三聚氰胺的检测方法
检测奶粉三聚氰胺方法
检测奶粉三聚氰胺方法
奶粉中三聚氰胺的检测方法主要有以下几种：
1. HPLC-UV法：利用高效液相色谱技术结合紫外检测器，通过样品中三聚氰胺的特征吸收峰进行定量分析。
2. LC-MS/MS法：利用液相色谱联用串联质谱仪的方法，对样品中的三聚氰胺进行定量分析，具有较高的灵敏度和准确性。
3. 免疫法：通过制备抗三聚氰胺抗体或利用商用的抗体盒，然后利用抗体与三聚氰胺结合形成特定复合物，并通过免疫反应进行检测和定量。
4. 酶法：利用三聚氰胺酶催化三聚氰胺分解产生氨气，然后利用氨气检测仪器进行定量分析。
需要注意的是，以上方法在检测奶粉中三聚氰胺时，通常需要先进行样品的预处理步骤，如提取、净化、富集等，以提高检测的灵敏度和准确性。
此外，不同的方法对样品的处理和仪器设备要求也有所不同，具体操作还需要参考相关的检测标准和方法说明。
三聚氰胺的检测方法
三聚氰胺的检测方法工业上测定三聚氰胺的纯度通常采用苦味酸法和升华法。
苦味酸法方法原理: 将水加入试样, 加热溶解后, 加人苦味酸溶液, 称量所生成的苦味酸三聚氰胺沉淀的质量, 即测得三聚氰胺纯度含量。
分析步骤: 称取试样, 置于500 ml 锥形瓶中, 同时加入水, 加热溶解; 冷却后, 加入酚酞指示液3 滴, 若显色, 加入硫酸溶液, 直至溶液颜色消失, 若有不溶物, 需过滤, 水洗; 把滤液和洗液合并, 移人500 ml 容量瓶中, 加水至刻度, 仔细振摇混合后, 准确吸取100 ml 置于500 ml 烧杯里; 将此溶液加热至80℃, 另加入已加热至80℃的100 ml 苦味酸溶液, 冷却至室温后, 保持在15℃以下约8 小时; 用已恒重的玻砂过滤器过滤, 之后,先用约100 ml 苦味酸三聚氰胺的饱和溶液洗涤, 再用水洗; 烘干玻砂过滤器, 置于干燥器中冷却后, 称量求得沉淀物质量。
升华法测定原理: 在升华装置中将试样在负压下进行加热, 让三聚氰胺完全升华后, 称其残渣量, 即测得三聚氰胺纯度。
分析步骤: 称取试样, 置于预先干燥了的且已知质量的试样容器里; 将试样容器置入减压升华装置内,待完全密闭后, 开启真空装置缓缓吸引, 并调节装置内的温度, 经2 小时升华结束; 取出试样容器, 冷至室温后,称量试样容器的质量。
上述两种测定方法准确度均较高, 但操作繁琐, 分析时间太长,有人推荐采用电位滴定法。
具体测定方法, 首先测定三聚氰胺溶液中总固体的含量, 称取样品于200 ml烧杯中, 加入100 ml 蒸馏水, 放于石棉网的电炉上加热,在沸腾的情况下搅拌溶液, 使试样完全溶解。
在电磁搅拌状态下, 用硫酸标准溶液滴定热溶液至pH 值为5 左右。
流水冷却溶液至室温, 滴定, 每次准确加入0.1 ml 硫酸标液,并记下相应的pH 值, 直至pH 值约为3。
计算出等当量点时消耗硫酸标液的体积。
结果计算按公式Me=S×6.307×V×F /m ( 其中式中:Me 为溶液中三聚氰胺的含量, %; S 为溶液中总固体的含量, %; V 为等当量点时消耗硫酸标液的体积, ml; F 为0.5 mol /L 硫酸标液的校正系数; m 为滴定时所标取总固体的质量;6.307 为换算系数) 。
三聚氰胺检测步骤
三聚氰胺检测步骤1药品配制1.1三氯乙酸溶液（1％）：10克三氯乙酸于1L容量瓶中。
1.2氨化甲醇溶液（5％）：5ML氨水和95ML甲醇，混匀备用．1.3流动相：离子对试剂缓冲液：乙腈= 9:1 1.4离子对试剂缓冲液：2.10克柠檬酸和2.16克辛烷磺酸钠，定容至1L备用．1.5三聚氰胺标准品：纯度大于99.0％．1.6三聚氰胺标准储备液：100mg（精确至0.1mg）三聚氰胺标准品于100ML容量瓶中，用甲醇水溶液溶解并定容至刻度，配制成浓度为1mg/ml的标准储备液，于4℃避光保存．2样品前处理……奶样2g——→……15ml三氯乙酸和5ml乙腈……超声，振荡，离心各10min……过滤（三氯乙酸定容至25ml．）……3ml甲醇、5ml水……取滤液5ml，与5ml水混匀，做待净化液……3ml水、3ml甲醇……6ml氨化甲醇（开始收集洗脱水）……50℃下氮气吹干样液（2.5）……残留物用1ml流动相定容，振荡1min．3高效液相色谱仪进样前准备工作3.1进样管插入甲醇水（1：9）中，出水口插入废液缸，同时，过滤管进口插入甲醇水中，出口插入废液缸．3.2打开排气阀排气，当流动较慢时，可在色谱工作站中点击＂启动＂，泵启动，加快排气，至气体全部排出，点击＂停止＂泵，关闭排气阀．3.3在色谱工作站中点击＂采集基线＂，至线走平为止（量程在100µl以下），点击＂停止采集＂，＂停泵＂．3.4进样管插入流动相溶液中，再次按照步骤3.3排气，待排气完毕，按步骤5，至线走平，平衡色谱柱工作完毕．4进样4.1一次性针管吸样液（2.7），过微孔滤膜后，收集于小塑料瓶中．4.2上述收集样液冲洗进样针（100µl）6～8次，提取样品，慢慢吸液，赶走针中的气泡．4.3插入进样阀，匀速进样，快速向下（inject）搬动阀门，针不得拔出，开始采集样品．4.4出现三聚氰胺峰后，点击＂停止采集＂，＂停止＂，停泵，保存数据．5仪器冲洗5.1进样管从流动相转入甲醇水（1：9）中，按3.3排气，至完毕后，点击工作站中的＂采集基线＂，直至线走平，点击＂停止采集＂，＂停止＂泵．5.2进样管从甲醇水转到纯甲醇中，按上述5.1步骤操作．5.3进样针用甲醇冲洗6～8次．关闭工作站．。
三聚氰胺检测方法
三聚氰胺检测方法检测方法利用酶联免疫吸附测定法用食品及饲料中三聚氰胺的定量测定。
检测原理酶联免疫吸附测定法定量测定三聚氰胺残留。
利用萃取液通过均质及振荡的方式提取样品中的三聚氰胺进行免疫测定。
先将三聚氰胺酶标记物，样品萃取物及标准加入到已经包被有三聚氰胺抗体的微孔中开始反应。
在30分钟的孵育过程中，样品萃取物中的三聚氰胺与三聚氰胺酶标记物竞争结合微孔中的三聚氰胺抗体，孵育30分钟后洗掉小孔中所有没有结合的三聚氰胺及三聚氰胺酶标记物。
在用去离子水清洗结束后，每孔中加入清澈的底物溶液，结合的酶标记物将无色的底物转化为蓝色的物质。
孵育30分钟后停止此反应，根据各孔颜色深浅进行数据读取。
依据标准的颜色得出样品中三聚氰胺的的浓度值。
实验所需设备及材料三聚氰胺检测试剂盒（目前常用进口试剂有美国Abraxis公司和美国Beacon公司的）酶标仪一台（配有450nm滤光片）1－5ml可调移液器100－1000ul可调移液器.20－200ul可调移液器.蒸馏水或去离子水..可吸取50ul的移液器及吸头.可吸取50ul和100ul的八道移液器及吸头.吸水纸或相当的吸水材料.450nm的酶标仪.计时器.洗瓶混旋器.20mM PBS： 0.62g NaH2PO4-2H2O+5.73gNa2HPO4-12H2O+9gNaCl ,蒸馏水定容至1000ml.注意事项最好配套使用试剂，不要同其它公司的产品混用，不要将不同批次的产品混用。
样品稀释或含有杂质很可能对结果的准确性有影响。
不要使用过期的产品。
使用之前将所有试剂回升至室温，但不要放置超过24小时。
三聚氰胺属于有毒性的化学品，请小心处理。
停止液是1N盐酸，避免接触皮肤。
样品制备（以美国Beacon试剂为例）湿的宠物食品萃取方法（稀释倍数：100）均质样品至布丁状。
称取2g样品加入10mL 60%甲醇/水溶液，并剧烈振荡。
超声萃取1分钟。
漩涡混合1分钟，然后静置5分钟，使样品分层。
三聚氰胺检测标准
三聚氰胺检测标准ICS 67.100C 53中华人民共和国国家标准GB/T 22388—2008原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法Determination of melamine in raw milk and dairy products2008-10-07 发布2008-10-07 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会发布前言本标准包括三个方法：第一法高效液相色谱法，第二法液相色谱-质谱/质谱法，第三法气相色谱-质谱联用法，检测时，应根据检测对象及其限量的规定，选用与其相适应的检测方法。
本标准的附录A 为资料性附录。
本标准由全国食品安全应急标准化工作组、全国质量监管重点产品检验方法标准化技术委员会提出并归口。
本标准第一法起草单位：中国检验检疫科学研究院、中国疾病预防控制中心、国家食品质量安全监督检验中心、北京市疾病预防控制中心、国家乳制品质量监督检验中心、浙江省质量技术监督检测研究院、国家加工食品质量监督检验中心（广州）。
本标准第一法主要起草人：宋书锋、鲁杰、安娟、杨大进、李淑娟、张晶、刘艳琴、杨红梅、杨金宝、鄂来明、廖上富、陈小珍、蔡依军、郭新东、吴玉銮。
本标准第二法起草单位：中国检验检疫科学研究院、北京市疾病预防控制中心、国家食品质量安全监督检验中心、中国疾病预防控制中心、中华人民共和国江苏出入境检验检疫局。
本标准第二法主要起草人：彭涛、吴永宁、邵兵、王浩、李晓娟、郭启雷、苗虹、赵云峰、丁涛、李立、蒋原。
本标准第三法起草单位：上海市质量监督检验技术研究院、国家食品质量安全监督检验中心、中国检验检疫科学研究院。
本标准第三法主要起草人：巢强国、常宇文、雷涛、陈冬东、赵玉琪、周耀斌、穆同娜、葛宇、曹程明、张辉、麦成华、曹红。
GB/T 22388—20082原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法1 范围本标准规定了原料乳、乳制品以及含乳制品中三聚氰胺的三种测定方法，即高效液相色谱法（HPLC）、液相色谱-质谱/质谱法（LC-MS/MS）和气相色谱-质谱联用法[包括气相色谱-质谱法（GC-MS），气相色谱-质谱/质谱法（GC-MS/MS）]。
三聚氰胺检测方法
创新点
• 目前测定三聚氰胺 的方法已有高效液相法和气相-质谱法， 目前也有液相色谱-质谱法的报道。这些方法，存在试验需要衍 生、操 作繁琐、过程冗长、试剂用量较大及灵敏度低等缺 点。 本研究中采用萃取柱净化，离子色谱-电导法 和离子色谱-紫外法 分别检测化肥中阴离子和三聚 氰胺的含量，无需衍生，操作简单， 一次进样即可测 试多种离子，方法实用可靠，可满足化肥生产和 使用 安全检测的需要
流程
• 2.1色谱条件 离子色谱-电导检测器测阴离子 条件：SH-AP-1 阴离子色 谱柱（250 mm×4.0 mm）为 亲水性阴离子色谱柱；淋洗液为淋洗液 发生器产生 的高纯氢氧化钾溶液，梯度洗脱及浓度见表 1，流量 0.8 mL/min，进样量 25 μL，柱温和检测器池温均为 35 ℃，SHY-6型抑制 器，抑制电流 120 mA，系统压力 10.2 MPa。以保留时间定性，峰面 积定量。
特点
• (1）高压。检测中流动相由于是液体，经过色谱柱阻力较大。为了可 以顺利通过色谱柱，对载液要高压处理。
• （2）高效。实施分离过程的高效能。可以采用固定相与流 动相以保 证分离效果处于最佳，分离效能可以提高出许多倍。
• （3）高灵敏度。采用紫外检测器的应用，精度达到了0.01ng, 检测中 进样量可以达到μL数量级的精度。
• 4.2 提取溶液 对于 3 份加入了 1.0μg/g 三聚氰胺的样品依次用高氯酸 0.2mol/L（A 方法）、三氯乙酸 1%+乙腈（B 方法）、三氯乙酸 1% （依据标准 GB/T22388－2008）提取。根据三种试验结果表明， 回收 率依次为 71.5%，64.7% 和 99.3%。实验提取溶液使用 1% 三氯乙酸。
称取 7 g 三氯乙 酸，用超纯水定
三聚氰胺奶粉检测方法
三聚氰胺奶粉检测方法
三聚氰胺奶粉检测方法如下：
1. 离子色谱法：该方法基于三聚氰胺在水中形成氢氧化铵和靛酚蓝络合物的反应，在离子色谱柱中用硫酸为流动相进行分离，再通过紫外检测器进行检测。
2. 高效液相色谱法：该方法使用高效液相色谱柱进行分离，以甲醇和水为流动相，以紫外检测器和荧光检测器进行检测三聚氰胺。
3. 液质联用法：该方法是高效液相色谱法和质谱法的结合，可以同时分离和定量三聚氰胺及其代谢产物。
4. 岛式红外光谱法：该方法利用不同样品的红外光谱图谱的差异性来鉴别含三聚氰胺的奶粉。
5. 快速检测法：该方法使用荧光和拉曼光谱等技术，可以在几秒钟内快速、准确地检测奶粉中的三聚氰胺。
以上是常用的几种三聚氰胺奶粉检测方法。
不同的方法具有不同的优点和适用范围，可以根据实际需求选择合适的检测方法。
三聚氰胺的检测技术一
● 以目标物测定浓度为横坐标，目标物与对应同位素内标峰面积比为纵坐标，绘制三聚氰胺标准曲 线，在2.5～100.0 ng/mL线性关系良好，回归方程为y=0.998 266x+0.041 23，相关系数r为 0.999 3，符合检验对标准曲线的要求。
回收率实验
● 分别向空白样本中添加标准工作液、同位素内标工作液，按照1.3.1步骤处理并检测。添加水平为 0.01 mg/kg、0.03 mg/kg、0.10 mg/kg 3个水平，每个浓度6份平行样本，检测结果见表2。方 法回收率为82.8%～102.3%，相对标准偏差为3.2%～5.6%，回收率和精密度良好，符合检测方 法要求，适合液体乳中三聚氰胺的检测
● 检出限测定以空白牛奶样品为基质，一个阳性添加浓度C(10.0µg/g)，按照上述优化过的方法来 前处理和上机，所得信噪比S/N=19.49，可计算检出限为0.001 5µg/g。计算公式如下
● 检出限(method detection limit,MDL)(μg/g)=3C/(S/N)
● 回收率和精密度的确定以空白牛奶作为基质，进行相应的加标回收试验，加标浓度为 10µg/kg、 5 0 µg / k g 、 2 0 0 µg / k g 。 每 个 加 标 浓 度 分 别 做 6 个 相 同 浓 度 的 平 行 试 样
结论
● 本研究探索优化了一种基于高效液相色谱-串联质谱法的内标法测定液态奶 中三聚氰胺的分析方法。该方法通过用含10%二乙胺的乙腈水溶液充分提 取，取上清液进行氮吹浓缩后，定容上机测定，最后，该方法的检出限达 到了0.001 5μg/g，能灵敏的检测低含量基质，同时，液态奶试样在按 10μg/kg、50μg/kg、200μg/kg 3个浓度添加情况下根据该试验方法进行 前处理和仪器检测，结果回收率为87.79%～104.54%，相对标准偏差为 2.39%～5.07%。该方法具有前处理简单便捷、检出结果精密度高定量结 果准确且重复测试较为稳定等特点，大大提高了液态奶中三聚氰胺的检测 效率，方便对此类药物的监督管控对有效的倒逼生产养殖端按规定使用该 类药物起到积极推动作用
三聚氰胺的测定—液相色谱法
C18柱，离子对试剂缓冲液-乙腈（90+10，体积比），混合。
流速：1.0 mL/min
柱温：40℃
波长：240 nm
进样量:20 μL
五、高效液相色谱测定
高
效 液
标准曲线的绘制
相
用流动相将三聚氰胺标准储备液逐级稀释得到的浓度为0.8、2、20、
色 谱
40、80 μg/ml的标准工作液，浓度由低到高进样检测，以峰面积-浓度
效 液
甲醇：色谱纯
相
乙腈：色谱纯
色 谱 法
氨水：含量为25％～28％ 三氯乙酸
柠檬酸
辛烷磺酸钠：色谱纯
甲醇水溶液：准确量取50 mL甲醇和50 mL水，混匀后备用。
三氯乙酸溶液（1％）：准确称取10 g三氯乙酸于1 L容量瓶中，用水溶解并定容 至刻度，混匀后备用。
二、试剂和材料
高
效
氨气：纯度大于等于99.999％
三、仪器和设备
高
效
高效液相色谱（HPLC）仪：配有紫外线检测器或二极管阵列检测器
液 相
分析天平：感量为0.000 1 g和0.01 g
色 谱
离心机：转速不低于4 000 r/min
法
超声波水域
固相萃取装置
氨气吹干仪
涡旋混合器
具塞塑料离心管：50 mL
研体
四、分析步骤
氨化甲醇溶液（5％）：准确量取5 mL氨水和95 mL甲醇，混匀后备用。
液
离子对试剂缓冲液：准确称取2.10 g柠檬酸和2.16 g辛烷磺酸钠，加入约980 mL
相
水溶解，调节PH至3.0后，定容至1 L备用。
色
三聚氰胺标品：CAS08-78-01，纯度大于99.0％
三聚氰胺纸国家检测标准
三聚氰胺纸国家检测标准
本标准规定了三聚氰胺纸的甲醛释放量、挥发物含量、预固化度、耐热性和耐光色牢度（蓝色羊毛标准）等指标的检测方法。
1.甲醛释放量
1.1试验方法
将三聚氰胺纸置于恒温恒湿条件下，采集其释放的甲醛气体，用分光光度计测定甲醛的吸光度，计算甲醛释放量。
1.2标准要求
甲醛释放量应小于或等于0.3mg/L。
2.挥发物含量
2.1试验方法
将三聚氰胺纸在恒温恒湿条件下放置一定时间，测量其挥发物的重量百分比。
2.2标准要求
挥发物含量应小于或等于5.0%。
3.预固化度
3.1试验方法
将三聚氰胺纸置于烘箱中，在一定温度下加热一定时间，观察其固化程度。
3.2标准要求
预固化度应达到80%。
4.耐热性
4.1试验方法
将三聚氰胺纸置于120℃的烘箱中加热3小时，观察其热稳定性。
4.2标准要求
加热后应无气泡、起皱、变色等现象。
5.耐光色牢度（蓝色羊毛标准）
5.1试验方法
将三聚氰胺纸置于蓝色羊毛标准光源下照射一定时间，测定其色差值和牢度等级。
5.2标准要求
耐光色牢度应达到蓝色羊毛标准的四级以上。
三聚氰胺检测技术 (2)
实验结果：
y=12.95 + 164.70x（R2=0.982）
• 将不同浓度三聚氰胺标准溶液（0， 0 .05，0 .1，0 .2，0 .4，0 .6，0 .8， 1 .0，2 .0，4 .0，6.0，10 μM）分别加 入到巯基苯硼酸修饰的金纳米簇溶液中， 反应30min
结语:
• 拉曼光谱法：一种基于表面增强拉曼光谱内标分析的三聚氰胺定 量检测方法_杨龙坤
实验结果：
利用上述方法进行实验，以峰面积为纵坐标，质量浓度 （μg/m L）为横坐标绘制标准曲 线。
y=61.304 179 9x-36.316 309 R2=0.99989
精密度试验: 取三聚氰胺标准溶液，各进样 6 次，计算精密度，见表 1。实验结果表明，1.0 μg/mL、2.5 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL 相对标准偏差分别为 5.15%、8.87%、4.04%、2.56% 及 2.53%，均小于 10%，实验重现性好，精密度符 合要求。
加标回收率试验 取空白样品，加入已知浓度的三聚氰胺标准溶液，测3 次，结果如表2。由表2 可知，三聚氰胺标准溶液的平均回收率为 87.974%，准确度好。
如图2 所示，三聚氰胺的标准品保留时间为 20.963 min。 随机选取部分市售含乳饮料样品6 种，按照上述 的实验方法进行。 图3 是该6 种市售含乳饮料样品其中一种三聚氰 胺色谱图，在20.963 min 时，没有任何峰出现， 说明该样品不含三聚氰胺。其他5个样品图和图 3 相似，都没有在20.963 min 出现峰。 结果表明，这6 种含乳饮料样品均没有非法添加 剂三聚氰胺检出，符合国家标准要求。 该方法简单方便，可以用于含乳饮料中非法添 加剂三聚氰胺的检测。
三聚氰胺的检测方法 PPT
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四、注意事项
1. 试剂盒选用不同，操作过程不同，请按购买试剂盒 说明操作；
2. 室温低于20℃或试剂及样本未回到室温20-25℃， 会导致OD偏低；
3. 每加一种试剂前要将其摇匀； 4. 不同批号试剂盒不要混用；
三聚氰胺的检测方法
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5. 试剂盒2-8℃保存； 6. 0标准的吸光度值小于0.5时，表示试剂可能变质； 7. 加入底物液A、B后，一般显色10min，若颜色较浅
三聚氰胺的检测方法
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4. 洗板：孔内液体甩干，每孔加洗涤液250µl，洗涤4-5次， 最后用吸水纸拍干；
5. 显色：加显色液A、B各50µl，混匀，盖板避光反应10min; 6. 测定：加终止液50µl，混匀，在酶标仪450nm读OD值。 7. 结果判定：标准品、样品输入软件计算
三聚氰胺的检测方法
• 检测方法：①气相色谱质谱法（GC-MS） ②液相色谱串联质谱法（LC-MS-MS） ③高效液相色谱法(HPLC) 准确；成本高、操作复杂 ④ELISA——试剂盒检测，快速、简便、准确、灵敏度高
三聚氰胺的检测方法
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二、原 理
• 采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被三聚氰胺 抗原，样本残留的三聚氰胺和微孔条上预包被的抗原竞争三聚 氰胺抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与 其残留物三聚氰胺成负相关，与标准曲线比较，再乘以其对应 的稀释倍数，即可得出样本中三聚氰胺的含量。
可延长反应时间到15min，但不可超过20min，反 之则减短反应时间； 8.每种液体加入速度尽量一致、快。
三聚氰胺的检测方法
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• 1ppm=1000ppb • 1ppb=1000ppt • ppm即：mg/L（毫克/升） • ppb即：ug/L（微克/升） • ppt即：ng/L（纳克/升）
三聚氰胺检测方法
三聚氰胺检测方法
三聚氰胺是一种有毒有害化学物质，常被用作动物饲料和奶粉等食品的添加剂。
以下是三种检测三聚氰胺的方法：
1. 高效液相色谱法（HPLC）：这是一种常用的方法，适用于对液态样品或溶解后的固态样品进行检测。
该方法的基本原理是将三聚氰胺从样品中分离出来，然后使用高效液相色谱仪进行检测。
2. 毛细管电泳法（CE）：这种方法是另一种常用的检测方法，通常用于奶粉、饲料和其他类似样品的检测。
该方法基于样品的分离和电泳移动性，可以快速准确地测量样品中三聚氰胺的含量。
3. 免疫学检测法：这种方法是通过检测样品中的三聚氰胺对特定抗体的反应来进行检测。
该方法具有快速、准确、简便等特点，并且适用于大批量的样品分析。
三聚氰胺的检测方法
三聚氰胺的检测方法工业上测定三聚氰胺的纯度通常采用苦味酸法和升华法。
苦味酸法方法原理: 将水加入试样, 加热溶解后, 加人苦味酸溶液, 称量所生成的苦味酸三聚氰胺沉淀的质量, 即测得三聚氰胺纯度含量。
分析步骤: 称取试样, 置于500 ml 锥形瓶中, 同时加入水, 加热溶解; 冷却后, 加入酚酞指示液3 滴, 若显色, 加入硫酸溶液, 直至溶液颜色消失, 若有不溶物, 需过滤, 水洗; 把滤液和洗液合并, 移人500 ml 容量瓶中, 加水至刻度, 仔细振摇混合后, 准确吸取100 ml 置于500 ml 烧杯里; 将此溶液加热至80℃, 另加入已加热至80℃的100 ml 苦味酸溶液, 冷却至室温后, 保持在15℃以下约8 小时; 用已恒重的玻砂过滤器过滤, 之后,先用约100 ml 苦味酸三聚氰胺的饱和溶液洗涤, 再用水洗; 烘干玻砂过滤器, 置于干燥器中冷却后, 称量求得沉淀物质量。
升华法测定原理: 在升华装置中将试样在负压下进行加热, 让三聚氰胺完全升华后, 称其残渣量, 即测得三聚氰胺纯度。
分析步骤: 称取试样, 置于预先干燥了的且已知质量的试样容器里; 将试样容器置入减压升华装置内,待完全密闭后, 开启真空装置缓缓吸引, 并调节装置内的温度, 经2 小时升华结束; 取出试样容器, 冷至室温后,称量试样容器的质量。
上述两种测定方法准确度均较高, 但操作繁琐, 分析时间太长,有人推荐采用电位滴定法。
具体测定方法, 首先测定三聚氰胺溶液中总固体的含量, 称取样品于200 ml烧杯中, 加入100 ml 蒸馏水, 放于石棉网的电炉上加热,在沸腾的情况下搅拌溶液, 使试样完全溶解。
在电磁搅拌状态下, 用硫酸标准溶液滴定热溶液至pH 值为5 左右。
流水冷却溶液至室温, 滴定, 每次准确加入0.1 ml 硫酸标液,并记下相应的pH 值, 直至pH 值约为3。
计算出等当量点时消耗硫酸标液的体积。
结果计算按公式Me=S×6.307×V×F /m ( 其中式中:Me 为溶液中三聚氰胺的含量, %; S 为溶液中总固体的含量, %; V 为等当量点时消耗硫酸标液的体积, ml; F 为0.5 mol /L 硫酸标液的校正系数; m 为滴定时所标取总固体的质量;6.307 为换算系数) 。
三聚氰胺的检测方法
重量法、电位滴定法、高效液相色谱法、气相色谱－质谱联用法、液相色谱－质谱联用法、毛细管电泳法、近红外线吸收法、比色法、免疫学法1.1重量法：苦味酸法和升华法。
苦味酸法的原理是将三聚氰胺样品用水溶解，再向该溶液中加入苦味酸使其与三聚氰胺生成沉淀，根据生成沉淀的量计算出样品中三聚氰胺的含量。
升华法的原理是将样品置于升华装置中，使样品中三聚氰胺受热升华，准确称取剩余固体的质量。
这两种方法用于工业上检测三聚氰胺的含量准确度相对较高，但分析时间都比较长，操作繁琐，不适合高效快速检测。
1.2电位滴定法电位滴定法在工业中检测三聚氰胺较重量法简单，实验时间较短，但准确度不高。
其实验原理：以硫酸标准溶液滴定含有三聚氰胺的溶液，通过公式用等当量点时消耗硫酸标准溶液的体积计算出三聚氰胺的含量。
不用于食品。
1. 3 高效液相色谱法（HPLC）用HPLC 检测三聚氰胺含量，检出限低，准确度相对较高，可用于食品中三聚氰胺的检测。
实验的一般操作步骤是：用沉淀法先将奶粉中的蛋白质沉淀，然后提取奶粉中的三聚氰胺，将提取液用阳离子交换固相萃取柱净化，最后用高效液相色谱进行检测，外标法定量。
1. 4气相色谱法和质谱联用法（GC-MS）与HPLC 法比较，GC-MS 具有准确度高、检出限低（0.05 mg/kg），更适合食品中三聚氰胺的微量检测。
该方法样品经蛋白沉淀离心后过MCX 固相萃取柱净化、氮气吹干、硅烷化衍生, 再由气相色谱－质谱联用仪检测。
由于三聚氰胺为强极性化合物，难汽化，直接对其进行GC-MS 测定不但灵敏度低且峰拖尾严重，为此王征采用N，O- 双三甲基硅基三氟乙酰胺衍生化，极性的减弱使其容易进行汽化，有利于待测物和基质的分离,降低了背景化学噪音的影响。
王立媛等用GC-MS 方法检测奶粉和鲜奶中三聚氰胺的加标回收率在82.3%～110.0%之间，相对标准偏差（RSD）＜10%，方法净化效果好、准确度高、灵敏度好。
但是GC- MS 法需要进行衍生化, 样品处理步骤复杂,不适用于多杂质生物检材中三聚氰胺的快速筛查和定量分析。
食品三聚氰胺检测方法
食品三聚氰胺检测方法
食品中三聚氰胺的检测方法主要有以下几种：
1. 高效液相色谱-质谱联用法：利用高效液相色谱将样品中的三聚氰胺分离出来，然后使用质谱进行定性和定量分析。
2. 气相色谱-质谱联用法：将样品中的三聚氰胺通过气相色谱分离，再利用质谱进行定性和定量分析。
3. 酶联免疫吸附测定法：利用酶联免疫吸附技术，制备专门的三聚氰胺抗体，将样品与抗体结合，在检测中利用酶的催化作用来定量分析三聚氰胺的含量。
4. 端子法：将含有三聚氰胺的食品样品与二甲腈反应生成蓝色复合物，然后通过分光光度法测定蓝色复合物的吸光度，从而计算出三聚氰胺的含量。
5. 电化学法：利用电化学传感器或电极来检测食品中的三聚氰胺，根据电化学信号的变化来定量分析。
需要注意的是，不同的检测方法在准确度、灵敏度、样品处理等方面可能存在差异，选择合适的方法需要综合考虑实际需求和条件。
而且在实际应用中，常常采用多种方法进行交叉验证，以提高检测的可靠性和准确性。
三聚氰胺的快速检测方法
三聚氰胺的快速检测方法
【目视比浊测定法】 1. 适用范围 本方法适用于原料乳、 纯乳、纯乳粉以及饲料中三聚氰胺的现场快速限量检 测。 2. 方法原理 样品中的三聚氰胺经过大约 5min 的快速提取后， 与铵盐沉淀试剂发生反应， 生成相对稳定的混悬液体，在比浊管中与对照液目视比对判定结果。 3. 检验材料 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 3.7 3.8 3.9 A 试液 20mL×2 瓶； B 试液 20mL×2 瓶； 5mL 离心管 20 只；ห้องสมุดไป่ตู้3mL 一次性吸管 20 支； 注射器 20 只； 密闭式微孔滤膜 20 个； 比浊管 6 只； 米字比浊片 6 片； 100mg/L 的三聚氰胺对照液 8mL×1 瓶。
三聚氰胺试验方法
三聚氰胺试验方法三聚氰胺是一种无机化合物，可以用于合成氰酸甲酰胺树脂和三聚氰胺甲醛树脂等多种化合物。
然而，三聚氰胺也因其毒性而广泛被人们关注。
特别是在2024年，中国发生了一起涉及三聚氰胺的食品安全事件，引发了全球范围内的关注和讨论。
因此，为了确保食品的安全性和消费者的健康，需要对食品中的三聚氰胺进行检测。
以下是一种常用的三聚氰胺试验方法。
1.样品准备：将待测食品样品收集，并进行样品预处理。
根据样品的不同性质，可采用研磨、过筛、稀释等方法，将样品制备成均匀可测的状态。
2.样品提取：将经过预处理的食品样品提取出三聚氰胺。
可采用水提取、酸提取、有机溶剂提取等方法，根据样品特点和所需检测的目的选择合适的提取方法。
3.样品清洗：对提取液进行净化和去除干扰物。
根据不同的提取方法和所需的净化程度，可采用固相萃取、液液分配等方法进行样品清洗。
4.样品测定：采用高效液相色谱（HPLC）联用质谱（MS）技术进行三聚氰胺的定量测定。
首先，通过HPLC方法对样品进行分离，然后利用质谱对样品中的三聚氰胺进行定量分析。
5.数据处理：根据样品的测定结果，计算出样品中三聚氰胺的浓度。
可以选择使用专门的数据处理软件进行结果的统计和分析。
需要注意的是，三聚氰胺的检测方法可能因样品性质和检测目的而有所不同。
另外，三聚氰胺的检测也需要专业的实验室设备和操作技术，确保数据的准确性和可靠性。
总而言之，三聚氰胺的检测是食品安全监管的重要环节。
通过合适的样品准备、提取、清洗和测定方法，可以准确快速地检测出食品中的三聚氰胺，保障消费者的健康和食品的安全。
三聚氰胺检测方法
检测方法GC-MS法测定动物食品中的三聚氰胺Spectra-Quad实现三聚氰胺含量在线检测超高效液相色谱_电喷雾串联质谱法测定饲料中残留的三聚氰胺反相高效液相色谱法测定饲料中三聚氰胺的含量高效液相色谱-二极管阵列法测定高蛋白食品中的三聚氰胺高效液相色谱法(HPLC)测定饲料中三聚氰胺的含量高效液相色谱-四极杆质谱联用测定饲料中三聚氰胺含量固相萃取与高效液相色谱联用测定宠物食品中三聚氰胺液相色谱串联质谱法(LC-MSMS)分析宠物食品中三聚氰胺液相色谱-串联质谱法测定饲料中三聚氰胺残留GC-MS法测定动物食品中的三聚氰胺附：三聚氰胺检测方法示例仪器与条件高效液相色谱仪；二极管阵列检测器(DAD)，检测波长240nm，柱温：40℃。
(1)AgelaVenusilTMASBC18(4.6×250mm);缓冲液：10mM柠檬酸,10mM庚烷磺酸钠;流动相：缓冲溶液:乙腈=85:15;流速：1.0mL/min。
(2)AgelaVenusilTMASBC8(4.6×250mm);流动相：缓冲液：乙腈=85：15;缓冲液：10mM 柠檬酸，10mM辛烷磺酸钠，调pH为3.0;流速：1.0mL/min;离子交换固相萃取柱AgelaClearnertTMPCX试剂与样品宠物饲料样品(农业部饲料供应中心提供);甲醇、乙腈为北京艾杰尔科技有限公司提供;氨水、乙酸铅、三氯乙酸、均购于北京化学试剂公司;三聚氰胺标准品、柠檬酸、辛烷磺酸钠(Sigma公司);甲醇为色谱纯，其他均为化学纯。
实验方法1、样品前处理方法(1)标准样品配制：取50mg三聚氰胺标准品，以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的标准溶液，使用时，以提取液(0.1%三氯乙酸)稀释至所要的浓度。
(2)提取：称取饲料样品5g，加入50ml0.1%三氯乙酸提取液，充分混匀，加入2mL2%乙酸铅溶液，超声20min。
然后取部分溶液转移至10mL离心管中，8000rpm/min离心10min，取上清液3mL过混合型阳离子交换小柱(PCX)。
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重量法、电位滴定法、高效液相色谱法、气相色谱－质谱联用法、液相色谱－质谱联用法、毛细管电泳法、近红外线吸收法、比色法、免
疫学法
1.1重量法：苦味酸法和升华法。
苦味酸法的原理是将三聚氰胺样品用水溶解，再向该溶液中加入苦味酸使其与三聚氰胺生成沉淀，根据生成沉淀的量计算出样品中三聚氰胺的含量。
升华法的原理是将样品置于升华装置中，使样品中三聚氰胺受热升华，准确称取剩余固体的质量。
这两种方法用于工业上检测三聚氰胺的含量准确度相对较高，但分析时间都比较
长，操作繁琐，不适合高效快速检测。
1.2电位滴定法
电位滴定法在工业中检测三聚氰胺较重量法简单，实验时间较短，但准确度不高。
其实验原理：以硫酸标准溶液滴定含有三聚氰胺的溶液，通过公式用等当量点时消耗硫酸标准溶液的体积计算出三聚氰胺的含量。
不用于食品。
1. 3 高效液相色谱法（HPLC）
用HPLC 检测三聚氰胺含量，检出限低，准确度相对较高，可用于食品中三聚氰胺的检测。
实验的一般操作步骤是：用沉淀法先将奶粉中的蛋白质沉淀，然后提取奶粉中的三聚氰胺，将提取液用阳离子交换固相萃取柱净化，最后用高效液相色谱进行检测，外标法定量。
1. 4气相色谱法和质谱联用法（GC-MS）
与HPLC 法比较，GC-MS 具有准确度高、检出限低（0.05 mg/kg），更适合食品中三聚氰胺的微量检测。
该方法样品经蛋白沉淀离心后过MCX 固相萃取柱净化、氮气吹干、硅烷化衍生, 再由气相色谱－质谱联用仪检测。
由于三聚氰胺为强极性化合物，难汽化，直接对其进行GC-MS 测定不但灵敏度低且峰拖尾严重，为此王征采用N，O- 双三甲基硅基三氟乙酰胺衍生化，极性的减弱使其容易进行汽化，有利于待测物和基质的分离,降低了背景化学噪音的影响。
王立媛等用GC-MS 方法检测奶粉和鲜奶中三聚氰胺的加标回收率在82.3%～110.0%之间，相对标准偏差（RSD）＜10%，方法净化效果好、准确度高、灵敏度好。
但是GC- MS 法需要进行衍生化, 样品处理步骤复杂,不适用于多杂质生物检材中三聚氰胺的快速筛查和定量分析。
1. 8 比色法
由于牛奶中各种蛋白质基质可能干扰三聚氰胺的检测, Fang Wei 等把基于酪蛋白的牛奶成分分离，然后向溶液中加入金的纳米颗粒。
金的纳米颗粒与三聚氰胺的相互作用导致了显著的颜色变化，显示出三聚氰胺的存在。
当三聚氰胺存在的时候，溶液的颜色在几秒钟内从红色变成了蓝色，而且可以通过视觉观察和分光光度测定法检测。
该法提供了一种使用纳米颗粒的高灵敏度探测手段，从而防止人们因为摄入三聚氰胺而受到伤害的独特机遇，对乳制品早期筛查提供了一种可行的方法。
1. 9
免疫学法———试剂盒检测法（ELISA）
免疫学法是一种快速检测三聚氰胺的方法，其原理是利用萃取液通过均质及震荡的方式提取样品中的三聚氰胺进行免疫测定。
样品经过甲醇离心处理，氮气吹干再次甲醇溶解后放入到试剂盒中，加入三聚氰胺HRP 酶标记物，轻轻混合60 s，孵育0.5 h。
将微空中的溶液倒入水槽中，用洗液洗板多次。
在吸水纸上拍打，向个孔中加入底物溶液，孵育0.5 h，最后加入终止液体，用酶标记仪在450 nm 下测吸光度。
然后以三聚氰胺浓度半对数为横坐标做标准曲线, 确定被测样品的浓度。
该法操作简便，分析速度快，可大批量筛选，其检出限达到10 ug/k。
但是在检测过程有假阳性问题，因此对阳性样品需确证方法进行确证。
●表面增强拉曼光谱法快速检测牛奶中的三聚氰胺
摘要：基于表面增强拉曼光谱技术的便携式拉曼光谱仪运用于牛奶收购、运输过程中三聚氰胺的快速测定进行了研究。
利用三聚氰胺位于708 cm-1~714cm-1的拉曼光谱特征峰及其强度，对三聚氰胺进行定性及半定量的快速测定。
检测限为 2.0 mg/L，常见含氮化合物尿素、亚硝酸钠等物质对本快速测定方法无干扰。
对每个样品的检测时间从样品制备到结果显示一般只需10 min。
(检测三聚氰胺的国家标准检测方法为高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用法、液相色
谱-质谱/质谱法三种方法为三聚氰胺的检测方法，检测定量限分别为2 mg/kg、0.05 mg/kg 和0.01mg/kg[4]。
)
●牛奶中三聚氰胺的高效液相色谱检测法(国家标准检测方法)
方法原理：用乙睛提取试料中的药物残留,经正已烷去除脂肪,提取液经蒸干后,用流动相
溶解残渣,所得样液以高效液相色谱一紫外检测法测定,外标法定量。
●液相色谱-质谱/质谱法对多种食品基体中三聚氰胺的检测（国家标准检测方法）
1.标准溶液的制备
2. 样品的提取
3. 提取液的净化
4. 液相色谱-质谱/质谱测定
考察了4种不同型号和填料的色谱柱,在相应的优化流动相条件下的检测灵敏度、精密度与基体效应。
结果表明,三聚氰胺在4种分析条件下均有响应,但由于色谱柱填料性质的差异,在针对具体食品基体时,灵敏度和精密度存在很大差别。
导致上述4种分析方法的结果差异,可能主要为以下原因: Hilic色谱柱的保留与分离机理比较复杂,流动相组成和样品基体中部分化合物对强碱性强极性化合物三聚氰胺的保留影响较传统ODS柱更为明显;三聚氰胺的特殊性质和分子结构,使其在质谱仪器上的离子化行为较为复杂,同时流动相组成和样品基体的差异,也将影响离子化效率,导致分析结果精密度不同。