猪圆环病毒2型ORF2-ORF1串联基因的原核表达及活性分析
猪圆环病毒2型ORF1和ORF2基因的克隆与表达
ＺＨＡ Ｎ Ｇ ａ ｇ ｇ ｎ Ｈ ＵＡＮ Ｇ ｉ － ａ Ｃｈ ｎ － ｏ ｇ 。 Ｙ ｎｙ ｏ
ｐ Ｔ２ｂ Ｒ ２ Ｅ ．２ ／ Ｆ ，转 化 大 肠杆 菌 Ｂ ２ （ Ｅ） Ｏ Ｌ ｌ Ｄ ，经 ＩＴ Ｐ Ｇ诱 导 表 达 ，收 集 菌 液 进 行 Ｓ ＳＰ Ｇ Ｄ ．Ａ Ｅ分 析 。确 定 重 组 蛋 白 主要 以 包涵 体 的 形式 表 达 ， 包涵体 洗涤 溶 解后 ，采 用 Ｎ 离子金 属 螯 合 亲和 层 析 柱 纯化 蛋 白 ，逐 步透 析 法进行 复 ｉ 性 ：Ｗｅｔ ｎ ｌ 和 Ｅ ＩＡ 分 析 结 果表 明 Ｒ ｐ蛋 白和 Ｃ ｐ蛋 白均 能 与猪 圆环病 毒 ２型 阳性 血 清 发 生特 异 性 反 应 。 ｓ ｒ ｏ ｅ ｂｔ ＬＳ ｅ ａ
ａ ｃ ｒ ｎｇ ｔ ＣＶ － ｓ ｑ ｎ ｅ ｉ ｎ ａ ｋ ａ ｄ ｌ ｎｅ ｉｔ ＥＴ－ ２ｂ，ｒ ｐ ｃ ｉｅｙ．Ｔｈ ｅｓ ｌａ ｏｎｓｒ ｔ ｒ ｒ ｎｓｏ ｍ ｅ ｎｔ ｃ ｏ ｄｉ ｏ Ｐ ２ ｅ ｕｅ ｃ ｎ Ｇｅ Ｂ ｎ ｎ ｃ ｏ ｄ ｎ ｏ ｐ ２ ｅｓ ｅ ｔｖ ｌ ｅ ｒ ｕ ｔｎｔｃ ｔｕｃｓ ｗｅ ｅ ｔａ ｆ ｒ ｄ ｉ ｏ
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第 ２ 卷 第 ｌ 期 ９ ２
２０ 年 ０７ ｌ 月 ２
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
中 国 预
防 兽
医 学 报
Ｖｏ ． ９ ＮＯ １ １ ． ．２ ２
Ｄｅ ． ２ ７ ｃ ００
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猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达及其免疫原性检测
猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达及其免疫原性检测梁晓艳;李玉林;李兆学;王继美;贾丽锋;周贺娟;王云龙【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2010(031)009【摘要】以病猪脾脏组织为材料,提取总RNA,通过RT-PCR得到579 bp的猪圆环病毒2型(PCV-2)/ORF2片段,与原核表达载体pET32a重组,通过菌落PCR鉴定、双酶切鉴定及测序鉴定后,证实重组质粒pET32a/ORF2构建成功,将其转化入表达菌Balgold,通过IPTG诱导表达,利用Ni-NTA亲和层析纯化目的产物,Western blot验证其免疫原性,重组蛋白免疫Balb/c小鼠,检测小鼠体内中和抗体滴度.获得的重组蛋白包涵体的形式出现,表达量占菌体总蛋白的30%,变性纯化后纯度达90%以上,Western blot证实重组蛋白能与PCV-2阳性血清发生反应,免疫Balb/c小鼠45 d后中和抗体滴度达到1∶22.【总页数】5页(P63-67)【作者】梁晓艳;李玉林;李兆学;王继美;贾丽锋;周贺娟;王云龙【作者单位】郑州大学,河南郑州,450002;河南省生物工程技术研究中心,河南郑州,450002;河南工业大学,河南郑州,450002;河南省生物工程技术研究中心,河南郑州,450002;郑州大学,河南郑州,450002;郑州大学,河南郑州,450002;郑州大学,河南郑州,450002;河南省生物工程技术研究中心,河南郑州,450002【正文语种】中文【中图分类】S852.659.2;S858.28【相关文献】1.猪圆环病毒2型ORF2基因原核表达蛋白间接ELISA检测方法的建立 [J], 高超;肖冲;高瑞峰;胡桂学2.猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达及反应原性分析 [J], 欧云文;马小元;王俊;丁耀忠;张永光;张杰3.猪圆环病毒2型ORF2基因片段的原核表达 [J], 李裕;邓舜洲;傅胜才;黄勇;高华;刘文峰;张文波;陈松昌;万文忠4.猪圆环病毒2型ORF2基因重组植物乳杆菌的构建及其免疫原性分析 [J], 倪能能;王新珂;赖强;焦茂兴;黄毓茂5.猪圆环病毒2型ORF2基因原核表达蛋白间接ELISA检测方法的建立及应用 [J], 高超;高云航;么乃全;胡桂学因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达及反应原性分析
成 功 构建 了 Ｐ Ｃ Ｖ２ 一 ＯＲ Ｆ ２原核 表 达载体 ， 实现 了在 大肠埃 希 菌 中的表 达 ， 纯化后 的 复性蛋 白具 有较 好 的反 应
原性， 为猪 圆环病 毒 ２型检 测 方法 建立或 试 剂盒 的开发 奠 定 了基 础 。 关键 词 ： 猪 圆环病 毒 ２型 ； Ｏ Ｒ Ｆ ２基 因； 原 核表 达 ； 反应 原性
中图分类号 ： ￥ ８ ５ ２ ． ６ ５ ９ ． ２ 文 献标 识 码 ： Ａ 文章编 号： １ ０ ０ ７ — ５ ０ ３ ８ （ ２ ０ １ ７ ） ０ ４ — ０ ０ ０ １ — ０ ６
表达 ６ ｈ ； 采 用 Ｎｉ — ＮＴＡ 树 脂 亲和 层 析 纯 化 重 组 蛋 白 ， 并 用 不 同浓 度 的尿 素 对 纯 化 蛋 白进 行 复 性 。Ｓ ＤＳ ＿
Hale Waihona Puke Ｐ ＡＧＥ分析 表 明 ， 该 ＯＲ Ｆ ２编码 基 因在 大肠埃 希 菌 中得 到表 达 ， 蛋 白大 小约为 ３ ４ ｋ ｕ ； Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ ｂ ｌ ｏ ｔ 检 测 结 果
ｍｕ ｌ ｔ ｉ ｓ ｙ ｓ ｔ ｅ ｍｉ ｃ ｗａ ｓ ｔ ｉ ｎ ｇ ｓ ｙ ｎ ｄ ｒ ｏ ｍｅ ，Ｐ Ｍ Ｗ Ｓ） ，Ｐ ＣＶ ２
转 录方 向相 反 ， ＯＲ Ｆ ３编 码 一 种 病 毒 复 制 所 非 必 需
的非 结 构 蛋 白， 但 是 其 可 以 诱 导 宿 主 细 胞 的 凋 亡［ １ 。 ； ＯＲ Ｆ ４位 于 Ｏ Ｒ Ｆ ３基 因 的 内部 ， 编 码 方 向 与
猪圆环病毒2型ORF2基因片段的原核表达
猪圆环病毒2型ORF2基因片段的原核表达李裕;邓舜洲;傅胜才;黄勇;高华;刘文峰;张文波;陈松昌;万文忠【摘要】猪圆环病毒2型(PCV2)的衣壳蛋白由ORF2编码.采用PCR技术扩增得到ORF2基因片段,克隆入pUCm-T载体,构建了重组质粒pUCm-PCV2-ORF2.根据pUCm-PCV2-ORF2测序结果设计引物,用Pfu酶扩增替换稀有密码子三联体.改造后的基因片段连接入表达载体pGEX-4T-1,并转化到BL21 (DE3)宿主菌,成功构建了GST-PCV2-ORF2蛋白大肠杆菌工程菌.经诱导表达后,对以包涵体形式存在的GST-PCV2-ORF2重组蛋白进行纯化、复性.复性后的GST-PCV2-ORF2重组蛋白具有良好的反应原性.【期刊名称】《湖南畜牧兽医》【年(卷),期】2016(000)004【总页数】3页(P39-41)【关键词】PCV2;ORF2;基因;原核表达【作者】李裕;邓舜洲;傅胜才;黄勇;高华;刘文峰;张文波;陈松昌;万文忠【作者单位】湖南省兽药饲料监察所,湖南长沙410006;江西农业大学动物科学技术学院,江西南昌330045;湖南省畜牧兽医研究所,湖南长沙410006;湖南省兽药饲料监察所,湖南长沙410006;沅江市畜牧水产局,湖南沅江413100;江西农业大学动物科学技术学院,江西南昌330045;江西农业大学动物科学技术学院,江西南昌330045;南昌金牧动物保健服务有限公司,江西南昌330013;南昌金牧动物保健服务有限公司,江西南昌330013【正文语种】中文【中图分类】S852.43猪圆环病毒属于圆环病毒科圆环病毒属。
根据致病性、抗原性、基因序列的不同，猪圆环病毒分为猪圆环病毒1型(PCV1)和猪圆环病毒2型(PCV2)。
PCV1和PCV2都广泛存在于全世界的猪群中。
PCV1无致病性。
PCV2能损伤猪的免疫系统，表现出多种病症。
这些病症有断奶仔猪多系统衰竭综合征(PM W S)、皮炎肾病综合征(PDNS)、猪呼吸道疾病复合症(PRDC)、繁殖障碍、肉芽肿性肠炎、渗出性皮炎、坏死性淋巴结炎、仔猪先天性震颤。
猪圆环病毒2型REP蛋白的原核表达及免疫原性鉴定
猪圆环病毒2型REP蛋白的原核表达及免疫原性鉴定徐萍;范娟;叶正琴;魏荣荣;宋庆庆;丁国伟【摘要】[目的]开发和研制鉴别猪圆环病毒疫苗免疫和野毒感染的ELISA检测试剂盒.[方法]根据NCBI数据库录入的2型猪圆环病毒(porcine circovirus 2,PCV-2)REP蛋白序列(GenBank登录号为KX828581)设计引物,利用PCR扩增REP蛋白全长基,构建原核表达载体pET-28a-rep,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,并诱导重组蛋白表达.[结果]经过SDS-PAGE分析,获得了大小约40 ku的目的蛋白,与理论大小相一致.重组蛋白经镍柱纯化后重组蛋白浓度为40μg/mL,纯度约95％.Western Blot及ELISA鉴定结果显示,该重组蛋白具有良好的免疫原性和反应原性.[结论]鉴于该重组蛋白具有良好的免疫原性及反应原性,该重组蛋白可为开发区分猪圆环病毒2型疫苗免疫和野毒感染的检测试剂盒奠定基础.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2018(046)028【总页数】4页(P84-87)【关键词】PCV-2;REP蛋白;原核表达;免疫原性【作者】徐萍;范娟;叶正琴;魏荣荣;宋庆庆;丁国伟【作者单位】扬州优邦生物药品有限公司,江苏扬州225008;扬州优邦生物药品有限公司,江苏扬州225008;扬州优邦生物药品有限公司,江苏扬州225008;扬州优邦生物药品有限公司,江苏扬州225008;扬州优邦生物药品有限公司,江苏扬州225008;扬州优邦生物药品有限公司,江苏扬州225008【正文语种】中文【中图分类】S858.28猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2，PCV-2)是近年来危害养猪业的重要病原之一，可以引发猪圆环病毒病(PCVD)，包括断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪皮炎肾病综合征(PDNS)、猪呼吸道病以及繁殖障碍等[1-2]。
猪圆环病毒2型ORF2基因片段的克隆与原核表达
Ａｂ ｔａ ｔ ｓｒ ｃ ：Ｔｈ ｒ ｃ ｔ ｄ ｆａ ｍ ｅ ｆＰＣＶ２ ｏＲＦ２ ｅ ｅ ｗａ ｍｐｌｆｅ ｅ ｔ ｕｎ ａ ｅ ｒ ｇ ｎｔｏ ｇ ｎ ｓａ ｉｉ ｄ ｂｙ ＰＣＲ ｒ ｍ ｈｅ ＰＣＶ２ ｉ ｆｏ ｔ 一ｎ— ｆｃ ｅ ｅ ｔ ｄ ＰＫ 一１ ｅ ｌ ．Ｔｈ ｃ ｌｓ ５ ｅ ＰＣＲ ｏ ｕｃ ｓ ｃｏｎ ｄ ｕ ｉ ｇ ｐ Ｄ 一 １ ｐｒ ｄ ｔ ｗａ ｌ ｅ ｓ ｎ Ｍ ｖ ｃ ｏｒａ ｏ ｉｍｅ ｙ ｒ — ８Ｔ ｅ ｔ ｎｄ ｃ ｎｆｒ ｄ ｂ ｅ ｓ ｒｃ ｎ ｙ ｅ ａ ｌ ｓｓ ａ ｔｉｔ ｅ ｚ ｍ ｎａ ｙ ｉ ｎｄ ＤＮＡ ｅ ｅ ｉ ｇ． Ｔｈｅ ｓ ｑｕ ｎｃｎ ｎ，ａ ｐｒ ｋａ ｙ ｉ ｘ ｅ ｓｏ ｅ ｔ ｒ ｐＥＴ 一２ ａ— ｏ ｒ ｏｔｃ ｅ ｐｒ ｓ ｉ ｎ ｖ ｃ ｏ ８ ＯＲＦ２ Ｗａ ｏｎ ｔ ｕ ｔ ｄ ｓｃ ｓ ｒ ｃ ｅ ．Ａｆ ｅ ｄ ｎｔｆｃ ｔｏ ｔ ｒｉ ｅ ｉｉａ ｉ ｎ，ｔ ｅ ｒ ｃ ｍ ｂ ｎ ｎｔｐｌ ｓ ｉ ｓｔ ａ ｆ ｒ ｄ ｉ ｔ Ｃ ｈ ｅ ｏ ｉ ａ ａ ｍ ｄ ｗａ ｒ ｎｓ ｏ ｍｅ ｎ ｏ Ｅ． Ｏ—
2型猪圆环病毒ORF2基因的原核表达
２型 猪 圆环 病 毒 Ｏ Ｆ Ｒ ２基 因 的原 核 表 达
梁 辰 张 勇 刘 强 马 晶 ， 丽 娟２ ， ， ， 苗
（． １吉林农业科技学院 ２０ 级动物医学专业学生 ， ０６ 吉林 １ １１２ 吉林农业科 技学 院动物 医学学院 ， ３ ０；． ２ 吉林 １ １１ ３ ０） ２
第 １ 卷 第 ３期 ９ ２１ ０ ０年 ９月
吉林 农业科 技 学 院学报
Ｊｕｎｌ ｆ ｉｎＡ ｒｕｔｒ ｃ ｎｅ ｎ ｅｈ ｏ ｇ ｏ ｅｅ ｏｒａ ｏ Ｊ ｉ ｇｉ ｌ ａ Ｓｉ ｃ ｄＴ ｃｎｌ ｙＣ ｌｇ ｌ ｃ ｕ ｌ ｅ ａ ｏ ｌ
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猪圆环病毒 ２ Ｐｒｎ ｒ ｖｕ ２Ｐ ｖ ） 型（ｏ ｉ ｃｃ ｉｓ ，Ｃ ２ 是 ｃ ｅ ｉ ｏｒ 断奶仔猪 多系统衰竭综合征 （ｏ ｗａ ｎ ｕｉ ｓ Ｐｓ ｅ ｉ ｍ ｌ ｙ． ｔ ｎｇ ｔ ｓ ｔ ｉ ｗｓｎ ｎｒ ｅ Ｐ ｒ 等相关疾病 的主要 ￣ ｃ ａｉ ｓ ｄ ｍ ， 邶 ｓ ｍ ｔｇ ｙ ｏ ） 病原 。该病 １９ 年在加拿大首次报道… ， ９１ １ 主要感 染５ ｌ ～ ２周龄仔猪 ， 致死率可达 ４ ％［ ，Ｃ ２在 ０ ＰＶ 淋巴细胞增殖 ， 可引起免疫细胞的凋亡， 损伤猪体 的免疫 系统 造成免疫 抑制【 ， ３ 易造成 Ｐ Ｖ Ｐ Ｒ ｊ Ｐ 、Ｒ Ｓ 及其他疾病 的继发感染［ ， ４ 给全世界养猪业带来 １
猪圆环病毒2型检测技术及研究进展
猪圆环病毒2型检测技术及研究进展猪圆环病毒2型（PRRSV-2）是一种严重危害猪健康的病毒，对猪场养殖业造成了严重的经济损失。
猪圆环病毒2型检测技术及研究的进展备受关注。
本文将对猪圆环病毒2型检测技术及研究进展进行介绍。
猪圆环病毒2型是一种RNA病毒，主要感染猪的肺泡巨噬细胞和树突细胞，引起猪的呼吸道疾病。
该病毒具有高变异性和抗原异质性，使得对其检测和控制具有一定的困难。
目前，针对猪圆环病毒2型的检测技术主要包括病毒抗原检测、病毒核酸检测和抗体检测。
病毒抗原检测是目前应用最为广泛的检测技术之一，其原理是利用酶联免疫吸附试验（ELISA）或荧光素酶免疫吸附测定（FIA）等方法检测猪血清、血浆或组织样品中的猪圆环病毒2型抗原。
病毒核酸检测则是通过聚合酶链式反应（PCR）技术检测病毒在猪体内的核酸含量，可快速、准确地检测猪圆环病毒2型的感染情况。
抗体检测则是通过酶联免疫吸附试验（ELISA）等方法检测猪血清或血浆中的病毒抗体水平，用于评估猪圆环病毒2型的感染和免疫情况。
近年来，针对猪圆环病毒2型的检测技术不断得到改进和提高，使得对该病毒的检测更加快速、准确和灵敏。
新型ELISA检测试剂盒的开发，可以大大缩短检测时间，提高检测的准确性；PCR技术的改进也使得对病毒核酸的检测更为灵敏和快速；抗体检测方面也出现了更加精准的检测方法，能够更好地评估猪圆环病毒2型的感染和免疫情况。
除了检测技术的不断改进之外，针对猪圆环病毒2型的研究也在不断深入。
研究人员对猪圆环病毒2型的传播途径、致病机制、病毒变异性等方面进行了深入研究，为更好地控制和防治该病毒提供了重要的理论支持。
研究人员还不断寻找新的疫苗和药物来应对猪圆环病毒2型的感染，为猪场养殖业的健康发展提供有力的支持。
猪圆环病毒ZZ株ORF2基因的克隆及原核表达
猪圆环病毒ZZ株ORF2基因的克隆及原核表达乔宏兴;张晓根;边传周;宁豫昌【摘要】对所分离鉴定的猪圆环病毒2型(PCV-2)ZZ株,参照GenBank中PCV-2全基因序列,设计1对特异性引物,利用PCR扩增出PCV-2ORF2片段,原核表达载体pET-32a(+)获得重组质粒pET-ORF2,IPTG进行诱导表述,并进行Western blot分析.结果表明,PCR扩增产物长度为702 bp,大小与预期的一致,成功构建重组质粒,经IPTG诱导成功获得分子质量约为30 ku的表达蛋白,该蛋白具有很好的免疫原性,为进一步研制PCV-2疫苗提供依据.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2012(033)001【总页数】4页(P33-36)【关键词】猪原环病毒2型;ORF2基因;原核表达【作者】乔宏兴;张晓根;边传周;宁豫昌【作者单位】郑州牧业工程高等专科学校生物工程系,河南郑州 450011;郑州牧业工程高等专科学校生物工程系,河南郑州 450011;郑州牧业工程高等专科学校生物工程系,河南郑州 450011;郑州牧业工程高等专科学校生物工程系,河南郑州450011【正文语种】中文【中图分类】S852.659.2;Q786猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2，PCV－2）是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（Postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS）和相关疾病的重要病原，德国学者Tisher首次在PK－15细胞中发现 PCV－2 ［1－2］。
郎洪武等［3］对国内7个省（市）的559份猪血清进行了检测，猪群PMWS抗体的阳性率为42.9% ，表明该病在中国很多猪场广泛存在，并且与其他猪病毒如猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪蓝耳病病毒等混合感染给养猪业造成了巨大损失，已成为阻碍中国养猪业发展的重要疾病之一。
PCV是一种无囊膜，直径平均为17nm的DNA病毒［4］。
猪圆环病毒2型ORF2基因与猪瘟病毒E2基因在奶山羊胎儿成纤维细胞中的表达与生物活性的鉴定
猪圆环病毒2型ORF2基因与猪瘟病毒E2基因在奶山羊胎儿成纤维细胞中的表达与生物活性的鉴定猪圆环病毒2型ORF2基因与猪瘟病毒E2基因在奶山羊胎儿成纤维细胞中的表达与生物活性的鉴定引言：猪圆环病毒2型（Porcine Circovirus Type 2，PCV2）是一种引起猪圆环病毒病的病毒，主要侵害幼猪，导致猪瘦肉病等严重疾病。
猪瘟病毒（Classical Swine Fever Virus，CSFV）是一种致命的猪类病毒性疾病，造成猪群的严重经济损失。
为了更好地了解这两种病毒的表达与生物活性特性，本研究旨在鉴定猪圆环病毒2型ORF2基因和猪瘟病毒E2基因在奶山羊胎儿成纤维细胞中的表达情况和生物活性。
材料与方法：1. 实验所需材料：本实验所需的材料包括奶山羊胎儿成纤维细胞（Fetal Goat Fibroblast Cells），猪圆环病毒2型ORF2基因和猪瘟病毒E2基因的质粒DNA，靶向连接酶，转染试剂等。
2. 质粒构建：将pcDNA3.1 (+)质粒与ORF2基因或E2基因分别通过限制性内切酶切割，加入靶向连接酶，反应后回收得到pcDNA3.1-ORF2和pcDNA3.1-E2。
3. 细胞培养与转染：将奶山羊胎儿成纤维细胞接种于含有DMEM培养基和10%胎牛血清的细胞培养板中，37°C、5% CO2条件下培养至细胞贴壁生长至80%。
4. 转染实验：将pcDNA3.1-ORF2和pcDNA3.1-E2质粒DNA分别与转染试剂混合，静置15分钟后滴加到培养基中，继续培养24小时。
结果与讨论：通过荧光显微镜观察，发现在转染实验后，奶山羊胎儿成纤维细胞中出现了明显的荧光信号，表明ORF2基因和E2基因在细胞中得到了成功表达。
进一步通过Western blotting和免疫荧光染色等技术鉴定，结果证实了ORF2和E2蛋白在转染细胞中的存在。
为了进一步了解ORF2和E2的生物活性，我们进行了细胞增殖实验和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测。
猪圆环病毒2型ORF1基因的克隆与原核表达
猪圆环病毒2型ORF1基因的克隆与原核表达郭颖初;王开功;周碧君;程振涛;文明;温贵兰;汪德生【摘要】为了给猪圆环病毒病的诊断及防制提供科学依据,试验参考GenBank中猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2) ORF1基因序列,设计1对特异性引物,进行ORF1基因的PCR扩增,扩增出PCV2贵州株ORF1基因片段.扩增产物与pMD18-T载体连接、鉴定正确后,再亚克隆至pET-30a(+)原核表达载体中,经双酶切鉴定后测序.结果表明,ORF1基因在pET-30a(+)载体中位置正确,pET30a-PCV2-ORF1原核表达质粒构建成功,转化至Rosetta菌,用IPTG进行诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE检测,结果显示PCV2-ORF1在pET-30a(+)中获得了高效融合表达,其表达蛋白分子质量约为42 ku.重组蛋白主要以包涵体的形式表达,包涵体洗涤溶解后,采用Ni2+离子金属螯合亲和层析柱纯化蛋白,Western blotting分析结果表明,表达蛋白能和抗His标签的单克隆抗体反应.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2013(040)011【总页数】4页(P30-33)【关键词】猪圆环病毒2型;ORF1基因;原核表达;免疫印迹【作者】郭颖初;王开功;周碧君;程振涛;文明;温贵兰;汪德生【作者单位】贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025;贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025;贵州省动物疫病研究室,贵州贵阳550025;贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025;贵州省动物疫病研究室,贵州贵阳550025;贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025;贵州省动物疫病研究室,贵州贵阳550025;贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025;贵州省动物疫病研究室,贵州贵阳550025;贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025;贵州省动物疫病研究室,贵州贵阳550025;贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025;贵州省动物疫病研究室,贵州贵阳550025【正文语种】中文【中图分类】S852.65+9.2猪圆环病毒（porcine circovirus，PCV）属圆环病毒科（Circoviridae）（King 等，2012），为单股负链DNA病毒，是目前已知最小的动物病毒之一。
2型猪圆环病毒ORF2基因的原核表达
2型猪圆环病毒ORF2基因的原核表达梁辰;张勇;刘强;马晶;苗丽娟【摘要】本研究克隆、原核表达了猪圆环病毒2型Cap蛋白.根据新分离毒株PCV2-871的已知序列设计一对引物,PCR扩增其去掉核定位信号的OBF2基因,命名为pcv-581,利用引入的双酶切位点BamHI/HindⅢ将其连接到表达栽体pQE-32中,命名为pQE-pcv581转化大肠杆菌M15中,经IPIG诱导表达和SDS-PAGE 鉴定,发现去核定位信号的OBF2片段可以大量表达.【期刊名称】《吉林农业科技学院学报》【年(卷),期】2010(019)003【总页数】4页(P3-6)【关键词】猪圆环病毒2型;Cap蛋白;原核表达【作者】梁辰;张勇;刘强;马晶;苗丽娟【作者单位】吉林农业科技学院,吉林,132101;吉林农业科技学院,吉林,132101;吉林农业科技学院,吉林,132101;吉林农业科技学院,吉林,132101;吉林农业科技学院动物医学学院,吉林,132101【正文语种】中文【中图分类】S85猪圆环病毒2型(Porcine circovirus2,PCV2)是断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemicwasting syndrome,PMWS)等相关疾病的主要病原。
该病1991年在加拿大首次报道[1],主要感染5～12周龄仔猪,致死率可达40%[2],PCV2在淋巴细胞增殖,可引起免疫细胞的凋亡,损伤猪体的免疫系统造成免疫抑制[3],易造成PPV、PRRS及其他疾病的继发感染[4],给全世界养猪业带来巨大的经济损失[5]。
PCV2是圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属成员[6],为单股环状负链无囊膜的DNA病毒,为已知的最小动物病毒之一,约17～20nm,二十面体对称。
根据病毒的抗原性和基因组成不同,可分为2种基因型或称血清型,即 PCV1型和 PCV 2型。
PCV1无致病性[7];PCV2具有致病性[8],基因组全长1767bp或1768bp,包括11个读码框,其中ORF2编码病毒的主要结构蛋白—核衣壳蛋白(Cap)[9],其N端包含一个由41个氨基酸残基组成的的核定位信号(Nuclear loca-tion signal,NLS),与PCV 2在细胞核内定位有关[10]。
猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达及反应原性分析
猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达及反应原性分析欧云文;马小元;王俊;丁耀忠;张永光;张杰【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2017(038)004【摘要】研究猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白的抗原性,为开发PCV2的检测方法奠定基础.以PCV2 CAU0673毒株的DNA为模板,扩增获得702 bp的目的片段,扩增产物克隆入pET30a(+)原核表达载体,构建pET30a-PCV2-ORF2重组质粒,转入大肠埃希菌BL21(DE3);在37 ℃以1 mmol/L IPTG诱导表达6 h;采用Ni-NTA 树脂亲和层析纯化重组蛋白,并用不同浓度的尿素对纯化蛋白进行复性.SDS-PAGE 分析表明,该ORF2编码基因在大肠埃希菌中得到表达,蛋白大小约为34ku;Western blot检测结果表明,该重组Cap蛋白与PCV2阳性血清发生特异性反应,与NA-PRRSV和PPV1血清不发生交叉反应.成功构建了PCV2-ORF2原核表达载体,实现了在大肠埃希菌中的表达,纯化后的复性蛋白具有较好的反应原性,为猪圆环病毒2型检测方法建立或试剂盒的开发奠定了基础.%This experiment was aimed to study the antigenicity of Cap protein of porcine circovirus type 2(PCV2).The gene was amplified from the DNA of PCV2-CAU0673 strain by PCR,whose product was approximately 702 bp.The product was cloned into pET30a(+)vector,PCR,digestion and sequencing were used to identify positive plasmid.The positive recombined plasmid was expressed by E.coli BL21(DE3)and was induced by IPTG.The recombinant protein was purified by Ni-NTA and refolding.The results of SDS-PAGE showed that the recombined protein was successfully expressed in E.coli BL21(DE3)with arelative molecular weight of 34 ku.The results of Western blot showed that this recombined protein was specifically reacted with PCV2 positive serum;no cross reacted with NA-PRRSV and PPV1 positive serum.The recombinant vector pET30a-PCV2-ORF2 was successfully constructed,and the recombined Cap protein with excellent reactinogenicity was successfully expressed in E.coli which laid a foundation for the diagnosis of PCV2.【总页数】6页(P1-6)【作者】欧云文;马小元;王俊;丁耀忠;张永光;张杰【作者单位】甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州 730070;中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃兰州 730046;中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃兰州 730046;中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃兰州 730046;中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃兰州730046;中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃兰州 730046;中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃兰州 730046【正文语种】中文【中图分类】S852.659.2【相关文献】1.猪圆环病毒2型Cap蛋白原核可溶性表达及分析 [J], 陈稳;郭军庆;王寅彪;金前跃;郅玉宝;王彦彬;张改平2.猪圆环病毒2型ORF2基因片段的原核表达及间接ELISA诊断方法的初步建立[J], 屈素洁;何苹萍;秦毅斌;朱芸;陈琼;黄伟坚3.猪圆环病毒2型ORF2-ORF1串联基因的原核表达及活性分析 [J], 闻晓波;侯喜林;倪宏波;李冬野;李树东;冉旭华;李晓娟;邵磊;王密;朴范泽;杨焕民4.猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达及其免疫原性检测 [J], 梁晓艳;李玉林;李兆学;王继美;贾丽锋;周贺娟;王云龙5.猪圆环病毒2型Cap羧基端多肽原核表达及抗原性分析 [J], 俞莉俐;姜平;冯志新;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
猪圆环病毒2型ORF2基因序列分析及真核表达载体的构建
猪圆环病毒2型ORF2基因序列分析及真核表达载体的构建芦银华;陈德胜;华修国;黄伟坚;谈国蕾;陈溥言【期刊名称】《中国病毒学》【年(卷),期】2002(017)001【摘要】根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因序列,设计一对引物,应用PCR从疑患断奶仔猪多系统消耗综合症(PMWS)的死亡仔猪组织病料中扩增出ORF2全基因(702bp).将此片段克隆入pGEM-T easy载体,筛选获得重组质粒pTORF2,并对此质粒中的插入序列进行了测序分析,结果表明本试验克隆的ORF2与美国PCV-2分离株AF264039的核苷酸及氨基酸序列同源性均达到100%,与其他PCV-2毒株同源性分别为92.3%～98 6%和92.3%～96.6%.重组质粒pTORF2经BamH I、EcoR V双酶切,回收ORF2基因,转移入真核表达载体pSec-Tag2/HygroB的相应酶切位点之间,构建成重组质粒pSecTagORF2.此重组表达载体的构建成功为进一步研究ORF2编码蛋白的生物学活性及建立PCV诊断试剂盒打下基础.【总页数】5页(P87-91)【作者】芦银华;陈德胜;华修国;黄伟坚;谈国蕾;陈溥言【作者单位】南京农业大学动物医学院,南京,210095;南京农业大学动物医学院,南京,210095;上海交通大学农学院,上海,200030;南京农业大学动物医学院,南京,210095;南京农业大学动物医学院,南京,210095;南京农业大学动物医学院,南京,210095【正文语种】中文【中图分类】S85【相关文献】1.猪2型圆环病毒ORF2基因在塞姆利基森林病毒RNA复制子衍生的新型真核表达载体中的表达 [J], 罗玉子;仇华吉;刘建华;韩凌霞;李娜;张守;童光志2.猪2型圆环病毒辽宁分离株ORF2基因真核表达载体的构建及鉴定 [J], 关淼3.猪圆环病毒2型ORF2基因的定点突变及其真核表达载体的构建 [J], 张艳萍;苏丹萍;贺东生4.猪圆环病毒2型武威株ORF2基因序列分析及真核表达载体的构建 [J], 马友记;柳纪省;赵兴绪5.猪圆环病毒2型ORF2基因的克隆及其真核表达载体的构建 [J], 陈圆圆;孙彦婷;邝爱丽;彭志锋;刘春生;郑鹿平;刘慧敏;王川庆因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
14760208_猪圆环病毒_2_型_ORF2_基因重组植物乳杆菌的构建及其免疫原性分析
!1 期
倪能能等$猪圆环病毒0型 M8U0基因重组植物乳杆菌的构建及其免疫原性分析
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猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达及其免疫原性检测
动物医学进展,2010,31(9):6367Pr ogress in Veterinary Medicine猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达及其免疫原性检测梁晓艳1,李玉林2,李兆学3,王继美2,贾丽锋1,周贺娟1,王云龙1,2*(1.郑州大学,河南郑州450002;2.河南省生物工程技术研究中心,河南郑州450002;3.河南工业大学,河南郑州450002)摘要:以病猪脾脏组织为材料,提取总RNA,通过RT PCR 得到579bp 的猪圆环病毒2型(PCV 2)/ORF2片段,与原核表达载体pET32a 重组,通过菌落PCR 鉴定、双酶切鉴定及测序鉴定后,证实重组质粒pET 32a/ORF2构建成功,将其转化入表达菌Balgold,通过IPT G 诱导表达,利用Ni NT A 亲和层析纯化目的产物,Western blot 验证其免疫原性,重组蛋白免疫Balb/c 小鼠,检测小鼠体内中和抗体滴度。
获得的重组蛋白包涵体的形式出现,表达量占菌体总蛋白的30%,变性纯化后纯度达90%以上,Western blot 证实重组蛋白能与PCV 2阳性血清发生反应,免疫Balb/c 小鼠45d 后中和抗体滴度达到122。
关键词:猪圆环病毒;ORF2;原核表达;免疫原性中图分类号:S852.659.2;S858.28文献标识码:A文章编号:10075038(2010)09006305猪圆环病毒2型(PCV 2)是危害养猪业的一种重要病原,可引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PM WS)[1]。
除此之外,PCV 2还与猪呼吸道综合症(PRDC)、母猪繁殖障碍、猪皮炎和肾病综合征(PD NS),肉芽肿性肠炎、渗出性表皮炎及肝炎等疾病有关[26],因此PCV 2感染给养猪业造成的危害严重。
PCV 2为圆环病毒科圆环病毒属成员,是一种无囊膜、20面体对称、共价闭合、环状单股DNA 病毒。
病毒粒子直径平均为17nm,基因全长1767bp 或1768bp,有11个阅读框(ORF),其中ORF1和ORF2是最主要的阅读框[7]。
猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达
猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达郭春艳;葛俊伟;李一经【期刊名称】《东北农业大学学报》【年(卷),期】2009(040)006【摘要】猪圆环病毒是引起猪多系统袭竭综合征的重要病原,全病毒培养十分困难,避开培养病毒,得到大量的检测抗原,对诊断本病有着重要的意义.本研究对疑似猪圆环病毒2型感染猪脾脏提取病毒DNA,进行套式PCR扩增获得了猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因序列,并将扩增片段定向插入质粒栽体pPRO-HTb,转化BL21大肠杆茵后,构建了表达猪圆环病毒2型ORF2蛋白的重组原核表达系统.经IPTG诱导,对表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析,表明ORF2基因在大肠杆菌中得到了表达,表达产物以包涵体形式存在于菌体中,通过提取包涵体,获得了初步纯化的ORF2蛋白,为进一步利用PCV2 ORF2蛋白抗原进行PCV血清学检测提供了基础.【总页数】6页(P79-84)【作者】郭春艳;葛俊伟;李一经【作者单位】东北农业大学动物医学学院,哈尔滨,150030;东北农业大学动物医学学院,哈尔滨,150030;东北农业大学动物医学学院,哈尔滨,150030【正文语种】中文【中图分类】S855.3【相关文献】1.2型猪圆环病毒ORF2基因的原核表达 [J], 梁辰;张勇;刘强;马晶;苗丽娟2.猪圆环病毒2型ORF2基因原核表达蛋白间接ELISA检测方法的建立 [J], 高超;肖冲;高瑞峰;胡桂学3.猪圆环病毒2型ORF2基因片段的克隆与原核表达 [J], 祁艳华;王爱萍;李学伍;游雷鸣;史平玲;胡峰;张改平4.猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达及反应原性分析 [J], 欧云文;马小元;王俊;丁耀忠;张永光;张杰5.猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达及其免疫原性检测 [J], 梁晓艳;李玉林;李兆学;王继美;贾丽锋;周贺娟;王云龙因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
猪圆环病毒2型ORF3基因的原核表达
猪圆环病毒2型ORF3基因的原核表达冉旭华;李晓娟;李冬野;周恩民;李树东;闻晓波;王密;杨焕民;倪宏波;侯喜林;朴范泽;邵磊【摘要】用原核表达系统表达猪圆环病毒2型ORF3基因,分析ORF3蛋白的抗原性.根据GenBank上公布的猪圆环病毒2型(PCV-2)核苷酸序列进行分析,针对ORF3基因设计并合成1对特异性引物,PCR扩增该基因,并将此片段克隆入原核表达载体pET-32a(+)上,命名为pET32a-ORF3,转化大肠杆菌Rosetta-blue(DE3)pLac Ⅰ感受态细胞,1.0 mmol/L IPTG 37℃诱导表达.结果表明,PCR扩增得到315 bp的片段,重组蛋白大小约为29 ku,与预期大小相符.Western blotting分析结果表明,重组蛋白能与抗His-tag的单克隆抗体反应.不与PCV-2阳性血清发生反应.猪圆环病毒2型ORF3基因能在大肠杆菌中成功表达,但与阳性血清之间没有反应原性,为进一步研究PCV-2 ORF3蛋白的功能及特性奠定基础.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2010(037)006【总页数】4页(P171-174)【关键词】猪圆环病毒2型;ORF3基因;原核表达【作者】冉旭华;李晓娟;李冬野;周恩民;李树东;闻晓波;王密;杨焕民;倪宏波;侯喜林;朴范泽;邵磊【作者单位】黑龙江八一农垦大学动物科技学院,预防兽医学省重点实验室,大庆,163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院,预防兽医学省重点实验室,大庆,163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院,预防兽医学省重点实验室,大庆,163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院,预防兽医学省重点实验室,大庆,163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院,预防兽医学省重点实验室,大庆,163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院,预防兽医学省重点实验室,大庆,163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院,预防兽医学省重点实验室,大庆,163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院,预防兽医学省重点实验室,大庆,163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院,预防兽医学省重点实验室,大庆,163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院,预防兽医学省重点实验室,大庆,163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院,预防兽医学省重点实验室,大庆,163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院,预防兽医学省重点实验室,大庆,163319【正文语种】中文【中图分类】S852.65+9.2猪圆环病毒2型(porcine circovirus serotype 2,PCV-2)能引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaning m ultisystemic wasting syndrome,PMWS)、猪增生性坏死性肺炎(porcine proliferative and necrotizing pneumonia,PNP)和仔猪先天性震颤等诸多疾病(Segalés等,2005)。
猪圆环病毒2型ORF2-ORF1串联基因的原核表达及活性分析
猪圆环病毒2型ORF2-ORF1串联基因的原核表达及活性分析闻晓波;侯喜林;倪宏波;李冬野;李树东;冉旭华;李晓娟;邵磊;王密;朴范泽;杨焕民【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2010(031)002【摘要】为探讨原核表达的PCV-2 ORF2-ORF1串联蛋白的抗原性及其作为基因工程亚单位疫苗的可能性,以构建好的PCV-2大庆分离株质粒pMD-18T/PCV-2为模板,PCR分别扩增去掉核定位信号的Cap蛋白基因(dNLS-ORF2)和Rep蛋白基因(ORF1),将其串联克隆到原核表达载体pET30a(+)上,经PCR、酶切和测序鉴定,成功构建了重组质粒pET30a-ORF2/ORF1.转化E.coli BL21(DE3)pLysS感受态细胞,经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE电泳与Western blot分析.纯化的重组蛋白与PCV-2阳性血清发生特异性反应,并能与免疫小鼠的抗血清发生特异性反应.重组蛋白具有较好的免疫学活性,为基因工程亚单位疫苗的研制奠定了基础.【总页数】4页(P41-44)【作者】闻晓波;侯喜林;倪宏波;李冬野;李树东;冉旭华;李晓娟;邵磊;王密;朴范泽;杨焕民【作者单位】黑龙江八一农垦大学动物科技学院,预防兽医学省重点实验室,黑龙江大庆,163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院,预防兽医学省重点实验室,黑龙江大庆,163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院,预防兽医学省重点实验室,黑龙江大庆,163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院,预防兽医学省重点实验室,黑龙江大庆,163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院,预防兽医学省重点实验室,黑龙江大庆,163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院,预防兽医学省重点实验室,黑龙江大庆,163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院,预防兽医学省重点实验室,黑龙江大庆,163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院,预防兽医学省重点实验室,黑龙江大庆,163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院,预防兽医学省重点实验室,黑龙江大庆,163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院,预防兽医学省重点实验室,黑龙江大庆,163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院,预防兽医学省重点实验室,黑龙江大庆,163319【正文语种】中文【中图分类】Q786【相关文献】1.猪圆环病毒2型 ORF4基因的原核表达及多克隆抗体的制备 [J], 王净修;高章照;姜永厚;吴海港;饶品彬;全滟平;徐辉2.猪圆环病毒2型Cap基因的原核表达及ELISA检测方法的建立 [J], 乔宏兴;边传周3.猪圆环病毒2型ORF2基因片段的原核表达及间接ELISA诊断方法的初步建立[J], 屈素洁;何苹萍;秦毅斌;朱芸;陈琼;黄伟坚4.猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达及反应原性分析 [J], 欧云文;马小元;王俊;丁耀忠;张永光;张杰5.猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达及其免疫原性检测 [J], 梁晓艳;李玉林;李兆学;王继美;贾丽锋;周贺娟;王云龙因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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摘 要 ： 为探 讨原核 表 达 的 Ｐ Ｖ ２ＯＲ ２ＯＲ １串联 蛋 白的抗 原性及 其 作为基 因工程 亚单 位疫 苗的 可 Ｃ 一 Ｆ － Ｆ
１ ２ 方 法 ．
本研 究 利 用 Ｄ ＮＡ 重 组 技 术 将 去 除 ＮＬ Ｓ的 Ｏ ２ ＲＦ
（ ＮＩ — Ｆ ） Ｏ １基 因 串联 克 隆 到 表 达 载 体 ｄ ＯＲ ２ 与 ＲＦ Ｓ
动 物 医 学 进 展 。 ０ ０， １ ２ ： 卜４ ２１ ３ （）４ ４
Ｐｒ ｒ ｓ ｎ Ｖ ｅ ｅ ｉ ａ ｙ Ｍ ｅ ｃ ｎｅ ｏｇ ｅ ｓ ｉ ｔ ｒｎ ｒ ｄｉ ｉ
猪 圆环 病 毒 ２型 ＯＲＦ 一 ２ＯＲＦ １串联 基 因的原 核 表 达 及 活 性 分 析
闻 晓波 ， 冬 野 ， 树 东 ， 旭 华 ， 晓娟 ， 李 李 冉 李 邵 磊 ， 王 密 ， 范 泽 ， 焕 民 ， 喜 林 ， 宏 波 朴 杨 侯 倪
一
农 垦大学 动 物科技 学 院预防兽 医学重 点 实验 室保 农 垦大 学动 物科技 学 院预 防兽 医学 实验 室构建 。
存 ， ＭＤ～８ ／ Ｃ 一 ｐ １ Ｔ Ｐ Ｖ ２大 庆 分 离 株 质 粒 由 黑 龙 江 八
一
等 ］ 。病原学 及 血 液 学 调 查 表 明该 病 毒 在 世 界 各 地广泛 存在 ， 重危 害世 界 养 猪业 的发 展｛ 严 。Ｐ Ｖ一 Ｃ ２ 因组 全长 １７ ７ｂ 基 ６ ｐ或 １７ ８ ｂ ， 包含 １ ６ ｐ 共 １个 开 放 阅读 框 （ Ｆ ， 中 ＯＲ １ ０Ｒ ２是两 个 最 大 的 ＯＲ ） 其 Ｆ 、 Ｆ 开放 阅读框 ， 别 编 码 复制 相 关蛋 白 （ ｅ 分 Ｒ ｐ蛋 白） 和
白， 研究 表 明其 Ｎ 端 含 有 一 个 由 ４ １个 氨 基 酸 残 基
组 成 的 核 定 位 信 号 （ ） 且 含 有 大 量 的 大 肠 埃 希 ＮＩ ， Ｓ 菌 稀 有 密 码 子 ， 将 严 重 影 响 外 源 蛋 白 的 表 达 。 这
清均 为黑龙 江八 一农 垦大学 动物 科技 式 ＤＮＡ胶 回收试 剂 盒 购 自上海 华 舜 生 物工 程 有
限 公 司 ；ｇ ＨＲＰ ｇ ａ ａ ｔ ｓ ｎ ） ＩＧ ＨＲ ｇ ａ ＩＧ— （ ｏ ｔ ｎｉ ｗｉｅ 、ｇ — Ｐ（ｏ ｔ — ａ ｔ ｍｏ ｓ ） 自 Ｊｃ ｓ ｎ公 司 ． Ｃ ２阳 性 、 性 血 ｎｉ ｕ ｅ购 — ａｋ ｏ Ｐ Ｖ一 阴
１ 材 料 与 方 法
１ １ 材 料 ．
是近 年来新 发现 的 、 害养 猪业 较严 重 的病 毒 之 一 ， 危 该病 毒 与猪 的多 种疾 病 综 合 征 密 切相 关 ， 括 猪 断 包 奶 后 多 系 统 衰 竭 综 合 征 （ ｏ ｔ ａ ｉｇ ｍｕｔ ｓｓ Ｐ ｓ～ ｎｎ ｌ—ｙ — ｗｅ ｉ ｔｍｉ ｗａｔ ｇｓ ｎ ｒ ｍｅ Ｐ ｅ ｃ ｓｉ ｙ ｄ ｏ ， ＭＷＳ 和 母 猪 的 繁 殖 障 ｎ ）
疫苗的研 制奠 定 了基础 。
关键 词 ： 圆环 病毒 ２型 ； 猪 ＯＲＦ ； Ｒ １ 表达 ２Ｏ Ｆ ；
中图 分 类 号 ： ８ Ｑ７ ６ 文 献标 识码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ７５ ３ （０ ０ ０ —０ １ ４ １０ —０ ８ ２ １ ） ２０ ４— ０
猪 圆环 病 毒 ２型 （ ｏ ｃ ｅ ｉ ｏ ｉ ｓ ，Ｐ Ｖ一） Ｐ ｒｉ ｒ ｖｒ ｎ ｃ ｃ ｕ ２ Ｃ ２
经 Ｉ Ｔ 诱 导 后 ， 行 Ｓ ＳＰ Ｐ Ｇ 进 Ｄ — ＡＧＥ 电泳 与 Ｗ ｅｔｒ ｌｔ 析 。 纯 化 的 重 组 蛋 白 与 Ｐ Ｖ ２ 阳 性 血 清 发 生 特 ｓｅｎｂｏ 分 Ｃ 一
异 性反应 ， 能与免 疫 小鼠 的抗血 清发 生特 异性反应 。重组蛋 白具 有较 好 的免 疫 学活性 ， 并 为基 因工程 亚单 位
能性 ， 构 建 好 的 Ｐ Ｖ ２大 庆 分 离株 质 粒 ｐ Ｉ－８ Ｐ Ｖ一 模 板 ， Ｃ 分 别 扩 增 去 掉 核 定 位 信 号 的 Ｃ ｐ 以 Ｃ 一 Ｍ ）Ｉ Ｔ／ Ｃ ２为 Ｐ Ｒ ａ
蛋 白基 因（ ＮＬ — Ｆ ） Ｒ ｐ蛋 白基 因（ ｄ ＳＯＲ ２ 和 ｅ ＯＲＦ ） 将 其 串联 克 隆到 原 核表 达 载 体 ｐ Ｔ３ ａ ＋ ） ， Ｐ Ｒ、 １， Ｅ ０（ 上 经 Ｃ 酶切 和测 序鉴 定 ， 功构 建 了重组质 粒 ｐ Ｔ ０— Ｆ ／ Ｆ 。转化 Ｅ ｃｌ Ｂ ２ （ ３ ｐ ｙＳ感 受 态细胞 ， 成 Ｅ ３ ａｏＲ ２ ＯＲ １ ．ｏｉ Ｌ １ ＤＥ ） Ｌ ｓ
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