C57black_6小鼠全脑缺血模型Fas_L和Caspase_3的表达
针刺对脑缺血损伤大鼠海马区Caspase-3蛋白表达的影响
（ 京 中医药大学 ， 京 ｌ０２） 北 北 ００９ 摘 要： 目的 ： 察 针 刺对 脑 缺血 损 伤 大 鼠大脑 海 马 区 Ｃｓａｅ 观 ａｐｓ 一３蛋 白表 达及 神 经行 为 学的 影响 。方
法： 雄性 ｓ Ｄ大鼠 ， 随机 分 为空 白对 照组 、 脑缺血模 型组 、 刺 治疗组 ， 组 ｌ ， 用化 学刺 激诱 导血栓 针 每 ０只 采
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血中的治疗作用研究 ［］中华医学杂志 ， ０， （５ ： ５ 一 Ｏ０ Ｊ． ２ ６８ １）１ ７ ｌ６ ０ ６ ０
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收稿 日期 ：０８ ０ ７ ２０ —１ —２
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康脑液对脑缺血大鼠Fas、Caspase-3蛋白表达的影响
康脑液对脑缺血大鼠Fas、Caspase-3蛋白表达的影响马倩;耿倩;薛茜;邹玉安【期刊名称】《中国老年学杂志》【年(卷),期】2013(033)018【摘要】目的观察康脑液对脑缺血再灌注大鼠Fas、Caspase-3蛋白表达的影响,探讨其脑保护作用及机制.方法用线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型,将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、依达拉奉组、康脑液高、中、低剂量组,于缺血后2h再灌注6、12、24、48 h后处死,免疫组化法观察Fas、Caspase-3蛋白的表达.结果与模型组比较,康脑液高、中、低剂量组能下调各时间点损伤侧Fas、Caspase-3蛋白表达.结论康脑液下调Fas、Caspase-3蛋白的表达,可能是其促进脑损伤区神经修复的重要机制之一.【总页数】3页(P4478-4480)【作者】马倩;耿倩;薛茜;邹玉安【作者单位】河北北方学院,河北张家口 075000;河北北方学院,河北张家口075000;河北北方学院第一附属医院神经内科;河北北方学院第一附属医院神经内科【正文语种】中文【中图分类】R743【相关文献】1.褪黑素对局灶性脑缺血大鼠扩散加权成像及脑组织中Fas、FasL、活性Caspase-3蛋白表达的影响 [J], 王海宇;陈岚芬;王晓莉;闫少珍;牟青杰;赵岩松2.康脑液对脑缺血大鼠5-溴脱氧尿嘧啶核苷及巢蛋白表达的影响 [J], 耿倩;马倩;邹玉安;薛茜3.人参皂甙Rg1对脑缺血再灌注大鼠Fas／Fas—L、Caspase-3表达的影响 [J], 刘霞; 包翠芬; 梁佳; 魏嘉; 秦书俭4.脑脉通联合骨髓干细胞动员对脑缺血大鼠神经细胞凋亡相关蛋白Fas、FasL及caspase-3表达的影响 [J], 李建生;刘敬霞;田玉收;任伟宏;张新峰;王丁超5.癌痛消方中活血化淤药对大鼠移植性肝癌细胞中Fas、FasL及Caspase-3蛋白表达的影响 [J], 王书杰;韦艾凌;张永琴;陆海颂;林元佳;韩海涛因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
脑缺血后脑红蛋白对细胞色素C及Caspas-3的作用
脑缺血后脑红蛋白对细胞色素C及Caspas-3的作用赵守财;储照虎;马领松;周曾;胡成伍【期刊名称】《皖南医学院学报》【年(卷),期】2011(030)002【摘要】目的:观察脑缺血半暗区脑红蛋白(neuroglobin,NGB)与细胞色素C(Cyt-C)相关性,以探讨NGB在脑缺血早期是否通过Cyt-C途径抑制Caspase-3表达.方法:大鼠随机分为假手术对照组(Sham)、缺血再灌注组(CIR)、干预组(IV)和干预对照组(IVC).CIR组制作脑缺血再灌注模型,按断头时程不同又分为1 h、6 h、12 h、24 h、72 h 5个亚组.IV组将重组人NGB注入左侧尾壳核30 min后制作脑缺血再灌注模型,按断头时程不同又分为1 h、6 h、12 h、24 h、72 h 5个亚组,其中Sham组和IVC组于24 h断头.取脑作HE和免疫组化染色.结果:NGB在缺血再灌注1h已经升高,24 h后达高峰,然后逐步下降.Caspase-3和 Cyt-C 在1 h后表达增多,12～24 h增高达到高峰,然后逐步下降.干预后Cyt-C表达明显减少(P<0.01),Caspase-3表达也明显减少(P<0.05).结论:脑缺血后NGB在缺血半暗区先升高后下降,可能通过Cyt-C途径抑制Caspas-3表达而发挥脑保护作用.%Objective: To find out whether neuroglobin (NGB) could regulate caspase-3 expression through pathway of cytochrome(Cyt-C) in penumbra after cerebral ischemia reperfusion by examining the correlation of the two factors.Methods: Seventy-two male Sprague-Dawley ( SD ) rats were randomized into groups of sham operation(Sham) ,cerebral ischemia-reperfusion ( CIR ), intervention ( Ⅳ ) and interventional controls (IVC).After CIR models were developed, the rats were decapitated and subgroupedchronologically into CIR of 1 h,6 h,12 h,24 h and 72 h,respectively.In Ⅳ group, CIR models were established 30 min after injection of recombinant human NGB into the left striatum, followed by subgrouping chronologically into CIR of 1 h,6 h, 12 h,24 h and 72 h, respectively.The animals in both Sham and IVC were killed at 24 h.Cerebral specimens were obtained for section with HE and immunohistostaining.Results:NGB expression was found up-regulated at 1h after CIR and peaked at 24 h before it down-regulating progressively.Increased expression was seen at 1h for caspase-3 and Cyt-C, topping at 12 ～24 h and descendeing thereafter.After injection of recombinant human NGB into the left striatum, expression of Cyt-C and caspase-3 was seen down-graded significantly ( P ＜ 0.01, P ＜ 0.05 ).Conclusion: NGB was increased before fall in ischemic penumbra after cerebral ischemia-reperfusion, suggesting that NGB may be involved in the neuroprotection by inhibiting caspas-3 expression through pathway of Cyt-C.【总页数】5页(P87-91)【作者】赵守财;储照虎;马领松;周曾;胡成伍【作者单位】皖南医学院附属弋矶山医院,神经内科,安徽,芜湖,241001;皖南医学院附属弋矶山医院,神经内科,安徽,芜湖,241001;皖南医学院附属弋矶山医院,神经内科,安徽,芜湖,241001;皖南医学院附属弋矶山医院,神经内科,安徽,芜湖,241001;皖南医学院附属弋矶山医院,神经内科,安徽,芜湖,241001【正文语种】中文【中图分类】R743.31【相关文献】1.针刺大椎、百会、人中穴对大鼠脑缺血再灌注损伤后不同时间点海马脑红蛋白表达的影响 [J], 颜虹;贺平;武姿含;蒋素容;田浩梅;陈楚淘2.脑红蛋白在实验大鼠局灶性脑缺血组织中的表达及其对谷氨酸表达的作用 [J], 赵守财;储照虎;马领松;吴家幂3.脑缺血再灌注损伤后大脑皮质和海马区脑红蛋白的表达变化 [J], 尚爱加;周定标;孟祥辉;王利红;张成岗4.脑缺血后脑红蛋白的保护作用及信号转导机制 [J], 张蓓;李亚军;张世俊;任会云;王敏娟;郭长江5.大鼠脑缺血性神经损伤后脑红蛋白对受损神经元轴突生长能力的调控作用及其机制 [J], 徐彩娜;石亚志;武桂平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
C57BL-6鼠脑组织中胺类神经递质及体液中阴、阳离子的毛细管电泳在线预富集及检测新方法
C57BL-6鼠脑组织中胺类神经递质及体液中阴、阳离子的毛细管电泳在线预富集及检测新方法C57BL/6鼠脑组织中胺类神经递质及体液中阴、阳离子的毛细管电泳在线预富集及检测新方法摘要:胺类神经递质在神经系统中起着重要的调整作用。
准确测定胺类神经递质在脑组织和体液中的含量和分布是探究神经系统功能和疾病的关键。
本探究开发了一种新的毛细管电泳在线预富集及检测方法，用于C57BL/6鼠脑组织中胺类神经递质（如多巴胺、去甲肾上腺素和肾上腺素）以及体液中的阴、阳离子（如钠离子和钾离子）的分析。
背景:胺类神经递质在神经系统中起着重要的调整作用，如参与情绪、认知和运动等功能调整。
因此，准确测定胺类神经递质在脑组织中的含量和分布对于探究神经系统功能和疾病具有重要意义。
阴、阳离子是维持生物活性的重要成分之一，其含量和分布异常与多种疾病有关。
因此，开发一种高灵敏度、高选择性的方法用于胺类神经递质和阴、阳离子的分析是分外必要的。
方法:我们构建了一种新的毛细管电泳在线预富集及检测方法。
起首，使用胰蛋白酶对标准溶液或样品进行预处理，以获得更高的灵敏度。
然后，使用polybrene修饰的微柱进行在线预富集，以提高样品浓缩效率，并缩减背景信号干扰。
最后，进行毛细管电泳分离和检测，可以实现胺类神经递质和阴阳离子的准确分析。
结果:使用本方法，成功地在C57BL/6鼠脑组织中分析了多巴胺、去甲肾上腺素和肾上腺素的含量和分布。
结果显示，这些胺类神经递质在不同脑区的含量存在差异，这与其不同的调整功能相吻合。
此外，通过检测体液样品，我们也成功地分析了钠离子和钾离子的含量。
结论:本探究成功地开发了一种新的毛细管电泳在线预富集及检测方法，该方法具有高灵敏度、高选择性和高准确性的特点。
使用该方法，我们成功地分析了C57BL/6鼠脑组织中的胺类神经递质和体液中的阴阳离子。
这一方法为探究神经系统功能和疾病提供了重要的工具，并对于药物研发和临床诊断有着重要的应用前景。
C57BL6小鼠神经干细胞应用领域
C57BL6小鼠神经干细胞应用领域
神经干细胞是多能干细胞，可以分化为神经系统的多种细胞，包括神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞等等。
神经干细胞可以从成年哺乳动物大脑的不同区域和脊髓等神经系统中分离出来。
神经干细胞有重建神经环路的能力，因此具有治疗脑组织损伤的潜能，从而在神经退行性疾病动物模型、遗传性中枢神经系统疾病、中风和脊髓损伤等方面有着广泛的研究。
C57BL/6小鼠神经干细胞来源于12.5天C57BL/6小鼠的大脑组织，以悬浮的神经球形式培养，在第二代冻存。
取自孕龄12.5天的C57BL/6小鼠胚胎大脑的海马和室管膜下区，用C57BL/6小鼠神经干细胞完全培养基培养。
传代扩增至第二代冻存，每支含1×106个细胞。
C57BL/6小鼠神经干细胞应用领域
神经干细胞被广泛地应用于发育生物学和大脑损伤治疗的研究。
神经干细胞具有迁移和向脑细胞分化的能力，在神经系统病变、遗传性神经系统疾病、中风和脊髓损伤等方面具有治疗潜能。
临床医学实验技术原理与操作期末作业
临床医学实验技术原理与操作第一临床医学院科硕1班 20171075 徐泳一、实验假设：黄芪多糖提取物基于PGE2介导Fas/FasL信号通路高表达治疗肺纤维化二、实验目的：在整体与细胞水平，明确黄芪多糖提取物抗肺纤维化作用与其对肺成纤维细胞凋亡的调控有关；阐明黄芪多糖提取物促进肺成纤维细胞凋亡的作用靶点和分子机制，揭示提取物通过 PGE2介导的 Fas/FasL信号通路发挥抗肺纤维化作用；全面揭示黄芪多糖提取物抗肺纤维化的科学内涵，为抗肺纤维化药物的发现提供理论依据。
三、实验依据、原理：肺纤维化是一种慢性弥漫性肺间质疾病，以细胞外基质（ECM）沉积为主要病理特征，可导致肺组织异常重塑，最终并发呼吸衰竭危及生命[1]。
现已公认肺成纤维细胞活化是肺纤维化的核心环节，有效干预肺成纤维细胞生物学行为则可成功防治肺纤维化[2-3]。
肺成纤维细胞在肺组织损伤时增殖分化为肌成纤维细胞，特征性表达α-平滑肌动蛋白（α-SMA），过量生成 ECM，加快肺纤维化进展[4]。
因此，清除活化的肺成纤维细胞，减少 ECM 的分泌与沉积是治疗肺纤维化的有效策略。
目前研究认为促进肺成纤维细胞凋亡是控制肺纤维化发生发展的关键环节。
国内外对于控制肺成纤维细胞活性的研究多集中在抑制其增殖和胶原分泌方面，这虽可在一定程度上缓解肺纤维化进展，但由于肺成纤维细胞增殖能力很强，完全抑制其增殖非常困难，抑制胶原合成并未减少肺成纤维细胞数量，无法从根本上清除肺成纤维细胞，且肺成纤维细胞不但有很强的抗凋亡作用，还可诱导肺泡上皮细胞凋亡，加快肺纤维化的进展[7]。
因此，有效促进肺成纤维细胞的凋亡，在肺纤维化的治疗中具有重要的价值[8]。
细胞凋亡是复杂的信号转导途径调控的结果。
Fas/FasL 诱导的凋亡信号通路在肺纤维化中发挥着关键作用 [9]。
Fas与 FasL结合形成死亡诱导复合(DISC)活化 Caspase-8， Caspase-8 一方面诱导 Caspase-3、 6、 7 生成，激活死亡受体凋亡途径，另一方面，可促进 Bcl-2 家族成员 Bid 活化引起线粒体外膜损伤，释放细胞色素 C，激活线粒体凋亡途径[10]。
缺氧缺血后新生鼠脑组织caspase-3mRNA表达变化及其意义
缺氧缺血后新生鼠脑组织caspase-3mRNA表达变化及其意义初桂兰;李维超【期刊名称】《中国小儿急救医学》【年(卷),期】2005(012)001【摘要】目的观察新生大鼠缺氧缺血后脑组织caspase-3mRNA表达动态变化,进一步探讨缺氧缺血诱导新生鼠神经元凋亡的机制及意义.方法制备新生鼠HIBD模型,随机分为假手术对照组、HIBD 6 h、24 h、3 d、5 d组,每组5只动物.应用RT-PCR方法测定了大鼠脑组织caspase-3mRNA的表达.结果7日龄Wistar大鼠假手术对照组即有一定水平caspase-3mRNA表达,HIBD 6 h组表达增加(与对照组比较有显著性差异,P＜0.05),HIBD 24 h其表达呈高峰,此后逐渐下降,HIBD 5 d仍维持较高水平(与HIBD 6 h相比有显著性差异,P＜0.01).结论缺氧缺血可诱导新生鼠脑组织caspase-3mRNA表达,其过度表达在HIBD后神经元凋亡的调控中起一定作用,针对caspase-3的治疗对策为围生期缺氧缺血脑损伤打开了新视窗.【总页数】3页(P31-33)【作者】初桂兰;李维超【作者单位】天津医科大学总医院儿科,天津,300052;天津医科大学总医院儿科,天津,300052【正文语种】中文【中图分类】R361+.1【相关文献】1.新生鼠缺氧缺血损伤脑组织水通道蛋白-4表达及意义 [J], 杨钊;姚裕家;付雪梅2.新生鼠脑组织缺氧缺血再灌注损伤NF-κB的表达及意义 [J], 张定荣;张海鸿;车芬芳;徐书珍3.AQP-4蛋白和AQP-4mRNA在新生鼠缺氧缺血脑组织的表达变化 [J], 杨钊;姚裕家;陈娟4.新生鼠缺氧缺血脑损伤脑组织中巨噬细胞炎性蛋白1-α mRNA的表达及意义[J], 张涛;李萍5.新生鼠缺氧缺血性脑损伤脑组织NgR mRNA和NgR蛋白表达及意义 [J], 王华;姚裕家;陈大鹏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
Caspase-3在小鼠毛囊周期中的表达及激活规律的研究
【 键 词 】Ｃ ｓａｅ３ 关 ａ ｓ一；Ａｃｖ Ｃ ｓａｅ３ ｐ ｐｏｉ；毛 囊周期 ；小 鼠 ｐ ｔ ｅ ａｐｓ．；ａｏｔｓ ｉ ｓ
中图 分类 号 ： ３ ２９５ ３９ ２ ；Ｒ９ ． Ｒ ２ ．９ ；Ｒ ２ ．８ ３ ４２
文献 标识 码 ：Ｂ
文章编 号 ：１７ — １４ （０ ２ ９ ０ ９— ３ ６ １ ８ ９ ２ １ ）０ — ３ １ ０
１ ｉ， ５ ｎ 去除内源 胜 ｍ 过氧化物酶活胜。柠檬酸微波抗原修复。滴加一抗，４
在毛 囊凋 亡的 各种 信号通 路 中 ，ｃｓａｅ ａｐ ｓ家族 的各 类分 子相互 级 联 ，在凋 亡的发生 中起 着重要的作用 。而Ｃ ｓａｅ３ ａｐｓ一处于凋亡有序级 联 反 应 的下游 ，是依 赖Ｃ ｓａｅ ａｐｓ凋亡机 制 中起 执行 者核心 作用 的关键 分 子 ，是细胞 凋亡发生 的关键步骤及一切 凋亡信号转导 的共同通路 ， ’ 它 的活化是凋 亡进入不可逆 阶段标志 。Ｃ ｓａｅ３ ａ ｓ一发挥 活性 需要通过剪 ｐ
切ｐｏＣ ｓ ａｅ 形成 活性形式 的Ａ ｔ ｅＣ ｓａｅ 。Ａ ｔ ｅ ａ ａ 一 的 ｒ— ａ ｓ一 ｐ ３ ｃ ｖ ａｐ ｓ一 ｉ ３ ｃ ｖ ｓ ｓ ３ ｉ Ｃ ｐ ｅ 形成是判 断细胞凋亡是否执行 的关键 。
℃孵育过夜。Ｐ ｓ Ｂ 洗，滴加二抗３＂孵育３ｍｎ Ｂ 洗，Ｄ Ｂ ７２ （ ０ ｉ，Ｐ ｓ Ａ 显色 。 ２结 果
２１免疫 组织化学检￣Ｃ ｓａｅ 在Ｂ ｄ 鼠毛囊周 期中的表达 ． ａｐ ｓ ３ ６ ， 一
在小 鼠出生后 的 １ｄ （ Ａ，Ａ’） ，Ｃ ｓａｅ３ ｌ 图１ ａｐｓ一主要表 达 与毛 囊
的毛球 部和 毛球部 的上 段的 内外根 鞘细 胞 中 ，而在 小 鼠毛囊处 于 退
病理生理学理论指导：半胱氨酸天冬蛋白酶在细胞调亡中的作用
半胱氨酸天冬蛋白酶（cysteinyl-aspartate specific protease， caspase）是一类半胱氨酸蛋白酶，在促凋亡信号作用下被激活，是凋亡的执行器。
目前已发现该蛋白酶家族至少有13 个成员，它们相互激活，caspase-9 可激活caspase-3 引起细胞凋亡。
caspase-3 在凋亡中所起的主要作用是：灭活细胞凋亡的抑制物如Bcl-2；水解细胞的蛋白质结构包括核蛋白和细胞骨架导致细胞解体，形成凋亡小体。
Hotchkiss 等研究20 例死于脓毒症及MODS 患者，caspase-3 免疫组化染色见脾脏白髓很多细胞呈阳性，白髓中淋巴细胞密度及外周血淋巴细胞减少。
提示caspase-3 介导了脓毒症时广泛的淋巴细胞凋亡。
给C57 BL/6J 小鼠腹腔注射LPS，2 h 时心肌中caspase-3 活性高出对照者8 倍。
注后24 h 心肌细胞TUNEL 阳性细胞百分率达21%，对照为2%.给予caspase 抑制剂zVAD 能显著抑制caspase-3 活性，心肌的生理功能仍保留。
C57Black／6小鼠全脑缺血后海马神经元损伤的研究
Ｃ ７ Ｉｃ ５ Ｂａｌ Ｃ６小 鼠全 脑 缺 血后 海 马 神 经 元损 伤 的 研 究
张 倩①， 张建 民①， 李建涛②
（ 山东大学威海分校海洋学 院 ； ① ②威海金海湾医院神经外科 ， ４ ０ ， ２ ２ ９ 山东省威海市） ６
摘要 ： 目的：５ｂ ｃ／ 小鼠采用双侧颈总动脉夹闭的方法制造全脑缺血模型并进行研究， Ｃ７ｌ ｋ６ ａ 为这种新的
镜 下观察 ．
１ ４ ＂ ＮＥ ． Ｉ ＇ Ｕ Ｌ染色
血 的研 究提 供试 验依 据．
１ 材 料 和 方 法
１ １ 动物 及分 组 ．
成 年 Ｃ ７ ｌｅ／ ５ Ｂａ ｋ６小 鼠 ，．０ Ｗ ８１ ．小 鼠 自由进 食
脑 缺血 术后 １ｄ ３ｄ ５ ｄ ７ｄ 试 验 小 鼠断 头取 ， ， ， ，
模型在 脑缺 血研 究中的应用提供试验依据．方 法 ： 双侧颈总动脉夹闭 １ ｉ ３ ｉ ０ｍｎ及 ０ｍｎ诱发全脑缺 血模 型石蜡切 片进行 ＨＥ染色 ； 术后 １ｄ ３ｄ５ｄ ７ｄ处死小 鼠， ， ， ， 制作 冰冻切 片进行 Ｔ Ｎ Ｌ及 ＵＥ
十 收 稿 日期 ：０７ １ －ｌ ２０ —２ ｌ
脑 后 ， 次在 ４ 多 聚 甲醛 溶 液 （ Ｈ７ ２７４） 固 依 ％ ｐ ． －． 中
定 ，５ 蔗糖 溶液脱 水过 夜 ， ． ． ｏ ｐ ｕ ｄ包埋 ， ２％ Ｏ Ｃ Ｔｃｍ ｏ ｎ 与试 验 １３相 同位 置处 连续 切片 ， ． 厚度 ２ ｍ， 入 ０ 加 ５￣／ ｇ ｍＬ蛋 白酶 Ｋ在 ３ ７℃ 反 应 １ ｎ Ｔ Ｔ ｂｆ ｒ ５ｍｉ， Ｄ ｕｆ ｅ
７ ２７ ４）５ｍ ．断头取 脑后 置 于 ４ 多聚 甲醛溶液 ． －． ２ Ｌ ％
神经元对脑缺血最敏感 ， 在全脑缺血中的损伤具有 其 变 化 的全 部特点 ， 中 Ｃ １区是大 脑 海 马最 易 于 其 Ａ 损 伤 的部 位 ＇．本 文 应 用 夹 闭 双 侧 颈 总 动 脉 １ ４ Ｊ ０
Caspase-3在缺血性脑损伤中的作用
Caspase-3在缺血性脑损伤中的作用摘要】脑血管疾病是当今人类三大死亡原因之一,目前仍然缺乏有效的治疗手段,因此需要进一步探讨发病过程中的分子机制,为预防及治疗提供新的理论依据。
近来许多研究发现由半胱氨酸蛋白酶家族介导的细胞凋亡在缺血性脑损伤中起到了重要的作用，而半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)被认为是细胞凋亡执行阶段的关键蛋白酶，且通过干预caspase-3 表达可减轻脑缺血的损伤程度[1]。
【关键词】缺血性脑损伤凋亡半胱氨酸蛋白酶-3前言：缺血性脑损伤是缺血性脑血管疾病中必经的病理过程，在此过程中细胞凋亡占有重要的比重。
在机体凋亡与抗凋亡过程，Caspase-3属于关键步骤；故在此对细胞凋亡、Caspase-3在缺血性脑损伤中的作用做简要综述。
1、细胞凋亡凋亡是一个基因调控的程序性细胞死亡过程，形态学特征是细胞核和细胞质发生浓缩，染色质发生断裂，不伴有炎症反应。
在这个过程中大量的基因被激活，蛋白质表达增加。
其在体内稳态平衡、神经发育、机体防疫、老化及许多疾病的发生过程中发挥重要作用，如帕金森病、老年性痴呆等神经退行性疾病与神经细胞过度凋亡有关。
依据细胞凋亡机制可将凋亡分为caspase依赖的、非caspase依赖的凋亡，其中以前者为主。
caspase依赖的途径主要有线粒体/细胞色素C通路、死亡受体通路和内质网通路[2]。
1）线粒体/细胞色素C通路：由理化因素导致的DNA损伤、生长因子缺乏、氧化应激、毒物药物等刺激信号激活。
细胞色素C作为一种促凋亡因子从线粒体膜释放入胞浆后，与胞浆中的凋亡激活因子-1（Apaf-1）的C末端及ATP结合，促使caspase-9蛋白酶家族呈“瀑布式”层层激活(caspase-9→caspase-3、6、7)，引起细胞形态学上的改变使细胞最终发生凋亡[3]；2）死亡受体(Fas-associated death domain，FADD)通路：由配体如TNF、Fas或TRAIL同其受体结合引起，配体受体结合后激活caspase-8,进一步激活caspase-3、caspase-6、capase-7；3）内质网通路：主要由Ca2+介导，胞内钙超载，影响内质网对钙的摄取和释放，造成内质网的应激，内质网应激诱导caspase-12表达，激活的caspase-12可进一步激活caspase-3而引发细胞凋亡。
高压氧对短暂前脑缺血小鼠海马半胱天冬酶-3表达的影响
高压氧对短暂前脑缺血小鼠海马半胱天冬酶-3表达的影响刘天会;陈瑞【期刊名称】《首都医科大学学报》【年(卷),期】2005(26)1【摘要】旨在通过测定缺血再灌注时半胱天冬酶-3(caspase-3)的表达以及高压氧对表达的影响,从细胞凋亡的角度探讨高压氧治疗脑缺血的分子生物学机制.将C57BL/6N小鼠分为假手术组(正常对照组)、缺血再灌注组(I/R组)及缺血再灌注加高压氧治疗组(HBO组),后2组夹闭双侧颈总动脉20 min后再通血流,建立脑缺血再灌注模型,分别于再灌注6 h、12 h、24 h和48 h取海马.采用半定量反转录-PCR及蛋白免疫印迹(Western Blotting)方法分别检测caspase-3在转录水平(mRNA)及翻译水平的表达变化.结果:各I/R组及HBO组海马中caspase-3 mRNA及酶原表达水平与假手术组相比均有明显升高,且差异有统计学意义(P<0.05);各I/R组与相应时相点HBO组caspase-3 mRNA及酶原表达水平相比差异均无统计学意义(P>0.05).提示:脑缺血再灌注损伤诱发caspase-3转录水平增加,而且这是引起其酶原增加的主要原因;caspase-3介导的细胞凋亡参与了缺血再灌注损伤;本实验中所采用的HBO治疗方案对caspase-3转录及酶原水平无明显作用.【总页数】4页(P59-62)【作者】刘天会;陈瑞【作者单位】首都医科大学附属北京友谊医院肝病中心;首都医科大学生物化学与分子生物学系【正文语种】中文【中图分类】R459.6;R364.1;Q556【相关文献】1.小鼠短暂前脑缺血海马区半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3酶原表达形式的变化 [J], 刘天会;陈瑞2.NJS小鼠短暂性前脑缺血后海马细胞改变的初步研究 [J], 高志强;陈光辉;孙桂勤;孙敬方;田小芸3.浅低温对小鼠前脑缺血再灌注海马区神经凋亡以及BNIP3表达的影响 [J], 汤莹莹; 潘峰; 贾俊可4.短暂前脑缺血小鼠海马脑红蛋白表达的动态变化 [J], 陈秀莲;陈瑞;高春锦;徐世明;张丽娟;王宏娟5.小鼠短暂前脑缺血海马中半胱天冬酶-3酶原表达的变化 [J], 刘天会;陈瑞;杜艳玲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
C57BL6小鼠肝脏微粒体膜蛋白表达谱的研究的开题报告
C57BL6小鼠肝脏微粒体膜蛋白表达谱的研究的开题报告标题：C57BL6小鼠肝脏微粒体膜蛋白表达谱的研究研究背景：微粒体是细胞内最重要的膜限制质膜系统之一，参与多种细胞代谢过程，如能量代谢、钙离子调节、药物代谢、内质网应激、肿瘤细胞凋亡等。
微粒体膜蛋白是微粒体中最重要的组成部分之一，对于微粒体的结构和功能具有重要的影响。
近年来，随着生物技术的快速发展，对微粒体膜蛋白的研究得到了越来越广泛的关注。
目前，有很多关于微粒体膜蛋白的研究，但对于C57BL6小鼠肝脏微粒体膜蛋白表达谱的研究还比较缺乏，因此本研究旨在探究C57BL6小鼠肝脏微粒体膜蛋白表达谱的变化规律及其对肝脏代谢功能的影响。
研究内容：1.构建C57BL6小鼠肝脏微粒体膜蛋白组蛋白质谱分析体系；2.采用质谱分析技术对C57BL6小鼠肝脏微粒体膜蛋白组进行定量和定性分析；3.通过生物信息学分析，筛选微粒体膜蛋白相关的通路，分析微粒体膜蛋白在代谢通路的作用；4.通过相关实验验证，研究微粒体膜蛋白对肝脏代谢功能的影响。
研究意义：本研究可以为深入研究微粒体膜蛋白结构和功能提供重要的信息，并可以为肝脏代谢疾病的防治提供新的思路和方法。
研究方法：本研究采用质谱分析技术和生物信息学分析技术，以C57BL6小鼠为实验对象，通过体内微粒体分离和组学分析实验，筛选微粒体膜蛋白相关通路，并通过相关实验验证微粒体膜蛋白对肝脏代谢功能的影响。
预期结果：本研究预期将得到C57BL6小鼠肝脏微粒体膜蛋白表达谱的基本信息，并深入探究微粒体膜蛋白在肝脏代谢通路中的作用机制，为进一步阐明微粒体结构和功能提供实验依据，并为肝脏代谢疾病的研究提供新的思路和方法。
关键词：微粒体膜蛋白，肝脏代谢，质谱分析，生物信息学分析。
新生小鼠缺氧缺血性脑病脑组织caspase-3表达的变化
新生小鼠缺氧缺血性脑病脑组织caspase-3表达的变化肖爱娇;康明非;汪建民;罗小泉【期刊名称】《天津医药》【年(卷),期】2015(000)010【摘要】目的：观察半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase）-3在新生儿缺氧缺血性脑病（NHIE）小鼠模型脑组织中表达的变化。
方法选取7 d CD1新生小鼠30只，按随机数字表法分为假手术组（9只）和NHIE模型组（21只），后者制备NHIE动物模型。
用TTC染色法检查2组的脑组织梗死面积；DAPI染色观察脑组织病理变化；原位末端标记技术检测脑组织细胞凋亡；荧光免疫组化法检测脑组织中caspase-3表达水平。
结果假手术组小鼠脑组织未见梗死灶，脑组织细胞排列致密整齐，TUNEL阳性细胞数[（18.57±4.98）个]和caspase-3阳性细胞数[(9.17±2.14)个]明显低于NHIE模型组的TUNEL阳性细胞数[（209.57±41.27）个]和caspase-3阳性细胞数[（63.33±16.22）个]；与假手术组相比，NHIE模型组小鼠的右侧半球可见梗死灶，脑组织细胞大量坏死脱落、周围组织间隙变大。
结论 NHIE模型鼠出现的脑组织损伤可能与caspase-3表达增加、脑组织细胞凋亡增加有关。
%Objective To observe apoptotic cells and caspase-3-positive cells in ipsilateral neonatal hypoxic-isch⁃emia encephalopathy (NHIE) model in mice. Methods CD1 mice of age 7 days (n=30) were randomly divided into two groups: sham group (n=9) and model group (n=21). NHIE model was induced by right common carotid artery ligation fol⁃lowed by 8%oxygen hypoxia for 100 min. TTC staining was used to determine area of brain infarction. DAPI staining was used to detect pathological changein brains. TUNEL assay was used to detect apoptotic cells and fluorescence immunohisto⁃chemistry was used to detect caspase-3 expression in the ipsilateral brain. Results No infarct was detected in sham group. Cells were densely and orderly arranged in brain. TUNEL-positive cells (18.57±4.98) and caspase-3-positive cells (9.17± 2.14) in the ipsilateral brain were both less than those in the ipsilateral brain of mice in model group(209.57±41.27) and (63.33±16.22) respectively. Mice in model group presented infarct in the right hemisphere with more dead cells and wider in⁃terstitial space compared with sham group. Conclusion Brain injury in NHIE model might be related to the increasing cas⁃pase-3 expression thus leads to apoptosis.【总页数】3页(P1116-1118)【作者】肖爱娇;康明非;汪建民;罗小泉【作者单位】江西中医药大学生理学学科组邮编330004;江西中医药大学针灸康复科邮编330004;江西中医药大学解剖学学科组邮编330004;江西中医药大学实验动物科技中心邮编330004【正文语种】中文【中图分类】R742【相关文献】1.针刺对缺氧缺血性脑病新生小鼠脑组织细胞凋亡的影响 [J], 肖爱娇;欧阳昕;陈明人2.姜黄素对大鼠脑缺氧缺血损伤时脑组织MDA变化、caspase-3表达及细胞凋亡的影响 [J], 殷广梅;喻林升;吴淑珍;叶光华;郑园园;伊吉普3.亚低温对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后脑组织Caspase-3的表达变化 [J], 赵旭晶;阴怀清;孙玲;房清丽;武师润;阴崇娟4.大鼠实验性脑出血后脑组织TLR2、NF-B/p65及caspase-3表达变化的研究[J], 吴丹;滕伟禹5.艾灸对缺氧缺血性脑病新生小鼠脑组织炎症细胞浸润和\rCD11b表达的影响 [J], 肖爱娇;肖移生;欧阳昕;贺琳;陈明人因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
小鼠全脑缺血模型海马区Bcl-2和Bax的表达
小鼠全脑缺血模型海马区Bcl-2和Bax的表达胡应安;黄海霞;刘丽敏;王蓬文【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2005(009)001【摘要】BACKGROUND: The utilization of cerebral ischemia model established on C57black/6 mouse has been significantly increased in the researches. At present, it is necessary to completely and thoroughly investigate the molecular biological changes in neuronal injury and death of the model. Our study is to observe the expression levels of two genes that are closely correlated with ischemic neuron death.OBJECTIVE: To observe Bcl-2 and Bax expressions in hippocampus after ischemia on cerebral ischemic mouse model for the investigation of this animal model on proteinic molecular expression level, which would provide a laboratorial gist for future application of this animal model in cerebral ischemia researches.DESIGN: A randomized controlled perspective study based on experimental animals as subjects.SETTING: Departments of Physiology and Pathoanatomy of some university.PARTICIPANTS: The study was conducted in the Department of Physiology of Capital Medical University from November 2002 to May 2003. Twelve C57black/6 mice were selected and randomly divided into sham-operation group and ischemia group with 6 mice each.INTERVENTIONS: Cerebral ischemic model was induced by occluding both common carotid arteries for 15 minutes. Brain tissues wereharvested after 24 hours. Bcl-2 and Bax expressions in hippocampus were observed after post-cerebral ischemic immunohistochemicalstaining.MAIN OUTCOME MEASURES: Bcl-2 and Bax expressions in hippocampus.RESULTS: The number of Bax-positive immune reaction(IR) neuron in hippocampal CA1 area was(57.3 ± 2.9) in ischemia group, which was significantly more than(17.2 ± 1.3) of sham-operation group( t = 30.91,P ＜ 0.05). The number of Bcl-2-IR-positive neuron in hippocampal CA3 and dentate gyrus was(43. 9 ± 1.1 ) in ischemia group, which was significantly more than(28; 6 ± 1.7) in sham-operation group( t = 18.51, P ＜ 0. 05) . As indicated by the results of positive staining grey scale measurements, Bax-IR positive grey scale in hippocampal CA1 area was (90.45 ± 5.23 ) in ischemia group, which was significantly lower than (168.39 ± 4.55) in sham-operation group( t =27.54, P ＜ 0. 05); Bcl-2-IR positive grey scale in CA3 area and dentate gyrus was(113.10±4. 20), which was significantly lower than( 157.25 ± 7.68) in sham-operation group( t = 12.35, P ＜ 0. 05).CONCLUSION: Bcl-2 and Bax expressions change after 24 hours of ischemia in cerebral ischemic mouse model. Bax expression increases in CA1area while Bcl-2 expression increases in CA3 and dentate gyrus.%背景:由C57black/6小鼠制成的全脑缺血模型在实验性脑缺血的研究中使用在明显增加,目前需要对这种模型的神经元损伤死亡在分子生物学方面的改变进行全面深入的研究,此项研究正是观察两种与缺血神经元死亡密切相关基因的表达水平.目的:在小鼠全脑缺血模型上观察缺血后海马区Bcl-2和Bax的表达,在蛋白分子表达水平对该模型进行研究,为这种模型在今后脑缺血研究中的应用提供实验依据.设计:以实验动物为研究对象,随机对照前瞻性研究.单位:一所大学生理学和病理解剖学教研室.对象:实验于2002-11/2003-05在首都医科大学生理系完成.选择C57black/6小鼠12只,随机分为假手术组和对照组,每组6只.干预:双侧颈总动脉夹闭15 min诱发全脑缺血模型,24 h后取脑组织.全脑缺血后应用免疫组织化学染色,观察海马Bcl-2和Bax的表达水平.主要观察指标:海马Bcl-2和Bax的表达水平.结果:缺血组海马CA1区Bax阳性反应神经元数目为(57.3±2.9个)个,假手术组Bax阳性细胞数目为(17.2±1.3)个,两组比较,差异有显著性意义(t=30.91,P＜0.05).缺血组CA3区和齿状回Bcl-2阳性反应神经元数目为(43.9±1.1)个,假手术组Bcl-2阳性细胞数目为(28.6±1.7)个,两组比较,差异有显著性意义(t=18.51,P＜0.05).阳性着色区灰度值测定结果显示:缺血组海马CA1区Bax阳性细胞染色灰度值为90.45±5.23,假手术组Bax阳性细胞染色灰度值为168.39±4.55,两组比较,差异有显著性意义(t=27.54,P＜0.05);缺血组CA3区和齿状回Bcl-2阳性细胞染色灰度值为113.10±4.20,假手术组Bcl-2阳性细胞染色灰度值为157.25±7.68,两组比较,差异有显著性意义(t=12.35,P＜0.05).结论:小鼠全脑缺血模型在缺血24 h后,Bcl-2和Bax表达发生改变,Bax表达增加在CA1区,Bcl-2表达增加在CA3区和齿状回.【总页数】2页(P242-243)【作者】胡应安;黄海霞;刘丽敏;王蓬文【作者单位】首都医科大学,生理学教研室,北京市,100054;首都医科大学,生理学教研室,北京市,100054;首都医科大学,生理学教研室,北京市,100054;首都医科大学,病理解剖学教研室,北京市,100054【正文语种】中文【中图分类】R74【相关文献】1.小鼠全脑缺血模型的海马区基因Fas-L和Caspase-3表达 [J], 胡应安;黄海霞;刘丽敏;王蓬文2.黄连温胆汤对2型糖尿病小鼠海马区Bcl-2、Bax、IGF-1、IGF-1R蛋白表达的影响 [J], 陈志明;石富国;张卫华;刘舟;马世平3.丰富环境对缺血性脑卒中小鼠海马区Bcl-2和Bax蛋白表达和认知功能的效果[J], 王传杰; 吴毅; 陶峰; 杨雷4.C57black/6小鼠全脑缺血模型脑内Bax和Bcl-2的表达 [J], 黄海霞;刘丽敏;付小锁;刘萍;胡应安5.C57black/6小鼠全脑缺血模型的海马区Bcl-2和Bax的表达 [J], 黄海霞;胡应安;刘丽敏;王蓬文因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
褪黑素对小鼠MFC前胃癌细胞的survivin、caspase-3表达的影响
褪黑素对小鼠MFC前胃癌细胞的survivin、caspase-3表达的影响刘卉;宫喜;徐丽;蒋继浩;周瑞祥【摘要】目的探讨褪黑素(Melatonin,MLT)对小鼠前胃癌细胞(murine foregastric carcinoma,MFC)的生存素survivin和半胱天冬酶-3(cysteinyl aspartate-specific protease-3,caspase-3)表达的影响.方法使用不同浓度褪黑素处理培养的胃癌细胞,运用细胞免疫组化、实时荧光定量PCR、免疫印迹法、分光光度法等方法检测褪黑素在抑制小鼠MFC前胃癌细胞增殖过程中对细胞survivin、caspase-3的表达影响.结果与空白对照组相比,6mmol/L浓度褪黑素干预组的胃癌细胞survivin表达下调,caspase-3蛋白表达上调,并呈剂量依赖性.结论褪黑素能够降低胃癌细胞survivin的表达,进而激活caspase-3的活性,是褪黑素体外抑制肿瘤细胞增殖的作用机制之一.%Objective To investigate the effect of melatonin on survivin and caspase-3 expression in murine foregastric cancer (MFC) cells. Methods MFC cells were treated with different concentrations of melatonin, and then we used immunocytochemistry,real-time fluorescence quantitative PCR, Western hlot, spectrophotometry and other methods to detecte the effect of MLT on the cytokines of survivin and caspase-3 expression in MFC cells during their proliferation. Results Compared with the blank control, the 6mmol/L concentration of MLT down-regulated the expression of survivin and up-regulated caspase-3 expression in a dose dependent manner. Conclusion MLT can down-regulate the expression of survivin and activate the activity of caspase-3protein in MFC cells, which is one of the anti-turner mechanisms of melatonin in vitro.【期刊名称】《中国组织化学与细胞化学杂志》【年(卷),期】2011(020)006【总页数】5页(P549-553)【关键词】褪黑素;胃癌细胞;生存素;半胱天冬酶-3【作者】刘卉;宫喜;徐丽;蒋继浩;周瑞祥【作者单位】福建医科大学人体解剖学与组织胚胎学系,神经生物学研究中心,福州,350004;福建医科大学人体解剖学与组织胚胎学系,神经生物学研究中心,福州,350004;福建医科大学人体解剖学与组织胚胎学系,神经生物学研究中心,福州,350004;福建医科大学人体解剖学与组织胚胎学系,神经生物学研究中心,福州,350004;福建医科大学人体解剖学与组织胚胎学系,神经生物学研究中心,福州,350004【正文语种】中文【中图分类】R735.2胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，大部分地区仍居恶性肿瘤的发病率和死亡率之首，胃癌不理想的治疗效果主要源于其发病机制尚未明确。
七氟烷与高浓度氧对老年小鼠海马caspase-3的表达及认知功能的影响
七氟烷与高浓度氧对老年小鼠海马caspase-3的表达及认知功能的影响陈玢;刘伟;史志国;刘涛;郑晖【期刊名称】《首都医科大学学报》【年(卷),期】2017(38)3【摘要】Objective To investigate the impact of sevoflurane and high concentration of oxygen on expression of caspase-3 and cognitive function of aged mice.Methods Thirty three healthy male C57/BL6 elderly mice (14 months) were randomly divided into three groups:group of high concentration of oxygen (HO group,n =11):inhaling 100％ oxygen for 4 h;high concentration of oxygen + sevoflurane group (HS group,n=11):taking in 100％ oxygen with 2.5％ sevoflurane for 4 h;control group (Con group,n =11):taking in air for 4 h.Cognitive function in the elderly mice was tested in the Morris water maze.Western blotting is used to test the expression of caspase-3 in hippocampus.Results Compared with Group Con,Group HO saw no difference in numbers of crossing the platform and Caspase-3 expression.Group HS crossed the platform less (P =0.023),and the caspase-3 expression of the group increased significantly(P=0.036).Conclusion Inhaling 100％ oxygen had no impact on cognitive function in the elderly mice;Inhaling 2.5％ Sevoflurane with 100％ oxygen could increase expression of caspase-3,and it had close relations with the cognitive dysfunction of the aged mice.%目的探讨七氟烷与高浓度氧对老年小鼠海马半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达及认知功能的影响.方法健康雄性C57/BL6老年小鼠(14月龄)33只,采用数字表法将其随机分为3组:高浓度氧组(HO组,n=ll):吸100％(体积分数)氧4h;高浓度氧+七氟烷组(HS组,n=11):吸100％(体积分数)氧+2.5％(体积分数)七氟烷4h;对照组(Con组,n=11):吸空气4h.24 h后采用Morris水迷宫法研究3组小鼠麻醉后连续5d找到平台所用的时间(逃避潜伏期)和第5天去除平台后,90 s内穿过原平台的次数.利用蛋白质印记(Western blotting)法检测小鼠海马caspase-3的表达.结果与Con组相比,HO组的caspase-3表达差异无统计学意义(P＞0.05);HS组的穿越平台次数降低(P=0.023),caspase-3表达显著增加(P =0.036).结论吸入100％(体积分数)氧对老年小鼠认知功能无影响,2.5％(体积分数)七氟烷与100％(体积分数)氧同时吸入增加老年小鼠海马caspase-3的表达,与老年小鼠产生认知功能障碍有关.【总页数】4页(P348-351)【作者】陈玢;刘伟;史志国;刘涛;郑晖【作者单位】首都医科大学附属北京胸科医院麻醉科,北京101149;首都医科大学附属北京胸科医院麻醉科,北京101149;首都医科大学附属北京胸科医院麻醉科,北京101149;首都医科大学附属北京胸科医院麻醉科,北京101149;国家癌症中心/中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院麻醉科,北京100021【正文语种】中文【中图分类】R614【相关文献】1.宫内七氟醚暴露对仔鼠海马CA1区caspase-3表达及早期认知功能的影响 [J], 陈弦;万海方;范皓;陶凡2.手术创伤引起的海马炎症反应对老年小鼠术后认知功能的影响 [J], 何龙;艾艳秋;储勤军;鲁稳梁;张卫3.莪术二酮对肝部分切除老年小鼠术后认知功能和海马区炎性因子表达的影响 [J], 石红;石磊;李建雄4.YC-1对肝部分切除术后老年小鼠认知功能及海马神经元凋亡的影响 [J], 葛叶盈;王秀珍;袁娜;袁力勇;陈洁5.YC-1对肝部分切除术后老年小鼠认知功能及海马神经元凋亡的影响 [J], 葛叶盈;王秀珍;袁娜;袁力勇;陈洁;;;;;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
caspase-3在神经毒素1-甲基-4-苯基吡啶离子诱发多巴胺能神经元凋亡中的表达
caspase-3在神经毒素1-甲基-4-苯基吡啶离子诱发多巴胺能神经元凋亡中的表达李艳云;蒲小平;朴景华;李长龄【期刊名称】《北京大学学报（医学版）》【年(卷),期】2002(034)006【摘要】目的:探讨caspase-3在1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium , MPP+)诱发多巴胺能神经元凋亡中的表达.方法:建立MPP+诱发中脑神经细胞凋亡模型,通过免疫组织化学染色及RT-PCR检测方法,检测原代培养的16 d胎鼠的中脑多巴胺能神经元中caspase-3的表达.结果:在正常组和细胞凋亡组(MPP+组)的caspase-3在蛋白质和基因水平均有表达,但在细胞凋亡组中表达强度明显高于正常对照组,二者差异具有显著性.caspase-3的蛋白酶抑制剂Ac-DEVD-CHO可降低caspase-3的表达.结论:caspase-3参与MPP+诱发的多巴胺能神经元的凋亡过程,并起关键作用,以MPP+为诱导剂建立的中脑神经细胞凋亡模型可用于研究与帕金森病(Parkinson disease, PD)有关的细胞凋亡的调控机制和筛选抗PD药物.【总页数】4页(P688-691)【作者】李艳云;蒲小平;朴景华;李长龄【作者单位】北京大学药学院分子与细胞药理学系,北京,100083;北京大学药学院分子与细胞药理学系,北京,100083;北京大学药学院分子与细胞药理学系,北京,100083;北京大学药学院分子与细胞药理学系,北京,100083【正文语种】中文【中图分类】Q255【相关文献】1.培补肝肾复方对1-甲基-4-苯基吡啶离子致多巴胺能神经元损伤的影响 [J], 田季雨;陈建宗;陈晓莉;杨浩2.肉苁蓉对1-甲基-4-苯基吡啶离子致多巴胺能神经元凋亡的影响 [J], 田季雨;陈建宗3.钙稳态失衡在1-甲基-4-苯基吡啶离子诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡中的作用 [J], 徐蕾;李文军;林丹苗;张洪梅;邹飞4.红景天苷通过抑制线粒体自噬通路减轻1-甲基-4-苯基吡啶离子诱导的PC12细胞凋亡实验研究 [J], 王松海;康超;谢燕华;陈捷;刘楠5.1-甲基-4-苯基吡啶离子诱发大鼠小脑颗粒细胞凋亡 [J], 蒲小平;李晓蓉;李慧农;李长龄因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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2006年10月 第27卷 第5期 首都医科大学学报Journal of Capital University of Medical Sciences Oct.2006Vol.27 No.5・基础研究・C57black /6小鼠全脑缺血模型F as 2L 和C aspase 23的表达黄海霞 刘丽敏 崔 茜 胡应安3(首都医科大学生理学教研室)【摘要】 目的 应用C57black/6小鼠制备全脑缺血模型,观察脑缺血后大脑皮质、丘脑、下丘脑杏仁核部位Fas 2L 和Caspase 23基因的表达。
方法 双侧颈总动脉夹闭(bilateral common carotid artery occlusion ,BCCAO )15min ,造成全脑缺血,24h 后取脑组织进行Fas 2L 和Caspase 23免疫组织化学染色。
结果 Fas 2L 阳性细胞广泛分布在大脑皮质、丘脑、下丘脑、杏仁核。
除丘脑外,缺血组其他部位Fas 2L 阳性神经元细胞密度均显著高于假手术组(P <0.01);缺血组各区域细胞染色灰度值均显著低于假手术组(P <0.01)。
Caspase 23阳性细胞在大脑皮质、丘脑、下丘脑均有表达,缺血组各区域阳性神经元细胞密度均显著高于假手术组(P <0.05,P <0.01);缺血组各区域细胞染色灰度值均显著低于假手术组(P <0.01)。
结论 双侧颈总动脉夹闭法可复制C57black/6小鼠全脑缺血模型,缺血再灌注24h 后,Fas 2L 和Caspase 23基因在多个区域表达增加。
提示该全脑缺血模型中,神经元死亡信号传导需要Caspases 基因家族成员表达的加强,且存在缺血后神经元死亡信号传导的外源性通路。
【关键词】 C57black/6小鼠;全脑缺血;Fas 2L ;Caspase 23【中图分类号】 Q 189The Expression of F as 2L and C aspase 23in C57black/6Mice after G lobal Cerebral IschemiaHuang Haixia ,Liu Limin ,Cui Qian ,Hu Yingan 3(De partment of Physiology ,Ca pital Universit y of Medical S ciences )【ABSTRACT 】 Objective C57black/6mice are increasingly used for experimental stroke research while how the neuron death is induced and what the pathway of dead signal transduction is after ischemia in this model are still unknown.Methods In this study global cerebral ischemia was induced by bilateral common carotid artery occlusion (BCCAO )in C57black6mice.C57black/6mice were subjected to 15min occlusion followed by reperf usion for 24h.Fas 2L and Caspase 23immunohistochemical staining of brain tissue were performed.R esults Fas 2L 2positive neurons were distributed in retrosplenial agranular cortex (RSA ),piriform cortex (Pir ),ventral posterolateral thalamic nucleus/ventral posteromedial thalamic nucleus (VPL/V PM ),arcuate hypothalamic nucleus (Arc )and medial amygdaloid nucleus ,posteroventral (MePV )areas and the cytoplasm was stained.There were more positive neurons in the ischemia group than in the sham 2surgery group (P <0.01)for all observed areas except VPL/V PM.And the positive neurons were more darkly stained in the ischemia group (P <0.01).Caspase 232positive neurons were distributed in RSA ,Pir ,V PL/V PM and MePV areas.The Caspase 232positive neurons were less in number and lightly stained compared with Fas 2L 2positive neurons.Also there were more Caspase 232positive neurons in the ischemia group than in the sham 2surgery group (P <0.05,P <0.01).The positive neurons were more darkly stained in the ischemia group (P <0.01).Conclusion These results showed that C57black/6mice model of global ischemia can induce extensive expression of Fas 2L and Caspase 23in brain ,indicating that members of Caspases family were involved in the pathway of neuron death signal transduction and there was exogenetic pathway during this process for this kind of global ischemia model.【K ey w ords 】 C57black/6mice ;global cerebral ischemia ;Fas 2L ;Caspase 23基金项目:首都医科大学科研基金资助项目3通讯作者(Corresponding aut hor ) 近年来,用C57black/6小鼠复制的全脑缺血模型被广泛应用于实验性脑缺血研究,并对短暂夹闭C57black/6小鼠双侧颈总动脉(bilateral common carotid artery occlusion ,BCCAO )后所造成的神经病学体征、生物化学、神经病理学改变、脑微循环的改变以及缺血神经元的死亡进行了全面研究[15]。
然而该种模型缺血后神经元的死亡与哪些基因表达密切相关,缺血后神经元的死亡信息如何传导,至今鲜见报道。
本工作应用免疫组化技术测定该模型缺血15min 、再灌注24h 后Fas 2L 和Caspase 23基因在大脑皮质、丘脑、下丘脑、杏仁核等多个区域的表达,旨在第5期黄海霞等:C57black/6小鼠全脑缺血模型Fas2L和Caspase23的表达探讨Fas2L和Caspase23基因在全脑缺血发生发展中的作用。
1 材料和方法1.1 动物模型的建立C57black/6小鼠,雌雄不拘,体质量25～28g,购于首都医科大学实验动物科学部。
按数字表法随机分为2组:假手术组(S组)和缺血组(I组),每组均为6只动物。
假手术组乙醚麻醉,颈部正中切口,暴露双侧颈总动脉后缝合颈部切口。
缺血组乙醚麻醉,颈部正中切口,暴露双侧颈总动脉,用动脉夹夹闭双侧颈总动脉,夹闭过程中小鼠保持清醒。
15min后去掉动脉夹,缝合颈部切口。
1.2 取材手术后24h,灌注固定假手术组和缺血组动物。
经乙醚麻醉后开胸暴露心脏,剪开右心耳,经左心室插管,先后注入生理盐水和4%多聚甲醛各约100 mL。
取全脑置4%多聚甲醛中固定24h再转入30%葡萄糖多聚甲醛后固定24～48h,待组织下沉后,取中段脑进行冰冻切片,切片厚度35μm。
1.3 免疫组织化学染色Fas2LⅠ抗、Caspase23Ⅰ抗、SP试剂盒、DAB 为Sigma公司产品。
参照免疫组化试剂盒说明书,采用SP法进行漂浮染色。
阴性对照用正常羊血清代替Ⅰ抗。
每例分别进行Fas2L和Caspase23染色。
1.4 结果观察和分析在显微镜下观察染色结果,计数阳性神经元密度(采用40倍视野下每mm2的细胞个数,40倍放大倍数下1mm2相当于实际面积2.5×104/μm2)。
用L EICA Q500IW图像分析仪、L EICA QWIN图像分析软件对染色结果进行分析,每张切片每个部位选取20个阳性细胞进行灰度值测定。
1.5 统计学分析采用SPSS11.0统计软件,所有数据用均数±标准差( x±s)表示。
进行成组设计资料两样本比较的u 检验,以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果免疫组织化学染色结果显示,双侧颈总动脉夹闭15min后,C57black/6小鼠全脑缺血模型中Fas2L 阳性细胞广泛分布在大脑皮质、丘脑、下丘脑、杏仁核,细胞着色均匀,胞体着色,胞质呈深褐色。
大脑皮质、下丘脑和杏仁核阳性神经元密度较大,细胞体积较小,多为圆形或椭圆形。
丘脑阳性神经元密度较小,但细胞体积较大,多为不规则的多角形。
本研究选取了大脑皮质RSA(ret ro splenial agranular cortex)和Pir(piriform cortex)区,丘脑V PL/V PM (vent ral posterolateral t halamic nucleus/vent ral posteromedial t halamic nucleus)区,下丘脑弓状核Arc(arcuate hypot halamic nucleus)和杏仁核的MePV(medial amygdaloid nucleus,posterovent ral)区进行了统计学分析。