喜树碱提取的关键技术

2．碱法提取
以乙醇为溶剂提取CT不仅成本高且通常提取时间较长能量消耗较大。以稀NaOH溶液为溶剂成本低提取反应在常温下进行提取时间短提取率也较高且无消防要求是一种相对于乙醇提取较理想的提取方法。王洋等用碱法提取喜树果粉中的CT并确定最佳试验条件为：提取时间3～4hNaOH溶液浓度0.3%用量为每次16 ml/g原料室温提取。
喜树(Camtotheca acumznata Decne．)属山乡莨萸目(Cornal-e.s)珙桐科(Nyssaceae)旱莲属植物落叶乔木分布于我国长江流域及西南各省和印度部分地区台湾、广西、河南等也有栽培最早的文字记载在1848年的《植物名实图考》中。1966年美国的Moneroe E．Wall从喜树的皮中分离出喜树碱(CamtothecinCT)经肿瘤试验证明这种色氨酸一萜烯类生物碱具有抗癌活性从而引起了人们的广泛关注。
喜树碱的生产主要有天然提取、全化学合成和半化学合成三种方法。
天然提取法制得的CT为S构型活性高。但由于含CT的天然植物资源有限、CT含量少且易受季节、产地等因素的影响从而限制了该法的广泛应用。天然提取法主要有有机溶剂法、碱法、柱层析法和树脂吸附法等方法。渗滤法所得产品的纯度稍低颜色较深但步骤简单回收率高后处理方便；碱法提取有提取时间短提取率高等优点；柱层析法和树脂吸附法所得产品的纯度高但得率稍低步骤繁琐。
1．有机溶剂提取与萃取分离
原料经粉碎按渗滤法以70%～90%乙醇为溶剂提尽可溶成分浓缩渗滤液滤除不溶物在滤液中用氯仿提取多次合并氯仿提取液回收氯仿于残留物中加氯仿：甲醇(1：1)并回流加热分去不溶物冷却溶液CT即可结晶析出重结晶后可得纯品熔点260℃以上既可药用。如呆反复重结晶熔点可以进一步提高。CT的毒性较大在提取时需小心操作。
人们先后从喜树果实、根、树皮中发现31种化合物其中喜树碱及其衍生物10余种。大量研究证实它们有良好的抗癌活性。但由于喜树碱不溶于水加之其钠盐毒副作用较大因此人们对喜树碱的结构改造进行了广泛研究旨在提高溶解度降低毒性延长内酯环在体内的保留时间及增加生物活性等。迄今所报道的喜树碱衍生物已经达数百种其中羟基喜树碱( Hydroxycamtotb-ecinHCT)拓普替康(TootecanTT9-NN’一二甲基亚胺基一10-羟基喜树碱)伊立替康（Camtothecin-11CT-1I）以及氨基、硝基喜树碱等在临床显示了广泛的抗癌活性。目前喜树碱类药物已进入临床阶段并获美国FAD的批准成为继紫杉醇之后第二个获准上市的具抗癌活性的天然药韧。总体来看临床试验所开发的衍生物主要有两类：一类是以CT-11和TT为代表的水溶性衍生物；另一类是以9一硝基和9一氨基为代表的喜树碱的水不溶性衍生物。
20世纪70年代初喜树碱进人临床研究阶段用喜树碱进行人体胃肠癌的实验性治疗对部分病人的症状有所缓解；用其钠盐的水溶液及腹腔注射方式还可治疗白血病和其他一些癌症。由于喜树碱的毒性和令人难以忍受的副作用如恶心、呕吐以及制成水溶性的钠盐后抗癌活性降低等原因使试验受阻喜树碱的研究一度进入低潮阶段。1985年Y．H. Hsiang发现喜树碱能阻断拓扑异构酶Itooisomerase Itool)的合成too I是一种与细胞分裂密切相关的一种酶阻断这种酶的产生即可阻止癌细胞的生长说明喜树碱的作用靶是too I而不是拓扑异构酶Ⅱ(tooⅡ)这是其抗癌机理的独特之处。这一发现掀起了喜树与喜树碱研究的新高潮。随后的10多年中人们对CT及其衍生物的药理作用进行了大量的研究发现这类药物除广泛的抗肿瘤活性外还具有抗病毒（可能的治疗艾滋病的作用）和治疗皮肤病等多方面的作用。
工艺要点如下：
①用80%乙醇室温浸泡24 h共浸泡5次；
②采用AB-8树脂27℃1 mol/L盐离子浓度H8的水相作为上柱吸附条件流速2 BV/h进行吸附；
③用6倍床体积H3的氯仿一乙醇(1：1)混合溶剂洗脱流速1：1)重结晶得CT成品。
3．柱层析提取分离
柱状层析法的基本过程是先用氯仿提取再向提取液中加工业乙醇后用乙酸乙酯提取经常压浓缩即得提取液。将提取液进行柱层析洗脱液为含2%、4%甲醇的氯仿含2%甲醇溶剂部分析出为CT含4%甲醇部分析出的淡黄色棱柱状晶体为HCT得率为十万分之一。
4．大孔吸附树脂法
采用大孔吸附树脂法从喜树果中提取CT的工艺流程如下所示。
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