃ ＴＰ Ｒ扩增得 到长 约 ８０ｂ 的 Ｐ Ｊ 因片段 ， 其 克 隆到 原核表 达 载体 ｐ Ｔ２ｂ ＋） 获得 的重 组子 ｐＴ ５ ｐ ，基 将 Ｅ －２ （ 中， Ｅ－ ２ｂＰ 转化 Ｅ ｃｌＢ １Ｄ ３ ， 终浓度 为 １ ｎ ｌＬＩＩ ２－Ｌ ．ｏ Ｉ （Ｅ ）经最 ｉ ２ ￣／ ＰＧ诱导 ３ ｍ ７℃培 养 ４ｈ 获得 约 ３ ｋ ａ ， １ Ｄ 大小的 重组蛋 白。ＳＳＰ Ｇ Ｄ －Ａ Ｅ电泳分析 表 明， 该蛋 白表达量 占菌体 总蛋 白的 ６％ ， 明 该蛋 白得到 了高效表达 。用表达 的特异蛋 白条 带制备 的免 疫 家兔 制备 抗血 清 ． Ｅ ＪＡ测 ０ 说 经 ｌＳ 定效价 为 １１ ００ 结论］ ／０ ０。［ 通过基 因重组 可获得 基 因在 大肠杆 菌中的 高效表 达蛋 白， 且该蛋 白具 有较 高的免 疫活性 。 关键 词 淡 紫拟 青霉菌 ；Ｌ基 因 ； Ｐ 原核表 达 ； 清 ；Ｌ Ａ 抗血 Ｅ Ｉ Ｓ 中图分 类号 Ｑ ８ 文献标 识码 Ａ ７２ 文章 编号 ０ １ — ６ １ ０８ ２ —１ ８ — ２ ５７ ６ １（ ０ ） ２ ５ ０ ３ ０ ７
蒋 宋 力 ， 桂芳 ， ２ 黄俊生 （重 文 学 生 科 系重 ４１；重 文 学 生 化 与 境 学 ，庆４１；中 热 １ 庆 理 院 命 学 ，庆 ０ ０．庆 理 院 物 学 环 科 系ຫໍສະໝຸດ ｏ６３ 国 ． ２ ２ ６ ２ｏ．
带农业科学 院环境与植物保护研究所 ， 海南儋州 ５ １３ ） ７７ ７
ｐ ｒ ｄ．，ｌ Ｌ ｇ ｎ ｒｇ ｎ ｓｏ ｔｉｅ ｈｏ ｇ － ｃＲ ｔｏｌｉａｉｎ ａ ｄ ｔｅｒｃ ｂｎ ｎ ｅｔｒｗａ ｍＭｕ ｔ ｎ ｄ ｎｉｅ ｎ ｈ ｎ ｉ ｅｕｅ ｃ ｏｔ ｅ Ｉ ｅ Ｐ ｅ ｅｆａ ｍｅ ｔｗａ ｂａｎ ｄ ｔｒｕｈ ＲｒＰ ｌ ａｒ ｉｃ ｔ ｎ ｅｍｎ ｉａ ｔｖｃｏ ｓｃ ｆ ｏ ｈ ｃｅ ａ ｄｉｅ ｔ ｄ ａ ｄ ｔｅ ｔ ｓｑ ｎ ｅ ｄ ｉ ｆ ｓ