Elisa实验中应该注意哪些问题？
ELISA原理及操作注意事项
ELISA原理及操作注意事项ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用于检测抗体或抗原的实验技术。
其原理是将待测物（抗体或抗原）通过特定的酶标记结合物与固定在试板上的配体结合，然后用底物与酶催化出彩色或荧光产物，从而通过测量产物的光学密度或荧光信号来定量检测待测物的含量。
1.实验仪器消毒：实验前应将使用的仪器、试剂瓶和器皿进行消毒，以避免实验中的污染。
2.条件优化：不同的ELISA实验条件可能有所不同，包括涂被物、孵育温度和时间、洗涤时间等，必须根据实验需要进行条件的优化。
3.阻断剂：在ELISA实验中，通常需要加入阻断剂（例如牛血清蛋白、鱼胶等）来减少非特异性的结合。
不同的样品可能需要不同的阻断剂浓度进行优化。
4.样品处理：对于待测物的检测，样品的处理包括稀释、加入试剂、混合等步骤。
处理时要注意对待测物的保存温度、避免阳性和阴性样品污染，以及避免样品的重复冻融过程，这可能会降低样品的稳定性。
5.孵育和洗涤步骤：酶标记物与涂被物结合的步骤通常需要进行一定的孵育时间和温度。
此外，洗涤步骤是为了去除不结合的物质，洗涤次数和洗涤液的成分必须根据实验需要进行优化。
6.制备酶标荧光物：在选择酶标物时，需要确保酶的活性和稳定性，并对荧光标记物的浓度和稀释倍数进行优化。
7.底物反应：根据所选择的酶，确定底物反应的最佳时间和温度。
避免底物超过反应时间，以防止过度反应导致结果不准确。
8.光学密度或荧光信号测定：ELISA的结果通常通过测量产物的光学密度（OD）或荧光信号来定量。
在测定前，必须确保光学和荧光仪器的正常工作，并根据实验条件和要求进行仪器校准。
9.数据分析：根据实验设计和实验目的，将ELISA的结果进行统计学分析，包括计算均值、标准差、相关系数等。
总结来说，ELISA是一种常用的实验技术，其原理基于酶催化反应。
在操作ELISA时需要注意实验仪器的消毒、条件的优化、样品的处理、酶标反应的制备和测定、以及数据的分析等方面。
elisa操作过程中的注意事项
elisa操作过程中的注意事项Elisa（酶联免疫吸附试验）是一种常用的实验方法，用于检测抗体或抗原的存在和浓度水平。
在进行Elisa实验时，有一些注意事项需要遵循，以确保实验结果的准确性和可靠性。
本文将介绍Elisa操作过程中的注意事项，帮助您顺利完成实验。
实验前的准备工作非常重要。
确保所有试剂和设备都按照指示进行保存和储存，并检查它们的有效期。
此外，实验室应保持清洁整洁，并遵循良好的实验室操作规范，如佩戴实验手套和实验室外套。
在进行Elisa实验之前，需要准备样品和标准曲线。
样品的选取和处理要仔细进行，确保样品的纯度和稳定性。
如果需要进行稀释，应根据实验要求选择适当的稀释液，并按照比例进行稀释。
接下来，选择合适的酶标板进行实验。
酶标板的材质和孔数应根据实验要求进行选择。
在将样品和标准品加入酶标板孔中之前，应先进行预洗步骤。
预洗可以去除杂质和非特异性结合，从而提高实验的灵敏度和特异性。
在加入样品和标准品之前，要确保将酶标板孔标记清楚，并按照实验设计进行分组。
此外，为了避免交叉污染，每个孔要使用新的吸头或移液器头。
在加样过程中，要保持操作的准确性和稳定性，避免溅出或误操作。
加样完成后，将酶标板密封，并进行孵育步骤。
孵育温度和时间应根据实验要求进行调整。
在孵育过程中，要避免震动或移动酶标板，以免干扰反应。
此外，为了保持温度的稳定性，可以将酶标板放置在恒温箱中进行孵育。
孵育完成后，需要进行洗涤步骤。
洗涤的目的是去除非特异性结合物质，从而减少背景干扰。
洗涤缓冲液的选择和洗涤次数要根据实验要求进行调整。
洗涤过程中，要注意不要将吸头或移液器头碰到酶标板底部，以免损坏酶标板。
洗涤完成后，需要加入检测抗体或底物。
在加入检测抗体之前，要先进行适当的稀释，并确保检测抗体的纯度和活性。
加入检测抗体后，要进行二次孵育和洗涤步骤，以确保特异性结合和去除非特异性结合。
进行底物反应和读板步骤。
底物的选择要根据实验要求进行，常见的底物有TMB（3,3',5,5'-四甲基苯基二氨基联苯基三甲基苯并噻唑啉）和ABTS（2,2'-联氨基双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)）。
酶联免疫（ELISA）使用试剂盒检测过程中值得关注的问题
酶联免疫（ELISA）使用试剂盒检测过程中值得关注的问题酶联免疫（ELISA）使用试剂盒检测过程中值得关注的问题1、仪器质控为使仪器保持最佳工作状态，应建立维护和校正仪器的标准操作程序（SOP），所要控制的仪器包括移液器（加样枪）、温箱、洗板机和酶标仪。
◎移液器：ELISA加样量小（20-200μl），其准确性直接影响实验结果，利用称重法检查：低、中、高三个刻度分别吸取指示量的水，万分之一天平称重后计算吸量是否准确，一般应在±5%以内；◎恒温箱：经常检查恒温箱温度计所示的温度和水中（或温箱内）实测温度是否一致，允许有±1℃的误差；◎洗板机：每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定，一般不超过2μl；人工扣板时，垫纸不湿；定期检查管孔是否堵塞；◎酶标仪：经常维护其光学部分，防止滤光片霉变，定期检测校正，使其保持良好的工作性能。
2、试剂盒选择◎应尽量选择正规厂家，产品经相应政府部门审核认可，试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、安全性及经济性全面评价。
◎灵敏度：有二层含义，1）为试剂检出被检物质的最低量的能力；2）为试剂对大量样品中阳性检出的能力。
◎特异性：常用交叉反应率表示。
含有与待测物相近结构部份的物质可能存在交叉反应，使测定结果升高，可能导致假阳性，所以交叉反应是评价其质量的关键指标。
◎精密度：ELISA试剂一般指其批内CV%，其值应小于15%；定量试剂应同时考察线性范围。
◎准确度：通过添加回收实验进行评价。
◎简便性：指在不影响试剂的前三项指标的前题下，实验和测定步骤越少越好，在定性实验中结果判断简单明了，定量试验结果计算也应简单。
◎安全性：指试剂对操作者和环境安全无害无传染性。
◎经济性：试剂在同等质量条件下通过大规模生产或技术进步降低成本，而市场价格比较合理。
◎试剂评价：需要有权威的确证方法和确证的样品进行检测。
3、样本前处理注意事项3.1 均质组织样本:肉、肝食品类切细，用绞肉机反复绞碎，混合均匀。
ELISA常见问题
1、ELISA试验的稳定性问题做ELISA实验时，结果老是重复性不上，相同的材料和相同的操作方法做出的结果就截然不同，上午做时其OD在1.5，下午做时就是0.9了，所以都没有办法下结论，为什么会差异这么大呀？（1）多设平行空孔，请别人代劳，以判断究竟是否操作问题（2）对于活性非常高的包被物和酶标记物，如果第一次选择的范围恰好在其平台位置边缘，那么在重复的时候，每次取样带来的微量误差就很容易导致大的偏差了，特别是线性比较好的原料试剂，这个就很正常了。
建议每次取样的时候只使枪尖一点点位于液面下，以免吸嘴外面沾有少量抗原or抗体or酶而使结果重复不上。
2、酶不稳定，有何高招？（1）保存浓度尽量高些，（2）另外可以添加牛血清白蛋白等蛋白保护剂，以避免其被吸附或沉降以及被蛋白酶所降解。
（3）加入50%甘油-20度保存、避免反复冻融。
（4）还可以加入防腐剂防止长菌（注意不能用叠氮钠，其对HRP活性有很大影响）（5）现在一些公司也有商品化的酶标保护剂供应，可以考虑一下酶类的稳定性与保存方法的很大关系。
干燥的制品一般比较稳定，在低温情况下其活性可在数日甚至数年无明显变化，贮藏要求简单，只要将干燥的样品置于干燥器内（内装有干燥剂）密封，保持0－4度冰箱即可。
液态稳定性较差，贮藏时应注意以下几点：1、样品不能太稀，必须浓缩到一定浓度才能封装贮藏，样品太稀易降解、变性。
2、一般需加入防腐剂和稳定剂，酶常用的稳定剂有硫酸铵糊、蔗糖、甘油等，也可加入底物和辅酶以提高其稳定性。
此外，钙、锌、硼酸等溶液对某些酶也有一定保护作用。
3、贮藏温度要求低，避免反复冻融。
3、ELISA试验中不加标本的OD值反而高于加人的阴性标本的OD值，是什么原因呀？做夹心法ELISA试验中不加标本的OD值反而高于加人的阴性标本的OD值，是什么原因呀？最大的原因是封闭的效果不好，应该调整封闭液；可以尝试不同的封闭剂（BSA、胶脂奶粉、明胶等）、不同的封闭浓度、时间，试试哪个效果好阴性的里面的其他蛋白起到了封闭的效果4、边缘的阴性OD值老是比中间的偏高，什么原因呢？我做ELISA时，有一段时间在板的最后一条板孔的阴性的OD值经常比在中间的高，有时候高出0.1个OD，导致实验经常重复，但原因也找不到在哪里？这可能是由于ELISA的边缘效应造成的。
ELISA实验操作中常见问题分析
ELISA实验操作中常见问题分析严峻溶血，以HRP 为标记的ELISA 测定中，残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样活性，催化底物显色造成假阳性；混有红细胞的血清易沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗净；如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应；标本凝固不全，有时为了争取时刻快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中能够形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果；采血试管洗涤不完全、反复使用易交叉污染；塑料试管能吸附抗原物质，样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。
2、试剂的阻碍a.分子量大。
合成肽采纳化学方法制备，由于工艺的局限，合成数量有限，只能达到数百个氨基酸；而利用基因工程制备的抗原，分子量更大。
d.纯化难度大。
基因工程抗原的纯化技术难度较大。
合成多肽抗原是按照蛋白质抗原分子的某一抗原决定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。
合成肽抗原有以下特点：a.分子量太小；b.一样只含有一个抗原决定簇；c.纯度高；d.稳固性差。
国内乙肝两对半试剂厂家较多；不同厂家出产的试剂灵敏度与特异性存在一定的差别，资料显示，不同厂家试剂的特异性和敏锐性分别为89.4%—99.3%,78%—89%存在较大差异。
有的厂家酶标板孔间A值差大于15%；标记酶的活性及显色液的稳固比较差。
使用质劣的试剂必定导致结果的假阳性或假阴性。
因此。
选择高质量的试剂是保证结果准确的关键之一。
•选择试剂时应选择灵敏度高、特异性好、稳固性好、批间差小、操作方便省时的优良检测试剂，国家参比实验室每年对各厂家的试剂进行质量评估并定期公布评估结果，可作为选择试剂的要紧依据。
•要注意试剂的批号和出厂日期，尽管试剂的有效期多为1年。
最好选择刚出厂的试剂使用。
不同厂家的试剂不能混用。
不同方法学的检测试剂，会使两对半结果显现一些不同。
例如：在实际工作中常用ELISA检测HBsAg结果为阴性，而电化学发光检测为阳性。
ELISA实验操作中常见问题分析
ELISA实验操作中常见问题分析1 标本及采集、贮运因素严峻溶血，以HRP 为标记的ELISA 测定中，残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样活性，催化底物显色造成假阳性；混有红细胞的血清易沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗净；如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应；标本凝固不全，有时为了争取时刻快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中能够形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果；采血试管洗涤不完全、反复使用易交叉污染；塑料试管能吸附抗原物质，样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。
血清标本宜在新奇时检测，严峻溶血标本禁用。
一样说来，在5 天内测定的血清标本可放置于4℃，标本在冰箱中储存时刻过长导致血清IgG 聚合，使间接法的试剂本底加深。
超过一周测定的需－20℃储存。
冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀并幸免产动气泡。
混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。
反复冻融会使抗体效价跌落，因此测抗体的血清标本如需储存作多次检测，宜少量分装冰存；最好使用一次性玻璃试管或真空管采血管；并使用非抗凝标本，肝素抗凝血浆会增加OD值，可能与高浓度肝素具有强大的负电荷能吸附酶标记物不易洗脱有关；EDTA、酶抑制剂（如NaN3）可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性；血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清，或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂。
2、试剂的阻碍ELISA 诊断试剂经历了从合成肽向基因工程抗原的过渡。
由于历史的缘故，人们往往以反应本底的好坏来衡量ELISA 反应试剂盒，因此有些厂家为了保持较好的本底采纳了单片段基因工程抗原及合成肽包被，该类试剂盒的流行病学敏锐度不够，稳固性也成问题。
也有厂家坚持试剂盒高的流行病学敏锐度，科学地对待反应结果。
基因工程抗原较合成肽抗原有无可比拟的优越性，就HCV-ELISA 试剂盒来讲，第一代产品为合成肽抗原，要紧是HCV 特异性抗原决定簇的肽片段；第二代产品包被的抗原既有基因工程抗原又有合成肽，只是当时的基因工程抗原不全，仅包括了HCV 的核心区片段；第三代产品差不多上采纳了基因工程抗原，而且这些抗原包括更多、更稳固、纯度更高的HCV 特异性抗原。
ELISA实验可能出现的问题及原因分析
ELISA实验可能出现的问题及原因分析1.应该注意试剂4°c冷藏时水化层形成，蛋白分子分布异常；2.标本由于冷藏时Ig G聚合成多聚体，Fib非特异性吸附，反复冻融机械切力致使蛋白分子受损；3.加样时不准，枪头吸样时插入样本液面下2mm为宜；4.常采用的温度有43、37°c、室温、或者4°c等。
37°c最常用，4°c效果最好，但孵育时间有异；5.要注意内源如风湿因子，补体，高浓度非特异性免疫球蛋白，异嗜性抗体及某些自身抗体等；外源如标本溶血，细菌污染，储存时间过长及凝固等因素影响。
6、在使用ELISA试剂盒时应注意：2-8℃保存（特殊情况除外）、同一品种不同批号试剂不能混用、不同品种试剂盒显色剂不能混用。
常见问题及分析1阳性对照不显色漏加阳性对照阳性对照孔忘加酶或忘加显色剂阳性对照受污染2、阳性对照显色浅（HBeAb HBcAb阴性对照显色浅）试剂和保存不当、活性下降在使用前试剂盒未放置在室温平衡温育时间不够或孵育温度过低洗板浸泡时间过长、洗板次数过多使用不正确的洗液洗液中含有防腐剂同时残留量过多洗板后酶标板被干透读数时使用波长不正确滤光片不清洁或滤光片位置错误读数时酶标板放置位置错误阳性对照活性下降酶标失活3、阴性对照显色（HBeAb、HBcAB除外）实验过程受污染阴性对照污染酶滴在孔壁上4、整板不显色试剂和保存不当、已经失活忘记加酶、可检查滴瓶内酶量忘记加抗原或中和试剂忘记加显色剂A或显色剂B5、阳性对照读数不正常加入标本后未进行必要的混匀标本稀释错误加样量不正确冷冻标本未完全溶解混匀标本中含有防腐剂6、血清本底高试剂盒灵敏度高加样时使用同一枪头、交叉污染孵育时间过长或温度过高洗板次数不足，浸泡时间短洗板时洗液量少或残留量多洗板时洗液量过多、串孔洗板机管道中有霉菌生长洗液瓶混用洗板机洗板头阻塞或洗板机洗板头位置错误配置洗液的去离子水或蒸馏水被污染终止液浓度不够，没有充分混匀，或终止液被污染读数时酶标板底部有水蒸气凝结酶标仪偏差7、假阳性结果实验器具被污染血清中出现纤维蛋白凝集血清标本中出现过多的红细胞血浆标本处理不当标本中含有灰尘、颗粒或细菌等标本被反复冻融加标本后进行不正确的振荡沿孔壁上加入标本，加样后出现过多的气泡酶标滴加在孔壁上，洗板未洗净混用洗液或洗液稀释错误洗液瓶中、管道或配置洗液的水中有霉菌洗板次数不足或浸泡时间短洗板时洗液量少或残留量多洗板时洗液量过多、串孔读数时酶标板底部有水蒸气凝结洗液瓶、废液瓶混用读数过程中板孔中有气泡酶标仪偏差8、同一板内重复性差标本混匀不充分试剂混匀不充分标本与酶结合物混匀不充分加样技术差异加样器故障或加样器被污染加样时间过长导致孵育时间不同孵育器内部的温度不一致，造成酶标板孔间的孵育温度差异读数时酶标板孔间有气泡9、HCV血清本底高灵敏度高样本稀释液加液量不足100ul枪头深入血清过深，致使外壁沾有血清导致加样偏多（>10ul）同一孔加了两次样本10、HIV阳性对照低误将阳性对照稀释阳性对照未混匀加液量不足11、HIV血清本底高标准变更，灵敏度提高标本稀释液加液量不足100ul枪头深入血清过深，致使外壁沾有血清导致加样偏多（>10ul）同一孔加了两次样本。
ELISA实验中常见问题和注意事项
ELISA实验中常见问题和注意事项临床标本的收集和保存用于ELISA测定的临床标本最为常用的是血清（浆）。
本实验室用ELISA测定乙肝两对半，甲肝，戊肝，抗HIV的标本时，在处理和保存方面要考虑以下几个方面：1）要注意避免出现严重溶血及血清中混有红细胞。
当标本出现严重溶血及血清中混有红细胞时，反应孔不易洗净，残留在反应孔内的血红蛋白具有过氧化物酶的活性，显色时可能造成假阳性。
2）标本凝固不全强行离心，造成血清中含有少量的纤维蛋白原，在实验过程中形成纤维蛋白吸附在反应孔孔壁上不易洗掉，易造成假性结果。
3）血清标本可在2～8℃下保存1周。
如血清样本需长时间保存，则需放入-20℃冰柜内冰冻保存。
冰冻保存的血清标本须注意避免反复冻融，标本可能引起假阴性结果。
此外冻融标本的混匀不要进行剧烈振荡，应反复颠倒混匀。
ELISA测定中试剂准备在实验开始前，将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置20分钟以上后，再进行测定，证试剂盒温度要和室温一致。
如果把试剂盒从冰箱拿出来直接做实验会造成一些弱阳性标本的检测出现假阴性。
因为在后面的孵育反应步骤中，造成孵育时间不够。
其次，ELISA实验中洗板用的洗液需每日更换配制，稀释时所用的蒸馏水或去离子水应保证质量。
加血清样本及反应试剂血清样本使用微量加样枪加样。
使用微量加样枪加样必须注意避免以下几点：1）加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。
需匀速加样，吸样时，加样枪需按到第一档，加样时，加样枪需直接按到底。
2）加样应直接加入反应孔底部，加在反应孔孔壁上易溅出会对邻近孔产生污染。
尽量避免出现气泡。
3）反应试剂的加入时先要注意试剂的有效期，再注意滴加的角度和滴加的速度。
滴加太快易出现重复滴加或加在两孔之间。
温育的时间与温度温育是ELISA测定中最容易出现问题的步骤。
温育温度应在37℃，水浴。
温育时间应按照试剂说明书上的时间严格执行。
温育实际测定操作中要注意以下几点：1）要保证在设定的温度下有足够的反应时间。
ELISA测定操作中的注意事项
ELISA测定操作中的注意事项ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的工具，用于测定病毒、细菌、蛋白质和其他生物分子在生物样本中的存在量。
ELISA检测方法操作相对简单，但仍然需要遵循一定的操作步骤和注意事项。
以下是ELISA测定操作中需要注意的几个关键点：1.准备工作：在进行ELISA测定之前，必须仔细准备实验室，并确保所有需要的试剂和仪器设备都得到妥善处理。
所有试剂应按照说明书储存和使用，并检查试剂有效期。
2.样品处理：样品的处理方法会因样品类型的不同而异。
无论是血清、尿液、细胞上清液还是其他类型的样品，都需要进行预处理以提取目标分析物。
必须注意避免样品污染和误导，以避免结果扭曲。
3.标准曲线制备：标准品的浓度应按照所需浓度系列依次配制。
标准曲线对于测量未知样品中目标物质的浓度至关重要。
应准确测量并稀释标准品，以保证标准品在适宜阶段内。
4.试板板块的涂覆：试板板块在试验中起到一个基础角色，对于测定结果至关重要。
在涂布之前，应完全清洗和干燥，以确保涂覆的均匀。
涂覆的目标抗体或抗原浓度也应该掌握好，以便获得准确的结果。
5.反应时间和温度：在试验进行过程中，应遵循说明书上的指导，严格控制每个反应的时间和温度。
反应时间和温度的变化可能会导致结果不准确或可读性差。
6.洗涤的重要性：洗涤步骤是ELISA测定中用来去除未结合的试剂或物质的重要步骤。
洗涤过程必须彻底，在每次洗涤中使用足够的洗涤缓冲液来确保彻底去除未结合物质。
7.底物的选择和反应停止：底物的选择对于结果的解读和显示至关重要。
不同的底物可能在不同的波长下显示颜色。
在选择底物时应确认设计好测定的波长。
同时，在底物反应后需要及时停止反应，使反应停止时间相对一致。
8.数据分析：9.消毒与废液处理：10.质量控制：为了确保ELISA测定的结果准确可靠，应进行质量控制。
包括使用质控样品、校准标准品和内部参比物来保证所得结果的精确性和可重复性。
总结起来，ELISA测定是一种有效的生化实验方法，但在操作过程中需要注意细节和实验操作的准确性。
elisa竞争法注意事项
ELISA 竞争法是一种常用的酶联免疫吸附测定技术，用于检测抗原或抗体。
在进行ELISA 竞争法实验时，有一些注意事项需要考虑，以确保实验的准确性和可靠性。
以下是一些常见的注意事项：1. 试剂和抗体的选择：选择高质量的试剂和抗体是确保实验成功的关键。
确保所使用的试剂和抗体具有高特异性和亲和力，并根据制造商的说明进行储存和使用。
2. 样本处理：正确处理样本对于获得准确的结果至关重要。
确保样本在采集、储存和处理过程中遵循适当的操作步骤，以避免样本的污染、降解或失效。
3. 标准曲线的绘制：绘制准确的标准曲线是定量分析的基础。
确保标准品的浓度范围覆盖待测样本的预期浓度，并使用合适的稀释液进行稀释。
4. 控制样本的设置：设置适当的阳性和阴性对照样本，以确保实验结果的可靠性。
阳性对照应产生预期的阳性结果，阴性对照应显示无反应。
5. 洗涤步骤：洗涤步骤对于去除未结合的试剂和杂质非常重要。
确保洗涤缓冲液的质量和洗涤次数足够，以避免假阳性结果。
6. 孵育时间和温度：严格按照试剂盒的说明控制孵育时间和温度。
过长或过短的孵育时间以及不正确的温度可能会影响实验结果。
7. 数据分析：仔细分析实验数据，确保结果在可接受的范围内。
如果结果异常，应检查实验步骤和试剂是否存在问题。
8. 质量控制：定期进行质量控制检查，包括试剂的批间和批内变异、仪器的校准和维护等，以确保实验的稳定性和准确性。
以上是 ELISA 竞争法实验中的一些注意事项。
在进行实验时，应严格按照试剂盒的说明书和实验方案进行操作，并遵循实验室的标准操作程序，以获得可靠的实验结果。
如果你对实验有任何疑问，建议咨询相关专业人士或参考相关文献。
ELISA测定操作中的注意事项
ELISA测定操作中的注意事项1.实验准备：-所有试剂和材料都应该保持清洁，并且在防尘环境中储存，以免被污染。
杂质和污染物可能会干扰实验结果。
-所有试剂和材料的质量控制必须符合规范，并且要检查试剂的过期日期。
2.样品处理：-样品的处理步骤和条件要准确无误。
对于血清和其他生物样品，必须遵循正确的方法进行采集、收集和储存，以确保没有损坏或污染。
-如果样品需要预处理，例如稀释、离心、过滤等，必须严格按照操作规程进行。
3.酶标板处理：-酶标板的表面必须干净而平滑，以确保所有试剂和样品都能均匀地附着在板上。
-酶标板在使用前和每次使用后都必须仔细清洗，以防止旧的试剂残留对结果产生影响。
-使用适当的洗涤缓冲液来冲洗酶标板孔洞。
过强或不够强的冲洗可能会干扰测定结果。
4.试剂添加：-规定每次添加试剂的顺序和时间，确保步骤按照要求执行。
-对于标准曲线的制备，必须准确称量，遵循要求的稀释方法，并尽量避免任何误差。
-每次添加试剂时都必须用新的、干净的移液器以避免交叉污染。
5.反应条件：-反应温度和时间必须严格控制。
温度变化可能会影响酶结合和反应动力学。
-每个步骤完成后都要正确地暴露在正确的环境中，以获得准确的检测结果。
6.测定结果：-应该使用正确的仪器进行结果读取，并确保仪器校准和校准曲线。
-样品结果应与控制结果进行比较，以减少误差。
-对结果进行多次重复测量，并计算平均值和标准偏差，以便计算结果的可靠性。
7.数据分析：-严格按照相关数据分析方法进行数据处理和统计分析。
-对于结果的解释，应根据实验设计、样品类型和研究目的进行相关解释。
总结起来，ELISA测定操作中的关键是保持实验材料和环境的清洁，遵循严格的操作规程，准确分析数据，并进行适当的质量控制。
通过严谨操作和数据分析，可以确保ELISA结果的准确性和可靠性。
elisa常见问题汇总
ELISA实验中常见的问题及解决方法如下：
加样误差：包括加样本及试剂量不准、孔间不一致。
解决方法包括校正移液器，吸嘴要配套，装吸嘴时要紧密；重复某一样品时，加样时间尽可能与上次接近；重复测定标本，操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致，以排除这些因素造成的不一致的可能性。
温育时间或洗板不一致：导致显色底物孵育效果不佳。
解决方法包括检查时间是否一致；校正温育箱温度。
试剂问题：包括显色液变质或者试剂过期、试剂稀释有误，如加酶的浓度过高、蒸馏水受酶等污染。
解决方法包括检查试剂盒有效期；请按说明书所示稀释倍数配制；使用新鲜蒸馏水。
洗板问题：如果没有洗板机，需要注意洗板液添加后不要从孔中溢出，在加洗板液后，静置1-2min，甩干液体后，在吸水纸上大力拍干；重复三次。
封板膜使用不当：在孵育样品、检测抗体以及HRP酶标抗体时，都要盖好封板膜，减少挥发及污染几率。
每次使用后要更换新的封板膜。
未及时读数：加完终止液后，形成的黄色颜色会随着时间延长继续加深，建议在15 min内读数。
以上内容仅供参考，如果无法解决你的问题，建议咨询专业人士获取帮助。
ELISA试剂盒检测过程中的注意事项
ELISA试剂盒检测过程中的注意事项ELISA的实验操作所要求的条件是比较严格的，无论是对实验的硬件条件还是对实验的操作人员的技术要求，都是如此。
下面所提到的就是一些在进行ELISA实验时所要注意的一些问题。
一、ELISA实验通用规则1、要保证移液枪的准确性，误差不能超过2%。
可用水和电子天平进行确定。
但最好有专业人员进行矫正。
2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。
吸取不同的液体后，要更换枪头。
即使是吸取标准品时。
3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更稳定。
4、实验时，要使底物避光保存。
5、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。
6、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。
7、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。
8、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。
也可以用酶标仪的晃动功能。
9、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。
10、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加彻底。
没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
11、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。
加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
12、底物是光敏感的，要在临用前现配。
13、检测前，要打开酶标仪，使之稳定10分钟以上。
14、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。
15、待检样品要澄清，否则会影响结果。
16、温浴时间应遵守试剂盒规定。
17、应尽量做双孔实验，这样才能保证数据的准确性。
18、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。
二、下面所提到的是针对我公司的ELISA产品会出现的问题及解决办法1. 加入反应终止液后，没有吸光值或吸光值偏低。
a.原因：未加入酶标记物。
ELISA操作常见问题解决办法
ELISA操作常见问题解决办法ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。
但ELISA测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在检测过程中除正常反应外，有时常见到一些错误的结果。
引起ELISA测定错误结果的原因主要有：①标本因素；②试剂因素；③操作因素。
下面就一些常见ELISA操作过程中的问题一一分析。
1．样品稀释酶联免疫反应是一种敏感性很高的反应，如果血清不稀释，不可避免会产生很强的非特异性反应，出现假阳性。
因此，国外检测血清抗体的试剂盒，均规定将血清稀释至适当的倍数，以降低非特异性反应，使特异性的抗原抗体反应充分体现出来。
一般产品的样品稀释倍数均通过大量试验确定，以保证试验的灵敏度和特异性。
但是，有些用户未能严格按使用说明书操作，如某些产品应取10μl样品进行稀释，个别用户取5μl甚至1μl样品进行稀释，由于吸嘴上不可避免地沾有样品以及微量移液器的精度不够，因此造成样品稀释倍数不准确，检测结果出现问题。
2．试剂盒平衡试剂盒中所有试剂和板条均应在试验前平衡至室温（约25℃），一般需在室温放置20～30分钟以上。
平衡时间太短会造成试剂混匀不够，样品孵育时间相对缩短，ELISA反应不够充分。
冬季室温低，可将试剂盒置37℃温箱20分钟。
3．样品和试剂的混匀稀释前、后的样品必须充分混匀，所有试剂在加样前也须摇匀，以保证试验的均一性。
4．加样在现在的ELISA商品试剂盒中，必然有使用微量加样器加入样本的步骤。
注意的关键点是：加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。
加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。
加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。
溅出会对邻近孔产生污染。
出现气泡则反应液界面有差异。
所以，有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性，下次测定为阴性，往往就是上述加样及试剂的错误所致。
5．温育温育是ELISA测定中影响测定成败最为关键的一个因素。
ELISA作为一种固相免疫测定，抗原抗体的结合反应在固相上进行，要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合，必须在一定的温度条件下反应一定的时间。
elisa操作要 点及注意事项
elisa操作要点及注意事项
Elisa操作是一种常见的实验技术，用于检测各种生物分子，如蛋白质、抗体等。
在进行Elisa实验时，需要注意以下几点：
1. 建立标准曲线：在进行Elisa实验前，需要先建立标准曲线，以确定样品中分子的浓度。
建立标准曲线的方法是将已知浓度的标准样品加入到酶标板中，然后测定其吸光度值。
通过标准曲线可以得到样品中分子的浓度。
2. 样品的处理：在进行Elisa实验前，需要对样品进行处理，如离心、过滤、稀释等。
处理样品时需要注意不要破坏样品中的目标分子。
3. 抗原、抗体的选择：在进行Elisa实验时需要选择适合的抗原和抗体。
抗原和抗体的选择要基于实验目的和样品特性。
4. 实验条件的控制：在进行Elisa实验时需要控制实验条件，如温度、湿度、时间、pH值等。
这些条件直接影响实验结果的准确性和重复性。
5. 结果的分析：在进行Elisa实验后需要对结果进行分析。
分析结果时需要注意标准曲线的斜率、截距和相关系数的准确性，以及实验的重复性和可重复性等因素。
总之，在进行Elisa实验时需要遵循标准实验操作规程，注意实验条件的控制和结果的分析，才能得到准确、可重复的实验结果。
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ELISA注意事项
1.标本收集：这个很关键呀！标本收集及保存的好坏，直接决定了实验能否成功。
在收集标本之前必须考虑到实验对标本收集及保存的要求，这些要求对标本中待测物质稳定性影响很大。
以ELISA为例。
ELISA检测的一般是液态标本，应在收集到新鲜标本后立即离心留取上清液1ml左右移入高温灭菌过的1.5ml EP管中。
这种标本在4度保存48小时，-20度保存1个月，-80度保存6个月对检测影响不大。
样本一般都是怕反复冻融的，这样会使蛋白降解，如需做预实验或需反复取用标本时，应在收集时即分装几个EP管（管外注意用标号笔标记好，不然就会驴唇不对马嘴了！）。
不注意这些要求，即使实验做的再漂亮也是瞎的，不大会出结果。
2.实验前的准备工作那是相当的重要。
要用到的100ul中枪头、1000ul大枪头、1.5ml EP管事先灭菌好是必须的；多次使用的酶标板框洗净烘干；3.备齐用品：100ul加样枪及枪头，1000ul加样枪及枪头，100ml量筒（洗净并双蒸水冲洗），500ml量杯（洗净并双蒸水冲洗，实验室没有更小的了），双蒸水100ml（稀释洗涤液用），吹气球，吸水纸（定性滤纸），试管架，避光湿盒，酶标板框，定时器，胶带，剪刀，弃物盒及废液缸；4.准备实验时进入实验室即打开37度恒温箱让它开始升温，不然等到需要用时再打开，你急它不急，它升温需要时间，可能已经过了要温育的时间它才达到37度；样品和试剂盒在室温下平衡30分钟以上；5.ELISA试剂盒固化的抗体在底部，加样时枪头千万不要碰到底部；用不完整个试剂盒可以分开用，但分时一定不要摸底部，原因同前；6.实验前最好自己写一个操作步骤，把操作中注意事项写清楚。
不要只看着试剂盒说明书做，因为说明书是把操作程序和注意事项分开写了，看不过来，另外说明书上很多东西毕竟写的不具体，网上的经验参考也要写在操作步骤里，越详细越好；7.一般一批标本只会使用部分试剂和微孔板，事先计算好需要的试剂量，分别用1ml注射器抽取比需要量多做3-5个标本的试剂转移到标记好的1.5mlEP管中，注意1ml注射器不要混用，做到一剂一个注射器。
elisa操作要 点及注意事项
elisa操作要点及注意事项
在进行elisa实验的过程中，需要注意以下几点：
1. 实验室安全：在实验室操作时，需要遵守实验室安全规定，佩戴防护手套、口罩和护目镜等个人防护装备，保持实验环境干净整洁，避免实验品污染。
2. 样品制备：样品制备是elisa实验中至关重要的步骤，需要注意样品的存储、处理和加样的方法，避免样品的变质和污染。
3. 试剂准备：试剂的准备需要严格按照说明书上的要求进行，避免试剂的过期使用、混合、污染等情况。
特别是要注意洗板液的配制和使用，避免洗板液的残留影响实验结果。
4. 操作步骤：在进行elisa实验操作时，需要按照实验步骤进行，避免操作顺序出错或漏步导致实验结果失真。
5. 仪器操作：elisa实验涉及到的仪器包括吸板酶标仪、洗板机等，需要准确操作，保证实验结果的准确性。
6. 结果分析：在实验结果分析中，需要对实验数据进行统计分析和比较，避免结果误差或数据处理不当导致结论出错。
总之，在进行elisa实验时，需要严格遵循实验操作规范，保证实验结果的准确性和可靠性。
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ELISA 法在操作中应注意的几个问题
ELISA 法在操作中应注意的几个问题发表时间：2015-06-12T11:17:02.970Z 来源：《医师在线》2014年第11期(下)供稿作者：张学芬[导读] ELISA 法特异性强,敏感性高,操作快速简便,因而是免疫学检验中最为常用的方法。
张学芬（云南省昆明市精神病院650101）【中图分类号】R2 【文献标号】A 【文章编号】1671-8725（2014）11-0191-01 ELISA 法特异性强,敏感性高,操作快速简便,因而是免疫学检验中最为常用的方法,也是我们基层医院检验科免疫学检验的主要技术手段。
我科乙肝五项ELISA法检测。
我们在实际工作中体会到ELISA法检测的全程质量控制很重要,优质的试剂、良好的仪器和正确的操作是保证ELISA 检测结果准确可靠的必要条件。
现将我们平时在操作中认为需要重视的步骤及遇到的一些问题报告如下:1 标本的采集和保存血,因红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP为标记的ELISA测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色。
血清标本宜在新鲜时检测。
如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。
标本储存时间过长,IgG可聚合成多聚体,在间接ELISA 测定中导致本底过深,甚至造成假阳性。
一般说来,在5 天内测定的血清标本可放置于4℃,超过1周测定的需低温冰存。
2 试剂的准备按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。
ELISA 中用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗涤的,应为新鲜的和高质量的。
从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。
试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。
3 加样在ELISA中一般有3次加样步聚,即加标本,加酶结合物,加底物。
加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可溅出,不可产生气泡。
加标本一般用微量加样器,按规定的量加入板孔中。
每次加标本应更换吸嘴,以免发生交叉污染。
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7．显色
显色一定要控制时间,根据试剂盒说明操作即可。一般来说，显色时间过短，结果偏低；显色时间过长，空白增高或者非特异性显色增加。
8．比色
比色要注意波长的选择。以TMB为底物和以OPD为底物的试剂盒均有使用，而前者比色波长为450nm，后者为492nm，滤光片需根据要求随时更换。因此，容易出现滤光片错用的问题。
4．加样
加样是一项很重要的步骤。加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。
5．温育
温育是ELISA测定中影响测定成败最为关键的一个因素。ELISA作为一种固相免疫测定，抗原抗体的结合反应在固相上进行，要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合，必须在一定的温度条件下反应一定的时间。
Elisa实验中应该注意哪些问题？
Elisa实验中应该注意的问题，包括样品稀释、试剂盒平衡、样品和试剂的混匀、加样、温育等问题，希望对大家有用处。
Elisa试剂盒有着准确性高、灵敏度高、特异性强的诸多优点，深受广大用户朋友的喜爱。然而，在实验过程中，也需要注意很多问题。
武汉福来生物工程提醒广大用户，需要遵守一些规则，才能更好地进行实验，取得较好的实验成果。
Elisa方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。在Elisa测定中影响因素较多，在检测过程中除正常反应外，有时常见到一些错误的结果。引起ELISA测定错误结果的原因主要有：标本因素；试剂因素；操作因素。
武汉福来生物提示广大用户，在进行实验的过程中，需要注意以下的一些问题。
1．样品稀释
一般产品的样品稀释倍数均通过大量试验确定，以保证试验的灵敏度和特异性。酶联免疫反应是一种敏感性很高的反应，如果血清不稀释，不可避免会产生很强的非特异性反应，出现假阳性。
2．试剂盒平衡
Elisa中所有试剂和板条均应在试验前平衡至室温(约25℃)，一般需在室温放置20～30分钟以上。平衡时间太短会造成试剂混匀不够，样品孵育时间相对缩短，ELISA反应不够充分。冬季室温低，可将试剂盒置37℃温箱20分钟。
3．样品和试剂的混匀
在稀释前、后的样品必须充分混匀，所有试剂在加样前也须摇匀，以保证试验的均一性。