喜树碱的提取及结构鉴定
喜树碱提取方法研究
Ｌ ． ３色谱条件进行测定 ， 每 每月 中旬 和月底 的晴天采集喜树 嫩叶和成熟 叶 ． ４ ．、０ ０ｍ ／ ． ５０５ ． ｇ 按照 １ 取 同时在 ４ ７ 月、 月和 １ 月 ， ０ 分别标记枝顶端刚展开 个浓度标准 液重 复进样 ５次 ， 色谱峰面积 的平
的第 １ 位新叶 ， 每隔两天采集一次标记的叶片 ． 采
对 喜树 碱 进 行 结 构 修 饰 、 或直 接筛 选 与 喜 树 碱 结
构相类似的衍 生物 ， 既能保持喜树 碱原有 的抗 癌 浯陛， 又能提高溶解 度 ， 减少毒 副反应 ， 而具 有 从 较高 的 临床应用 价 值 ． 献 ［ Ｊ文 ７一ｌ］ 道 了几 种 ０报 实验室及生产中常用 的喜树碱提取 方法 ， 在此基 础上 ， 本研究利用高效液相色谱法（ ｅ Ｃ ， Ｈ Ｌ ）分别采 用索氏回流提取 、 超声提取 、 碱法提取对喜树叶 中 喜树碱 （ Ｐ ） Ｃ Ｔ含量的季节变化进行研究 ， 以确定最 佳 的生 产工艺 ．
本 实验 色谱 条 件为 ： 国 Ｋｏ ｓｒＯ ＳＣ ８柱 美 ｒｍｔ Ｄ １ ａ （． ４ ６×１０Ｉｎ５／ｎ ； 动 相 ， ５ ｌ， ａ ）流 ｎ 乙腈 ＋水 （ ３＋７ ３ ；
份体积 乙腈 与 ７份体 积水混合 ） 流速 １０ｍ ； ． Ｌ・ ｒｎ 检 测波 长 ２４ｒ 进样量 ２ ； 温 ２ ａ ～； ｉ ５ ｍ； ｉ ｏ 柱 ５℃ ．
、 ．７ １２ Ｎ ｏ ２ ．
Ｊ ｎ． ２ ０ ｕ ０ ８
文章编号： ０ — ４２２０ ）２ ０８ — ３ １ ４ ５２ （０８０ — ０９ ０ ０
喜 树 碱 提 取 方 法研 究
孙雁 霞 ， 晓勇 ， 邬 王跃 华 徐 文俊 郭 勇 ， 大兴 ， ， 石
喜树碱提取的关键技术
2．碱法提取
以乙醇为溶剂提取CT不仅成本高且通常提取时间较长能量消耗较大。以稀NaOH溶液为溶剂成本低提取反应在常温下进行提取时间短提取率也较高且无消防要求是一种相对于乙醇提取较理想的提取方法。王洋等用碱法提取喜树果粉中的CT并确定最佳试验条件为：提取时间3～4hNaOH溶液浓度0.3%用量为每次16 ml/g原料室温提取。
喜树(Camtotheca acumznata Decne．)属山乡莨萸目(Cornal-e.s)珙桐科(Nyssaceae)旱莲属植物落叶乔木分布于我国长江流域及西南各省和印度部分地区台湾、广西、河南等也有栽培最早的文字记载在1848年的《植物名实图考》中。1966年美国的Moneroe E．Wall从喜树的皮中分离出喜树碱(CamtothecinCT)经肿瘤试验证明这种色氨酸一萜烯类生物碱具有抗癌活性从而引起了人们的广泛关注。
喜树碱的生产主要有天然提取、全化学合成和半化学合成三种方法。
天然提取法制得的CT为S构型活性高。但由于含CT的天然植物资源有限、CT含量少且易受季节、产地等因素的影响从而限制了该法的广泛应用。天然提取法主要有有机溶剂法、碱法、柱层析法和树脂吸附法等方法。渗滤法所得产品的纯度稍低颜色较深但步骤简单回收率高后处理方便；碱法提取有提取时间短提取率高等优点；柱层析法和树脂吸附法所得产品的纯度高但得率稍低步骤繁琐。
1．有机溶剂提取与萃取分离
原料经粉碎按渗滤法以70%～90%乙醇为溶剂提尽可溶成分浓缩渗滤液滤除不溶物在滤液中用氯仿提取多次合并氯仿提取液回收氯仿于残留物中加氯仿：甲醇(1：1)并回流加热分去不溶物冷却溶液CT即可结晶析出重结晶后可得纯品熔点260℃以上既可药用。如呆反复重结晶熔点可以进一步提高。CT的毒性较大在提取时需小心操作。
羟基喜树碱结构
羟基喜树碱结构一、引言羟基喜树碱是一种重要的天然生物碱，具有广泛的药理活性和医学应用价值。
本文将从羟基喜树碱的结构、合成方法、药理作用以及应用领域等方面进行全面介绍。
二、羟基喜树碱结构1. 分子式和分子量羟基喜树碱的分子式为C20H24N2O2，分子量为324.42。
2. 结构特点羟基喜树碱是一种含有吡啶环和吗啉环的杂环化合物。
其主要结构特点包括：（1）含有两个手性中心，存在四个立体异构体；（2）吡啶环上连接有两个苯乙烯侧链；（3）吗啉环上连接有一个氢原子和一个氧原子。
三、羟基喜树碱合成方法1. 自然来源提取法羟基喜树碱最初是从植物亚洲鹅掌柴中提取得到的。
目前已经发现多种植物中含有羟基喜树碱，如印度马钱科植物等。
2. 化学合成法化学合成法主要包括以下几种：（1）巴克曼重排法：以苯乙烯和吗啉为原料，通过巴克曼重排反应制备羟基喜树碱。
（2）Mannich反应法：以苯乙烯、吗啉和甲醛为原料，在碱催化下进行Mannich反应得到羟基喜树碱。
（3）环氧化合物开环法：以苯乙烯和吗啉为原料，经过环氧化合物开环反应得到羟基喜树碱。
四、羟基喜树碱药理作用1. 抗肿瘤作用羟基喜树碱具有抗肿瘤活性，可以通过多种途径抑制肿瘤细胞的增殖和转移。
2. 抗炎作用羟基喜树碱可以抑制多种炎性因子的产生，具有显著的抗炎作用。
3. 免疫调节作用羟基喜树碱可以调节机体免疫系统的功能，增强机体免疫力。
五、羟基喜树碱应用领域1. 肿瘤治疗领域羟基喜树碱被广泛应用于肿瘤治疗领域，可以单独使用或与其他化疗药物联合使用。
2. 抗炎治疗领域羟基喜树碱可以作为抗炎药物应用于多种炎性疾病的治疗中。
3. 免疫调节治疗领域羟基喜树碱可以作为免疫调节剂应用于多种免疫性疾病的治疗中，如自身免疫性甲亢等。
六、结论羟基喜树碱是一种具有广泛药理活性和医学应用价值的天然生物碱。
其结构特点、合成方法、药理作用以及应用领域等方面均已得到深入探究。
未来，随着科技的不断进步和人们对健康需求的不断提高，羟基喜树碱必将在医学领域发挥更加重要的作用。
喜树论文：喜树喜树碱营养元素提取纯化
喜树论文：喜树喜树碱营养元素提取纯化【中文摘要】为了满足人们对抗癌药物喜树碱的需求,本文研究了外源营养元素对一年生喜树幼苗喜树碱含量的影响,一年生幼苗中喜树碱含量的动态变化以及幼苗中喜树碱的提取纯化工艺,结果如下：通过对喜树碱含量测定方法的研究,得到以下结论：1、建立了RP-HPLC法分析条件：色谱柱为phenomenex Luna C18(2)色谱柱(4.6 mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-水(30：70)；流速1ml/min;检测波长254 nm；柱温40℃；进样量20μL。
该色谱条件下,喜树碱保留时间适中,峰形良好,与杂质分离较好。
2、供试品溶液的制备方法如下：取喜树样品粉末约1.0g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,称定重量。
于50℃超声提取1h,冷却至室温,称定重量,用甲醇补足减失重量,摇匀,0.45μm滤膜过滤,续滤液作为供试品溶液。
通过对一年生喜树幼苗生物量变化及喜树碱积累的研究,得到以下结论：1、一年生喜树幼苗在7-10月生长较快,叶、茎、根的干物质量迅速增加。
不同月份喜树叶中喜树碱含量成一条单峰曲线,以8月中旬叶中含量最高。
不同月份喜树茎和根中喜树碱含量类似成一条正弦曲线,喜树碱含量的极大值在8月中旬,极小值在10月中旬。
2、在6-11月期间,喜树幼苗整株及根、茎的喜树碱总量持续增加。
叶中喜树碱总量成一条单峰曲线,以10月中旬叶中喜树碱总量最高。
喜树整株和叶中喜树碱总量在7-10月增长较快,茎中喜树碱总量在7-11月增长较快。
通过对外源营养元素对喜树幼苗生长及喜树碱积累影响的研究,得到以下结论：1、氮元素对喜树幼苗生长及喜树碱积累的影响：1)氮元素能促进喜树幼苗的生长,但当施氮量大于0.95g/株时,茎和根的生物量增加不显著,仅喜树叶片显著增加。
不同施氮水平下,喜树幼苗各器官喜树碱含量成一条单峰曲线,各器官中喜树碱含量在施氮量为1.90g/株时最高。
喜树碱天然提取方法
CT超临界CO2提取流程图
上述工艺的优点如下：
(1)提取阶段用超临界二氧化碳萃取法萃取能够节省大量时间传统方法一般需要浸泡几十小时而超临界二氧化碳萃取法萃取只需几小时适用于大规模生产。
(2)传统方法的渗漉过程耗费大量有机污染。
(3)采用超临界二氧化碳萃取法萃取可减少耗时、耗力的溶剂减压浓缩环节。(4)大孔吸附树脂纯化工艺可以大量减少氯仿消耗量简化产品精制环节。
3．超临界二氧化碳萃取法
研究用现代技术提取喜树中的抗癌活性成分探索喜树多种抗癌活性成分的综合提取方法将是今后发展的方向。对喜树有效化学成分的深入了解及其对喜树碱等有效成分的高效提取分离是目前喜树研究的热点在这方面人们进行了大量的研究。其中超临界二氧化碳萃取技术是一种快速、廉价、无毒、无污染、低温、高效的方法。刘展眉等用超临界二氧化碳流体萃取方法及大孔吸附树脂从喜树果中提取喜树碱的同时还得到了亚麻酸、油酸、棕榈酸、亚油酸等脂肪酸组分。亚麻酸、油酸、棕榈酸也被证实具有抗癌作用能明显地延长长肿瘤的小白鼠的寿命。他们将喜树果原料投人萃取槽首先进行棕榈酸和亚油酸的提取从分离釜取出棕榈酸、亚油酸等的混合液后又继续进行喜树碱的提取采用协同萃取可以减少操作环节不但可以减少原料的损失还可以节省大量工作时间大大地提高了工作效率喜树碱得率为0．025％纯度为97．8％脂肪酸收率为1．8％其工艺流程见下图。
喜树碱（Camtothecin下面简写为CT）的天然提取天然提取法提的CT必须为s构型才有活性。但由于含CT的天然植物资源有限、CT含量少且易受季节、产地等因素的影响从而限制了该法的广泛应用。根据近2年的研究成果喜树碱的天然提取法目前较为可取的主要有树脂吸附法、碱法、超临界二氧化碳萃取等方法。
1．树脂吸附法
赵东亮等探讨并确立了用大孔吸附树脂从喜树果中提取、纯化喜树碱的优化工艺：喜树果粉末一70％的乙醇浸泡一浓缩一浓缩液加饱和石灰水搅拌30rain过滤一滤液调H值8～9一上AB一8树脂柱_90％h值2—3的乙醇洗脱一浓缩至悬浊状_乙酸乙酯萃取_浓缩避光结晶-+粗品一乙酸乙酯一石油醚(2：3)溶解重结晶得纯品。所得喜树碱纯度可达98％得率为0．41％o。该法的优势在于：①乙醇提取液浓缩后用饱和石灰水处理可大大提高喜树碱的得率得率可达0．41％o同时也使杂质大为减少；②树脂经H值2～3、90％的乙醇洗脱后用自来水洗掉乙醇可以再利用处理方便简单；③乙酸乙酯：石油醚(2：3)萃取后剩下的不溶物中含有大量的羟基喜树碱而羟基喜树碱的是喜树碱的10倍左右所以可进一步对其进行纯化。
从喜树中提取喜树碱的工艺研究进展
从喜树中提取喜树碱的工艺研究进展[摘要] 近几年来，喜树碱及其衍生物的药理作用已经普遍受到各国医学专家的极度重视，本文简单介绍了喜树碱及其衍生物的基本特性以及药理作用。
总结了当前从喜树中提取喜树碱的几种工艺过程并对比分析了每种工艺的优缺点。
结果表明匀浆提取法是较快速、有效的提取方法。
[关键词] 喜树碱药理作用提取喜树碱及其衍生物具有比较明显的抗癌作用，最近几年在临床上有比较多的应用，而且疗效相对其他的抗癌药物更为明显，因此其提取工艺被各国医学专家不断地进行研究，并进行各种药理作用的临床实验。
结果证明喜树碱及其衍生物具有抗肿瘤，抗癌，免疫抑制，抗病毒，抗早孕，改变皮肤表皮的角化过程等作用；对胃癌、肝癌、膀胱癌及白血病等恶性肿瘤都有显著的疗效，是一种有较高药用价值的植物资源。
因此，不断地探索和改进其提取方法就成为了化学工作者的首要工作。
1.喜树碱的简介喜树碱（Camptothecin）是从珙桐科喜树（Camptotheca acuminata Decne）的木部、果实、根皮、种子和叶子中提取出来的一种生物碱，分子式为C20H16N2O4，分子量348.34，为淡黄色针状晶体，熔点264～267℃；该分子为五环结构，含有一个毗咯喹啉环，一个共轭的吡啶酮环和一个六元α—羟基内酯环[1]；喜树碱的化学性质不同于普通的生物碱，其没有明显的碱性，属于中性的喜树碱，与一般的生物碱试剂无反应，避光十分稳定，加热可使喜树碱分解；不溶于水，不溶于一般的有机溶剂，除吡啶、氯仿和甲醇的混合溶液、二甲基亚砜等少数有机溶剂外，不溶于酸，与酸不易成盐，所以不能用常规的方法提取、分离喜树碱。
通过大量的实验证明，喜树碱具有抗肿瘤，抗癌，免疫抑制，抗病毒，抗早孕，改变皮肤表皮的角化过程等作用，目前已经临床应用：用于恶性肿瘤，银屑病，治疣，急慢性白血病以及血吸虫病引起的肝脾肿大等。
喜树碱具有的抗癌活性是1966年美国国立癌症治疗服务中心(CCNSC)Monroe E. Wall博士最初发现[2]。
喜树碱（Camptothecin）相关资料介绍
喜树碱（Camptothecin）相关资料介绍喜树碱是一种植物抗癌药物，化学式为C20H16N2O4，浅黄色针状结晶。
从中国中南、西南分布的喜树中提取得到。
1976年中国化学家高怡生等合成消旋喜树碱成功。
喜树碱对肠胃道和头颈部癌等有较好的疗效，但对少数病人有尿血的副作用。
10-羟基喜树碱的抗癌活性超过喜树碱，对肝癌和头颈部癌也有明显疗效，而且副作用较少。
化合物简介：喜树碱(Camptothecin，CPT)，是一种细胞毒性喹啉类生物碱，能抑制DNA拓扑异构酶(TOPO I)。
1966年由M.E. Wall和M.C. Wani 通过有系统的筛选天然物质，进而发现的抗癌药物。
喜树碱是从产于中国的喜树(喜树，幸福树)树皮和枝干分离出来，早期为传统中医疗法治疗癌症的方法。
喜树碱在初步临床试验有显著的抗癌特性、溶解度低以及含有高度的药物不良反应特性。
药用化学家进而利用这些特性开发出了多样的合成喜树碱和各种衍生品，以增加良好的效果。
现今已有两个喜树碱的类似物批准，并为癌症进行化疗，如拓扑替康和伊立替康。
理化性质：淡黄色针状结晶。
熔点264～267℃，[α]D20+31.3°(氯-仿∶甲醇=1∶2)。
不溶于水，溶于氯-仿、甲醇、乙醇中。
其溶液在紫外光灯下显紫蓝色荧光，见光易变质，微有吸湿性，遇浓硫酸显黄绿色，用蒸馏水稀释产生黄绿色荧光，呈碱性。
与碘化铋钾反应，生成橙红色复盐沉淀。
由喜树根或果粉以有机溶剂提取而得。
毒性较大，提取时应小心，有抗肿瘤活性。
用以治疗肠癌、直肠癌、胃癌和白血病等症，10-羟基喜树碱毒性较小。
喜树碱(Camptothecin)是一种强细胞毒性的五环生物碱，具有诱导细胞凋亡的特性。
喜树碱及其类似物可抑制拓扑异构酶I (topo I)，使S期细胞进入凋亡。
喜树碱结合并稳定拓扑I - DNA骨干复合体(共价二元复合体)。
这种稳定的复合物减少了从断链释放的topo I的速率，从而减缓了宗教和随后的DNA合成过程。
不同种源喜树幼枝中喜树碱的含量
植物学通报 2005, 22 (5): 584￣589①陕西省教育厅产业化培育项目(03JC39)和西北大学科研基金项目(02NW10)资助。
②通讯作者。
Author for correspondence. E-mail: lwenzhe@ 收稿日期: 2004-12-19 接受日期: 2005-02-28 责任编辑: 于昕不同种源喜树幼枝中喜树碱的含量①王玲丽 刘文哲②(西北大学生命科学学院 西安 710069)摘要 通过HPLC 测定了喜树(Camptotheca acuminata )不同器官及不同种源幼枝中喜树碱的含量。
结果表明, 喜树碱含量在叶、种子和幼枝(幼叶和幼茎)中较高, 木质部中较少, 髓中最低。
不同种源的幼枝中, 来自成都种源喜树的喜树碱含量最高。
通过比较, 两年生喜树各器官中喜树碱含量普遍比一年生高, 幼枝中顶枝的喜树碱含量比侧枝高。
关键词 喜树, 喜树碱, 幼枝, 种源Contents of Camptothecin in Camptotheca acuminatafrom Different ProvenancesWANG Ling-Li LIU Wen-Zhe ②(College of Life Science, Northwest University, Xi’an 710069 )Abstract Camptothecin (CPT) content in organs of Camptotheca acuminata and young shoots from different areas of China was determined by HPLC. CPT content in leaves, seeds and young shoots was higher than that in xylem, lowest in piths and highest in young shoots from Sichuan province. CPT content in young biennial shoots was higher than that in annual shoots and that in caulody was higher than that in subbranches.Key words Camptotheca acuminata , Camptothecin, Young shoot , Provenance喜树(Camptotheca acuminata ), 为珙桐科(Nyssaceae)喜树属多年生亚热带落叶阔叶乔木, 是我国特有树种, 主要分布在长江流域及西南各省(中国科学院中国植物志编辑委员会,1983)。
喜树碱含量的测定方法研究
喜树碱含量的测定方法研究方旭东;陈绍宇【摘要】本文介绍了喜树碱含量的分析测定方法.样品采用了乙醇超声提取法从喜树叶中提取喜树碱,并用薄层层析法和高效液相色谱法分析测定喜树碱的含量.薄层层析法测定喜树碱的含量使用硅胶G做固定相,v(氯仿)∶v(丙酮)=70∶30、v(甲醇)∶v(氯仿)=10∶90做展开剂.高效液相色谱法用v(甲醇)∶v(水)=55∶45做流动相,并且流动相流速为1.0ml/min.在波长为254 nm,温度为25℃下检测.每次进样量为5μL.【期刊名称】《天津化工》【年(卷),期】2011(025)002【总页数】4页(P46-49)【关键词】喜树碱;高效液相色谱;薄层层析;分析测定方法【作者】方旭东;陈绍宇【作者单位】天津渤海职业技术学院,天津,300402;广西钦州市水利电力勘测设计院,广西,钦州,535000【正文语种】中文【中图分类】TQ450.7目前，农药残留、害虫抗药性以及作物药害等农药产生的副作用，是我们需解决的问题之一。
生物农药采用天然产物，对人类、环境和作物是低毒、无毒且残留时间较短的。
喜树碱是一种具有生物活性可广泛应用于生物农药的物质，本文利用薄层层析（TLC）法和高效液相色谱（HPLC）法对喜树叶中提取的喜树碱含量进行了分析与测定。
该法简便、快捷、准确性高，为将来该领域研究提供了可靠的依据。
高效液相仪、紫外光检测器、色谱工作站、超声波细胞粉碎机、高速离心机、电子天平。
甲醇，95%乙醇，无水乙醇，丙酮，氯仿，硅胶G（薄板层析用）。
喜树叶于2010年8月采自钦州市水利局喜树园栽培3年生的喜树幼苗，采集喜树嫩叶（顶芽，顶芽以下1～2片叶）。
用天平称取采得的喜树叶约1000 g，并用自来水将其洗净后置于恒温干燥箱内，调整恒温干燥箱温度至40℃烘干24 h,直到材料发脆，再用60目的DWF-TOOA 型粉碎机粉碎，将粉碎好的喜树叶装入密封袋后将其置于4℃冰箱中避光保存，待用。
从喜树果中分离提纯喜树碱的工艺条件
从喜树果中分离提纯喜树碱的工艺条件Ξ赵东亮,郁建平3(贵州大学生化营养研究所,贵州贵阳 550025)摘 要:探讨了用大孔吸附树脂从喜树果中提取、纯化喜树碱的工艺。
结果表明,以70%乙醇为提取液,浓缩后用饱和石灰水提取,提取液上AB -8树脂,洗脱条件经实验确定为用p H =2,浓度为90%的乙醇洗脱最佳。
结晶溶剂为乙酸乙酯/石油醚(2∶3),所得喜树碱纯度可达98%,得率为0141‰。
关键词:喜树碱;大孔吸附树脂;提取分离;石灰水;纯化工艺中图分类号:S792199018;Q946188 文献标识码:A 文章编号:1008-0457(2004)06-0493-04Study on the method of separating and purifying camptothecin from the fruits of Camptot heca acuminataZHA O Dong 2liang ,YU Jian 2ping 3(Institute of Biochemist ry and N ut rition ,Guiz hou U niversity ,Guiz hou ,Guiyang 550025,China )Abstract :The optimal method for separation and purification of camptothecin with macroreticular resin from the fruits of Cam ptotheca acuminata was reported.The results showed that cam ptothecin was extracted from the fruits of Cam ptotheca acuminata with 70%alcohol ,the extracting solvent was concentrated ,the liquid was extracted with sat 2urated limewater and the cam ptothecin was adsorbed by AB -8resin.The camptothecin in resin was eluted with 90%alcohol in p H =2and the crystallizing agent is acetic ester/petroleum ether (2∶3).The content of camptothecin in the product was normally 98%and the productivity was 0141‰.K ey w ords :camptothecin ;macroreticular resin ;extracting and separating ;limewater ;purifying technology喜树碱(camptothecin ,A )、10-羟基喜树碱(10-hydroxycamptothecin ,B )、10-羟基脱氧喜树碱(10-hydroxydeoxycamptothecin ,C )和甲氧基喜树碱(methyoxycamptothecin ,D )等是我国南方的特有树种———珙桐科喜树Cam ptotheca acumi nata Decne 中所含的生物碱,已从喜树果中分离得到20余种化合物,这些化合物均有不同的生物活性,其中喜树碱和10-羟基喜树碱等具有显著的抗癌活性,其作用机理为通过抑制拓扑异构酶Ⅰ来表现抗癌活性[1]。
反相高效液相色谱法测定喜树果实中喜树碱的含量
加入一定量对照品,按供试品测定方法测定,并计算回收率,测得墨沙酮的加样回收率为9819%,RSD为211%(n=6)。
4 供试品的测定考查了供试品溶液的制备方法。
以甲醇为溶剂,分别采用浸泡20h,回流提取4h和超声振荡提取1h等3种方法制备供试液。
结果表明,浸泡20h浸出量明显低于其他两种方法,而回流提取液中杂质较多。
对超声提取时间也进行了考查。
对照品溶液:精密称取墨沙酮对照品适量,加甲醇定量稀释制成每毫升中约含0115mg的溶液,作为对照品溶液。
供试品溶液:精密称取生等药材细粉(过60目筛)约015g,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml后,称重,浸泡2h后,超声振荡提取1h,放冷,补足重量,过滤,取续滤液备用。
准确量取对照品溶液2,4,6,8,10μl和供试品溶液适量进样,按外标法计算含量。
测得生等药材中墨沙酮的含量为1102%,RSD为0152%(n=3)。
5 参考文献1 中国科学院西北高原生物研究所.藏药志.西宁:青海人 民出版社,1991:4052 藏药标准.西宁:青海人民出版社,1979:331996—03—26收稿反相高效液相色谱法测定喜树果实中喜树碱的含量张丽艳 杨玉琴(贵州省中医研究所 贵阳550002) 摘要 采用YWG2C18柱,甲醇2水(6∶4)流动相,254nm检测,测定了喜树果实中喜树碱的含量,平均回收率为98167%,RSD为1171%(n=5),并对不同月份采收的喜树果实进行了测定。
关键词 高效液相色谱法 喜树碱 喜树果系珙桐科植物喜树的果实。
喜树碱为其主要活性成分,临床用于治疗消化系统恶性肿瘤[1]。
目前广西、上海药品标准采用紫外分光光度法测定喜树碱含量。
本文用反相HPLC测定喜树碱,其结果对于药材质量评价及指导工业生产具有参考作用。
1 实验部分111 仪器与试药日本岛津LC25A高效液相色谱仪,C2 R2AX数据处理机,SPD22AM紫外检测器。
喜树碱对照品(中国科学院昆明植物研究所提供)为分析纯。
喜树碱的制备方法
Ｖ ＝ ＩＲＩ ＯＨ， ２＝ Ｒ３ ＯＨ； Ｒ Ｈ， ＝ ｌ ＝ ｉ ＲＩ ＯＨ， ２＝ Ｒ ＝ ｔ ｆ Ｒ Ｈ， ３ ＯＣＨ３
喜树碱 的化学 性 质不 同 于普 通 的生物碱 ， 其没 有
明显 的碱性 ， 于中性 的喜 树碱 。喜树 碱 与一般 的 生 属 物碱 试 剂无 反 应 ， 常用 的检 测 试 剂 ： 化 铋 钾 和苯 如 碘 酚试 剂 ， 阴性 ； 哚 分 析 ， 反 应 ； 呈 吲 负 与各 种 酸 不形 成
般 认 为果 实 中喜 树 碱 的含 量 最 高 ， 次 为 根皮 、 其 树根
和树皮 ， 而树 枝 含 量较 低 。近 年来 的研 究结 果 表 明组 织 越幼 嫩 ， 树 碱 的含 量 越 高 ； （ ） 喜 枝 叶 龄越小 ， 含量越 高 ：皮质 较 木 质 含 量 高 。 嫩 叶 中喜树 碱 的含 量 高达 ０ ％， 种子 中含 量 的 １ ． 是 ４ ． 。 由于喜 树 植 株有 简单 ５倍 易 得 、 树 碱 含 量 高等 优 点 ， 喜 因此 是 目前 获 得 喜 树碱
从植 株 中提 取 喜 树 碱 研 究 最 早 ，条 件 也 比较成 熟。
１６ ９ ６年 美 国 的 Ｍｏ ｒｅＥＷａ 等 首 次从 喜 树 茎 ｎｏ ． ｌ ｌ
的提 取物 中分 离 出喜 树 碱 ， 们 首先 将植 物 原料 通过 他
热 庚 烷 去 除无 效 成 分 ， 乙醇 提 取 、 缩 、 经 氯仿 一 浓 后 乙
Ｖ ＲＩ Ｈ ， ２＝ ＝ Ｒ ＯＨ ， ＝ ； Ｒ３ Ｈ
是 目前最 有效 、 速 的办 法 ， 其 生 产 受 到 喜树 生 长 迅 但 发 育和环境 因素 的影 响 ， 量 开采 还会 造 成 资源 匮乏 过 和生态学 问题 ， 是 限制 喜 树碱 生 产 的主 要 因素 。合 这
树脂柱层析法分离喜树碱
树脂柱层析法分离喜树碱施荣富王瑞芳史作清温珍珍何炳林南开大学吸附分离功能高分子材料国家重点实验室，高分子化学研究所，天津３０００７ｌ喜树为珙桐科乔术，是我国特有植物，广泛分布于长江以南各地区，资源丰富。
喜树中成分复杂．至今已发现二十余种，包括喜树碱类，喜果甙，鞣花酸类及微量的吲哚碱类等．经过几十年的大量实践，证明喜树碱（ＣＰＴ）对胃癌、结肠、。
直肠癌、绒毛膜上皮癌、头颈部肿瘤、膀胱癌和白血病等多种恶性肿瘤都有较好的近期疗效．提取喜树碱的传统方法是氯仿萃取重结晶法，此法要消耗大量的有机溶剂，生产成本高，溶剂毒性大，产率低．且提取物中往往包含多种性质、结杜Ｊ近似的喜树碱类化合物，若要对组分进行进一步的分离以获得高纯度的单一组分．用常规的溶剂摹取法难以实现．但用树脂柱层析法进行分离，有可能解决这一难题．啦附树脂在许多中药有效成分的提取分离中已经取得很好的结果，可能成为一种推进中药继续发眨的、不可缺少的分离技术，而国内外关于用吸附树脂提纯分离喜树碱的技术报道很少。
因此树＂ｈ＃ｊ包谱分离提纯喜树碱的研究存在很大的必要性和开发潜力．本组曾就吸附树脂在水体系中对简单有机碱体系（苯胺、Ｎ一甲基苯胺、Ｎ，Ｎ－二甲基苯胺）的吸附规律及色谱分离进千亍了考察，并得割了很好的分离效果（如Ｆｉｇ．１所示）．此实验利川三种胺与ＡＤＳ一１７物理作用力的差异．采埘梯度洗脱的方法把二者分开．此结果说明可刚普通颗粒的暇附树脂，以梯度泓洗常压色谱法米分离结构性能类似的生物碱．喜树碱（Ｉ）在喜树各部位中晌含鲑以累最高，率组用８０％的乙醇水溶液对喜树果进行提取，减压浓缩．过滤得橙黄色清夜．ＨＰＬＣ捡测发现，除前面一大的加质峰外．保留时问８ｍｉｎ左右有一吸收峰，己确定是喜树碱．保留时间１４ｍｉｎ左右有一更大的吸收蜂，尚未确定是何组分．其他绲分的吸收峰均根小．ｏ加４０∞舶瑚埘１４０蛐瑚Ｖ缸）Ｆｉ９１翱疆ａ匕妇西和ｌｉ呜蜥喊叫枷ｌ矗ＥＭ牛ｄｊⅢ酣刚部ｍｊ豳加鲫阳）舶０ｏｈ助：ｌ∞・８皿Ｆ１＿ｍ嚏∞栅‘本组选用了五种树脂进行色谱分离Ｏｍｓ－５，Ｄｒ５２，ＡＤＳ一１７．Ｘ－５，凝交型后交联的ＰＳＴ）．过柱进行树脂筛选时．提取液上柱币．先用稀的乙醇水溶液把＾＝量杂质洗下．然后增加乙醇浓度继续淋洗，分部收集．结果发现，１Ｆ极性的树脂分离效果较好．如图Ｆｉｇ．２，Ｆｉｇ３所示．树脂填料是凝交ｈ．５２型后交联的ＰＳＴ，ＣＰ］、一ａ是前儿组流份的混台液．ＣＰＴ—ｂ是后几组流份的混合液．由色谱图可看出，保留时间为１４ｍｉｎ左右的绵分宽被人鼙淋洗ｒ米，喜树碱只有小部分被洗一Ｆ．增加乙醇浓度后，喜树碱可被完全淋洗干净，而树脂ｉｒ直接水洗再利Ｈｊ，所以此法不仅操作简便．而且通过梯度淋洗・大大提高了喜树碱的纯度。
喜树碱及其衍生物提取工艺进展研究
喜树碱及其衍生物提取工艺进展研究朱宏宇（西南林业大学，云南昆明）摘要：喜树碱(CPT)是一种细胞毒性喹啉生物碱,可以抑制DNA酶拓扑异构酶I.1966年，M.E. Wall和M.C. Wani 等从喜树植物中分离出喜树碱并认为其是一种天然的抗癌药物。
实验室提取喜树碱及其衍生物的方法多为乙醇为溶剂，使用微波法、浸提法、超声波法或匀浆提取法从树木的叶子中提取喜树碱及其衍生物。
有研究通过正交试验对提取温度、提取时间以及匀浆时间对提取效率的影响进行了分析。
笔者将从简单综述以上多种喜树碱及其提取工艺，并简述各种工艺操作的优缺点。
关键字：喜树碱；提取工艺；研究进展Research of Extraction Methods for Camptothecin and its derivatives from Camptotheca acuminataAbstract: Camptothecin (CPT) is a cytotoxic quinoline alkaloid which inhibits the DNA enzyme topoisomerase I (topo I). It was discovered in 1966 by M. E. Wall and M. C. Wani in systematic screening of natural products for anticancer drugs. Using ethanol as solvem, 4 metllods including stirring extraction，homogenate extraction，ultrasonic extraction or microwave—assisted extraction were adopted to extract camptothecinand its derivatives from Camptotheca acuminata.Studies through the orthogonal experiment of extracting temperature, extracting time and the influence of homogenate of time on the extraction efficiency were analyzed.The author will from simple overview over a variety of camptothecin and its extraction technology, and describes the advantages and disadvantages of various process operations.Key words:camptothecin; Extraction process; Research progress喜树碱(Camptothecin，CPT)喜树(Camptotheca acuminata Decaisne)为山茱萸目(Cornlales)珙桐科(Nyssaceae)旱莲属植物。
喜树嫩叶中喜树碱的提取分离与鉴定
树叶 中喜树碱 的提取报道 很少 ， 而对 枝顶 端 的 １～３
片 叶中喜树 碱的提取 分离更 是未 见报 道 。本 实验 以 ３ 年生喜树枝顶端 的 １— ３片 叶为原料 ， 以碱液为 溶剂提
取分离喜树 碱 ， 采用 高 效液 相色 谱法 来考 察 提取分 并
离 的效果 。 １ 实验 仪器与材料 美 国 Ｗａ ｒ Ｉ ｈ ６ ０ 高 效 液 相 色 谱 仪 ， － ｔ ｓ ） ａ０ Ｅ ｅ ｅ Ｗａ
精密称取喜树碱标 准样 品 ５ 于 １ｍＬ容量瓶 ， ｍｇ ０ 以 甲醇 一 （／ 水 ｙｖ＝６ ４ 为 溶剂 超声 波 溶解 并 定 容 至刻 ：） 度， 摇匀备用 。 ２ ３ 喜树 碱的提取 ． １５ １＇ Ｃ杀青 ，Ｏ一８ ℃ 烘 干 制成 干 粉 ， 密称 取 喜 ７ ０ 精
树 叶干粉 ４ ｇ于 ２ ｍＬ锥形瓶 中 ， ５ 加入适 量 Ｎ Ｏ ａ Ｈ溶液 ，
喜树嫩 叶中提 取喜树 碱 。实 验结果 表 明 ， ０ ３ Ｎ Ｏ 以 ． ％ ａ Ｈ溶 液 为溶 剂 ， １ ｍＬ ｇ原 料 ・ 按 ４ ／
次， 超声波提取 ３ ｍｉ， ０ ｎ 可使 喜树 碱与相邻组分达到 良好分离 。 关键词 ： 喜树碱 碱液 ＨＬ Ｐ Ｃ法 下龙头铺 。
２ 实 验 方 法
３４ 样 品保 留时间推迟 的原 因分析 ． 对照 品中喜树 碱 的保 留时 间为 ４ ３ ， ．６ 而样 品 中喜 树碱 的保 留时 间均滞后 （ 图 ２ 图 ３ 图 ４ 图 ５ 。这 见 、 、 、 ） 是 由于对照 品是羟基喜树 碱 ， 其极 性大于喜树 碱 ， 以 所 在相 同的色谱条件下 ， 羟基 喜树碱 先于喜树 碱洗脱 出， 故 同等条件下样品 中喜树碱保 留时问推迟 。
Ｃ Ｔ 一３： Ｂ Ｃ ；Ｃ Ｔ 一４： Ｂ２ Ｐ Ａ２ ｌ ２ Ｐ Ａ２ Ｃｌ
实验一喜树碱含量的紫外可见分光光度分析
七、喜树碱含量的计算
喜树果实中喜树碱含量：
C×V×40 CPT（μg/g）=
M
C为对应工作曲线的样品喜树碱浓度
V为提取液体积（25mL）
M为样品质量(g)
八、思考题
比较紫外分光光度法和高效液相色谱法
测定喜树果实中喜树碱含量的差异，并 分析产生差异的原因。
实验一：喜树碱含量 的紫外分光光度分析
一、实验目的
掌握喜树碱的提取方法和紫外可见分光
光度计的使用
二 、实验原理
紫外分光光度分析是基于被测物质的分子
对紫外光 具有选择吸收的特性而建立的分 析方法。 不同物质的紫外吸收特性不同，因而物质紫 外光谱是鉴定物质结构的重要信息之一。 在特定波长下（通常选择物质的吸收峰值波 长），在一定浓度范围，物质的含量与吸光 度成正比 C1 A1 =
六、实验步骤
准确称取1 g喜树果粉放入25 mL容量瓶中;（每2
人称一份样品，每组3-4个重复）； 加入60％乙醇溶液约20 mL; 混匀后超声提取30分钟; 取出静置，至室温时定容至25mL，摇匀; 将样品倒入到小锥形瓶中,并标记清楚; 室温下取1 mL 12000rpm 离心15分钟; 取500μL上清于干净的离心管，标记清楚后冻存， 用于高效液相色谱分析； 另取100uL上清液加入到已加入3.9mL60%乙醇的小 药瓶中，混匀）。 在254nm下，以60%乙醇为空白测定吸光度并根据 标准曲线计算样品中喜树碱含量。
C个以上的浓度，分别测定吸光度，可进行线
性回归。未知浓度的样品可根据标准曲线计算浓 度。Y=aX+b
吸光度-浓度标准曲线 1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 50 100 150 浓度(ug/mL) 1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 50 吸光度-浓度标准曲线
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
广
４ ４
东
化
工
２ ０ １ ８ 年 第 １ １ 期
ｗｗｗ． ｇ ｄ ｃ ｈ ｅ ｍ． ｃ ｏ ｍ
第４ ５ 卷 总第 ３ ７ ３期
喜树碱 的提取及结构鉴定
（ 佛 山科学 技术 学院 食 品科 学 与５ ２ 程 学 院，广 东 佛 山 ５ ２ ８ ０ ０ ０ ）
李 国强 ，李韵仪 ，谭卓杰
Ｌ ｉ Ｇ ｕ ｏ ｑ ｉ ａ ｎ ｇ ， Ｌ ｉ Ｙ ｕ ｎ ｙ ｉ ， Ｔ ａ ｎ Ｚ ｈ ｕ ｏ ｊ ｉ ｅ
（ Ｃｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ｆ ｏ ｏ ｄ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ａ ｎ ｄ Ｅ ｎ ｇ ｉ ｎ ｅ ｅ ｒ ｉ ｎ ｇ ， Ｆ ｏ ｓ ｈ ａ ｎ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｆ ｏ ｓ ｈ ａ ｎ ５ ２ ８ ０ ０ ０ ， Ｃｈ ｉ ｎ ａ ）
。
２ ． ２ 结 构 鉴 定
化 合物 为黄 色无 定形粉 末 ，ｍ ｐ ２ ６ ５ ～ ２ ６ ７℃ ，薄层 层析 后香草 醛一 浓硫 酸反 应显黄 色 ，紫 外光 照射下 有蓝 色荧光 。 Ｕ ｖ谱在 ２ ０ ３ ， ２ ｌ ８ ，２ ５ ３ ，３ ７ ０ ｎ ｒ ｆ ｌ 处 显示 最大吸 收 ，Ｉ Ｒ （ Ｋ Ｂ ｒ ） 谱 提示 该化 合物 含 有羟基（ ３ ４ ４ １ ｃ ｍ ） ，羰基（ １ ７ ４ １ ｃ ｍ 。 ） ，苯环结 构（ １ ６ ０ ｌ ，１ ５ ０ ｌ ，ｌ ４ ３ ９ ｃ ｍ ） ；Ｈ Ｒ Ｅ Ｓ １ ． ＭＳ ｍ ／ ｚ ３ ４ ９ ． １ ｌ ８ ３ ［ Ｍ＋ Ｈ ］ ， 提 示 其 分 子 式 为
Ａｆ ｔ ｅ ｒ ｐ ｕ ｒ ｉ ｉｅ ｆ ｄ ｂ ｙ ｓ ｉ ｌ ｉ ｃ ａ ｇ ｅ ｌ ｃ ｏ ｌ ｕ ｍｎ ａ ｎ ｄ ＯＤ Ｓ ｃ ｏ ｌ ｕ ｍｎ ， ｐ ｕ ｒ ｅ ｃ ａ ｍｐ ｔ ｏ ｔ ｈ ｅ ｃ ｉ ｎ ｃ ｏ ｍｐ ｏ ｕ ｎ ｄ ｗａ ｓ ｏ ｂ ｔ ａ ｉ ｎ ｅ ｄ ． Ｔ ｈ ｅ ｓ ｔ ｒ ｕ ｃ ｔ ｕ ｒ ｅ ｏ ｆ ｃ ａ ｍｐ ｔ ｏ ｔ ｈ ｅ ｃ ｉ ｎ ｗａ ｓ ｅ ｖ ａ ｌ ｕ ａ ｔ ｅ ｄ ｂ ｙ １ Ｒ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｒ ｕ ｍ， ｍａ ｓ ｓ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｍｅ ｔ ｒ ｙ ａ ｎ ｄ ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ａ ｒ ｍａ ｇ ｎ ｅ ｔ ｉ ｃ ｒ ｅ ｓ ｏ ｎ ａ ｎ ｃ ｅ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｓ ｃ ｏ ｐ ｙ
晶 ，经 硅胶 柱和 ＯＤ Ｓ柱纯 化后 得到纯 喜树 碱化合 物 。利用 红
［ 文章 编号 １ Ｏ ０ ７ 一 ｔ ８ ６ ５ （ ２ ０ １ ８ ） １ １ － ０ ０ ４ ４ ・ ０ １
Ｅｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ｓ ｔ ｒ ｕｃ ｔ ｕｒ ａ ｌ Ｉ ｄｅ ｎｔ ｉ ｉｃ ｆ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｃａ ｍ ｐｔ ｏ ｔ ｈｅ ｃ ｉ ｎ
Ｃ２ ｏ ＨＩ ６ Ｎ２ Ｏ４ 。
肿瘤 均有 一 定的疗 效 。
Ｈ Ｎ ＭＲ （ ５ ０ ０ ＭＨ ｚ ，Ｄ ＭＳ Ｏ ） 谱 显示有 １ 个 甲基 峰信号 『 ６ Ｈ ０ ． ９ ０ （ ３ Ｈ，ｔ ，Ｊ ＝ ７ ． ３ Ｈ ｚ ） ］ ，２个亚 甲基 质子 信号 ［ ６ Ｈ １ ． ８ ８ （ ２ Ｈ，ｍ） 】 ，６个 不饱 和氢 信号［ ６ Ｈ ７ Ｉ ３ ４ （ １ Ｈ， ｓ ） ， ７ ． ７ ｌ （ １ Ｈ， ｍ ） ， ７ ． ８ ６ （ １ Ｈ， ｍ） ， ８ ． １ ２ （ １ Ｈ， ｄ，Ｊ ＝ ８ ． ０ Ｈｚ ） ，８ ． １ ７ （ １ Ｈ，ｄ ，Ｊ ＝ ８ ． ５ Ｈｚ ） ，８ ． ６ ８ （ １ Ｈ，ｓ ） １ ， １个连氧 亚 甲基 质子 信号 【 ５ ． ４ ２ （ ２ Ｈ， ｓ ） ］ ， １ 个连 氮亚 甲基质 子信 号【 ６ Ｈ ５ ． ２ ７ （ ２ Ｈ，
Ｋｅ ｙ ｗｏ ｒ ｄ ｓ ： ｃ ａ ｍｐ ｔ ｏ ｔ ｈ ｅ ｃ ｉ ｎ ；ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ：ｓ ｔ ｕｃ ｒ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｉ ｆ ｃ ａ ｔ ａ ｍ ｐ ｔ ｏ ｔ ｈ ｅ ｃ ａ ａ ｃ ｕ ｍｉ ｎ ａ ｔ ａ ） ，又 名旱莲 、水栗 、水桐树 、天 梓树 、旱莲 子 、干张 树 、野芭 蕉 、水漠 子 ，为琪 桐科 （ Ｎｙ ｓ ｓ ａ ｃ ｅ ａ ｅ ） 喜树 属（ Ｃ ａ ｍｐ ｔ ｏ ｔ ｈ ｅ ｃ ａ Ｄ ｅ ｃ ｎ ｅ ） 植物 ，本属 仅有 １ 种 ，为我 国特产 。 喜树 主治 各种 恶性 肿瘤 ，急 、慢性 白血病 … １ ， 银 屑病 ［ 】 以及血 吸虫 病 引起 的肝脾 肿 大等疾 病 ，有研 究证 明其 具有 良好 的抗 氧化 活性 ［ １ ９ ６ ６年 ，ｗａ ｌ ｌ 等研 究人 员从我 国特 有植 物喜 树的 树皮 中首 次 分离得 到 了喜树 碱（ ｃ ａ ｍｐ ｔ ｏ ｔ ｈ ｅ ｃ ｉ ｎ ） ，并研 究发 现其 具有 显著 的抗 肿瘤 活性 【 ， 主 要通 过作 用于 拓扑 异构酶 Ｉ 靶点 从而抑 制 Ｄ ＮＡ合 成 以达 到抗 肿瘤 的作用 【 ］ ，对 胃癌 、直肠 癌 和 白血病 等 多种 恶性