3种酵母样真菌鉴定方法的比较
发酵食品中菌种的选择和筛选方法研究
发酵食品中菌种的选择和筛选方法研究发酵食品是指利用可食用的微生物（如细菌、酵母菌、真菌等）的代谢过程，对食品中的成分进行转化和改造的食品。
而菌种的选择和筛选方法则是研究发酵食品中的关键环节之一。
本文将介绍一些常见的菌种选择和筛选方法，以及它们在发酵食品生产中的应用。
首先，菌种的选择方法是在众多潜在的菌种中，选择合适的菌种进行发酵。
常见的菌种选择方法包括：1. 文献调研法：通过查阅相关的文献资料，了解各种菌种在特定食品发酵过程中的应用情况和效果，以此为依据进行选择。
2. 试验筛选法：通过实验的方式，将不同的菌种与发酵基质结合，观察其生长情况、代谢产物以及对食品品质的影响，选出最佳菌种进行后续发酵。
3. 现有菌种的再利用法：在发酵食品生产中，已经存在一些被广泛应用的菌种，如酵母菌、乳酸菌等，可以直接利用这些已有的菌种，无需选择新的菌种。
接下来，菌种的筛选方法是从大量的发酵菌中，找出具有优良特性的菌株。
常见的菌种筛选方法包括：1. 菌株的生理生化特性筛选：通过测定菌株的生长速率、代谢产物、耐受性等生理生化特性，来筛选具有优良特性的菌株。
2. 抗菌活性筛选：利用菌株的抗菌活性来对菌株进行筛选。
例如，使用抗生素对菌株进行抗性测试，或者利用菌株的抗菌代谢物对其他菌种进行抑制。
3. 基因工程筛选：通过基因工程技术对菌株进行改造，使其具有更好的发酵特性。
例如，通过引入外源基因来提高菌株的产物产量或改善发酵过程中的抗性。
在实际的发酵食品生产中，菌种选择和筛选方法的应用十分广泛。
以乳酸菌在乳制品发酵中的应用为例，菌种选择主要考虑到菌株在发酵过程中的代谢特性和产物品质。
例如，乳酸菌的菌株要具有低酸和低丁酸生成量的特性，以使乳制品口感更佳。
而菌株的筛选则可以通过酸奶的发酵试验，观察不同菌株的发酵速率、产酸量以及乳酸呈异构体的比例等指标，选择出最佳的菌株进行扩大生产。
总结来说，菌种的选择和筛选方法对于发酵食品生产至关重要。
酵母样真菌鉴定流程及药敏试验方法
酵母样真菌鉴定流程及药敏试验方法English response:Identification of yeast-like fungi and drug susceptibility testing are important steps in the diagnosis and treatment of fungal infections. The process of identifying yeast-like fungi involves several steps, including macroscopic and microscopic examination, biochemical tests, and molecular methods.First, the macroscopic examination involves observing the colony morphology on agar plates. Different species of yeast-like fungi have characteristic colony appearances, such as color, texture, and shape. This can provide initial clues to the identity of the fungus.Next, the microscopic examination involves observing the cellular morphology of the fungi using a microscope. This can reveal important features such as the presence of pseudohyphae, true hyphae, budding patterns, and theformation of spores. These characteristics can help narrow down the possible species of the fungus.Biochemical tests are then performed to further identify the yeast-like fungi. These tests may include carbohydrate assimilation tests, enzyme assays, and assimilation of nitrogen sources. The results of these tests can be compared to known patterns for different fungal species to aid in identification.In addition to traditional methods, molecular techniques such as polymerase chain reaction (PCR) and sequencing of specific genes can also be used for fungal identification. These methods can provide rapid and accurate identification of yeast-like fungi.Once the yeast-like fungi have been identified, drug susceptibility testing can be performed to determine the most effective antifungal treatment. The standard method for drug susceptibility testing of yeast-like fungi is the broth microdilution method. This method involves exposing the fungi to different concentrations of antifungal drugsin a liquid medium and observing the growth or inhibition of the fungi.In summary, the identification of yeast-like fungi involves a combination of macroscopic and microscopic examination, biochemical tests, and molecular methods. Once identified, drug susceptibility testing can help guide the selection of appropriate antifungal therapy.中文回答：酵母样真菌的鉴定涉及到几个步骤，包括宏观和微观检查、生化试验和分子方法。
菌种鉴定方法大全
菌种鉴定方法大全一、金开瑞菌种鉴定服务简介在细菌/真菌的16/18SrDNA中有多个区段保守性，根据这些保守区可以设计出细菌/真菌通用引物，扩增出细菌/真菌的16/18SrDNA片。
因此，16/18SrDNA可以作为细菌/真菌群落结构分析最常用的系统进化标记分子。
该鉴定手段试用于单种鉴定或者少量混杂菌种鉴定。
金开瑞拥有多种配套的通用菌种鉴定引物，实验周期短，可以帮您快速实现菌种鉴定。
服务流程引物设计合成—PCR扩增16/18S rDNA/ITS—PCR产物纯化—测序，序列比对分析客户提供基因组DNA：要求基因组DNA的浓度≥100 ng/μl，总体积≥20 μl，且无明显降解；平板或斜面：经菌种分离后带有单菌落的新鲜平板或斜面。
最终交付测序结果，BLAST比对得到细菌种属名称服务内容及说明服务名称服务周期（工作日）原核生物/16SrDNA5-7真核生物/18SrDNA5-7真菌ITS序列分析5-7二、菌种鉴定方法介绍（1）常规鉴定常规鉴定内容有形态特征和生理生化特征。
形态特征包括显微形态和培养特征；理化特性包括营养类型、碳氮源利用能力、各种代谢反应、酶反应等。
（2）BIOLOG碳源自动分析鉴定BIOLOG鉴定系统以微生物对不同碳源的利用情况为基础，检测微生物的特征指纹图谱，建立与微生物种类相对应的数据库。
通过软件将待测微生物与数据库参比，得出鉴定结果。
该系统已获美国FDA认可，已逐步应用于食品和饮品企业、环保、海洋生物/水产品、制药、农业微生物、生物治理、化妆品、临床等领域的微生物鉴定试验中。
BIOLOG是一种微生物菌种快速鉴定系统，涉及革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、厌氧菌、酵母、丝状真菌在内近2000种微生物。
（3）分子生物学鉴定应用分子生物学方法从遗传进化角度阐明微生物种群之间的分类学关系，是目前微生物分类学研究普遍采用的鉴定方法。
CICC拥有微生物菌种分类鉴定的分子生物学实验室，配有PCR仪、高速冷冻离心机、电泳仪、HPLC、凝胶成像系统、紫外控温分析系统等先进仪器设备，以及DNAMAN、BIOEDIT、CLUSTALX、TREEVIEW等序列分析软件。
霉菌和酵母菌介绍及检测方法
霉菌和酵母菌介绍及检测方法一、霉菌和酵母菌介绍：霉菌和酵母菌及其检验酵母菌是真菌中的一大类,通常是单细胞，呈圆形，卵圆形、腊肠形或杆状。
霉菌也是真菌，能够形成疏松的绒毛状的菌丝体的真菌称为霉菌。
霉菌和酵母广泛分布于自然界并可作为食品中正常菌相的一部分。
长期以来,人们利用某些霉菌和酵母加工一些食品，如用霉菌加工干酪和肉，使其味道鲜美;还可利用霉菌和酵母酿酒、制酱；食品、化学、医药等工业都少不了霉菌和酵母。
但在某些情况下,霉菌和酵母也可造成中腐败变质。
由于它们生长缓慢和竞争能力不强，故常常在不适于细菌生长的食品中出现,这些食品是pH低、湿度低、含盐和含糖高的食品、低温贮藏的食品，含有抗菌素的食品等。
由于霉菌和酵母能抵抗热、冷冻，以及抗菌素和辐照等贮藏及保藏技术，它们能转换某些不利于细菌的物质，而促进致病细菌的生长;有些霉菌能够合成有毒代谢产物－霉菌毒素.霉菌和酵母往往使食品表面失去色、香、味.例如,酵母在新鲜的和加工的食品中繁殖，可使食品发生难闻的异味，它还可以使液体发生混浊，产生气泡，形成薄膜，改变颜色及散发不正常的气味等。
因此霉菌和酵母也作为评价食品卫生质量的指示菌,并以霉菌和酵母计数来制定食品被污染的程度。
目前已有若干个国家制订了某些食品的霉菌和酵母限量标准.我国已制订了一些食品中霉菌和酵母的限量标准。
二、检验方法：霉菌和酵母的计数方法,与菌落总数的测定方法基本相似。
主要步骤为：将样品制作成10倍梯度的稀释液，选择3个合适的稀释度，吸取1mL于平皿，倾注培养基后，培养观察，计数.对霉菌的计数，还可以采用显微镜直接镜检计数的方法。
具体检测标准参见：GB4789.15—94，《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物检验霉菌和酵母计数》三、说明：1．样品的处理。
为了准确测定霉菌和酵母数，真实反映被检食品的卫生质量，首先应注意样品的代表性。
对大的固体食品样品，要用灭菌刀或镊子从不同部位采取试验材料,再混合磨碎.如样品不太大，最好把全部样品放到灭菌均质器杯内搅拌2min。
130株酵母样真菌在3种真菌药敏培养基中的药敏结果比较
临床微生 物 实 验 室有 必 要 积极 开 展 真 菌 检 验 和药 敏 试 验 。 Ｎ Ｃ Ｓ推 荐 的 液 体 稀 释 法 ， 作 复 杂 ， 适 合 临床 微 生 物 实 验 ＣＬ 操 不
用多个构成比 ． 检验比较其结果 的一致性 。结果 ） ｃ 。
值均小于 娃 ｓＰ ．０ ， １０株酵 母样 ， ＞ｏ０ ５即 ３
真 菌 在 ３种 培养 基 上 敏 感 率 一 致 ， 异无 统 计 学 意 义 。结 论 自制 改 良 Ｍ 培 养 基 、 沙 培 养 基 药 差 Ｈ 胰
物敏感性结果与改 良 Ｓ ＨＡＤ ＭＹ 培 养 基 结 果 有 较 高 的 一 致 性 ， 合 做 酵 母 样 真 菌 药 敏 试 验 ， 果 可 Ｏ 适 结
结 果
验与液体稀释法来检测 １６ 酵母样菌对氟康唑的敏感性 ， ０株 结
果 显 示 ： ｏ ｃ 片 法 与 液 体 稀 释 法 符 合 率 最 高 ， 且 操 作 简 Ｒ ｓｏ纸 而
单 ， 果 易 于观 测 ］ 结 。我 室 自制 ２种 真 菌 药 敏 培 养 基 ， 用 丹 应 麦 Ｒ ｓｏ药 敏 纸 片 与 商 品 化 改 良 Ｓ ｏｃ ＨＡＤ ＭＹ 药 敏 琼 脂 进 行 Ｏ
展 ， 得 尤 为 重 要 ｌ 。为 了 适 应 医 院 真 菌感 染 学 方 面 的 发 展 ， 显 ｌ ｊ
４ 培 养 基 ．
１ 改 良 Ｓ Ｄ０ ） ＨＡ ＭＹ 培 养 基 ： 兰 州 市 医宝 由
公 司提 供 。２ 改 良 Ｍ— 培 养基 ： １０ｍＩＭ— 琼 脂 中 ， 入 ） Ｈ 在 ０ Ｈ 加 葡 萄 糖 ２ｇ 磷 酸 二 氢 钾 ０ １ｇ 调 节 ｐ ． 。 １ １℃ ， ５ｍｉ ， ． ， Ｈ ７０ ２ １ ｎ 高 压 灭 菌 ，５℃水 浴 后 ， ５ 置厚 度 为 ４ｍ 平 皿 备 用 。 ３ 胰 沙 培 ｍ ）
隐球菌的实验室鉴定方法
隐球菌的实验室鉴定方法摘要：一、引言二、隐球菌的实验室鉴定方法1.涂片镜检2.生化试验3.血清学试验4.分子生物学方法三、各种方法的优缺点及适用范围四、我国隐球菌实验室鉴定现状及展望五、结论正文：一、引言隐球菌（Cryptococcus）是一类广泛存在于自然环境中的酵母型真菌，可以在人体内引起隐球菌病。
随着近年来免疫抑制剂的应用和器官移植等医疗技术的不断发展，隐球菌病的发病率逐渐上升。
早期诊断和准确鉴定隐球菌对临床治疗和预后具有重要意义。
本文将对隐球菌的实验室鉴定方法进行综述，以期为临床实验室提供参考。
二、隐球菌的实验室鉴定方法1.涂片镜检涂片镜检是隐球菌实验室鉴定的常用方法。
通过将患者标本涂抹在载玻片上，用瑞氏染色或墨汁染色后镜检，观察菌落的形态、颜色和结构。
此方法操作简便，但准确性受染色效果和检验人员经验影响，容易出现误诊。
2.生化试验生化试验是通过对隐球菌的代谢产物进行鉴定，从而判断其种属。
常见的生化试验包括糖酵解、产氨、氧化酶试验等。
生化试验可以快速初步鉴定隐球菌，但特异性较低，难以区分同属不同种的隐球菌。
3.血清学试验血清学试验是通过检测患者血清中抗隐球菌抗体，从而判断患者是否感染隐球菌。
常用的血清学方法有免疫荧光法、酶联免疫吸附法等。
血清学试验具有较高的敏感性和特异性，但需患者血清样本，且存在假阳性或假阴性的情况。
4.分子生物学方法分子生物学方法通过对隐球菌的基因进行检测，从而实现对其种属和基因型的鉴定。
常用的分子生物学方法有PCR、实时荧光定量PCR、DNA测序等。
分子生物学方法具有较高的准确性，但操作复杂，对实验室设备要求较高。
三、各种方法的优缺点及适用范围涂片镜检适用于快速初步鉴定，但准确性较低；生化试验快速初步鉴定，但特异性较低；血清学试验具有较高的敏感性和特异性，但需患者血清样本；分子生物学方法具有较高的准确性，但操作复杂。
在实际应用中，可根据实验室条件和个人需求，选择合适的鉴定方法。
真菌培养及鉴定方法有哪些
真菌培养及鉴定方法有哪些真菌培养及鉴定方法有哪些真菌的营养要求不向。
在一般细菌培养基上均能生长。
真菌培养及鉴定有哪些的呢?本文是店铺整理真菌培养及鉴定的资料，仅供参考。
真菌培养及鉴定1.采集标本体表真菌的标本有毛发、皮屑、甲屑、痂等，标本在分离前常先用75%的乙醇消毒。
深部真菌的标本可根据情况取痰、尿液、粪便、脓液、口腔或阴-道分泌物、血液、脑脊液、各种穿刺液和活检组织，采集标本应注意无菌操作。
2.培养检查：可提高真菌检出率，并能确定菌种。
标本接种于葡萄糖蛋白胨琼脂培养基(Sabouraud agar)上，置室温或37℃培养1～3周。
必要时可行小培养协助鉴定。
菌种鉴定常根据菌落的形态及显微镜下形态判断。
对某些真菌，有时尚需配合其他鉴别培养基、生化反应、分子生物学方法确定。
真菌培养的方法与直接镜检法相比较而言，更能对大部分真菌感染的灰指甲作出准确的鉴定，也是诊断灰指甲的一个很重要的手段。
下面我们就从培养基的选择、培养时间、菌种鉴定三方面来了解一下灰指甲的真菌培养法。
1.培养基的选择通常培养真菌会同时选用两种培养基，如果单用一种培养基，则容易忽略其它种类的真菌诊断。
常见的两种培养基，一种为沙氏葡萄糖琼脂培养基中加抗菌剂，常为氯霉素和放线菌酮;另一种是沙氏葡萄糖琼脂培养基中仅加氯霉素，不加放线菌酮。
2.培养时间各种真菌的生长速度不同，所以报告的时间也不同。
一般皮肤癣菌生长较缓慢，在26℃-28℃的环境下需要培养2-4周才能发报告，但是，皮肤癣菌含盖的菌种较多也需要区别对待;酵母菌生长较快，通常2-3就可以发报告，如果为阴性则需要观察1周;霉菌生长也比较快，一般2-4天就可以发报告。
3.菌种鉴定(1)丝状真菌：包括皮肤癣菌和霉菌，根据菌落形成所需要的时间，在不同条件下生长的情况，菌落表面及背面的形态、色素，培养基中有无色素，培养物用乳酚棉蓝染色后镜检找特征性标志结构。
(2)酵母菌：分为形态学鉴定及生化试验。
酵母菌表面展示的方法及原理
酵母菌表面展示的方法及原理酵母菌是一种单细胞真菌，被广泛应用于生物学研究、发酵工业以及药物研发等领域。
酵母菌具有较强的表面展示能力，通过在其表面展示外源蛋白，可以实现对蛋白质功能的研究、蛋白质工程和新型疫苗开发等。
本文将介绍酵母菌表面展示的方法及原理。
一、酵母菌表面展示方法1. 细胞壁融合细胞壁融合是一种常见的酵母菌表面展示方法。
它包括两个主要步骤：首先，将目标蛋白的基因与酵母菌的细胞壁蛋白基因进行融合，生成一个新的基因；然后，通过将新基因导入酵母菌细胞中，使细胞壁表面表达目标蛋白。
该方法的优点是操作简单，表达效率高，适用于多种酵母菌。
2. 细胞外分泌细胞外分泌是一种常用的酵母菌表面展示方法。
该方法通过将目标蛋白的编码基因与酵母菌分泌应用所需蛋白的基因进行融合，将目标蛋白的编码基因导入酵母菌细胞中，使其可以通过分泌方式将目标蛋白表达到细胞外。
然后，通过纯化和检测等方法获取纯净的目标蛋白。
3. 突变筛选展示方法突变筛选展示方法是一种高通量的酵母菌表面展示方法。
该方法通过将目标蛋白的编码基因拼接到酵母菌基因库中，然后通过突变筛选等方法，筛选出能够特异性结合目标物质的酵母菌。
该方法具有高效率、高通量的特点，适用于大规模筛选和鉴定目标蛋白的结合亲和性。
二、酵母菌表面展示的原理酵母菌表面展示的原理是利用酵母菌细胞表面的蛋白质进行外源蛋白的展示。
酵母菌细胞的细胞壁由多种不同的蛋白质组成，其中有些蛋白质具有结构域和肽段，使其可以识别并结合到外部的分子上。
通过将目标蛋白的编码基因与酵母菌的细胞壁蛋白基因进行融合，目标蛋白与细胞壁蛋白共同表达，并展示在酵母菌的表面。
酵母菌表面展示技术的应用具有重要的研究价值和广阔的应用前景。
在蛋白质功能研究方面，通过展示外源蛋白质，可以研究其结构域、逆境应答、分子识别和相互作用等功能；在蛋白质工程和药物研发方面，可以通过展示特定的抗原蛋白，用于疫苗开发和免疫治疗；在酵母菌工程和自噬研究方面，可以通过调控酵母菌表面展示的蛋白质表达，进一步优化产酶菌株和酵母菌自噬过程。
食品微生物能力验证霉菌酵母菌计数—检验方法比较
食品微生物能力验证霉菌酵母菌计数—检验方法比较霉菌酵母菌在自然界中分布极广，种类繁多，食品中易受到不同程度的污染。
食品中霉菌酵母菌的增殖一般会导致营养价值下降、酸败变味或外观恶化等，影响货架期及口感，若霉菌、酵母菌含量较高，且日摄入量较多，会影响人体肠胃内的微生物平衡，甚至造成肠胃不适，可能引起疾病发生。
霉菌对干食品的最大风险主要是在适宜的条件下(产毒株、数量、温度、湿度、水分活度等），能产生霉菌的有毒代谢产物—霉菌毒素，引起过敏反应等各种急、慢性中毒及可能的致癌作用。
因此，人们愈来愈重视食品中霉菌及酵母菌污染对人体造成的危害。
在我国国家部分食品产品及卫生标准中，把霉菌和酵母菌作为常见指示菌进行监测和控制，如饮料、坚果制品、米面制品、糕点类等食品。
霉菌和酵母的检测被列入国标4789 系列食品安全微生物常规检测项目之一 , 霉菌酵母菌的检验方法看似简单，但由于食品种类繁多成分复杂，食品中存在的霉菌种类较多，对环境温湿度及营养成分的要求有所不同，要在同等条件下把所有的霉菌培养出来，反映出样品的真实情况，实属不易，且霉菌前期生长速度缓慢，后期菌丝急剧增加，特别是毛霉的蔓延，给霉菌和酵母菌的同时计数带来一定的困难，如何能更准确、快速提离食品中霉菌检测数目是食品卫生部门面临的一个严峻问题。
能力验证是利用实验室间的比对判定实验室的特定校准、检测能力，以考察实验室检验能力的外部质量活动,组织方提供试验的样本，一般会考虑增加检测难度。
为了更准确更全面得出能力验证结果，本实验室综合了多种方法进行同步检测，主要是考虑霉菌、酵母菌总数检测是通过平板中生长的菌落数目直接计数推算，培养基的质量和培养方式直接影响了检测的结果，因此，选择两种常用的霉菌酵母培养基，采用正置和倒置培养法进行试验，比较分析不同培养基、不同培养方式对霉菌酵母菌计算结果的差异，进而得出较为准确的试验结果进行上报。
2 材料与方法2.1 样品能力验证样品：中国检验检疫科学研究院测试评价中心提供，样品编号为15-G068。
微生物分离的方法
微生物分离的方法微生物分离是指将微生物从复杂的微生物群体中分离出来，单独培养和研究的过程。
微生物分离的方法有很多种，根据不同的目的、微生物类型和样本来源，可以选择不同的分离方法。
1. 纯培养法纯培养法是最常用的微生物分离方法，常用于培养细菌、真菌和酵母等微生物。
首先，需要从样本中制备适量的稀释液，然后取适量的稀释液分别均匀涂布在不同的培养基上。
在合适的培养条件下（如温度、pH值等），通过单菌落的形成，筛选出单个微生物菌株，并进行进一步的纯化和鉴定。
2. 过筛法过筛法是利用不同的筛孔大小来筛选微生物的方法。
主要可以分为通过粗糙的筛网和细孔的纱布进行筛选。
首先将样品溶于适当的溶剂，然后通过筛网或纱布过滤。
微生物细胞会被截留在筛网或纱布上，而溶液则通过筛孔流出。
将筛得的微生物脱落至培养基上，进行纯化和鉴定。
3. 稀释落数法稀释落数法是将样品稀释成一系列不同浓度的稀释液，然后取适量的稀释液均匀涂布在培养基上。
采用这种方法不仅可以分离出单个微生物菌落，还可以计算微生物的含量，如细菌菌落数量。
通过在不同浓度上形成不同的菌落形态，可以用于鉴定微生物的生长特性和生理功能。
4. 筛选富营养培养基法筛选富营养培养基法是通过调整培养基的成分，选择特定条件下生长特定微生物的方法。
例如，根据微生物对碳源、氮源、矿物质、酸碱度等因素的要求，选择不同类型的培养基，使特定菌株优先生长。
这种方法可以筛选特定的微生物群体，有助于深入研究微生物群落结构和微生物的代谢特性。
5. 抗生素抑制法抗生素抑制法是利用抗生素的选择性杀菌作用，从样品中分离出特定微生物的方法。
根据不同微生物菌株对抗生素的抗性差异，可以选择适当抗生素制备培养基，将样品接种于含有抗生素的培养基上。
抗生素会抑制非目标微生物的生长，而目标微生物则能够原样分离出来。
6. 过滤法过滤法是将样品通过微孔滤膜过滤，将微生物分离出来的方法。
根据滤膜的孔径大小，可以选择性地分离出不同大小的微生物。
判断酵母菌的呼吸方式的方法
判断酵母菌的呼吸方式的方法酵母菌是一种单细胞真菌，对人类生活具有重要意义。
了解酵母菌的呼吸方式对于研究其代谢途径、工业发酵以及酿造产业等具有重要指导意义。
本文将介绍判断酵母菌呼吸方式的方法，供相关领域研究人员参考。
以下将详细介绍判断酵母菌呼吸方式的方法。
1.生理特征观察法通过观察酵母菌的生理特征，可以初步判断其呼吸方式。
通常情况下，酵母菌主要有两种呼吸方式：氧呼吸和非氧呼吸。
可以通过判断酵母菌对氧气的依赖性来初步确定其呼吸方式。
若酵母菌对氧气依赖性强，只能通过氧呼吸产生能量，则可判断其为氧呼吸型酵母菌。
反之，若酵母菌对氧气依赖性较低，即在没有氧气的情况下也能产生能量，可初步判断其为非氧呼吸型酵母菌。
2.呼吸过程测定法为了更准确地判断酵母菌的呼吸方式，科研人员通常会运用呼吸过程测定法。
该方法通过测定酵母菌在不同环境条件下的呼吸过程来判断其呼吸方式。
具体步骤如下：（1）培养酵母菌首先需要选择适当的培养基，包括碳源、氮源等，将酵母菌接种到培养基中。
将培养基转移到适当的培养容器中，如试管或培养皿等。
（2）调整环境条件根据已知的引起呼吸方式改变的因素，来调整培养酵母菌的环境条件。
例如，可调整培养温度、氧气浓度、pH值等。
注意控制各个条件的实验组和对照组。
（3）测定呼吸过程在特定的时间点，使用适当的方法测定酵母菌的呼吸过程。
例如，可以通过测定培养液中产生的二氧化碳浓度的变化来判断呼吸方式。
氧呼吸方式产生的二氧化碳多，而非氧呼吸方式产生的二氧化碳较少。
（4）对比分析结果根据呼吸过程测定的结果，对不同环境条件下酵母菌的呼吸方式进行对比分析。
通过对实验组和对照组的结果进行比较，可以进一步确定酵母菌的呼吸方式。
3.分离基因测定法分离基因测定法是一种通过分析酵母菌的基因组来判断其呼吸方式的方法。
每种呼吸方式在基因水平上都存在特定的基因表达模式。
通过提取酵母菌的基因组DNA，进行PCR扩增和测序等分子生物学技术，可以鉴定酵母菌的呼吸方式。
霉菌和酵母检测怎么鉴定？标准方法与快检有哪些不同？
概述霉菌和酵母的检测是我们食品微生物检测的一个重要项目。
霉菌是丝状真菌的俗称，绒毛状、絮状或蛛网状的真菌菌落；没有菌丝的称之为酵母。
这并非分类学名词。
相对于细菌来说，霉菌和酵母生长缓慢，竞争能力较弱，故培养霉菌和酵母时要注意形成抑制细菌的环境。
下面是我们在检测霉菌酵母时遇到的几个问题：1、计数前的鉴定计数霉菌酵母结果前是需要鉴定菌落是否是真菌的。
霉菌的形态相对比较明显，不容易被混淆。
但是对于酵母来说，培养基里抑制细菌的成分，例如氯霉素在此的剂量不足以抑制所有的细菌种类。
部分细菌会在孟加拉红培养基上生长的也很好，如下图：被红色圆圈圈起来的菌落是不是很像酵母？然而这只是一种革兰氏阳性的球菌而已，是细菌。
简单来说，真菌比细菌大得多。
镜检如果使用低倍镜（10-40倍）就可以清晰观察到菌的轮廓，那么就是真菌。
相反，如果需要油镜等高倍镜（1000倍以上），那就是细菌。
2、不同形态的菌落做镜检“不同”形态的菌落，这个“不同”也是有区别的。
如下图所示：图2中红色和蓝色圆圈内的这两种“不同”形态的菌落，差别太大，确实是不相同的种类。
图3中的四个“不同”的形态的菌落，其实是同一种酵母，这是酿酒酵母菌的标准菌株在孟加拉红培养基上因为生长位置不同而体现出的差异。
生长在琼脂表面的菌落，白色透粉红、圆形；生长在琼脂内部的菌落，出现菱形或花瓣形；生长在琼脂底部和平皿接触面上的菌落，呈现出较深粉红色的圆形。
使用倾注法，同一种酵母可能会出现不同的形态。
因此，挑取有代表性的菌落做镜检，我们要慎之又慎。
不然会做重复工作或漏检。
3、是否必须培养5天在GB 4789.15-2016 中把“培养 5 d，观察并记录”修改为“观察并记录培养至第 5 d 的结果。
”部分霉菌适宜生长的温度稍高，如烟曲霉等，如果依然使用28℃培养，酶的催化活性降低，代谢速度减慢，繁殖就会慢，就不能提前计数。
还有几类霉菌:毛霉、犁头霉、木霉等生长快、菌丝多，最好在48小时以内计数，否则菌丝就会覆盖整个平皿，无法准确计数。
念珠菌等酵母菌的分类鉴定
皮肤，粪 土壤，水，植物 便 痰，尿， 富营养土壤和水 粪便 不详 不详 陈鸽子粪，桉树 痰(少见) 花 皮肤 不详 不详 昆虫，土壤 食品，水果，土 痰 壤 皮肤， 土壤，水 头发
阴道炎(少见) 腹膜炎，心内膜炎 不详 皮肤(少见) 皮炎 不详 不详 白结节病 脑膜炎 肺病，CNS 肺病 淋巴结 扩散 扩散
CBS 5256T
IV
AS 2.1678T JCM 9396T CBS 2022T
V
AS 2.1681
VICBS 5265TKb22001600
1125
680
450 225
Bai et al. 2000. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 50: 417-422.
Electrokaryotypes of the Six Groups in the C. guilliermondii Complex
E.
菌丝形成
有些酵母菌在进行芽殖时，芽细孢在与母细胞脱离之 前连续芽殖，形成丝状体，这种由细胞连续芽殖而形 成的菌丝称为假菌丝(pseudohyphae)。 有些酵母菌还可形成具分隔的真菌丝，真菌丝是由顶 端细胞不断生长并产生分隔形成的。 在形态上假菌丝与真菌丝的区别主要为：真菌丝的分 隔较直，在分隔处没有缢缩或缢缩不明显，顶细胞往 往长于后面的细胞，而假菌丝的分隔只是两个细胞的 交接点，弯曲且有明显的缢缩，顶端细胞一般不会长 于后面的细胞。
DNA碱基组成(DNA Base Composition)
属内差异多在10%以内 种内差异1.0-1.5%(浮力密度法)或2.0-2.5%(热变性法) 一对菌株的变性总DNA之间杂交复性的程度和稳定性， 通常以相对结合百分率表示 种 种 内：> 70% 间：< 40%
酵母样真菌的培养鉴定及药敏结果分析
６ ． ，１． ％ ， ． ％ ， ． ％ ，２０ ａｃｔｓ ｅ ａ ｈ ｔｒ ｉ Ｂ ６２ ５２ ９７ ３４ ． ％ ｎ ． ｒｓ ｅｔ ｅ ｖ ｙ ｈ ｅｓ ｉｔ ａｅｏ ｕ ｏ ｙｏｉ ， ｍｐ ｏｅｉｎ ， ｔｉ ｆｏ ｎ ｃ
【 要 】 目的 了解 呼 伦 贝 尔地 区真 菌 感 染 的 类 型 、 布 及 对 常 用 药 物 的敏 感 程 度 ， 临床 提 供 及 时合 理 的 用 药指 摘 分 为
导 。方 法 选取 ２ １ ０ ０年 ４月￣２ １ 年 ４月住 院的 １ ５例病人 的送检 培养 物， ０１ ４ 参照《 全国临床检验操 作规程》 自制 普通 ，
ｔ ｆ Ｃａ ｄ ｄ ａｂ ｃ ｎ ， Ｃ ｎ ｉａ ｇ ａ ｒ ｔ ， Ｃａ ｄ ｄ ｒ ｐ ｃ ｌｓ Ｃａ ｄｄ ａ ａ ｓｌ ｓｓ ａ ｄ ｏ ｈ ｒ ｙ ａ ｔｌ ｅ ｕ ｇ ｗｅ ｅ ｉ ｏ ｎ ｉ ａ ｌ ｉａ ｓ ｏ ａ ｄ ｄ ｌｂ ａ ａ ｎ ｉ ａ ｔ ｏ ｉａｉ ， ｎ ｉ ａ ｐ ｒ ｐ ｉ ｉ ｎ ｔ ｅ ｅ ｓ－ｉ ｆ ｎ ｉ ｏ ｋ ｒ
Ｉ ｅ ｉ ｉ ａ ｉ ｎ ａ ｒ ｇ ｓ ｓ ｅ ｔｂ ｌｔ ｆ ｙ ａ ｔｌｋ ｕ ｇ ｄ ｎｔｆｃ ｔｏ ｎｄ ｄ ｕ ｕ ｃ ｐ ｉ ｉｉｙ ｏ ｅ ｓ－ｉ ｅ ｆ ｎ ｉ
Ｈ ＡＮ － ｉ ｇ， ＨＡＯ 。 ｎｇ Ｆｕ ｑａｎ Ｓ Ｌｉｐｉ
（ ｐ ｒｍｅ ｔ ｆ Ｃ ｉ ｉ ｌ ａ ｏａ ｏ ｙ，Ｔ ｅ ｅ ｐ ｅ Ｈｏ ｐ ｔ ｌ ｆ Ｈｕ ｕ ｂ ｉｒ Ｄｅ ａ ｔ ｎ ｏ ｌ ｃ Ｌ ｂ ｒ ｔｒ ｎａ ｈ Ｐ ｏ ｌ’ ｓｉ ａ ｏ ｌ ｎ ｅｅ ，Ｈｕ ｕ ｂ ｉ ２ ０ ８ ｌ ｎ ｅｅ ０ １ ０ ，Ｎｅｍｅ ｇ ｕ， ｈ ｎ ） ｒ ｉ ｎ ｇ Ｃ ｉａ
酵母菌的分离筛选方法
酵母菌的分离筛选方法酵母菌多数为腐生，一般生长在含糖较高，偏酸的环境中，在通气条件下，液体培养比霉菌快。
菌落与细菌相似，较大而厚，多数不透明，菌落光滑湿润粘稠，乳白色，少数干皱，边缘整齐，呈红色或粉红色，圆形椭圆卵形，液体培养基生长会生成沉淀或菌膜。
含高糖浓度（45%），分离蜂蜜酵母，球拟酵母属等嗜高渗透压的酵母。
1.培养基：1.1葡萄糖50g/L 尿素1g/L （NH4）2SO41g/L KH2PO42.5g/LNa2HPO40.5g/L MgSO41g/L FeSO4 0.1g/L 酵母膏 0.5g/L 孟加拉红 0.03g/L PH4.5-5.0 （富集用）★1.2乳酸-马铃薯-葡萄糖培养基：马铃薯200g/L 葡萄糖（霉菌用蔗糖）20g/L 乳酸5ml马铃薯去皮切片200g，加水煮沸30min，纱布过滤，补足蒸馏水1L，PH自然。
（去掉乳酸可用于酵母菌和霉菌培养用）（富集用）★1.3麦芽汁培养基：1：4水60-65℃水浴3-4小时，4-6层纱布过滤，可加一个蛋清加水20mL调均生泡沫，倒入糖化液中，煮沸过滤，10-15波林，氯霉素0.1g/L PH6.0-6.4 121℃ 20min（分离保存用）灭菌后加入300u/ml硫酸链霉素（集菌用）★1.4虎红（孟加拉红）培养基：蛋白胨5.0g/L 葡萄糖10g/LKH2PO41.0g/L MgSO40.5g/L 孟加拉红0.033g/L 氯霉素0.1g/L 琼脂15g/L PH自然（分离纯化用）★1.5 豆芽汁培养基：黄豆芽100g/L 葡萄糖50g/L PH自然。
100g 黄豆芽，加水煮沸30min，纱布过滤，补足蒸馏水1L1.6察氏培养基：主要培养霉菌观察形态用蔗糖30g/L 硝酸钠3g/L 磷酸氢二钾1g/L 氯化钾0.5g/L 硫酸镁0.5g/L 硫酸亚铁0.01g/L 琼脂15-20g/L 121℃ 20min PH自然一般分离黄酒酵母酒精酵母使用曲汁培养基，啤酒酵母用酒花麦汁培养基，葡萄酒酵母用葡萄汁培养基。
真菌鉴定方法
真菌鉴定的方法主要有直接涂片、墨汁涂片、涂片或组织切片染色和培养检查12。
1.直接涂片：为最简单而重要的诊断方法。
取标本置玻片
上，加一滴10%KOH溶液，盖上盖玻片，在酒精灯火
焰上稍加热溶解角质后，轻轻加压盖玻片使标本透明即
可镜检。
可用于检查有无菌丝或孢子，但不能确定菌种。
2.墨汁涂片：用于检查隐球菌及其他有荚膜的孢子。
取一
小滴墨汁与标本（如脑脊液）混合，盖上盖玻片后直接
镜检。
3.涂片或组织切片染色：染色可更好地显示真菌形态和结
构。
革兰染色适用于白念珠菌、孢子丝菌等。
4.培养检查：可提高真菌检出率，并能确定菌种。
标本接
种于葡萄糖蛋白胨琼脂培养基上，置室温或37℃培养
1-3周，必要时可行玻片小培养协助鉴定。
酵母样真菌鉴定流程及药敏试验方法
酵母样真菌鉴定流程及药敏试验方法英文回答：Identification of yeast-like fungi and the methods for antifungal susceptibility testing are essential in clinical laboratories for the diagnosis and treatment of fungal infections. In this response, I will explain the general process of yeast-like fungi identification and the methods used for antifungal susceptibility testing.Yeast-like fungi identification process:1. Specimen collection: The first step is to collect a clinical specimen from the patient, such as blood, urine, or respiratory secretions. The specimen should be collected using aseptic techniques to avoid contamination.2. Microscopic examination: The collected specimen is then examined under a microscope to identify the presence of yeast-like fungi. The characteristic morphology of yeastcells, such as budding or pseudohyphae formation, can help in the initial identification.3. Culture: If yeast-like fungi are observed in the microscopic examination, the specimen is cultured on appropriate agar media, such as Sabouraud dextrose agar or chromogenic media. The culture is incubated at an optimal temperature for yeast growth, typically around 30°C.4. Colony morphology: After incubation, the colonies that grow on the agar media are examined for their macroscopic characteristics, such as color, texture, and size. These characteristics can provide additional clues for identification.5. Biochemical tests: Various biochemical tests are performed to differentiate different species of yeast-like fungi. These tests may include carbohydrate assimilation tests, enzyme production tests, and other metabolic reactions. The results of these tests help in narrowing down the identification to a specific species.6. Molecular methods: In some cases, molecular methods such as polymerase chain reaction (PCR) or DNA sequencing are used for more accurate and rapid identification of yeast-like fungi. These methods can detect specific genetic markers or sequences that are unique to different species.Antifungal susceptibility testing methods:Once the yeast-like fungi are identified to the species level, it is important to determine their susceptibility to antifungal drugs. This helps in selecting the mosteffective treatment for the patient. The two commonly used methods for antifungal susceptibility testing are:1. Disk diffusion method: In this method, paper disks containing different antifungal drugs are placed on an agar plate that has been inoculated with the yeast-like fungi. The plate is incubated, and the zone of inhibition around each disk is measured. A larger zone of inhibitionindicates greater susceptibility to the drug.2. Broth microdilution method: This method involvespreparing a series of dilutions of antifungal drugs in a liquid growth medium. The yeast-like fungi are then added to each well of a microtiter plate containing the drug dilutions. The plate is incubated, and the minimum inhibitory concentration (MIC) of the drug, which is the lowest concentration that inhibits fungal growth, is determined.中文回答：酵母样真菌的鉴定和药敏试验方法对于临床实验室诊断和治疗真菌感染至关重要。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
1 进修生
收稿日期:2001-04-103种酵母样真菌鉴定方法的比较农生洲 韦柳宏1 陈松峰
(广西壮族自治区人民医院检验科 南宁 530021)
为综合评价目前我国实验室常规手工发酵鉴定法(常规法)、生物梅里埃A T B Fug us卡鉴定法(仪器法)和近年国内开始应用的科玛嘉(CHRo M ag ar)酵母样真菌显色培养基鉴定法(显色法)等3种酵母样真菌鉴定方法的优劣。
我们同时用这3种方法对实验室保存的122株酵母样真菌标准菌株进行了鉴定比较,报道如下。
1 材料与方法
1.1 菌株来源:122株实验菌为实验室历年保存的标准菌株,其中白假丝酵母菌53株,热带假丝酵母菌31株,光滑球假丝酵母菌18株,近平滑假丝酵母菌11株,克柔氏假丝酵母菌3株,季也蒙假丝酵母菌、葡萄牙假丝酵母菌各2株,粘红假丝酵母菌、酿酒假丝酵母菌各1株。
1.2 试剂:沙氏培养基和各种手工用发酵管均购自杭州天和微生物试剂公司;Fug us卡及其配套仪器A T B Ex pressio n 为法国生物梅里埃公司产品;显色培养基则购自郑州搏赛科技有限责任公司。
1.3 鉴定方法:常规法鉴定按卫生部医政司颁发的《全国临床检验操作规程》进行;Fug us卡法按配套的操作手册取菌制成悬液,加样后置37℃培养24h后上机鉴定;显色法则取F ugus卡法剩余的悬液直接接种于显色培养基制成的平板上,置37℃培养,每隔24h观察一次结果,据菌落颜色进行判定;翠绿色为白假丝酵母菌,兰灰色为热带假丝酵母菌,紫红色边缘模糊有微毛为克柔氏假丝酵母菌菌,整个菌落湿润且紫红色为光滑球假丝酵母菌,白色为其它假丝酵母菌。
2 结 果
2.1 培养鉴定耗时:常规法和仪器法需预先用沙氏培养基培养出真菌,平均耗时大约72h,再加上鉴定耗时又分别平均约需72h和24h,常规法培养鉴定总共平均约需6d,仪器法约需4d;显色法集培养与鉴定于一体,耗时平均约需4 d。
2.2 鉴定结果:122株酵母样真菌的鉴定中,三法对53株白假丝酵母菌鉴定全部正确。
其它69株菌中,常规法有11株无法鉴定到种,占总株数9.0%(11/122)。
此外有5株热带假丝酵母菌鉴定错误,3株错定为光滑球假丝酵母菌,2株错定为近平滑假丝酵母菌。
有3株光滑球假丝酵母菌鉴定错误,1株误定为热带假丝酵母菌,2株误定为近平滑假丝酵母菌。
有2株近平滑假丝酵母菌鉴定错误,1株误为热带假丝酵母菌,1株误为光滑球假丝酵母菌。
除无法鉴定到种的11株菌后,鉴定错误率仍有9.0%(10/111);显色法对白假丝酵母菌等该法能鉴定的6种酵母样真菌鉴定准确率达100%,其它菌株却无法鉴定到种,占总株数4.1%(5/122);
F ugus卡法全部菌株均可鉴定到种,且准确率达100%。
详见表1。
表1 122株酵母菌样真菌3种方法鉴定结果比较(株) 菌名菌株数常规法显色法仪器法
白假丝酵母菌 53 53 53 53
热带假丝酵母菌31273131
光滑球假丝酵母菌18171818
近平滑假丝酵母菌11111111
克柔氏假丝酵母菌3133
粘红假丝酵母菌1111
季也蒙假丝酵母菌2102
葡萄牙假丝酵母菌2002
酿酒假丝酵母菌1001
2.3 成本核算:常规法鉴定每一株菌平均约需10元,仪器法平均约需50元,显色法平均约需15元。
3 讨 论
当前酵母样真菌引起的临床感染正呈逐步增加之势,临床医师急需实验室准确快速地检出病原体以协助诊治[1]。
纵观本试验结果,加上预先真菌培养时间常规法鉴定耗时总共需要至少6d左右,且操作繁琐,生化结果判定较困难,即使是标准菌株,结果仍极易出错。
而如F ugus卡等仪器测试卡法,虽然鉴定耗时较短,操作也简便,鉴定结果准确率又高且可配套进行体外药敏试验,但因仪器和试卡均为进口产品,价格昂贵,只适合在有大量标本的大型综合性医院应用。
从本研究可看出,显色法培养加鉴定耗时平均仅需48h,与应用仪器法耗时基本相等,且培养基制备方便,价格适中,结果判定简便快速准确,虽然有一部分菌株无法鉴定到种,但已能鉴定出目前临床感染95%以上的3～4种酵母样真菌感染[2],故不失为一种替代常规法在中小医院普及开展的酵母样真菌检验方法。
参 考 文 献
1 周贵民,谢 灵.国内酵母菌感染和实验室诊断的现状及建议.中华医学检验杂志,1996,19(5):301-303.
2Pfaller M A,Housto n A,Co ffman S.A pplicatio n of CHR OM ag ar Ca ndida for r apid scr eening o f clinical specimens for Candida A lbicans,Candida tro picalis, Candida K rusei,and Candida(T or ulopsis)glabrata.J Clin M icr o bilo l,1996,34(1):58-61.
・
764・广西医科大学学报
JOURNA L OF GU ANGXI M EDICAL UNIVERSIT Y
2002Oct;19(5)。