小鼠Ⅱ型胶原性关节炎模型的制备
胶原诱导性关节炎动物模型制作的步骤及方法
胶原诱导性关节炎动物模型制作的步骤及方法自20世纪70年代次建立胶原诱导性关节炎动物模型以来，已有研究证实，类风湿关节炎患者血清及滑液中存在抗胶原抗体，且这种对胶原组织的自身免疫反应，可以解释类风湿关节炎所具有的系统性和慢性持续性发展的特点。
(1)复制方法将Ⅱ型胶原(是一种与免疫系统隔绝的蛋白质，大量存在于关节软骨中)溶于0.1mol/L的醋酸中，在4℃下搅拌充分溶解，浓度为2g/L，置4℃冰箱过夜，再将灭活卡介苗(BCG)置于液体石蜡中，配成2g/L的弗氏佐剂，将二者等体积混合、乳化，制成Ⅱ型胶原乳剂。
将该乳剂于小鼠的尾根部皮内注射0.1ml致炎，第21日腹腔注射乳剂0.1ml 作为激发注射。
(2)模型特点次免疫注射后，可在皮内注射部位形成多处小溃疡，此为局部炎症刺激反应，一般1周左右可自行结痂愈合；关节炎体征：致炎后24d，小鼠出现关节肿胀，先两个后足，然后蔓延到前足和尾部，并日渐加重，36d达高峰；用足爪仪测足爪变化，再致炎28d，足爪明显大于正常对照组。
在发病过程中，动物的毛色失去光泽，轻微脱毛，体重减轻，伴有耳及尾部的炎症病灶。
肉眼可见单个或多个关节红、肿，动物行动不便；光镜下，早期滑膜组织有中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞浸润，继之滑膜细胞增生、排列紊乱，纤维素渗出，胶原纤维沉着，纤维素样坏死，即滑膜炎表现；电镜下，滑膜细胞线粒体减少，溶酶体增多，细胞间隙增大；关节腔内渗出液细菌培养阴性，提示CIA为非感染性炎症。
CIA的骨质破坏与破骨细胞的异常表达关系密切，利用组织形态测定CIA小鼠近端胫骨及腰椎骨的骨质丢失，发现早期有大量破骨细胞和暂时性骨质构建，致炎后4周，在近端胫骨接近关节炎症部位，破骨细胞及骨小梁的数量比对照组增加4倍，腰椎部位未显示关节炎症状，破骨细胞募集较晚，随着时间的推进，在近端胫骨和腰椎有骨的吸收。
(3)比较医学 CIA作为RA的动物实验模型，表现为多发性外周关节炎，关节局部红肿，严重致关节畸形。
类风湿关节炎动物模型的制作及注意要点
抗Ⅱ型胶原单克隆抗体源自8周大的雄性DBA/1J 小鼠CIA 模型，这些抗体混合物注射到模型小鼠的关节腔后可直接作用于Ⅱ型胶原或其他在体内高表达的自身抗原，从而发挥免疫介导作用。该模型的临床症状与CIA和RA很相似，突出特点是能在几天之内迅速发病，关节组织中巨噬细胞和多核型白细胞浸润。该模型很好的体现了外源性抗原抗体刺激体诱导的严重关节损伤。
类风湿关节炎动物模型的制作及注意要点
（一）佐剂诱导型（AA）
AA 早由Freund 于20 世纪50 年代创立，又称弗氏佐剂关节炎，介导溶剂分为完全佐剂（CF模型在T细胞相关致炎通路的药物筛选上发挥着重要的作用。
（二）胶原诱导型（CIA）
CIA 模型是由Trentham等于1977年*建立的实验性关节炎动物模型。通过皮下注射Ⅱ型胶原和等量CFA 的混合液来建造，来源于鸡、小牛和大鼠的Ⅱ型胶原均能引起关节炎症。CIA 是MHC 相关型，以T/B淋巴细胞介导的关节炎症侵蚀为主要特征。
Ⅱ型胶原诱导的大鼠关节炎动物模型的研究
四川大学硕士学位论文Ⅱ型胶原诱导的大鼠关节炎动物模型的研究姓名：王岩艳申请学位级别：硕士专业：内科学（风湿免疫）指导教师：刘钢20060401四川大学临床医学硕士专业学位论文用皮试针头紧贴表皮浅层刺入皮内，然后使针头向上挑起并再稍向前刺入，即可注射药液。
注射后可见皮肤表面鼓起一白色小皮丘。
（见图１）图ｌ皮内注射胶原的皮丘２．２．４灌胃：一只手拇指和食指捏紧大鼠头颈部皮肤，另外三指和掌内侧夹紧固定大鼠背部的皮肤，使口腔与食道成一直线。
另外一只手持灌胃器，将灌胃针从鼠的口腔插入，沿咽后壁慢慢插入食道，可感到轻微的阻力，此时可略改变一下灌胃针方向，以刺激引起吞咽动作，顺势将药液注入。
２．２．５动物的观察：密切观察大鼠的生命体征、活动和饮食等情况。
每天观察关节变化情况，每周称重一次，踝关节周长，踝关节直径，以自制的容积测量设备用容积法测量踝关节以下（包括踝关节）的容积。
于初次免疫第５０天左右评价关节炎指数。
２．３血清标本收集：２．３．１断尾取血：①固定：大鼠放入专门自制的小木盒中固定，仅露出尾②将大鼠尾放入４５℃左右的温水浸泡几分钟，并用酒精棉球涂拭尾，使尾部的血管充盈。
四川大学临床医学硕士专业学位论文Ｃａｂｄ图２空白组大鼠前肢Ｃａ）后肢（ｂ）表现，模型组大鼠前肢Ｃｏ）后肢（ｄ）红肿３．组织病理检查：ＨＥ染色，空白组滑膜细胞仅有１－－２层，无增生，滑膜下未见炎性细胞浸润，无血管增生，关节软骨表面光滑，关节软骨及软骨下骨质无破坏，关节间隙正常（见图３ａ，３ｂ）．与空白组相比，模璎组膝关节滑膜细胞水肿，明显增生有３—７层。
并且形成许多小绒毛状突起伸向关节腔。
滑膜下组织见大量炎性细胞浸润，纤维结缔组织和血管增生，取代正常的滑膜下脂肪组织，血管增生形成的血管翳破坏关节软骨及软骨下骨质，关节结构被破坏。
滑膜组织中还可见淋巴滤泡形成。
（见图３０－３０ａＸ１００倍ｂ×４００倍ｃ×１００倍ｄＸ４００倍ｅ×１００倍ｆＸ１００倍图３（ａ）（ｂ）空白组滑膜组织：（ｃ）（ｄ）模型组滑膜细胞增生；（ｅ）模型组滑膜组织大量炎性细胞浸润；（ｆ）模型组增生的滑膜细胞和增生扩张的血管形成血管翳。
II型胶原(CII)诱导的大鼠关节炎(CIA)模型筛选服务
RA的病因与发病机制目前尚未完全阐明，但随着细胞分子学和免疫学的深入研究，RA 动物模型的建立，发现了细胞因子、TH1／TH2细胞平衡、性激素等在RA的发病中起重要作用。 其中人们已证实TNF-a及IL-lβ在RA进展中起着决定性作用。TNF-a是机体炎症反应与免疫应 答的重要调节因子，能刺激滑膜细胞和软骨细胞合成PGE2和胶原酶，导致关节局部滑膜炎症 和软骨组织破坏，TNF-a既能刺激IL-Iβ，IL-6，IL-8的产生，又能刺激其自身的合成，在 RA的细胞因子网络中起中心作用；IL-1分为IL-1a和IL-lβ，主要由巨噬细胞分泌，内皮细 胞和淋巴细胞也能产生，能诱导一系列全身的炎症反应，包括引起发热和消瘦，合成急性期 蛋白，也可对软骨和骨基质代谢产生局部作用。TNF-a主要导致RA初期的关节肿胀，而软骨 的侵蚀则由IL-Iβ介导且和免疫复合物有协同效应。TNF-a是一个主要的炎性因子，IL-Iβ 是关节组织破坏的决定性细胞因子。故在对RA的治疗中，必须对IL-Iβ，TNF-a实行双重阻 断，才能阻止关节的破坏。
II 型胶原（CII）诱导的大鼠关节炎（CIA）模型筛选服务
类风湿性关节炎(RA)是一种以关节滑膜炎为特征的自身免疫性疾病，其发病机制十分复 杂，迄今尚未完全阐明。
胶原诱导性关节炎(collagen—induced arthritis，CIA)模型是Trentham 等于1977年 首次建立的实验性关节炎动物模型，是一种免疫性炎症模型，多发性的末端关节炎是该模型 的主要临床表现。研究表明动物CIA模型特点与临床类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)临床表现极为相似，是研究和筛选治疗RA药物的理想模型，也是美国食品药 品监督管理局用于治疗RA药物筛选的动物模型。
《2024年胶原蛋白诱导性关节炎小鼠Th1-Th2细胞及其细胞因子的动态研究》范文
《胶原蛋白诱导性关节炎小鼠Th1-Th2细胞及其细胞因子的动态研究》篇一胶原蛋白诱导性关节炎小鼠Th1-Th2细胞及其细胞因子的动态研究一、引言胶原蛋白诱导性关节炎（Collagen-induced arthritis，CIA）是一种广泛用于研究人类自身免疫性关节炎的动物模型。
这种模型能模拟人类风湿性关节炎（Rheumatoid Arthritis, RA）的发病机制和病程发展，为我们提供深入理解RA及其相关疾病的有效手段。
在此背景下，本文以Th1/Th2细胞及其细胞因子为研究对象，探究CIA小鼠的免疫应答动态变化，旨在揭示其免疫反应的内在机制。
二、材料与方法1. 实验动物与模型本实验采用小鼠作为实验对象，通过注射胶原蛋白诱导其发生关节炎。
所有实验小鼠均饲养在无特定病原体（Specific Pathogen Free, SPF）环境中，确保实验结果的准确性。
2. 实验方法通过流式细胞术和实时荧光定量PCR技术，分别对小鼠的Th1/Th2细胞及其细胞因子进行动态监测。
在CIA小鼠的不同病程阶段（如初期、中期和晚期），分别采集其血液和关节液样本，进行相关指标的检测。
三、Th1/Th2细胞的动态变化1. Th1细胞的动态变化在CIA小鼠的病程发展过程中，Th1细胞的数目和活性呈现出先升高后降低的趋势。
在关节炎初期，Th1细胞的数量和活性显著增加，表明机体正在进行免疫应答。
然而，随着病程的进展，Th1细胞的数目和活性逐渐降低，可能与其功能衰竭或凋亡有关。
2. Th2细胞的动态变化与Th1细胞相反，Th2细胞在CIA小鼠的病程发展过程中呈现出先降低后升高的趋势。
在关节炎初期，Th2细胞的数量和活性相对较低，随着病情的恶化，其数量和活性逐渐增加，这可能与机体的抗炎反应有关。
四、细胞因子的动态变化在CIA小鼠的病程发展过程中，多种细胞因子如IL-2、IL-4、IFN-γ等均有所变化。
IL-2和IFN-γ是Th1细胞的主要产物，其水平的变化与Th1细胞的动态变化趋势一致。
胶原诱导小鼠关节炎方案(CIA
胶原诱导小鼠关节炎方案（CIA）胶原诱发的关节炎与人类风湿病关节炎具有共同的免疫学和病理学特征，因此CIA模型被广泛应用于研究致病机理及治疗方法的研究。
尽管关节炎模型是可复制的，但要成功诱导高发病率和严重程度的关节炎，一些影响造模因素需要考虑。
以下是成功诱发小鼠关节炎的一些重要因素。
在造模之前，特别是对于首次造模者，这些因素需要提前考虑到。
然而，正如其它生物模型，不同研究单位的方案有所不同，因此，每个研究者需要确定自己的研究方案。
动物管理与饲养动物必须是7-8 周龄健康的并在SPF条件下饲养的动物。
一般来说，对于肠道菌群，不管是否致病都显著影响宿主对抗原的免疫应答。
滤过性毒菌和细菌感染也会影响机体对胶原的免疫应答及关节炎进展。
例如：感染肝炎病毒（MHV）的小鼠，不能够诱发关节炎。
饮食也会影响关节炎的发病率和严重程度，CIA在饲喂不同饮食的小鼠中差异很大。
饲喂高脂肪的食物更容易引起高发病率和严重关节炎。
小鼠品系小鼠对CIA的易感性与MHC-Ⅱ类分子相关，同时也取决于接种二型胶原的小鼠品系。
有两个小鼠品系被广泛应用，因为这两个品系对CIA高度易感。
一个是DBA/(H-2q)小鼠，对鸡牛猪和人二型胶原有免疫应答，另一个品系B10.RⅢ(H-2r)小鼠，对牛和猪的二型胶原有免疫应答，对鸡和人二型胶原有较弱的免疫应答。
两个品系对小鼠的二型胶原都有较弱的免疫应答，小鼠二型胶原的抗体水平低于关节炎抗体水平的1%。
因此，如果用小鼠的二型胶原免疫小鼠的话，关节炎发生率约为10%。
列表为用于CIA及CAIA 动物模型研究的小鼠品系.另一方面，CIA抗性的小鼠不总是不产生关节炎抗体。
最近研究表明，对CIA的敏感性不仅取决于MHC 类型，同时CIA抗性的小鼠C57BL/6, 129/Sv (H-2b), and Balb/c (H-2d) ，当INF-r 和IL-10 基因敲除后，小鼠能产生针对的关节炎自身抗体。
这表明，对关节炎的敏感性也取决于不同细胞因子水平。
《2024年胶原蛋白诱导性关节炎小鼠Th1-Th2细胞及其细胞因子的动态研究》范文
《胶原蛋白诱导性关节炎小鼠Th1-Th2细胞及其细胞因子的动态研究》篇一胶原蛋白诱导性关节炎小鼠Th1-Th2细胞及其细胞因子的动态研究一、引言胶原蛋白诱导性关节炎（Collagen-induced arthritis，CIA）是一种常见的自身免疫性疾病模型，常被用于研究关节炎的发病机制和治疗方法。
Th1细胞和Th2细胞作为免疫系统中的两种主要细胞亚群，在CIA的发病过程中起着重要作用。
本文旨在研究CIA小鼠模型中Th1/Th2细胞的动态变化及其相关细胞因子的表达情况，以期为进一步理解CIA的发病机制和寻找有效的治疗方法提供理论依据。
二、材料与方法1. 实验材料选用特定品系的小鼠，制备胶原蛋白诱导性关节炎模型。
所需试剂包括各种抗体、细胞因子检测试剂等。
2. 方法（1）制备CIA小鼠模型；（2）在不同时间点收集小鼠血清和关节液，进行Th1/Th2细胞及其细胞因子的检测；（3）采用流式细胞术、酶联免疫吸附试验（ELISA）等方法进行检测；（4）数据分析采用统计学方法。
三、实验结果1. Th1/Th2细胞的动态变化在CIA小鼠模型中，Th1细胞和Th2细胞的数量随着疾病的进展发生动态变化。
在疾病早期，Th1细胞数量增多，而Th2细胞数量相对较少。
随着疾病的进展，Th2细胞数量逐渐增多，与Th1细胞的比例发生变化。
这一变化趋势与疾病的严重程度和病程有关。
2. 细胞因子的表达情况在CIA小鼠模型中，多种细胞因子如IFN-γ、IL-4、IL-10等表达水平发生变化。
IFN-γ作为Th1细胞的标志性细胞因子，在疾病早期表达水平升高；而IL-4和IL-10作为Th2细胞的标志性细胞因子，在疾病后期表达水平升高。
这些细胞因子的表达水平与疾病的严重程度和病程密切相关。
3. 相关性分析Th1/Th2细胞的数量和细胞因子的表达水平之间存在显著相关性。
在疾病早期，Th1细胞数量增多，IFN-γ表达水平升高；而在疾病后期，Th2细胞数量增多，IL-4和IL-10表达水平升高。
小鼠胶原诱导性关节炎模型的建立及其免疫学变化研究
Ⅱ型胶 原 与 完 全弗 氏佐 剂 混 和并 充 分 乳 化 ， Ｄ Ａ １小 鼠尾 根 部 皮 内 注 射 进 行 初 次 免 疫 ，０ ｄ后 同样 方 法 进 行 再 于 Ｂ／ ２ 次 免 疫 。 应 用 千 分 尺 测 量 ＣＡ模 型小 鼠 的 左右 两侧 足 掌 厚 度 ， 进 行 关 节 炎 评 分 。酶 联 免 疫 吸 附 试 验 测 定 小 鼠血 Ｉ 并 清 Ⅱ型 胶 原 特 异 性 抗 体 ，ｕ ｉ ｘ技 术 和 ｃ ＩＡ 技 术 测 定 血 清 及 培 养 上 清 中 的 细 胞 因 子 水 平 。 结 果 Ｌ ｍｎ ｅ ｔＳ Ｌ ＣＡ 小 鼠 于 Ｉ
ＸＩ ＡＯ Ｚｈｉｙ ｎ ＺＨＡＮＧ ｉ ｇ ｌｎ ＺＨＡＮＧ ａ －ｕ ， — ｏ ｇ， Ｌ ｎ —ｉｇ， Ｘｉｏ ｒ ｉ ＺＨ ＯＵ Ｗ ｅ ｘａ， ｎ—ｉ ＺＨ ＡＮＧ ｎ ｘ ａ ｇ Ｙｏ ｇ—ｉ ｎ
（ ｎ ｔｕｅｏ ｈ ｒ ｃ ｌｇ ｎ ｏ ｉｏｏ ｙ，ＡＭＭＳ，Ｂ ｉｎ ０ ８ ０， ｈｎ ） Ｉｓｉ ｔ ｆＰ ａｍａｏｏｙ ａ ｄＴ ｘｃ ｌｇ ｔ ｅｊ ｇ １ ０ ５ Ｃ ｉａ ｉ
将 牛
疗 药 物 筛 选 的 理 想 模 型 ， 是 目前 国 际上 公 认 的关 节 炎 模 型 。但 是 ， 也 目前 鲜 见 Ⅱ型 胶 原 诱 导 ＣＡ模 型 的 系 统 免 疫 Ｉ 学 变 化 的 报 道 。 因 此 ， 研 究 采 用 Ｄ Ａ １小 鼠诱 导 了 ＣＡ模 型 ， 对 其 免 疫 学 改 变 进 行 了 系 统 研 究 。 方 法 本 Ｂ／ Ｉ 并
小鼠胶原诱导性关节炎的研究进展
conducting MgB2.Phys.Re v.B,2001;64:14050919Jin S.,Mavoori H.,B ower C.,et al.High critical currents in iron-clad superconducting MgB2wires.Nature,2001;411:56320Canfield P.C.,Finnemore D.K.S.Lbud.ko,Superconductivi ty in dens e MgB2wires.Phys.Rev.Le tt.,1986;(11):243321谢旭,沈庆飞等.MgB2超导线和不同电极材料之间接触电阻的研究.低温物理学报,2001;23(4):30522刘春芳.西北有色金属研究院新型MgB2超导体研究进展.材料导报,2001;(5):39923Eon C.B.,Lee M.K.,et al.Hi gh critical current dens ity and enhanced irreversibili ty field in s uperconducti ng MgB2thin fil ms.Nature,2001;411:55824C hri sten H.M.,Zhai H.Y.S uperconduc ting m agnesium diboride fil ms wi th T c U24K grown by puls ed laser depisition wi th in si tu anneal.Phys C,2001;353:157-16125Loa I.,Syassen K.C alculated elastic and electronic properties of MgB2at high pres sures.Sol.Sta.C om.,2001;118:27926B ugoslarky Y.,et al.Vortex dynam ics in s uperconduc ti ng MgB2and prospects for applications.Nature,2001;410:56327Ki m M.S.,Jung C.U.,e t al.Pro minent bulk pi nning effec t in theMgB2s uperc onductor.Phys.Re v.B,2001;64:01251128Buoslavs ky Y.,F.C ohen L.,e t al.Enhance ment of the high-magnetic -field critical current density of superconducti ng MgB2by proton i rradi2 ation.Nature,2001;411:56129De Lim a O.F.,Ri beiro R.A.,et al.Anisotropic s uperconduc ting prop2 erties of aligned MgB2c rystallites.Phys.Re v.Lett,2001;86(28):5974 30Cunningham C.E.,Petrovic C.,et al.Synthesis and Processing of MgB2 powders and wi res.Phys C,2001;353:5-10Reserch and Progress in MgB2Matrix Superconduc2 tive Mater ialHuang Y ong¹,Liu Xin2yuº,Z eng Zhong2ming»¹»G raduate Student,School o f Mate rials Sc ienc e and Enginee ring,C en2 tral South Universit y,C hangs ha,410083ºPro fess or,R es earch Ce nte r for Mate rials Sc ie nce and Enginee ring,G uilin Institue o f Ele ctronic Tec hnology,G uilin,541004Key words MgB2m atrix s uperconductive material,electronic structure,su2 perconducti ng m echanis m小鼠胶原诱导性关节炎的研究进展奚正德张冬青张雁云臧敬五(中国科学院上海生命科学研究院P上海第二医科大学,健康科学中心,上海市免疫学研究所)关键词胶原诱导性关节炎类风湿性关节炎Ò型胶原自身免疫病胶原诱导性关节炎(collagen2induced arthritis,CIA)是最常用的类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的动物模型.由于其重复性好、易于界定、并被证实对类风湿性关节炎新疗法(诸如最近发展起来的TNF-A中和治疗方法)的发展有用而被广泛接受.胶原诱导性关节炎模型代表了导致关节炎的某些途径,较大程度上反映了RA的发生情况.现在我们正处于认识、理解免疫识别的结构(例如MHC分子、淋巴细胞受体和Ò型胶原表位)的时代.这些环节对疾病的发生、发展都极为重要.这为对类风湿性关节炎致病机制的理解和胶原诱导性关节炎致病机制的进一步研究提供了有价值的工具.一、引言类风湿性关节炎是一种自身免疫病,免疫系统功能的混乱是导致疾病发生的根本原因[1,2],但具体机制尚不清楚.为了研究这一疾病的发病机理,建立动物模型是必然的选择.现有的动物模型主要分为二大类:一类是佐剂性关节炎,另一类是关节源性自身抗原诱导的关节炎.后者中研究最多和较为透彻的是胶原诱导性关节炎.胶原诱导性关节炎在临床症状和病理表现方面与类风湿性关节炎极为相似或相同(诸如关节滑膜增生、关节翳形成和软骨破坏等).因此,CIA是研究RA较为理想和最常用的动物模型.这一模型是通过用佐剂乳化的Ò型胶原(collagen typeÒ,CÒ)皮内免疫注射诱导易感小鼠品系实现的.作为关节软骨的一种主要和特有的组分,用CÒ免疫注射可激发出攻击关节的自身免疫应答.获得性免疫由两部分组成(细胞免疫和体液免疫).T细胞和B细胞在CI A致病机制中具有中心作用,但它们在免疫活化的激发和关节的破坏中的重要性仍不清楚.B细胞的主要作用是产生关节致病性(arthritoge nic)抗CÒ抗体.现在已非常清楚这些与CÒ反应的抗体可以与软骨结合并诱导关节炎,针对Ò型胶原的抗体与关节致病性抗体识别相同表位[3].再者,B细胞缺失小鼠不会发展为C IA[4],补#36 #Ziran Zazhi Vol.25No.1科技进展体的缺失可以减轻CI A[5].CI A中T细胞的作用更为复杂,主要通过两个途径协同关节炎的发生、发展.首先,T 细胞帮助B细胞产生关节致病性抗CÒ抗体.第二,T细胞本身在关节炎症中也具有作用:通过其他细胞(例如滑膜巨噬细胞)的活化来实现.T细胞转移可以诱导滑膜炎,T细胞或T细胞功能的阻断可以缓解关节炎的发展.在具体描述获得性免疫应答的分子致病机制以前,有必要讨论一些环境和遗传因子的作用,这对理解这一复杂模型极有帮助.二、胶原诱导性关节炎小鼠模型的一般特征胶原诱导性关节炎在用异源(heterologous,即来源于小鼠以外其他物种的)CÒ单次免疫注射后可有效诱导.这会导致数天后的免疫激活,1或2周后关节内的免疫活化和2周后的肉眼可见关节炎的发生.在大多数的情况下,免疫注射后可持续几周或数月.在关节炎发作后数天内,受累关节被炎性反应破坏,在那里关节的严重破坏和RA中观察到的侵蚀性血管翳的形成和关节重塑在组织病理学上极为相似.活动性炎症在疾病发生后3 ~4周消退,留下一个被破坏和重塑的非炎症性关节.但是,最近发现:在一些品系中慢性复发性疾病可以在数月后重新出现.在用同源(自体,autologous)CÒ免疫后,大多数小鼠品系对关节炎的发展较为抵抗.但是,关节炎一旦发展,其通常是严重的并会进展为一种慢性的复发性疾病,且比用异源性CÒ免疫后发生得更早.就关节炎诱导来说,重要的是对CÒ产生的强免疫应答,这可通过佐剂化的CÒ免疫实现.佐剂通常是用含有分枝杆菌细胞壁的矿物油(弗氏完全佐剂,C FA).这会诱导出有强I L-2和TNF C产生的典型1型应答,伴有各种型别(isotype)的免疫球蛋白的分泌.然而,在某些品系中,只用含有CÒ的矿物油(不含有分枝杆菌细胞壁,弗氏不完全佐剂,I FA)免疫后也可出现关节炎.在这种情况中,免疫应答轻微偏向2型应答,伴有以I gG1为主的抗体应答.因此,1型和2型应答对关节炎的发展似乎都有贡献.三、影响胶原诱导性关节炎易感性的环境因素除了用于免疫注射的胶原和佐剂的选择外,C IA的易感性和发展还受一些环境因素的影响.已经观察到:雄性小鼠比雌性小鼠对C IA更易感[6],雌性小鼠雌激素受体的阻断可以使CI A加强[7].这可以解释为与受体结合的雌性激素有强大的抑制关节炎作用.其他因素还有应激和行为因素.雄鼠间的攻击不但可提高对C IA的易感性,而且对一些品系的严重自发性肌腱附着点病变(enthesepath)的发展有作用.这些使得诸如DB A P1等的某些品系的CI A模型难以评估.另一种常出现的环境因素(影响着免疫应答和关节炎的发展)是动物房的光照周期.松果体分泌的黑暗诱导的褪黑素(melatonin)可以提高免疫应答和CIA[8].另一个需要考虑的重要因素是动物的年龄.小鼠在6~7周龄以后才对关节炎易感,而后易感性不断提高.小鼠模型中的这种年龄作用的原因尚不清楚,可能与免疫调节细胞随时间逐渐消失或关节软骨脆性的增加有关.因此,C IA实验中影响CÒ免疫应答的因素需要仔细控制和评估以减少个体和实验间的可变性.然而仍可观察到疾病在很大程度上受着遗传的影响.四、胶原诱导性关节炎模型的遗传控制在近交小鼠品系中对CIA的易感性有极大的可变性.与R A和其他自身免疫疾病一样,主要受主要组织相容性复合体(majo r histocom patibility co mplex,M HC)区域的影响.然而,与大多数其他自身免疫疾病和疾病模型相比较,一个单独Ò类基因(A q)被证实在C IA易感性中具有关键作用.正如预期的那样,M HCÒ类区域的影响只是数量上的,因为在关节炎发展中其他基因也有作用.这一多基因作用已在基因分离(gene se gregation)实验中(用对C IA有不同易感性的各种小鼠品系进行杂交)被确定[9-12].M HC区域被发现在所有使用的小鼠品系中都具有重要作用,但没有在为了确定其他基因区域的选择性杂交中分离出来.因此,这些杂交在非分离H-2q 或H-2r M HCÒ类区域的情况下进行.其结果显示:在每个杂交中有一个独特的控制C IA的基因区域格局.提示不同基因区域控制着导致C IA的主要途径,且可能有许多不同途径可导致CI A.现在,这些位点的基因或他们控制的途径还没有被确定.然而,在以前确定的一些杂交中与特殊途径相关的候选基因被定位于这些基因区域.例如,在DB A P1与S WR间杂交和B10.Q与NOD.Q 间杂交中可观察到有一个来源于2号染色体的关节炎促进作用,这可能是由于S WR和NOD.Q品系中有一个C5缺失基因[10,13].这与早先观察到的用单克隆抗体中和C5可以导致对C IA的保护作用相一致(用抗-CÒ抗体在正常小鼠中可以诱导关节炎,而C5缺失小鼠中则#37#自然杂志25卷1期科技进展不能).这些现象提示:关节炎过程依赖于经典补体活化途径[14].另一个关节炎促进作用也被定位于NOD.Q品系的1号染色体远端,这可以被解释为f cgr2b基因(编码I gG的Fc受体)的多态性形式.更重要的是:最近证实fcgr2b基因缺失的小鼠对CI A抵抗[15].这些发现再次支持CI A的一个主要效应途径是由CÒ的抗体介导的观点.抗CÒ抗体可以与软骨结合并活化经典补体途径,导致粒细胞和单核细胞的浸润.然而,M HC分子的强烈影响提示T细胞的特异性免疫活化也起着关键作用.五、主要组织相容性复合体区域的作用用M HC同类系(c ongenic)小鼠品系的早先观察发现只有某些品系对C IA易感.用异源(hete rologous,如鸡、人、牛和大鼠CÒ)胶原免疫后最易感的单元体(halo2 type)是H-2r和H-2q单元体.有趣的是:这些单元体用小鼠CÒ也可诱导出关节炎,并对CÒ有强烈的自身抗体应答.相比照:H-2p单元体对CI A呈抵抗性.虽然在p和q间M HCÒ类基因Aa基因(编码A A链)是相同的,B链只有4个氨基酸(85,86,88和89位)不同.但是,不同的易感性也可以归因于M HCÒ类分子以外的其他基因,因为17号染色体上的同类系片段含有数百个不同的多态性基因.这些基因中有数个候选基因(例如TNF A、M HCÑ类分子、热休克蛋白、各种补体成分和抗原递呈中参与抗原处理的基因).另外,这些成群基因的功能效应相互协作,且它们在遗传上也相互连接,这就阻碍了在人类甚至是同类系小鼠中的进一步分析.一系列的实验中显示,M HCÒ类基因Ab(编码A B链)具有重要作用.一种Ab-p基因突变体的表达(转基因小鼠中表达在85,86,87,89位有多态性氨基酸的A q分子)赋予了对关节炎的易感性.因此,CI A的M HC相关性在很大程度上取决于M HCÒ类的Ab基因.再者,已发现:结合于q突变体A q分子的免疫优势肽(im munodo minant peptide)位于CÒ分子的256和270之间[16,17],最小的肽基序在260和267位之间.这是一个糖肽,有一个寡糖指向T细胞受体,它可以被大部分CÒ反应性T细胞识别[18].重要的是:A p分子与肽的结合能力比Aq弱,这个差异就解释了H-2p和H-2q间对CI A易感性的不同.有趣的是:Aq分子结合肽的口袋与RA相关的DR4(DRB1* 0401)和DR1分子的情况非常相似.再者,转基因表达DR4(DRB1*0401)或DR1(D RB1*0101)的小鼠对CI A易感且对来源于同一CÒ区域的肽有应答[19-22].CÒ260-273肽结合于D R4*0401分子与同一肽结合于A q分子相比主要锚着点移动了三个氨基酸,但T细胞受体识别位点部分相同.因此,这些人源化的小鼠品系为我们提供了一个CI A模型,它们与人类疾病在某些关键性方面具有同样的分子架构.六、Ò型胶原的T细胞识别Ò型胶原(CÒ)是在翻译后经修饰的,这些修饰可以被T细胞识别.事实上,大部分CÒ256-270特异性T 细胞能识别264位侧链被羟基化、半乳糖基化和葡萄糖半乳糖基化的赖氨酸.每种修饰可被一种不同的T细胞亚类识别.这种T细胞亚类与其他修饰的交叉反应能力不同,但用CÒ免疫后主导免疫应答的类型似乎是半乳糖基化肽[23].再者,这些修饰可能产生一系列T细胞表位,这些表位可被不同T细胞克隆特异性识别.因此,识别这个单一肽的实际T细胞库事实上是很大的.对于体内CÒ特异性T细胞的活化来说,糖基化胶原分子首先需要被降解,而后被抗原递呈细胞递呈.这种细胞尚未被确定,但它可能不是树突状细胞,因为实验显示树突状细胞处理和递呈胶原的能力很差.替代的是其他细胞:诸如巨噬细胞,可能在处理和递呈CÒ给自身反应性T细胞中具有重要作用.另外,糖基化侧链很难处理.因此,递呈的结构取决于原初软骨细胞合成的东西.胶原的不同糖基化形式的表达有很大的可变性.它取决于软骨,并可能受这一细胞应激状态的影响.胶原糖基化的作用尚不清楚,但在264位的糖基化存在于成人软骨胶原中.七、CÒ的自身反应性T细胞虽然M HCÒ类分子+肽复合物与T细胞受体间的作用并未直接回答CI A或RA的致病机理的问题,但它们为进一步分析提供了一种较好的工具.一个重要的问题是:在正常状态下免疫系统是怎样与外周关节相互作用的,因为小鼠是不会自发性发展自身免疫性关节炎的;在病理状态(用CÒ免疫活化后)下发生了什么情况.大多数T细胞在用异源CÒ免疫后被活化,并如上所述与CÒ256-270肽发生反应.重要的是这些T细胞不能与小鼠CÒ发生交叉反应.同源和异源肽的区别是266位的氨基酸:小鼠是独特的天冬氨酸(D)而其他物种(包括大鼠)是谷氨酸(E),这提高了T细胞对自己CÒ耐受(toleranc e)的可能性.用在266位为谷氨酸的突变CÒ转基因小鼠可以回答这个问题.当突变CÒ在软骨内表达时T细胞对异源CÒ的应答被部分降低.这些小鼠(被称#38 #Ziran Zazhi Vol.25No.1科技进展为M M C)仍然对关节炎易感,但发病率下降至用同源C Ò免疫小鼠中观察到的水平.这一发现显示,正常软骨和T细胞间的相互作用导致耐受.这一耐受表现为对C Ò的记忆性增殖应答能力的破坏.然而这个耐受是不完全的,因为T细胞仍能产生效应分子,诸如I NF C,并能辅助B细胞.另一方面,在Ñ型胶原(CÑ)中表达异源CÒ表位的转基因小鼠对C IA完全抵抗,并显示出比M M C 小鼠中观察到的对CÒ的细胞免疫更强的耐受原性表型.相比照,CÒ表达呈高度组织特异性,而CÑ是系统性表达.在CÑ转基因小鼠中观察到有更强的耐受性指出:自身抗原的可获得性对免疫系统的耐受性建立和对自身免疫病的保护作用非常重要.在M MC小鼠中诱导耐受的机理尚不清楚.一种可能性是:T细胞事实上已在外周被有效去除.M M C小鼠中T细胞活性的保留和关节炎的发展可以解释为去除的T细胞不断被胸腺来源的童贞(TnaÇve)细胞代替的可能性.然而,实际的情况可能不是如此,因为耐受诱导得很快,且胸腺切除没有影响.替代的说法是:T细胞耐受是通过只去除高亲和力的克隆而低亲和力的T细胞存活下来而实现的.因此, M M C小鼠中关节炎的诱导和免疫活化取决于低亲和力的T细胞活化(需要较高的活化阈值).这将导致功能偏向低能力T细胞在体内增殖.这是非常诱人和值得讨论的,因为A p分子(可以与同一肽结合但亲和力低)与Aq 分子对用小鼠CÒ免疫后启动自身反应性T细胞和关节炎诱导来说作用是不一样的[24].第三种可能性是去除不完全且以相对高的频率赦免T细胞克隆.在这一点上,各种形式CÒ肽的翻译后修饰可能具有重要作用.大部分CÒ特异性T细胞似乎能识别264位赖氨酸,且用CÒ免疫后主导免疫应答的翻译后形式似乎是半乳糖化肽[18].有趣的是,M MC小鼠中T细胞耐受对非糖基化的CÒ特异的T细胞来说更易有效诱导,这就证实了一个假说:识别翻译后修饰的肽的T 细胞不易耐受.另一种可能性是,T细胞本身没有耐受,只是从Th1表型变为Th2,或M M C小鼠中的T细胞转化为调节性T 细胞.虽然这是个有吸引力的假说,但至今没有有力的支持数据.再者,有一些有限的证据与调节性T细胞在M M C小鼠经典CI A诱导中的作用相矛盾[15].在这个实验中F1小鼠表达二个不同的M HC分子(A q和A r).这一小鼠被用牛CÒ(带有可以与A r分子结合的肽,牛CÒ607-621)免疫.这些小鼠患上了关节炎且产生一个完全的牛CÒ特异的T细胞应答,但对A q分子递呈的CÒ256-270表位仍呈耐受状态.再者,用IL-10缺失小鼠与其杂交并没有降低耐受诱导度或提高关节炎的易感性.M M C小鼠中CÒ256-270特异的T细胞仍保持IFN C 的产生,这与主动抑制模型相悖,尤其是由Th2细胞介导的.最后,M MC小鼠中可能有T细胞无能(anergy)被诱导出来.无能T细胞被反复证实仍然保持了它们的效应功能,但它们没有或只有很弱的增殖功能.相比较[25],这些细胞与M M C小鼠中T细胞的表型高度一致.不管什么是观察到的部分耐受(pa rtial tole ra nce)的原因,已清楚这些T细胞在极端环境下(诸如强的CÒ免疫方案)可以介导关节炎.相比照,一旦T细胞被活化,与CÒ反应的B细胞就不能耐受,甚至在T细胞部分耐受的情况下也是如此.它们能帮助B细胞产生自身反应性抗体,这些抗体通常是致病性的.有可能的是:相同的情况也存在于人类中,这些可以解释在血清和关节炎性关节中分离CÒ反应性T细胞困难而检测CÒ反应性B 细胞相对容易的原因.八、与RA致病机理研究的关系为了理解R A的分子致病机理,动物模型是必需的,用它可以阐明特异性机理.C IA动物模型在这一方面显然是有价值的.然而,由于数个原因,我们获得的信息可能会有某些偏差:(a)CI A是通过免疫诱导实现的(包括有分枝杆菌,这可以导致1型为主的应答);(b)异源CÒ或胃蛋白酶(pepsin)消化的带有异源表位的CÒ被用于免疫,这会主要激活异源反应性(hete roreac tive)T细胞;(c)大多数CI A研究者几乎都注目于疾病的急性期(观察80天内的发展).R A是一种自发性自身免疫疾病抑或由外源病原体诱导(在关节内激发引起了自身免疫攻击)的尚不清楚,但是一个强的异源性免疫应答当然不会出现在人类中.由于所需诊断的标准的原因,RA在其初始阶段通常不能被研究.然而当仔细观察C IA中的自身反应性应答和疾病晚期的复发进展时,关节炎关节中的组织病理学情况和对CÒ的免疫识别与RA有惊人的相似之处.必须强调的是:在鼠模型中T细胞和B细胞应答和R A中针对同一表位,RA中产生的抗体与C IA中的抗体针对CÒ上同样的构象表位(conf ormational epitope),相似CÒ肽被RA相关DR4分子递呈(正如其在CI A中的关键重要性一样).一个需要解决的重要问题是:是否RA中对CÒ应答的T细胞表现出与CIA中相同类型的部分耐受状态(虽然保持着分泌细胞因子和为自身反应性B细胞提供帮助的能力,但增殖能力不良),并有优势的糖肽靶向的反应性.诚然,一旦在人类中的分#39#自然杂志25卷1期科技进展子相互作用被确定,这仅仅是理解R A这一复杂疾病性的第一步.在用动物模型作研究的同时,我们也需要考虑遗传和环境因素对从软骨生理耐受转化为慢性、破坏性炎症应答中的作用.用动物模型作研究可以获得用于RA研究的相应经验,并为治疗R A药物的研制提供有价值的模型[27],这将是一个复杂的但又很有前途的研究方向.(2002年10月7日收到)奚正德讲师,中国科学院上海生命科学研究院,上海第二医科大学健康科学中心,上海市免疫学研究所,上海200025张冬青教授,中国科学院上海生命科学研究院,上海第二医科大学健康科学中心,上海市免疫学研究所,上海200025张雁云教授,中国科学院上海生命科学研究院,上海第二医科大学健康科学中心,上海市免疫学研究所,上海200025臧敬五教授,中国科学院上海生命科学研究院,上海第二医科大学健康科学中心,上海市免疫学研究所,上海2000251奚正德,马宝骊.类风湿性关节炎的骨髓源学说.自然杂志, 1998;20(6):31823222奚正德,马宝骊.造血干细胞移植与自身免疫病.国外医学免疫学分册.1999;22(3):13621403Urkhardt H.,Koller T.,Engstrom A.,e t al.Epi tope2specific recogni tion of type II collagen by rheum atoid arthritis antibodies i s shared with rec2 ogni ti on by antibodies that are arthritogenic in collagen2induced arthritis in the mouse.A rthritis Rheum.,2002;46(9):2339223484Svens son L.,Jirholt J.,Hol mdahl R.,et al.B cell2deficient mice do not develop type II collagen2induced arthritis(CIA).C lin.Exp.Im m unol., 1998;111(3):52125265Hietala M.A.,J onss on I.M.,Tarkow ski A.,et plem ent defi2 cienc y am eli orates collagen2induced arthriti s in m ice.J.Im m unol., 2002;169(1):45424596Jansson L.,Holm dahl R.Es trogen2m 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lic hi)又称灰金丝猴;滇金丝猴(R hino pithec us bie ti)亦称黑金丝猴.越南分布的一种称越南金丝猴(Rhinopithe c us av uncu2 lus)或称东京仰鼻猴(在北部低海拔热带雨林中,野生数量130~350只).目前,除川金丝猴被I UCN列为/渐危种0外,其余3种均被I UC N列为/濒危种0;中国特有的3种金丝猴种群数量皆屈指可数,总数不足20000只,均已被国家列为一级保护动物.金丝猴的珍贵不仅仅在于数量稀少,而且在于:金丝猴的化石分布区与现生种类地区大体一致,可以认为是我国极为珍贵的孑遗生物活化石之一,是最高等的旧大陆猴,处于猴类与猿类的中间地位[1],是研究动物进化方面极为珍贵的活材料.仰鼻、长尾、身披金毳等特征早就引人注目,被古人作为特殊动物记录下来.川金丝猴的珍贵皮毛遐迩闻名,源远流长.黔金丝猴目前只生存于贵州梵净山狭小范围内,被称为/世界独生子0,其数量甚至比大熊猫还少.滇金丝猴是进化地位最高的一种[2],生存于人迹罕见处,有重要科研价值,并且体态、神情十分喜人,.99昆明世界园艺博览会就以滇金丝猴/灵灵0作为吉祥物.二、金丝猴学名的由来与现生状况/金丝猴0这一称谓实际上并不确切,它只是根据川金丝猴的毛色为金黄的特点作出的,而其他种类金丝猴毛色并非如此,甚至与/金丝0风马牛不相及.对金丝猴的近代科学研究始于19世纪70年代,外国人从我国和越南获得金丝猴标本,至1912年,先后订立了4个金丝猴新种及其学名./金丝猴0学名最早源于Milne2Edwards根据巴黎自然历史博物馆所收藏法国人David于1870年获自四川省宝兴县附近的川金丝猴标本,命名为Rhinopithe c us rox2 ellana[3];这一名称是以/仰鼻0为特征起的,当然,川金丝猴的金色长毛这一特征也很突出./Rhino0取自希腊文/Rhis0,意即/鼻0,表示仰鼻这一更为显著的特征,实际上将/Rhinopithec us0译为/仰鼻猴0更确切,只因为近数十年大家已习惯金丝猴这一称谓,也就不再作此改变了.1871年法国人R.P.S oulie和Monseigne ur B ie t在云南省德钦县通过当地猎人采集到7只年龄、性别不同的金丝猴头骨和皮张标本并运抵巴黎自然历史博物馆;1879年由Milne2Edwrds将此/新种0定名为Rhino pithe c us bieti (即滇金丝猴).此后相当长时期未见有关滇金丝猴的报道,我国动物学家直到1962年才又获得该种金丝猴毛皮标本[4],再次得到证实.(上接第40页)tes ti ng dis ease2m odi fying and remi ssion2i nduci ng therapies.A rthritis Rhe um. 2001;44(5):121521224Research Advances on Collagen2Induced Arthr itis in MiceXi Zheng2de¹,Z hang Dong2qingº,Z hang Yan2yun»,Z ang Jing2wu¼¹Le cture r,º»¼Pro fes sor,Shanghai Instiute o f Im m unology,He alth Sc ie nce C ente r,Shanghai Sec ond Me dical Universit y,Shanghai Ins titute for Biological Sc ienc es,C AS200025Key words collagen2i nduced arthriti s,rheumatoid arthritis,collagen type Ò,autoi m mune dis ease#41#自然杂志25卷1期综合考察。
Ⅱ型胶原诱导关节炎小鼠和大鼠模型述评
基金项目：国家自然科学基金面上项目（２０１８ＹＦＣ１７０７４０７） 作者简介：陶宁，女，１９９２－１０生，在读硕士，住院医师，，Ｅ ｍａｉｌ：１９２２５３９２７８＠ｑｑ．ｃｏｍ 收稿日期：２０２０－０３－０５Ⅱ型胶原诱导关节炎小鼠和大鼠模型述评陶 宁１，张 杰２ （１中国医科大学第一临床学院中医科，沈阳 １１０００１；２中国医科大学附属第一医院中医科； 通讯作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｊｉｅ９４５＠１２６．ｃｏｍ）关键词： 类风湿关节炎； Ⅱ型胶原； 小鼠； 大鼠中图分类号： Ｒ５９３．２２ 文献标志码： Ａ 文章编号： １００７－６６１１（２０２０）０６－０５９３－０６ ＤＯＩ：１０．１３７５３／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－６６１１．２０２０．０６．０２２ 类风湿关节炎（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＲＡ）是一种以关节滑膜长期慢性炎症为基本病理改变的系统性多关节炎，其临床多表现为对称性、侵袭性小关节炎症，可累及到关节外器官，导致关节畸形和强直，但发病机制尚不明确。
为深入研究ＲＡ的发病机制、病理变化、药物筛选以及免疫治疗等方面，选择合适的类风湿关节炎动物模型尤为重要。
Ⅱ胶原诱导的关节炎（ｃｏｌｌａｇｅｎ ｉｎｄｕｃｅｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＣＩＡ）模型是以慢性、多发性末端关节炎，甚至关节损伤等表现为主的免疫性炎症模型，其临床表现和病理改变等方面与ＲＡ有诸多相似之处，是研究ＲＡ的金标准模型［１］。
Ｔｒｅｎｔｈａｍ等［２］１９７７年首次报道了ＣＩＡ模型，该模型的发病机制包括体液免疫和细胞免疫两个方面。
在体液免疫中，异种动物Ⅱ型胶原蛋白（ｔｙｐｅⅡｃｏｌｌａｇｅｎ，ＣⅡ）注入动物体内后，活化Ｂ淋巴细胞产生的特异性胶原蛋白抗体在关节部位与胶原蛋白结合形成免疫复合物活化了补体系统从而产生免疫反应，其中Ｔｈ１型细胞因子通过增加ＭＨＣ Ⅱ和黏附分子的表达，促进抗原递呈活化巨噬细胞，在ＣＩＡ的发生发展中发挥着重要作用［３－５］。
胶原诱导关节炎小鼠体内Tfh细胞及其相关免疫分子的表达
摘要 ： 目的 检测鸡 Ⅱ型胶 原蛋 白诱导性关节炎 （ｃｏｌｌａｇｅｎ—ｉｎｄｕｃｅｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＣＩＡ）小 鼠中滤泡 辅助性 Ｔ（Ｔｎ ）细胞及 其细胞 因 子表 达水平 ，探讨 Ｔｆｈ细胞与类风湿性关节炎之 间的关系 。 方法 利用鸡 Ⅱ型胶原 蛋 白造模 小 鼠制备人类类风湿关 节炎动 物模 型 ＣＩＡ小 鼠 ，造模后进行病情 观察并利 用关 节炎指数（ＡＩ）进行评 分 ，正常野生型 （ｗｉｄｅ ｔｙｐｅ，ｗＴ）小 鼠按 照 ＣＩＡ小 鼠相 同 方法和时间注入等量生理盐 水为对照组 ，流式检测 ＣＩＡ小 鼠和对照组小 鼠脾脏和淋 巴结 中 Ｔｉｌｌ细胞数 量和 比例差异 ，实时荧 光定量 ＰＣＲ检测两组 小鼠脾脏细胞中 Ｂｄ－６和 Ｉ１｜＿２ｌ ｍＲＮＡ水平 ，ＥＬＩＳＡ比较血浆 中细胞 因子 ＩＬ－２１表达差异 。 结果 ①流 式细胞术结果显示 ：ＣＩＡ小 鼠脾脏 中 ＣＸＣＲ５ ＩＣＯＳ Ｔｆｈ细胞 占 ＣＤ４ Ｔ细胞 比例 明显高于 ｗＴ小 鼠（２．６８４±０．１１６ ８ ｖｓ １．９２８ ±０．１６２ ４，Ｐ＜０．０５）；ＣＩＡ小 鼠淋 巴结 中 ＣＸＣＲ５ ＩＣＯＳ Ｔｆｈ细胞 占 ＣＤ４ Ｔ细胞 比例 明显高 于 ｗＴ小 鼠 （１．９６０±０．１６９ ５ ｖｓ １．２１１±０．０９３ ９，Ｐ＜０．０５）。②实 时荧光定 量 ＰＣＲ检测 结果 提示 ：ＣＩＡ小 鼠脾脏 中 Ｂｃｌ－６ ｍＲＮＡ表 达高 于 ｗＴ小 鼠（１．０００± ０．０５０６９／３５ ０．６００±０．０５０ ５４，Ｐ＜０．０５）；ＣＩＡ小 鼠脾脏 中 ＩＬ一２１ ｍＲＮＡ表达高于 ｗＴ小 鼠（１．０００±０．０６０ ７５ ｕｓ ０．５３０－４－０．０５０ ５４， Ｐ＜０．０５）。￣ＥＬＩＳＡ结果 显示 ：ＣＩＡ小 鼠血浆中 ＩＬ一２１水平 明显高于 ｗＴ小 鼠（１０４．３±３．５４１ ｖｓ ６０．２±１０．１７０，Ｐ＜０．０５）。 结论 ＣＩＡ小 鼠外 周免疫器官 中 Ｔｆｈ细胞 比例及其相关免疫 分子表达明显升高 ，血浆 中 Ｔｆｈ细胞分泌的特异性细胞 因子 ＩＬ一２１ 显著升高 ，Ｔｆｈ细胞与 ＲＡ的发生和病情进展有 密切关 系。 关键词 ： 类风湿性关节炎 ； 胶原 蛋白诱 导性关节 炎 ； 滤泡辅 助性 Ｔ细胞 ； ＣＸＣＲ５； ＩＬ一２１
小鼠关节炎造模方法
小鼠关节炎造模方法嘿，小鼠关节炎造模这事儿啊，可得小心操作呢。
一种常见的方法是胶原诱导性关节炎模型。
先准备好胶原蛋白，把它溶解在合适的溶液里。
然后呢，给小鼠注射这个溶液。
就像给小鼠打疫苗似的，不过这可不是啥好东西哦。
注射的部位要选好，不能随便乱扎。
一般是在尾巴根部或者背部啥的。
注射完后，就等着小鼠慢慢出现关节炎的症状吧。
这个过程可能得几天甚至几周呢，要有耐心。
还有一种是佐剂诱导性关节炎模型。
弄点佐剂，比如弗氏完全佐剂啥的。
把它和一些特定的抗原混合在一起，再给小鼠注射。
这就跟给小鼠来点小刺激，让它的免疫系统乱起来，然后就可能出现关节炎了。
同样，注射的时候要小心，别把小鼠弄疼了。
另外呢，可以用一些化学物质来诱导关节炎。
比如碘乙酸钠啥的。
把这些化学物质注射到小鼠的关节里，那可不得了，关节很快就会发炎。
不过这得掌握好剂量，太多了可能会把小鼠给弄死，太少了又没效果。
在造模的过程中，要时刻观察小鼠的情况。
看看它们的关节有没有肿起来，走路有没有不正常啥的。
要是发现有问题，赶紧记录下来。
就像照顾病人一样，得细心点。
我给你讲个事儿哈。
有个实验室的小伙伴，他要做小鼠关节炎的实验。
他选了胶原诱导性关节炎模型。
一开始他还挺紧张，怕弄不好。
他小心翼翼地准备胶原蛋白溶液，然后给小鼠注射。
注射完后，每天都去观察小鼠。
一开始没啥变化，他还挺着急。
等了几天，终于看到小鼠的关节有点肿了，他可高兴了。
他赶紧记录下小鼠的症状，继续做实验。
从那以后，他就知道了，做小鼠关节炎造模得有耐心，仔细观察，才能成功呢。
胶原诱导的小鼠关节炎模型（CIA）
胶原诱导的小鼠关节炎模型（CIA）
动物：DBA/1、B10Q、B10G、NFR/N、C57BL/6
试剂：完全弗氏佐剂（CFA）、II型胶原（鸡、牛、猪来源）
步骤：胶原乳化后，尾根部皮内注射，21天后进行二次免疫（当然也可根据需要单次改高剂量胶原诱导）。
注意要点：①小鼠的年龄关系到模型能否成功，7-8周龄鼠相对出模率高；
②不同品系的小鼠对于胶原敏感度有很大差异导致成模率有很大的差异，如下图所示：
③不同胶原对同一品系小鼠诱导出模率也有很大的差异，需要选择所选动物相对比较敏感的胶原来进行诱导，例如DBA/1小鼠可使用鸡、牛、猪的II型胶原进行诱导，B10.Rill小鼠则对牛、猪II型胶原比较敏感，C57BL/6则只对鸡II胶原敏感，但C57BL/6小鼠本身对胶原不是很敏感，出模率低。
胶原诱导关节炎小鼠体内Tfh细胞及其相关免疫分子的表达
胶原诱导关节炎小鼠体内Tfh细胞及其相关免疫分子的表达王宁;胡志芳;李爱连;郭娜;姜凤良【摘要】Objective To investigate the percentage of Tth cells and their related cytokines in collagen-induced arthritis(CIA) mice,and to explore the relationship between Tfh cells and rheumatoid arthritis(RA).Methods The mouse model of rheumatoid arthritis was prepared using chicken type Ⅲ collagen.The disease condition of mice was observed,and the arthritis index was scored.Flow cytometry was used to detect the number and proportion of Tfh cells in the spleen and lymph nodes.The levels of Bcl-6 and IL-21 mRNA in spleen cells were detected by qRT-PCR.The level of IL-21 in plasma was detected by ELISA.Results ①The percentage of CXCR5 + ICOS + Tfh cells in CD4 + T cell of spleen in CIA mice was significantly higher than that of WT mice (2.684 ± 0.116 8 vs 1.928 ± 0.162 4,P ＜0.05).The percentage of CXCR5 + ICOS+ Tfh cells was significantly higher in CIA mice than in WT mice (1.960 ± 0.169 5 vs 1.211 ±0.093 9,P ＜0.05).②The expression of Bcl-6 mRNA in spleen of CIA mice was higher than that in WT mice (1.000 ±0.050 69 vs 0.600 ± 0.050 54,P ＜ 0.05).The expression of IL-21 mRNA in spleen of CIA mice was higher than that in WT (1.000 ±0.060 75 vs 0.530-±0.050 54,P ＜0.05).③ELISA results showed that the level of IL-21 in plasma of CIA mice was significantly higher than that in WT mice (104.3 ± 3.541 vs 60.2 ± 10.170,P ＜ 0.05).Conclusion The results demonstrate that Tfh cells are closely related to the occurrence and progression of RA.Specifically blocking Tth cells and their associatedimmune molecules is expected to become a potential target for the prevention and treatment of RA.%目的检测鸡Ⅱ型胶原蛋白诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠中滤泡辅助性T(Tfh)细胞及其细胞因子表达水平,探讨Tfh细胞与类风湿性关节炎之间的关系. 方法利用鸡Ⅱ型胶原蛋白造模小鼠制备人类类风湿关节炎动物模型CIA小鼠,造模后进行病情观察并利用关节炎指数(AI)进行评分,正常野生型(wide type,WT)小鼠按照CIA小鼠相同方法和时间注入等量生理盐水为对照组,流式检测CIA小鼠和对照组小鼠脾脏和淋巴结中Tflh 细胞数量和比例差异,实时荧光定量PCR检测两组小鼠脾脏细胞中Bcl-6和IL-21 mRNA水平,ELISA比较血浆中细胞因子IL-21表达差异. 结果①流式细胞术结果显示:CIA小鼠脾脏中CXCR5+ ICOS+ Tfh细胞占CD4+T细胞比例明显高于WT 小鼠(2.684±0.116 8 vs1.928±0.1624,P＜0.05);CIA小鼠淋巴结中CXCR5+ ICOS+ Tfh细胞占CD4+T细胞比例明显高于WT小鼠(1.960±0.169 5 vs1.211±0.093 9,P＜0.05).②实时荧光定量PCR检测结果提示:CIA小鼠脾脏中Bcl-6 mRNA表达高于WT小鼠(1.000±0.050 69 vs 0.600±0.050 54,P＜0.05);CIA 小鼠脾脏中IL-21 mRNA表达高于WT小鼠(1.000±0.06075 vs0.530±0.05054,P ＜0.05).③ELISA结果显示:CIA小鼠血浆中IL-21水平明显高于WT小鼠(104.3±3.541 vs 60.2±10.170,P＜0.05).结论 CIA小鼠外周免疫器官中Tfh细胞比例及其相关免疫分子表达明显升高,血浆中Tfh细胞分泌的特异性细胞因子IL-21显著升高,Tfh细胞与RA的发生和病情进展有密切关系.【期刊名称】《山西医科大学学报》【年(卷),期】2018(049)001【总页数】6页(P26-31)【关键词】类风湿性关节炎;胶原蛋白诱导性关节炎;滤泡辅助性T细胞;CXCR5;IL-21【作者】王宁;胡志芳;李爱连;郭娜;姜凤良【作者单位】西安医学院免疫学教研室,西安710021;西安医学院免疫学教研室,西安710021;西安医学院免疫学教研室,西安710021;西安医学院免疫学教研室,西安710021;西安医学院免疫学教研室,西安710021【正文语种】中文【中图分类】R593.22interleukin-21类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以多个小关节病变为特点的系统性自身免疫性疾病,其病变特点为关节滑膜炎症伴随有骨质和关节软骨的破坏,并常有关节外器官受累,最终导致关节畸形甚至功能丧失[1]。
小鼠胶原诱导性关节炎模型的建立及其免疫学变化研究
1. 1 实验材料 1. 1. 1 实验动物： DBA1 / J 小鼠，三级，雄性，6 ～ 8 周，华阜康生物技术有限公司提供［SCXK（ 京） 20090004］。实验时饲养于温度 （ 20 ± 2） ℃ 和湿度 （ 55 ± 2） % 相对 较 为 恒 定 的 动 物 饲 养 室，自 由 饮 水，每 日 光照 / 黑暗各 12h。 1. 1. 2 药 品 及 试 剂： 完 全 弗 氏 佐 剂 （ complete Freund' s adjuvant， CFA ） 、牛 Ⅱ 型 胶 原 （ C Ⅱ ） ， Chondrex 公司，美 国。 刀 豆 蛋 白 A （ concanavalin A， Con A ） sigma 公 司，美 国。 Luminex 细 胞 因 子 试 剂 盒，Millpore 公 司，德 国； αLISA 试 剂 盒，Perkin Elmer 公司，美 国。 辣 根 过 氧 化 酶 （ horseradish peroxidase，
【Key words】 Collagen induced arthritis； Cellular immunity； Th1 / Th2； Cytokine
实验性类风湿性关节炎动物模型为研究类风 湿关节炎的病因、发 病 机 制 和 治 疗 方 法 提 供 了 有 力 的工具。理想的类风湿动物模型应该具备以下条 件： （ 1 ） 临 床 症 状、病 理 和 影 像 学 的 特 点 与 人 类 RA 相似； （ 2） 尽可能少的具备非 RA 的特点； （ 3） 易 感 的动物品系容易得到且价格便宜； （ 4） 动物可以高 效繁殖； （ 5） 可以缩短疾病的自然发生过程； （ 6） 容 易检测疾病和免疫功能的变化； （ 7） 可以模拟类风 湿性关节炎患者的治疗作用。目前类风湿性关节 炎的 动 物 模 型 有 佐 剂 性 关 节 炎 （ adjuvant-induced arthritis，AA） 、链 球 菌 细 胞 壁 成 分 （ strepococcal cell wall fragments，SCW ） 诱 导 的 关 节 炎、卵 蛋 白 诱 导 的 关节炎、蛋 白 多 糖 诱 导 的 关 节 炎、降 植 烷 （ pristane） 诱导的关节炎、胶原诱导的 关 节 炎 （ collagen induced arthritis，CIA） 、转 基 因 动 物 模 型 等［1］。 其 中 CIA 小 鼠模型最为常用的模型。
Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠模型的制备及评价
Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠模型的制备及评价孔薇;李俊;王婷玉;黄琳燕【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2008(043)002【摘要】目的提取纯化Ⅱ型胶原蛋白(CⅡ)并制备胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型.方法采用胃蛋白酶消化法从鸡胸骨剑突上提取CⅡ,通过DEAE-52纤维树脂处理、NaCI的反复盐析纯化并采用SDS-PAGE鉴定和吸收光谱分析.所提CⅡ加以完全弗氏佐剂采用皮内注射的方法建立大鼠CIA模型.容积法检测大鼠足爪肿胀度并进行评分;HE染色法对关节组织作病理检查;ELISA法检测体内抗CⅡ抗体的含量;放免法检测血清细胞因子IL-1β、TNF-α含量.结果自提的CⅡ与标准品分子量一致,最大吸收峰为226 nm.CIA大鼠足爪的炎症反应强烈,关节肿胀明显;病理检查关节组织可见其组织纤维化,伴有大量炎性细胞浸润;血清中抗cⅡ抗体水平和IL-1β、TNF-α显著升高.结论该方法提纯CⅡ简单、高效,用以制备大鼠CIA模型成功.【总页数】5页(P173-177)【作者】孔薇;李俊;王婷玉;黄琳燕【作者单位】安徽医科大学药学院,合肥,230032;安徽医科大学药学院,合肥,230032;安徽医科大学药学院,合肥,230032;安徽医科大学药学院,合肥,230032【正文语种】中文【中图分类】R392;R593.22;R-332【相关文献】1.大鼠胶原诱导性关节炎模型的制备及评价 [J], 石磊;李小峰;王彩虹;张莉芸;马丽辉;国华;杨艳;刘燕;周丽2.胶原诱导的关节炎和佐剂诱导的关节炎大鼠模型的制备 [J], 李沙;傅颖媛;尧荣凤;涂丽娜;张海荣3.胶原诱导型大鼠类风湿关节炎模型的制备 [J], 陈彩娥;崔向军;郑可;王琴4.胶原诱导性类风湿关节炎大鼠模型制备及早期表现评价 [J], 苏云龙; 王雪梅5.胶原诱导性类风湿关节炎大鼠模型制备及早期表现评价 [J], 苏云龙;王雪梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
药理实验方法学重点
一．1.首过效应：口服给药后，药物在到达体循环之前，经肠道、肠壁和肝脏的代谢分解使进入生物体内的相对药量降低。
2，判断方法：尾静脉给药AUC和门静脉给药AUC—比较判断肝首过—是—尾静脉》门静脉;门静脉给药和十二指肠给药AUC—比较判断肠首过—是—门静脉》十二指肠十二指肠和灌胃给药AUC—比较判断胃首过—是—十二指肠AUC》灌胃AUC 二．简述肾外包扎性高血压模型制备的基本原理和注意事项?答：原理：肾外异物包扎，可致肾周围炎，肾外形成一层纤维性鞘膜，压迫肾实质，造成肾组织缺血，使肾素形成增加，进而使血管紧张素含量增加，血压上升。
属肾性高血压模型。
注意事项：1)肾外包扎材料除自制双层孔胶薄膜和玻璃纸外，还可用绸布、乳胶、火棉胶等材料。
肾外包扎应足够紧，但不能勒破组织。
2) 如果要制造2肾1扎型，则一侧肾包扎后无需切除另一侧肾，术后3~6个月10%~20%动物形成高血压；如果要制造2肾2扎型，则一侧肾包扎后同法包扎另一侧肾，术后3~4周70%以上动物形成高血压。
三、（一）佐剂性关节炎1.大鼠AA的制备：选用雄性Lewis、Wistar或SD大鼠，体重200g左右，将每鼠右后足趾皮内注射完全弗氏佐剂（CFA）0.1ml致炎。
CFA是将卡介苗或死结合分枝杆菌加入已经高压灭菌的液体石蜡中，浓度为10mg/ml。
原发病变主要表现为早起致炎局部的炎症反应，致炎后18h右后足的肿胀达峰值，持续3d后逐渐减轻，8d后再度肿胀；继发病变一般出现于致炎后10d左右，表现为对侧和前肢的肿胀，耳和尾部出现“关节炎”小结，变应性角膜翳以及体重下降等等。
2.小鼠AA 的制备：选用雄性C57BL/6小鼠，8周龄，4%氟烷吸入麻醉，左侧胫-跗关节皮下两点皮下注射100ulCFA，CFA浓度为5ug/ul，对照组同方法注射液状石蜡。
造模后22d处死。
造模24h 内原发侧关节出现急性肿胀，第9天肿胀较严重。
模型组穿格子数和活动度明显降低。
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小鼠Ⅱ型胶原性关节炎模型的制备
第六图书馆
目的 制备Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎模型。
方法 利用Ⅱ型胶原乳剂皮内注射。
结果 与对照组比较,Ⅱ型胶原性关节组小鼠的足爪肿胀和关节评分明显增加,并且Ⅱ型胶原诱导的迟发性变态反应呈阳性,血清中也检测出抗Ⅱ型胶原的抗体。
结论
Ⅱ型胶原乳剂皮内注射可制备关节炎小鼠模型。
目的 制备Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎模型。
方法 利用Ⅱ型胶原乳剂皮内注射。
结果 与对照组比较,Ⅱ型胶原性关节组小鼠的足爪肿胀和关节评分明显增加,并且Ⅱ型胶原诱导的迟发性变态反应呈阳性,血清中也检测出抗Ⅱ型胶原的抗体。
结论 Ⅱ型胶原乳剂皮内注射可制备关节炎小鼠模型。
Ⅱ型胶原性 关节性 疾病模型迟发性变态反应中国药理学通报金涌 李俊安徽医科大学临床药理研究所1999第六图书馆。