蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量

合集下载

蒽酮-硫酸比色法测定盘龙七中多糖的含量

回归方程为Ｙ＝６．７９５０ｘ＋０．０３４２，＝０．９９９４（ｎ：５），平均回收率为１０１．０６％，ＲＳＤ＝１．３１％，（ｎ
＝
６）。结论是所用方法快速准确、重现性好，可用于盘龙七中多糖的含量测定。
西北大学学报（自然科学版）２０１３年１２月，第４３卷第６期，Ｄｅｃ．，２０１３，Ｖｏ１．４３，Ｎｏ．６ＪｏｕｎａｒｌｏｆＮｏｒｔｈｗｅｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＥｄｉｔｉｏｎ）
蒽酮一硫酸比色法测定盘龙七中多糖的含量
冯永辉，曹东凯，郭耀武
（１．西安医学院药学院，陕西西安７１００２１；２．陕西省富平县人民医院药剂科，陕西富平７１１７００；３．陕西省食品药品检验所，陕西西安７１００６１）
ｉｄｒｅｓｗａｓ０．０２ —０．１０ｍｇ／ｍＬ，ｔｈｅｌｉｎｅａｒｅｑｕａｔｉｏｎｗａｓＹ＝６．７９５０ｘ＋０．０３４２，ｔｈｅｒｅｌｅｖａｎｃｅｍｏｄｕｌｕｓ＝０．９９９
ｒａｔｅａｎｄｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ．ＩｔｃａｎｂｅｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅＲｈｉｚｏｍａＢｅｒｇｅｎｉａｅＳｃｏｐｕｌｏｓａｅ．

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量
操作步骤
葡萄糖标准曲线的制作
取6支具塞试管，按下表数据精密配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液，每个浓度做2个重复：
管号0 1 2 3 4 5
标准葡萄糖溶液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
蒸馏水/mL 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0
在每支试管中立即加入蒽酮试剂4mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热10min。

取出，迅速浸于冰水浴中冷却10min。

在652nm波长下以第1管为空白，迅速测定其余各管吸光值。

以标准葡萄糖含量( g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。

样品的测定
将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。

取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个重复。

在652nm波长下迅速测定各管吸光值。

根据葡萄糖含量的标准曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。

Cri-J。

蒽酮-硫酸比色法测定香菇多糖含量

ＺＵＷｅ（ＬＮ（ＩＮＳＮＴＡＥＴＣＬＣＬＤｉｇａｇ２４０，ＨＮＨｉＡＡＤＪＧＵ）ＵＲＣＵＩＡＯ，Ｔ．Ｊｊｎ１５０ＣＩＡ）Ａｎｉ
ＡｓａｔＯｊｃｖ：ｏｅｔｂｉｔｏｏｅｅｍｎｔｎｏｅＬｎｎｎｃｎｎｉＬｎｎｎＡＩｅｏ：ｅｒｉｖａ－ｂｔｃ：ｂｔｅＴｓｌｈａｍｅｄｆｒｄｔｒｉａｏｆｔｅｔａｏｔｔｎｅｔａＰ．ＭｔｄＤｔｍｎｂｎｒｅｉａｓｈｉｈｉｅｉｈｅｅ
ｔｒｎｓｌｒｃａｉｅｌｒｔ，ｔｋｎｘｒｎａｈｅｅｅｃｏｔ１ｈｏｅ— ｕｆｉｃｄｏｏｍｅｒｕｉｙａｉｇＤｅｔａｓｔｅｒｆｒｎｅｃｎｒ．ＲｅｕｔＩｈＤｘｒｎｏｃｎｒｔｎｗｉｉ１０ｏｓｌ：ｎｔｅｅｔｅｃｎｅｔｉｔｎ００４— ａａｏｈ
水均为二次重蒸馏水。
表１不同反应时间对应吸光度值
ｌ．主要仪器：＿３１岛津ｕ一４０Ｖ２５型紫外一可见分光光度计、涡旋混合器。
２取．２２１１．４主要器材：．硅胶Ｈ板（青岛海洋化工厂）１ｍ具塞试管。１．、５ｌ．４放置时间对于吸光度的影响：１．下配制之香菇多糖１．法２方溶液３ｌｍ，冰水浴中沿管壁精密加入已加入０２．％蒽酮硫酸溶液５ｌｍ的试管中，涡旋混匀后，即于沸水中加热，立自混匀起１．香菇多糖组成单糖的初步分析：２００４批香菇多糖．１２取０９０计时，准确反应６ｉ，ｍｎ取出移至冰水浴中，再放至室温，水为空０００．２ｇ于１ｍ安剖瓶中，加ｌｏ／的硫酸溶液５封口，０ｌｍｌ１ｍｌ白，６５ｍ处测定吸收度，于２ｎ结果见表２从表２，结果看出，溶Ｉ０加热８时，出，酸钡中和，Ｏ￣Ｃ小取碳水浴浓缩至ｌｌ为供ｍ，液在６０分钟内稳定。试液。取Ｄ葡萄糖、一糖、一一Ｄ果Ｄ甘露糖、一Ｄ半乳糖各２ｍ，．ｇＯ

蒽酮——硫酸比色法测定枇杷叶中可溶性多糖的含量

蒽酮——硫酸比色法测定枇杷叶中可溶性多糖的含量摘要：目的：建立枇杷叶中可溶性多糖的含量测定方法。

方法：采用蒽酮—硫酸比色法。

结果：显示624nm处有最大吸收峰，线性关系较好(r=0.9999)，平均回收率为99.58%(n=5，RSD=2.85%)，枇杷叶可溶性多糖的含量为8%以上。

结论：该方法快速准确、重现性好，可为枇杷叶中水溶液多糖的检测提供参考方法。

关键词：枇杷叶多糖；蒽酮—硫酸比色法；含量测定枇杷叶为蔷薇科(Rosaceae)植物枇杷(Eriobotrya japonica Thunb Lindl)的干燥叶，在我国已有2200多年的栽培历史。

目前已报道枇杷叶中熊果酸和齐墩果酸的含量测定方法，但是采用蒽酮比色法测定枇杷叶中水溶性多糖含量方法的研究报道较少[1]。

本试验探讨了枇杷叶中水溶性多糖的含量测定方法，旨在为今后产业化利用枇杷资源的含量检测提供参考。

1 材料试验用枇杷叶采自成都中医药大学峨嵋学院植物种植园，由王书林教授鉴定为蔷薇科(Rosaceae)植物枇杷(Eriobotrya japonica Thunb Lindl)的干燥叶。

1.1 试药无水葡萄糖(AR)、枇杷叶、蒽酮(AR)、硫酸(AR)、无水乙醇。

1.2 主要仪器设备UV2450紫外-可见分光光度计、R-201旋转蒸发仪、101-2A电热恒温鼓风干燥箱、W201C数控恒温水浴锅、SHB-Ⅲ循环水真空泵、2G 10-2.4A离心机。

2 方法2.1 样品溶液的制备将枇杷叶洗涤后于60℃干燥，粉碎备用。

精密称取约10g，加水150mL，在80℃回流提取3h[1]，趁热过滤，重复提取一次，合并上述滤液，离心，上清液减压浓缩至约25mL，精密吸取浓缩液10mL，加乙醇调含醇量至含乙醇量为85%，密闭置4℃冰箱中静置过夜。

回收乙醇，沉淀用水适量超声溶解，摇匀定容至50mL，精密吸取上述定容液0.5mL用水定容至100mL作为待测液。

2.2 标准液的配制精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖100.00mg，加蒸馏水100mL，配置成浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液备用。

蒽酮-硫酸法测多糖

蒽酮硫酸比色法测定多糖含量之青柳念文创作一. 实验原理糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色.该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比.该法有很高的活络度，糖含量在30 µg左右就可以停止测定.二. 试剂器材蒽酮试剂：紧密称取0.1g蒽酮，加80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀.当日配制使用；葡萄糖尺度液：将无水葡萄糖置于五氧化二磷干燥器中，12hr后紧密称取100mg，用蒸馏水定容至100ml；其他器材：分析天平、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等.三. 操纵步调样品的测定将样品溶液糖浓度调整到测定范围，切确吸取2mL置于干燥干净试管中，在每支试管中当即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min.取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每一个浓度做23个重复.在625nm波长下迅速测定各管吸光值.根据葡萄糖含量的尺度曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量. 四. 注意事项该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不单可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包含淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量.在没有需要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多费事，因此，有特殊的应用价值，但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，否则会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差.分歧的糖类与蒽酮试剂的显色深度分歧，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因分歧糖类的比例分歧造成误差，但测定单一糖类时则可防止此种误差.。

蒽酮_硫酸比色法测定麦冬多糖的含量_

·40 ·

安徽医药 A nhui Medical and Pharm aceutical Jou rnal 2003 Feb ;7 (1)
硫酸镁注射液细菌内毒素检查法的可行性研究
李凤华张克俊
(安徽省和县人民医院药剂科 ,和县 238200)
摘要目的建立硫酸镁注射液的细菌内毒素检测方法。方法按《中国药典》二部 2000 年版附录细菌内毒素检查法 ,考察硫酸镁注射液对细菌内毒素法检查的干扰作用。结果硫酸镁注射液稀释 10 倍 ,对细菌内毒素法无干扰作用。结论细菌内毒素检查法可代替家兔热原检查法。关键词硫酸镁注射液 ;细菌内毒素检查法 ;热原检查法 ;干扰试验
14. 7 23. 0227 12. 0 21. 0319 13. 8 21. 3464 11. 7 18. 2402
回收率 ( %) 99. 74
102. 14 104. 61 103. 34 102. 46 ±2. 07
2. 02
2. 2. 6 精密度试验从同一样品中取出相同量溶液 6 份 ,测定麦冬多糖的含量 , 结果为 71129 % ±0128 % ( RSD 为 0139 %) 。 2. 2. 7 样品的含量测定精密称取麦冬多糖精制品约 20 mg ,加水溶解并定容至 100 ml 作为供试品。取溶液适量 ,按 21214 方法操作 ,626 nm 处测定吸收值。代入工作曲线方程 , 计算出供试品麦冬多糖的含量 , 结果为 81158 %、6911 %、 71136 %、6811 %、82145 %( n = 5) 。 3 讨论 3. 1 苯酚 - 硫酸和蒽酮 - 硫酸比色法测定多糖的含量为两
able. KEY WORDS Radix Ophiogonis ; ant hrone2sulphuric acid colrimetry ; content determination

蒽酮_硫酸比色法测定玉竹多糖含量的研究

蒽酮2硫酸比色法测定玉竹多糖含量的研究杨　辉(南京医药合肥天星有限公司,安徽合肥　230061)关键词:玉竹;蒽酮2硫酸比色法玉竹多糖是中药玉竹Polygonatum odoratum (M ill .)D ruce的主要有效成分,含量测定中国药典一部2005年版采用苯酚2硫酸比色法[1]。

我们在实际工作中发现,这种方法受试剂的影响很大,并造成误差。

本文以水提醇沉方法精制玉竹多糖,以蒽酮2硫酸比色法测定玉竹多糖的含量,并对测定方法的可行性进行研究,报道如下。

1　仪器与试药1.1　仪器　HP8453紫外2可见分光光度计(美国惠普);TG328A 型电光分析天平(上海分析天平厂)。

1.2　试药　玉竹购于合肥市医药公司、无水葡萄糖(AR,中国上海曹杨第二试剂厂)、蒽酮(AR,中国医药集团上海化学试剂公司)、硫酸(AR,中国淮南市化学试剂厂)。

2　实验方法与结果2.1　玉竹多糖的提取与精制　玉竹适量,切成薄片,加6倍量水煎煮提取3次,每次1h,提取过程中应不断搅拌,提取液合并,过滤,减压浓缩至约为原体积的五分之一,浓缩液加乙醇至醇浓度90%以上,静置,倾去上清液,沉淀物以95%乙醇洗涤即得玉竹多糖粗提取物,再用少量无水乙醇和乙醚洗涤除去可能含有的少量脂溶性成分,80℃干燥即得玉竹多糖精制品,得率约为10%。

2.2　波长选择及工作曲线的建立　称取干燥恒重的葡萄糖适量,加水溶解使成118.6mg ・L -1作对照品溶液。

取对照品溶液0、0.5m l 置具塞试管内,分别加水1.0、0.5m l,加入新鲜配制的蒽酮试剂(0.2%蒽酮的80%硫酸溶液)8.0m l 沸水浴加热10m in,迅速置冰水浴冷却10m in 后,以首管为空白,在460～660n m 处扫描,结果在626±1n m 处有最大吸收,因此,选择测定波长为626n m,结果见图1。

称取干燥恒重的葡萄糖适量,加水溶解使成230.0mg ・L -1,精密量取0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0m l 置具塞试管内,加水1.0m l,再加入新鲜配制的蒽酮试剂(0.2%蒽酮的80%硫酸溶液)8.0m l 沸水浴加热10m in,迅速置冰水浴冷却10m in 后,以首管为空白,在626n m 处测定吸收度,以浓度对吸收度作工作曲线得方程为C =0.61312+25.285×A (r 2=0.9981)。

蒽酮_硫酸法测定板栗多糖含量

河北科技师范学院学报第24卷第2期,2010年6月Journa l of H ebe iN o rm al U niversity of Science&T echno l ogy V o l.24N o.2June2010蒽酮硫酸法测定板栗多糖含量李润丰,常学东,狄小丽(河北科技师范学院食品科技学院,河北秦皇岛,066600)摘要:采用蒽酮硫酸法测定板栗多糖含量并对其测定条件进行优化。

结果表明,蒽酮硫酸法测定板栗多糖的适宜操作条件为:加入2g/L蒽酮硫酸溶液4mL,在沸水浴中加热3m i n,自来水冷却40m i n后在10 m i n内于波长600n m下读取吸光度。

蒽酮硫酸溶液需要现配现用。

多糖含量控制在0.02~0.06g/L之间为宜。

蒽酮硫酸法测定板栗多糖含量的精密度实验RSD值为0.792%,平均加样回收率为107.2%,R SD值为4.6%。

用本方法测定板栗中多糖含量为12.67%。

关键词:板栗多糖;蒽酮硫酸法;测定中图分类号:R284.1 文献标志码:A 文章编号:1672 7983(2010)02 0054 06板栗是中国栽培最早的果树之一,约已有2000~3000年的栽培历史。

板栗营养价值很高,甘甜芳香,含淀粉51%~60%,蛋白质5.7%~10.7%,脂肪2.0%~7.4%,多糖、粗纤维、胡萝卜素、维生素A、B、C及钙、磷、钾等矿物质,可供人体吸收和利用的养分高达98%。

栗果具有养胃健脾、补肾强筋、活血止血之功效,因而又具有较高的医疗保健价值,深受国内外消费者的青睐[1]。

目前,板栗作为一种营养价值高又具有重要的养生保健功能、药食两用的果中珍品,其营养和保健价值还远未得到有效开发、利用。

因而充分运用现代科学技术手段对板栗的营养保健功能的物质进行系统分析,对功能成分进行提取和开发,使之商品化、产业化,生产理想保健食品,进行深加工和新产品研究,提高附加值,具有重要的意义,开发应用前景将十分广阔[2、3]。

蒽酮-硫酸法测多糖

蒽酮硫酸比色法测定多糖含量之阳早格格创做一. 真验本理糖类正在较下温度下可被浓硫酸效率而脱火死成糠醛或者羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱火缩合，产死糠醛的衍死物呈蓝绿色.该物量正在620 nm处有最大吸支，正在150 µg/mL范畴内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比.该法有很下的敏捷度，糖含量正在30 µg安排便能举止测定.两. 试剂器材蒽酮试剂：粗稀称与0.1g蒽酮，加80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀.当日配制使用；葡萄糖尺度液：将无火葡萄糖置于五氧化两磷搞燥器中，12hr后粗稀称与100mg，用蒸馏火定容至100ml；其余器材：分解天仄、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器战兴液缸等.三. 支配步调样品的测定将样品溶液糖浓度安排到测定范畴，透彻吸与2mL置于搞燥净净试管中，正在每支试管中坐时加进蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后所有置于沸火浴中加热15min.与出，赶快浸于冰火浴中热却15min，每个浓度搞23个沉复. 正在625nm波少下赶快测定各管吸光值.根据葡萄糖含量的尺度直线，由样品溶液吸光值估计百般品溶液中糖的浓度，并估计其糖含量. 四. 注意事项该法的特性是险些可测定所有的碳火化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有鳏糖类战多糖类，包罗淀粉、纤维素等（果为反应液中的浓硫酸可把多糖火解成单糖而爆收反应），所以用蒽酮法测出的碳火化合物含量，本量上是溶液中局部可溶性碳火化合物总量.正在不需要粗致区分百般碳火化合物的情况下，用蒽酮法不妨一次测出总量，省来许多贫苦，果此，有特殊的应用价格，但是正在测定火溶性碳火化合物时，则应注意切勿将样品的已溶解残渣加进反应液中，可则会果为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂爆收反应而减少了测定缺面.分歧的糖类与蒽酮试剂的隐色深度分歧，果糖隐色最深，葡萄糖次之，半乳糖、苦露糖较浅，五碳糖隐色更浅，故测定糖的混同物时，常果分歧糖类的比率分歧制成缺面，但是测定简单糖类时则可预防此种缺面.。

蒽酮-硫酸法测多糖

蒽酮硫酸比色法测定多糖含量之五兆芳芳创作一. 实验原理糖类在较低温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色.该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/mL规模内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比.该法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定.二. 试剂器材蒽酮试剂：精密称取0.1g蒽酮，加80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀.当日配制使用；葡萄糖尺度液：将无水葡萄糖置于五氧化二磷枯燥器中，12hr后精密称取100mg，用蒸馏水定容至100ml；其他器材：阐发天平、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等.三. 操纵步调样品的测定将样品溶液糖浓度调整到测定规模，精确吸取2mL置于枯燥洁净试管中，在每支试管中立即参加蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于滚水浴中加热15min.取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做23个重复.在625nm波长下迅速测定各管吸光值.按照葡萄糖含量的尺度曲线，由样品溶液吸光值计较各样品溶液中糖的浓度，并计较其糖含量. 四. 注意事项该法的特点是几近可测定所有的碳水化合物，不单可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包含淀粉、纤维素等（因为反响液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而产生反响），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量.在没有需要细致划分各类碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值，但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣参加反响液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂产生反响而增加了测定误差. 不合的糖类与蒽酮试剂的显色深度不合，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混杂物时，常因不合糖类的比例不合造成误差，但测定单一糖类时则可避免此种误差.。

蒽酮-硫酸比色法测定甘草残渣中多糖含量

３实验结果与分析
３１标准曲线的绘制．
２实验方法
２１甘草多糖的提取．
分别量取葡萄糖标准溶液００１０２０３０４、．、．、．、．、
精密称取提取过甘草酸后的甘草残渣５，０ｇ石油醚回流脱脂２ｈ回收石油醚，渣挥干溶剂后用，残
２２溶液的配制．２２１标准溶液的配制．．
甘草是临床常用中草药材之一，药用根，其性甘、，平具有补气健脾、热解毒、清润肺止咳之功效。甘草中的有效药用成分很多，甘草酸、如甘草多糖、甘草黄酮等＿ｌＪ。本实验为提高甘草的利用率，从提取过甘草酸后的甘草残渣中提取出了药用价值较高的水溶性甘草多糖，并采用蒽酮一硫酸比色法［其２１对
３ｉ，０ｎ过滤合并滤液，ｍ减压浓缩至１０ｍ，５Ｌ用氯仿萃取多次，以除去蛋白质，过滤后，滤液加入９％乙５
醇使乙醇含量达８％，置过夜，淀多糖并过滤，０静沉滤饼依次用无水乙醇、酮、醚多次洗涤，丙乙干燥，
线，图１见。由图１看出，００５７００５８ｍ／可在．－．ｅｍＥ范围０４
收稿日期：０００ — ３２１—５２
８％乙醇浸泡３ｈ于８０，０℃下加热１，滤，药渣ｈ过将用１５０ｍＬ蒸馏水浸泡过夜，然后于９００℃温浸提取１，再用５０ｍＬ蒸馏水于９ｈ００℃重复温浸提取

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量

创作编号：GB8878185555334563BT9125XW创作者：凤呜大王*蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量一. 实验原理糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色。

该物质在620 nm 处有最大吸收，在150 µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

该法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定。

二. 试剂器材蒽酮试剂：精密称取0.1g蒽酮，加80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀。

当日配制使用；葡萄糖标准液：将无水葡萄糖置于五氧化二磷干燥器中，12hr后精密称取100mg，用蒸馏水定容至100ml；其他器材：分析天平、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等。

三. 操作步骤葡萄糖标准曲线的制作取7支具塞试管，按下表数据精密配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液，每个浓度做2-3个重复：管号0 1 2 3 4 5 6 标准葡萄糖溶液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 蒸馏水/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。

取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min。

在625nm波长下以第1管为空白，迅速测定其余各管吸光值。

以标准葡萄糖含量( g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。

样品的测定将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。

取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个重复。

在625nm波长下迅速测定各管吸光值。

根据葡萄糖含量的标准曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。

蒽酮—硫酸比色法测定松花粉中粗多糖的含量

蒽酮—硫酸比色法测定松花粉中粗多糖的含量李艳艳;郑萍【摘要】优化蒽酮-硫酸比色法测定松花粉中粗多糖含量的条件,并对分析方法进行了验证.实验优化了松花粉粗多糖的浸提时间、浸提温度、多糖的显色时间、显色温度、显色剂的用量等条件.方法的平均加标回收率为98.81％,RSD为2.01％,精密度实验RSD为1.68％,线性范围:16.5-99 μg/mL.结果表明:所优化的分析方法准确、精密、简便、快速,可应用于实际样品的检测.%Optimization of anthracene ketone-sulfuric acid colorimetry to determine the content of crude polysaccharide in pine pollen conditions,and the analysis method is verified.Experiment to optimize the pine pollen polysaccharide extraction time,extraction temperature,polysaccharide chromogenic time,color temperature and the dosage of the chromogenic agent conditions.Results show that the optimization analysis method isaccurate,precise,simple,rapid and has been applied to actual sample detection.【期刊名称】《云南师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2017(037)004【总页数】6页(P58-63)【关键词】松花粉;多糖;含量测定;蒽酮-硫酸比色法【作者】李艳艳;郑萍【作者单位】云南师范大学职业技术教育学院,云南昆明 650092;云南师范大学职业技术教育学院,云南昆明 650092【正文语种】中文【中图分类】Q946.3松花粉药名松花、松黄，为鲜黄色或者淡黄色，其性味甘平无毒[1].松花粉中蕴含多种营养物质，能调节人体的多种生理功能，具有较高的营养价值[2]，其中的多糖类具有增强免疫力和抗氧化作用，所以松花粉中多糖含量的测定对松花粉保健及药用功能的开发具有十分重要的意义[3].组成松花粉多糖的单糖主要有葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸[4]，目前没有专门测定松花粉粗多糖含量的行业或企业标准.多糖含量的测定方法可分为两类，一类是利用糖的还原性进行测定，如斐林滴定法、3，5-二硝基水杨酸盐(DNS)比色法，另一类是利用多糖在强酸性条件下脱水生成糠醛或其衍生物，然后再与酚类或胺类化合物缩合，生成有色的物质，再进行比色测定，包括苯酚-硫酸法、蒽酮-硫酸法、地衣酚-硫酸法[5].苯酚-硫酸法稳定性好，但是不同的单糖显色反应后的最大吸收波长有差异，斐林滴定法得到的是松花粉的总糖含量，淀粉、糊精的干扰较大，而蒽酮-硫酸法的灵敏度较高，操作快速简便，其呈色强度与溶液中糖的浓度成正比，可在特定波长下比色定量，具有特殊的应用价值[6].本研究以蒽酮-硫酸法测定松花粉中粗多糖的含量，对蒽酮-硫酸法的测定条件进行优化，排除了样品中淀粉、糊精的干扰，建立了准确可靠、快速简便测定松花粉粗多糖含量的方法[7].多糖经热水浸泡提取后，用乙醇沉淀分离，除去可溶性杂质的干扰[8]，再用热水溶解沉淀物后，加入硫酸-蒽酮溶液，多糖水解后[9]，在较高温度可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或其衍生物，再与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色.该物质在620 nm处有最大吸收，在一定浓度范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比[10-11].反应的化学方程式见图1.实验采用葡萄糖标准品作为对照.主要参考标准：中华人民共和国供销合作行业标准GH/T1030-2004[12]；地方性企业标准Q/YLY 0002 S-2016[13].3.1 仪器与试剂紫外可见分光光度计：SP-2006UV，日本岛津公司；分析天平：ST1114，上海奥豪斯仪器有限公司；离心机：TG-16，成都市苏净科学器材有限公司；水浴锅：HH.S11-1，太原仪诚实验室设备有限公司.化学标准品：葡萄糖标准品(含量：98%，上海普誉科贸有限公司)；蒽酮、浓硫酸：分析纯；市售的松花粉及松花粉片.3.2 实验溶液的配制3.2.1 葡萄糖标准溶液准确称取经过98～100 ℃干燥至恒重的分析纯葡萄糖0.016 5 g，加水溶解，并定容至100 mL，混匀.此溶液每1 mL含有165 μg葡萄糖[12].3.2.2 蒽酮-硫酸溶液称取0.2 g蒽酮置于烧杯中，缓慢加入100 mL浓硫酸，溶解后呈黄色透明液体，临用新配.3.2.3 松花粉多糖样品溶液取精密称定样品约1 g，精密称定，置于100 mL容量瓶中，加50 mL蒸馏水，在90 ℃水浴中加热40 min，冷却至室温，用水定容到刻度，摇匀，过滤.取续滤液15 mL置于100 mL的离心瓶中，加75 mL乙醇搅拌均匀，在离心机中以4 000 r/min离心10 min，小心弃除上清液，再加15 mL热水冲洗离心瓶中的沉淀物，以4 000 r/min离心10 min，小心用吸管将上清液吸去，得沉淀物.然后用热水分次溶解沉淀，冷却，定容至100 mL的容量瓶，过滤，弃除初滤液，收集续滤液，即为多糖样品溶液.3.3 显色条件的选择3.3.1 最大吸收波长的选择准确吸取葡萄糖标准溶液(165 μg/mL)1 mL置于25 mL具塞比色管中，加入0.2%蒽酮-硫酸溶液4 mL，充分混匀，在80 ℃恒温水浴锅中水浴10 min，取出，冷却至室温，显色后，溶液呈蓝绿色，以空白试剂为参比，1 cm比色皿测定，进行同样的显色操作，于400～700 nm波长范围内进行扫描，结果见图2.由图2的扫描结果可知，显色溶液在620 nm处有最大吸收，故检测波长设置为620 nm.3.3.2 显色温度的确定分别准确吸取1 mL松花粉多糖样品溶液置于5只25 mL具塞比色管中，加入0.2%蒽酮-硫酸溶液4 mL，充分混匀，分别于20 ℃、40 ℃、60 ℃、80 ℃、100 ℃恒温水浴锅中恒温10 min，取出，冷却至室温，在620 nm波长以试剂空白溶液为参比，1 cm比色皿测定吸光度值.结果见图3.由图3可以看出，在20-80 ℃,吸光度值逐渐增大，在80-100 ℃，吸光度值逐渐减小，在80 ℃吸光度值最大，故最佳显色温度设定为80 ℃.3.3.3 显色时间的确定分别准确吸取1 mL松花粉多糖样品溶液置于5只25 mL具塞比色管中，加入0.2%蒽酮-硫酸溶液4 mL，充分混匀，放入80 ℃的恒温水浴锅中，分别水浴6 min、8 min、10 min、12 min、14 min，取出，冷却至室温，在620 nm波长以试剂空白溶液为参比，1 cm比色皿测定吸光度值[16].结果见图4.由图4可以看出，在6-14 min，吸光度值减小，在6-8 min和10-14 min，吸光度值减小幅度较大，在8-10 min之间，吸光度值基本保持稳定，故选8 min作为最佳显色时间.3.3.4 显色剂最佳用量的确定分别准确吸取1 mL松花粉多糖样品溶液置于6只25 mL具塞比色管中，分别加入0.2%蒽酮-硫酸溶液4 mL、5 mL、6 mL、7 mL、8 mL、9 mL，充分混匀，在80 ℃恒温水浴锅中水浴10 min，取出，冷却至室温，在620 nm波长以试剂空白溶液为参比，1 cm比色皿测定吸光度值.结果见图5.由图5可以看出，吸光度值随蒽酮-硫酸的用量的增加而减小，当蒽酮-硫酸的用量为4 mL时，吸光度值最大，因此，显色剂最佳用量为4 mL.3.4 多糖提取最佳条件的选择3.4.1 浸提温度的确定分别取样品约1 g，精密称定，置于5个100 mL容量瓶中，各加50 mL蒸馏水，分别置于20 ℃、40 ℃、60 ℃、80 ℃、90 ℃恒温水浴锅中水浴40 min，冷却至室温，定容到刻度，摇匀，过滤.分别取此待测液15 mL置于100 mL的离心瓶中，各加75 mL乙醇搅拌均匀，在离心机中以4 000 r/min离心10 min，并小心除去上清液，再加15 mL热水冲洗离心瓶中的沉淀物，以4 000 r/min离心10 min，小心用吸管将上清液吸去，得沉淀物.然后用热水分次溶解沉淀，冷却，分别定容至100 mL的容量瓶，过滤，弃去初滤液，收集续滤液，收集的续滤液即为多糖样品溶液.分别准确吸1 mL松花粉多糖样品溶液置于25 mL具塞比色管中，按照实验确定的最佳显色条件分别测定其吸光度，计算多糖的含量[15]，结果见图6.由图6可以看出，随着浸提温度的升高多糖得率增加，当提取温度到达90 ℃，多糖得率最高，故浸提最佳温度为90 ℃.3.4.2 浸提时间的确定分别取样品约1 g，精密称定，置于5个100 mL容量瓶中，各加50 mL蒸馏水，在沸水浴中分别加热20 min、30 min、40 min、50 min、60 min、70 min，冷却至室温，定容到刻度，摇匀，过滤.按照实验确定的最佳显色条件分别测定其吸光度，计算多糖的含量.结果见图7.由图7看出，当浸提时间为40 min时，多糖得率最高，且此时松花粉浸提过滤速度比较快，因此，浸提最佳时间为40 min.3.5 松花粉粗多糖质量百分浓度的计算方法采用外标工作曲线法，利用如下公式计算粗多糖质量百分浓度：X=×100%式中X表示样品中粗多糖含量，单位g/100 g；m1表示根据标准曲线查得的样品待测液中粗多糖的含量，单位μg；m表示取样量，单位g；n表示稀释倍数.4.1 标准曲线的绘制准确吸取葡萄糖标准溶液(165 μg/mL)0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL(相当于葡萄糖16.5、33、49.5、66、82.5、99 μg/mL)，分别置于25 mL比色管中，加入0.2%蒽酮-硫酸溶液4 mL，充分混匀，在80 ℃恒温水浴锅中水浴10 min，取出，冷却至室温，在620 nm波长以试剂空白溶液为参比，1 cm比色皿测定吸光度值.以葡萄糖质量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线(如图8)，其回归方程Y=0.007 5X-0.005 4，相关系数r=0.999 6.4.2 精密度实验准确吸1 mL松花粉多糖样品溶液置于25 mL具塞比色管中，加入0.2%蒽酮-硫酸溶液4 mL，充分混匀，在80 ℃恒温水浴锅中水浴恒温10 min，取出，冷却至室温，在620 nm波长以试剂空白溶液为参比，1 cm比色皿测定吸光度值.平行测定5次.结果见表1.RSD=1.68%(n=5)<5%，说明该方法的精密度较高，方法可靠.4.3 稳定性实验准确吸1 mL松花粉多糖样品溶液置于25 mL具塞比色管中，加入0.2%蒽酮-硫酸溶液4 mL，充分混匀，在80 ℃恒温水浴锅中水浴10 min，取出，冷却至室温，在620 nm处扫描1 h内的时间曲线[16],结果见图8.从图8中可以看出显色后1小时内测定，数据都是稳定的.4.4 加标回收率实验分别准确称取0.5 g松花粉，按松花粉多糖样品的处理步骤得到多糖样品溶液，分别加入0 mL、0.2 mL、0.3 mL的葡萄糖标准溶液(165 μg/mL)，按照实验确定的最佳显色条件分别显色、测定其吸光度，根据葡萄糖的检出量，计算其回收率.结果见表2.回收率计算公式如下：回收率(%)×100%样品加样平均回收率为98.81%，表明本方法的准确度较高.4.5 淀粉、糊精干扰排除选择不同厂家生产的松花粉原料及对应制备的松花粉片剂3批，将松花粉片剂研磨成粉，分别称取松花粉及研磨成粉的松花粉片剂样品各约1 g，精密称定，置于6个100 mL容量瓶中，将松花粉片剂粉加入90 ℃热水搅拌后，放置一夜，而松花粉不做该处理，然后按照优化浸提条件制备松花粉多糖样品溶液，再按照优化显色条件测定6组吸光度值，计算粗多糖的百分含量.结果见表3.从表3知，对于同一厂家生产的相同质量的松花粉及松花粉片剂，通过将松花粉片剂磨成粉并用热水浸泡一夜后，测得两者的多糖含量基本相同，间接证明淀粉、糊精基本不干扰多糖的测定.实验采用水提取醇沉淀法，提取松花粉中的粗多糖，后用蒽酮-硫酸法，以葡萄糖作为对照品，探索松花粉粗多糖的最佳浸提条件及显色条件[17].确定了松花粉粗多糖最佳测定条件为：浸提时间40 min，浸提温度90 ℃，测定波长620 nm，显色温度80 ℃，显色时间10 min，蒽酮-硫酸用量4 mL，显色加水量0 mL(原标准中显色加水量为10 mL，而经实验证明当加水量超过2 mL后，溶液出现絮状物质，不能准确测定吸光度，经实验验证，显色时加水仅起稀释溶液的作用，故确定显色加水量为0 mL[18])，对该法的精密度、稳定性、加标回收率及干扰性实验进行了验证[19].蒽酮-硫酸法所用仪器设备简单，操作简便.本次实验对原标准Q/YLY 0002 S-2016具体在松花粉粗多糖测定时的方法和条件进行了优化与改善，结果见表4.具有实际的应用价值，已被云南云测质量检验有限公司应用于相关食品检测中.【相关文献】[1] 马荣驰，彭光华，李春美，等.正交实验法优选马尾松花粉多糖的提取工艺[J].食品工业科技，2007，21(2):11-16.[2] 国家药典委员会．中华人民共和国药典[M]．2010版.北京:化学工业出版社，2010.[3] CEVDET NERGIZ,ICLAL DONMEZ.Chemical composition and nutritive value of Pinea L seeds[J].Food Chemistry，2004，86:365-368.[4] 逯南南，石丽花，刘辉,等．马尾松花粉多糖中的单糖组分的HPLC分析[J]．中国野生植物资源，2008，27(2)：61-63．[5] 刘敏.油松花粉多糖分离纯化及抗氧化活性研究[D].天津：天津科技大学，2010.[6] 范传颍，陶正明，吴志刚．苯酚硫酸法与蒽酮硫酸法测定铁皮石斛中多糖含量的比较[J]．浙江农业科学，2013 (7)：799-801.[7] 廖伟玲，翟旭峰，娄勇军,等.复方灵芝胶囊中粗多糖测定方法研究[J].食品与药品，2015，17(5)：338-342.[8] 缪月秋，顾龚平，吴国荣.植物多糖水解及其产物的研究进展[J].中国野生植物资源，2005，24(5)：4-7.[9] 佟茵，吴红娟.植物多糖的提取方法研究进展[J].中医药信息，2012，35(5)：108-110.[10]易剑平，毕雅静，宋秀荣,等.蒽酮-硫酸法测定枸杞多糖质量分数的研究[J].北京工业大学学报，2005，31(6):640-646.[11]陈莎莎，洪丽玲，林继辉.高效液相色谱法分析龙眼多糖的单糖组成[J].云南民族大学学报：自然科学版，2015，24(5)：369-372.[12]中华人民共和国供销合作行业标准GH/T1030-2004 .[13]地方性企业标准Q/YLY 0002 S-2016 .[14]王玉玺，胡欣.蒽酮-硫酸法测定地笋多糖含量的研究[J].化工计通讯，2016，42(4):154-162.[15]LEIRO J M,CASTRO R,ARRANZ J A,et al.Immunomodulating activities of acidic sulphated polysaccharides obtained from the seaweed Ulva rigidaC．Agardh[J]．International Immunopharmacology，2007，7(7)：879-888.[16]周勇，易延逵，杨晓敏,等.香菇中多糖含量测定方法的比较研究[J].食品研究与开发，2016，37(13)：124-128.[17]LIU Z W.Effects of Different Extraction Methods on Extraction Rate of Polysaccharide from Sonchus oleraceus L.[J].Medicinal Plant,2010 (5):31-32,35.[18]马趣环，石晓峰，王新娣等.苯酚硫酸法与蒽酮硫酸法测定糙叶败酱多糖含量的比较研究[J].西部中医药，2015，28(12)：30-33.[19]罗爱勤，陈亮，李菁.灵芝孢子多糖含量不同方法测定的比较[J].中国中医药现代远程教育，2016，14(19):132-134.。

蒽酮硫酸法测多糖优选稿

蒽酮硫酸法测多糖内部编号：（YUUT-TBBY-MMUT-URRUY-UOOY-DBUYI-0128）蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量?一.实验原理糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色。

该物质在620nm处有最大吸收，在150μg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

该法有很高的灵敏度，糖含量在30μg左右就能进行测定。

二.试剂器材蒽酮试剂：精密称取0.1g蒽酮，加80%浓H2SO4100mL使溶解，摇匀。

三.操作步骤样品的测定将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。

取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个重复。

在625nm波长下迅速测定各管吸光值。

根据葡萄糖含量的标准曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。

四.注意事项该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。

在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值，但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，否则会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。

不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时则可避免此种误差。

蒽酮-硫酸法测多糖

蒽酮硫酸比色法测定多糖含量之袁州冬雪创作一. 实验原理糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色.该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比.该法有很高的活络度，糖含量在30 µg左右就可以停止测定.二. 试剂器材蒽酮试剂：紧密称取0.1g蒽酮，加80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀.当日配制使用；葡萄糖尺度液：将无水葡萄糖置于五氧化二磷干燥器中，12hr后紧密称取100mg，用蒸馏水定容至100ml；其他器材：分析天平、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等.三. 操纵步调样品的测定将样品溶液糖浓度调整到测定范围，切确吸取2mL置于干燥干净试管中，在每支试管中当即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min.取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每一个浓度做23个重复.在625nm波长下迅速测定各管吸光值.根据葡萄糖含量的尺度曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量. 四. 注意事项该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不单可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包含淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量.在没有需要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多费事，因此，有特殊的应用价值，但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，否则会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差.分歧的糖类与蒽酮试剂的显色深度分歧，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因分歧糖类的比例分歧造成误差，但测定单一糖类时则可防止此种误差.。

蒽酮浓硫酸法测定多糖含量显色条件的研究

1 材料与方法
1 . 1 材料
葡萄糖:分析纯;9 8 % 浓硫酸:分析纯;蒽酮:分析纯;无水葡萄糖:标准品。0.1%、0.2%、0.33%蒽酮浓硫酸
显色剂：分别称取 0.1、0.2、0.33g 蒽酮分别溶于浓硫酸中并定容至100m L贮于棕色瓶中。40mg/L葡萄糖试
液 :称取 0.1g 匍萄糖，用水溶解并定容成 100mL，再经稀释而成。1mg/mL标准匍萄糖溶液:精确称取100mg
无水葡萄糖标准物质以水溶解并定容至 100m L ，4 丈保存备用。
1 . 2 试验仪器
分光光度计:722S(上海精华科技有限公司），电子天平JH 3102(上海精科天美科学仪器有限公司），电子
分析天平:TD—214(北京丹佛仪器有限公司），刻度吸量管：天玻 A 级、恒温水浴锅：HWS— 12(上海一恒科学
)
作者简介：李雪珍（1970-) ，女，工程师，从事蔗糖深加工及副产物综合利用研究。 E-m ail:13769406789@
通信作者：郭家文（1979-) ，男，研究员，从事甘蔗产业综合技术研究。 E-m ail:79jwguo@
16
Sugar Crops of China
究。研究表明：90°C 恒温水浴下，10m g/L ~ 100m g/L 葡萄糖含量范围内，浓硫酸用量配比3.0m L (A ) 、 2.8m L(B ) 、2.7m L(C ) 、2.6m L(D ) 、2.5m L(E ) 、2.4m L(F ) 、2.2m L(G )7 个试验方案中，C 、D 、E 三个方案较为适宜，并确定了水浴加热时间，分别在5~8m in、6~10m in、7 ~ 1 1m in 达到显色完全稳定。研究的过程和

蒽酮-硫酸法测定芝芪菌质中的多糖含量

物，不仅可显著促进鸡体生长，更有预防禽流感的显著作
用… 。多糖是芝芪菌质的有效成分之一，此，测多糖含因检量是控制芝芪菌质质量的方法之一。笔者采用蒽酮一硫酸法测定芝芪菌质中的多糖含量。
１材料与方法
０１００２００３００４０、．０．０、．０、．０、．００５０的硫酸一蒽酮，匀，水混置
安徽农业科学，ｏｒａｏＡｈｉｇｉｃ．０８，６２：１２ＪｕｎｌｆｎｕＡｒ．Ｓｉ０３（６）１４４—１４５２１２
责任编辑
李菲菲
责任校对
傅真治
蒽酮一硫酸法测定芝芪菌质中的多糖含量
阮鸣南晓学生科系用物究，苏京２１）（京庄院命学药菌研所江南１７１１
ＤｅｅｍｉａｉｎｏｌｓｃｈｉｅＣｏｔｎｔｉｉｉＦｕｎａｂｔｎｃｔｒｎｅ－ＩｆｒｃＡｃｄＭｅｈｏｔｒｎｔｏｆＰｏｙａｅａｒｄｎｅｎＺｈｑｇｌＳｕｓａｅｂｙＡｎｈｏｓｌｕｉｉｔｄｌ
液，水１５ｍｌ分别加入６０ｍ加．，．ｌ浓度为００５０００、．２、．５
由药性基质（黄芪药渣）和营养基质（廉价的农副产品）组成
的 “ 性基质 ” ，一定条件下进行固体双向发酵得到的产全中在
芝芪菌质是应用药用真菌新型固体发酵工程技术— — 中药生物技术研制而成的新型饲料添加剂，是将灵芝接种于

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

Welcome To Download !!! 欢迎您的下载，资料仅供参考！
测所有寡糖类和多糖类，包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值，但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，否则会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时则可避免此种误差。
蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量一. 实验原理糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色。该物质在620 nm处有最大吸收，在150 μg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。该法有很高的灵敏度，糖含量在30 μg左右就能进行测定。二. 试剂器材蒽酮试剂：精密称取0.1g蒽酮，加80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀。当日配制使用；葡萄糖标准液：将无水葡萄糖置于五氧化二磷干燥器中，12hr后精密称取100mg，用蒸馏水定容至100ml；其他器材：分析天平、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等。三. 操作步骤葡萄糖标准曲制一系列不同浓度的葡萄糖溶液，每个浓度做2-3个重复：管号 0 1 2 3 4 5 6 标准葡萄糖溶液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 蒸馏水/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min。在625nm波长下以第1管为空白，迅速测定其余各管吸光值。以标准葡萄糖含量(g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。样品的测定将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个重复。在625nm波长下迅速测定各管吸光值。根据葡萄糖含量的标准曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。四. 注意事项该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可