多糖含量测定

多糖含量的测定参照国标NY/1676-2008

一、实验原理

多糖在硫酸作用下，先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，与苯酚反应生成橙黄色溶液，在490nm处有特征吸收，与标准曲线比较定量。

二、试剂

1、硫酸（H2SO4，国药集团），ρ=1.84g/mL；

2、无水乙醇（国药集团）；

3、苯酚（国药集团），重蒸馏；

4、80%乙醇溶液（国药集团）；

5、葡萄糖（国药集团），使用前于105℃恒温烘干至恒重；

6、80%苯酚溶液：称取80g苯酚于100mL烧杯中，加水溶解，定容至100ml后转至棕色瓶中，置4℃冰箱中避光贮存。

7、5%苯酚：吸取5mL，80%的苯酚溶液，溶于75mL水中，混匀，现配现用。

8、100mg/L标准葡萄糖溶液：称取0.1000g葡萄糖于100mL烧杯中，加水溶解，定容至1000mL，4℃冰箱中避光贮存。

三、仪器

双光束紫外可见分光光度计（TU-1901；北京普析通用仪器有限责任公司）

分析天平（0.0001g；奥豪斯）

超声提取器（KQ-500B;昆山市超声仪器有限公司）

高速离心机（常州中捷实验仪器制造有限公司）

四、操作步骤

1、样品的提取

称取样品0.1g于离心管中，加入20mL无水乙醇，充分混匀后超声提取30min，然后4000r/min离心10min，弃去上清液，不溶物用10mL乙醇溶液洗涤、离心。用水将上述不溶物转移至圆底烧瓶中，加入50mL水，沸水浴回流提取2h。冷却至室温，过滤，将上清液转移至100mL容量瓶中，残渣洗涤2-3次，洗涤液转移至容量瓶，加水定容。

2、标准曲线

分别吸取0、0.2mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL标准液至试管中，蒸馏水补至1.0 mL。向试液中加入1.0 mL5%苯酚溶液，快速加入5 mL硫酸，静置10min。充分混匀后将试管放置于30℃水浴中反应20min,在490nm处测吸光度，以浓度为横坐标，吸光度未纵坐标，绘制标准曲线

3、测定

吸取1.00mL样品溶液于20mL具塞试管中，按照1、2操作，测定吸光度，同时做空白实验

五、计算公式

X（%）=m1*v1/(m2*v2)*0.9*10-4

m1标曲上查的样品测定液中含糖量，μg；

v1样品定容体积，mL；

v2比色测定所移取样品测定液体积，mL；

m2样品质量，g；

0.9 葡萄糖换算成葡聚糖的校正系数