ELISA实验原理,方法,仪器,流程图和注意事项分析
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酶联免疫吸附实验 (ELISA)
目的Βιβλιοθήκη Baidu要求
掌握ELISA的原理、操作过程及注意事项 了解ELISA实验结果的读取和分析
实验原理
借助酶标记抗体（或抗原）在体外与抗 原（或抗体）结合，通过相应底物被酶 解后出现显色反应。反应颜色深浅与抗 原（或抗体）量的多少有关。 特点：灵敏、特异 类型： 双抗体夹心法、竞争法、间接法等
双抗夹心法ELISA
竞争法 ELISA
实验材料
BSA包被的测定板 酶标抗鼠IgG抗体 待检血清，阳性血清，阴性血清 洗涤液： PBS＋吐温-20 底物液：邻苯二胺（OPD） 终止液：10% H2S04
实验步骤
加入稀释好的待测血清每孔100ul， 37℃孵育40min
洗板3次,每次1min
加入100ul酶标抗体, 37℃孵育30min
洗板3次,每次1min
实验步骤
加入100ulTMB底物液避光室 温孵育15min
终止反应:每孔加1滴10％硫酸
结果观察
注意事项
加样：应将所加物加在ELISA板孔的底部，并 注意不可溅出，不可产生气泡。
洗板：每次洗液加入后，应静置1分钟使清洗 更加彻底。末次洗板尽量将水甩干。 液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻 轻晃动30秒，混匀液体。 底物有毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，尽量避 免接触。
目的Βιβλιοθήκη Baidu要求
掌握ELISA的原理、操作过程及注意事项 了解ELISA实验结果的读取和分析
实验原理
借助酶标记抗体（或抗原）在体外与抗 原（或抗体）结合，通过相应底物被酶 解后出现显色反应。反应颜色深浅与抗 原（或抗体）量的多少有关。 特点：灵敏、特异 类型： 双抗体夹心法、竞争法、间接法等
双抗夹心法ELISA
竞争法 ELISA
实验材料
BSA包被的测定板 酶标抗鼠IgG抗体 待检血清，阳性血清，阴性血清 洗涤液： PBS＋吐温-20 底物液：邻苯二胺（OPD） 终止液：10% H2S04
实验步骤
加入稀释好的待测血清每孔100ul， 37℃孵育40min
洗板3次,每次1min
加入100ul酶标抗体, 37℃孵育30min
洗板3次,每次1min
实验步骤
加入100ulTMB底物液避光室 温孵育15min
终止反应:每孔加1滴10％硫酸
结果观察
注意事项
加样：应将所加物加在ELISA板孔的底部，并 注意不可溅出，不可产生气泡。
洗板：每次洗液加入后，应静置1分钟使清洗 更加彻底。末次洗板尽量将水甩干。 液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻 轻晃动30秒，混匀液体。 底物有毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，尽量避 免接触。