pBluescript

合集下载

pBluescript II SK(+)载体说明

pBluescript II SK(+)编号载体名称北京华越洋生物VECT4810 pBluescript I I S K(+)pBluescript I I S K(+)载体基本信息载体名称: pBluescript I I S K(+), p Bluescript I I S K+质粒类型: 原核表达载体；克隆载体高拷贝/低拷贝: 高拷贝启动子: Lac启动子克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶载体大小: 2961bpGenbank: X52328.15' 测序引物及序列: M13-‐F (-‐21): T GTAAAACGACGGCCAGT 3' 测序引物及序列: M13-‐R: C AGGAAACAGCTATGAC 载体标签: -‐-‐载体抗性: 氨苄青霉素筛选标记: -‐-‐备注: 标准的克隆质粒。

f1 (+) 方向允许有意链ssDNA的复制。

pBluescript I I S K(+)和 pBluescript I I K S(+) 差异仅仅存在于多克隆位点的方向不同。

稳定性: 瞬表达组成型: 非组成型病毒/非病毒: 非病毒pBluescript I I S K(+)载体质粒图谱和多克隆位点信息pBluescript I I S K(+)载体序列ORIGIN1 CTAAATTGTA AGCGTTAATA TTTTGTTAAA ATTCGCGTTA AATTTTTGTT AAATCAGCTC 61 ATTTTTTAAC CAATAGGCCG AAATCGGCAA AATCCCTTAT AAATCAAAAG AATAGACCGA 121 GATAGGGTTG AGTGTTGTTC CAGTTTGGAA CAAGAGTCCA CTATTAAAGA ACGTGGACTC 181 CAACGTCAAA GGGCGAAAAA CCGTCTATCA GGGCGATGGC CCACTACGTG AACCATCACC 241 CTAATCAAGT TTTTTGGGGT CGAGGTGCCG TAAAGCACTA AATCGGAACC CTAAAGGGAG 301 CCCCCGATTT AGAGCTTGAC GGGGAAAGCC GGCGAACGTG GCGAGAAAGG AAGGGAAGAA 361 AGCGAAAGGA GCGGGCGCTA GGGCGCTGGC AAGTGTAGCG GTCACGCTGC GCGTAACCAC 421 CACACCCGCC GCGCTTAATG CGCCGCTACA GGGCGCGTCC CATTCGCCAT TCAGGCTGCG 481 CAACTGTTGG GAAGGGCGAT CGGTGCGGGC CTCTTCGCTA TTACGCCAGC TGGCGAAAGG 541 GGGATGTGCT GCAAGGCGAT TAAGTTGGGT AACGCCAGGG TTTTCCCAGT CACGACGTTG 601 TAAAACGACG GCCAGTGAGC GCGCGTAATA CGACTCACTA TAGGGCGAAT TGGGTACCGG 661 GCCCCCCCTC GAGGTCGACG GTATCGATAA GCTTGATATC GAATTCCTGC AGCCCGGGGG 721 ATCCACTAGT TCTAGAGCGG CCGCCACCGC GGTGGAGCTC CAGCTTTTGT TCCCTTTAGT 781 GAGGGTTAAT TGCGCGCTTG GCGTAATCAT GGTCATAGCT GTTTCCTGTG TGAAATTGTT 841 ATCCGCTCAC AATTCCACAC AACATACGAG CCGGAAGCAT AAAGTGTAAA GCCTGGGGTG 901 CCTAATGAGT GAGCTAACTC ACATTAATTG CGTTGCGCTC ACTGCCCGCT TTCCAGTCGG 961 GAAACCTGTC GTGCCAGCTG CATTAATGAA TCGGCCAACG CGCGGGGAGA GGCGGTTTGC 1021 GTATTGGGCG CTCTTCCGCT TCCTCGCTCA CTGACTCGCT GCGCTCGGTC GTTCGGCTGC 1081 GGCGAGCGGT ATCAGCTCAC TCAAAGGCGG TAATACGGTT ATCCACAGAA TCAGGGGATA 1141 ACGCAGGAAA GAACATGTGA GCAAAAGGCC AGCAAAAGGC CAGGAACCGT AAAAAGGCCG1201 CGTTGCTGGC GTTTTTCCAT AGGCTCCGCC CCCCTGACGA GCATCACAAA AATCGACGCT 1261 CAAGTCAGAG GTGGCGAAAC CCGACAGGAC TATAAAGATA CCAGGCGTTT CCCCCTGGAA 1321 GCTCCCTCGT GCGCTCTCCT GTTCCGACCC TGCCGCTTAC CGGATACCTG TCCGCCTTTC 1381 TCCCTTCGGG AAGCGTGGCG CTTTCTCATA GCTCACGCTG TAGGTATCTC AGTTCGGTGT 1441 AGGTCGTTCG CTCCAAGCTG GGCTGTGTGC ACGAACCCCC CGTTCAGCCC GACCGCTGCG 1501 CCTTATCCGG TAACTATCGT CTTGAGTCCA ACCCGGTAAG ACACGACTTA TCGCCACTGG 1561 CAGCAGCCAC TGGTAACAGG ATTAGCAGAG CGAGGTATGT AGGCGGTGCT ACAGAGTTCT 1621 TGAAGTGGTG GCCTAACTAC GGCTACACTA GAAGGACAGT ATTTGGTATC TGCGCTCTGC 1681 TGAAGCCAGT TACCTTCGGA AAAAGAGTTG GTAGCTCTTG ATCCGGCAAA CAAACCACCG 1741 CTGGTAGCGG TGGTTTTTTT GTTTGCAAGC AGCAGATTAC GCGCAGAAAA AAAGGATCTC 1801 AAGAAGATCC TTTGATCTTT TCTACGGGGT CTGACGCTCA GTGGAACGAA AACTCACGTT 1861 AAGGGATTTT GGTCATGAGA TTATCAAAAA GGATCTTCAC CTAGATCCTT TTAAATTAAA 1921 AATGAAGTTT TAAATCAATC TAAAGTATAT ATGAGTAAAC TTGGTCTGAC AGTTACCAAT 1981 GCTTAATCAG TGAGGCACCT ATCTCAGCGA TCTGTCTATT TCGTTCATCC ATAGTTGCCT 2041 GACTCCCCGT CGTGTAGATA ACTACGATAC GGGAGGGCTT ACCATCTGGC CCCAGTGCTG 2101 CAATGATACC GCGAGACCCA CGCTCACCGG CTCCAGATTT ATCAGCAATA AACCAGCCAG 2161 CCGGAAGGGC CGAGCGCAGA AGTGGTCCTG CAACTTTATC CGCCTCCATC CAGTCTATTA 2221 ATTGTTGCCG GGAAGCTAGA GTAAGTAGTT CGCCAGTTAA TAGTTTGCGC AACGTTGTTG 2281 CCATTGCTAC AGGCATCGTG GTGTCACGCT CGTCGTTTGG TATGGCTTCA TTCAGCTCCG 2341 GTTCCCAACG ATCAAGGCGA GTTACATGAT CCCCCATGTT GTGCAAAAAA GCGGTTAGCT 2401 CCTTCGGTCC TCCGATCGTT GTCAGAAGTA AGTTGGCCGC AGTGTTATCA CTCATGGTTA 2461 TGGCAGCACT GCATAATTCT CTTACTGTCA TGCCATCCGT AAGATGCTTT TCTGTGACTG 2521 GTGAGTACTC AACCAAGTCA TTCTGAGAAT AGTGTATGCG GCGACCGAGT TGCTCTTGCC 2581 CGGCGTCAAT ACGGGATAAT ACCGCGCCAC ATAGCAGAAC TTTAAAAGTG CTCATCATTG 2641 GAAAACGTTC TTCGGGGCGA AAACTCTCAA GGATCTTACC GCTGTTGAGA TCCAGTTCGA 2701 TGTAACCCAC TCGTGCACCC AACTGATCTT CAGCATCTTT TACTTTCACC AGCGTTTCTG 2761 GGTGAGCAAA AACAGGAAGG CAAAATGCCG CAAAAAAGGG AATAAGGGCG ACACGGAAAT 2821 GTTGAATACT CATACTCTTC CTTTTTCAAT ATTATTGAAG CATTTATCAG GGTTATTGTC 2881 TCATGAGCGG ATACATATTT GAATGTATTT AGAAAAATAA ACAAATAGGG GTTCCGCGCA 2941 CATTTCCCCG AAAAGTGCCA C//其他大肠杆菌表达载体：pBV221 ptdTomato pET-52b(+) pAmCyanpDsRed-Express2 pBV220 pCold-GST pColdS-SUMOpCold TF pCold IV pCold III pCold IIpCold I pE-SUMO pCold-ProS2 pBAD102/D-TOPO pBAD202/D-TOPO pACYC184 pBAD/Thio-TOPO pBad/Myc-His C pBad/Myc-His B pBad/Myc-His A pBad/His C pBad/His BpBad/His A pBAD-TOPO pET-23b(+) pET-23a(+)pET-23c(+) pET-23(+) pET-12b(+) pET-12c(+)pET-12a(+) pET-11b(+) pET-11a(+) pET-11c(+)pBad24 pQE-82L pQE-81L pQE-80LpQE-32 pQE-9 pQE-16 pQE-31pQE-60 pQE-70 pQE-40 pET-51b(+) pET-50b(+) pET-49b(+) pET-48b(+) pET-47b(+) pET-26b(+) pET-32a(+) pET-21b(+) pET-22b(+) pET-14b pET-16b pET-15b pET-19bpET-20b(+) pET-21d(+) pET-21c(+) pET-21b(+) pET-21a(+) pET-24a(+) pET-24d(+) pET-25b(+) pET-27b(+) pET-28a(+) pET-30a(+) pET-42a(+) pET-43.1c(+) pET-43.1b(+) pET-43.1a(+) pET-44a(+) pET-44c(+) pET-46 EK/LIC pET-37b(+) pTrcHis2 C pTrcHis2 B pTrcHis2 A pET303/CT-His pET302/NT-His pRSET-CFP pRSET-EmGFP pRSET-BFP pGFPuvpET300/NT-DEST pET301/CT-DEST pGEM-T pBad43pGEX-4T-3 pGEX-5X-2 pBlueScript SK(+) pG-Tf2pG-KJE8 pGro7 pET-SUMO pSE380pET-17b pET102/D-TOPO pCDFDuet-1 pMAL-p5xpTf16 pET-28c(+) pBluescript II SK(+) pET-30b(+) pSUMO pProEX HTc pProEX HTb pProEX HTa pKD3 pKD13 pKD46 pTYB1pTYB2 pTWIN2 pBluescript II KS(-) pTYB12pMAL-p5e pACYCDuet-1 pEGM-11ZF(+) pEGM-7ZF(+) PinPoint Xa-3 PinPoint Xa-2 PinPoint Xa-1 pSP73pSP64 pTWIN1 pTYB11 pTXB1pET-5b(+) pBad/gIII C pBad/gIII B pBad/gIII A pET-5a(+) pMal-p4X pMal-p2G pkk223-3pkk232-8 pCYB1 pEZZ18 pBAD18pMAL-c5x pMal-p2E pMal-p2X pET-44 EK/LIC pET-43.1 EK/LIC pET-41 EK/LIC pMal-c4X pTrcHis BpET-31b(+) pET-3b(+) pET-41a(+) pGEX-3XpGEX-4T-2 pETDuet-1 pGEX-4T-1 pTrc99apET-28b(+) pET-His pALEX a,b,c pACYC177pBR322 pKD4 pKD20 pMXB10pEcoli-6xHN-GFPuv pKJE7 pRSET B pGEX-KGpGEX-2T pRSFDuet-1 pCOLADuet-1 pTrcHis C pTrcHis A pET-41b(+) pET-42b(+) pET-3a(+) pGEX-6P-3 pGEX-6P-2 pGEX-6P-1 pGEX-5X-3 pGEX-5X-1 pGEX-2TK pRSET A pMal-c2GpMal-c2E pMal-c2X pRSET C pQE-30pET-45b(+) pET-44b(+) pET-42c(+) pET-41c(+) pET-40b(+) pET-33b(+) pET-39b(+) pET-32 EK/LIC pET-32 Xa/LIC pET-32c(+) pET-32b(+) pET-30 Xa/LIC pET-30 EK/LIC pET-30c(+) pET-29c(+) pET-29b(+) pET-29a(+) pET-24c(+) pET-24b(+) pET-24(+)pET-23d(+) pET-11d(+) pBad33。

Ta克隆

T-A克隆法就是用改良碱裂解法抽提pBluescript SK(+)质粒，用EcoRⅤ将pBluescript SK(+)质粒切成平端，利用Taq DNA聚合酶及dTTP制备pBluescript SK(+) T-A载体. 将β-actin cDNA片段克隆入自制的pBluescript SK(+) T-A载体，经EcoRⅠ及HindⅢ双酶切得到与设定长度一致的β-actin cDNA片段.简单的理解为：将pBluescript SK(+)质粒从酶切后的平末端变成黏末端的Ta载体。

对PCR产物进行克隆是分子生物学领域以及基因工程领域里常用的方法. 以前对PCR产物进行克隆实验, 采用的方案有以下几种：一是将PCR产物切成两端平齐的双链DNA，然后克隆到切成平端的质粒载体上, 或在PCR产物的两端加上人工接头(linker)，经限制性内切酶处理后, 克隆到质粒载体的相应位点上；二是在设计PCR引物时, 使PCR引物的5′端含有可切成粘性末端的限制性内切酶酶切位点的识别序列，在PCR反应结束时, 将PCR产物再用相应的限制性内切酶进行处理，以便于克隆到含相应限制性内切酶酶切位点的质粒载体上. 这两种方法虽然有效,但均较繁琐.本实验的目的在于利用pBluescript SK(+)质粒、Taq DNA聚合酶及dTTP自制T-A克隆载体, 对从RT-PCR中得到的β-actin cDNA片段进行克隆.1 材料与方法1.1 试剂Taq DNA聚合酶、T4 DNA连接酶、EcoRⅤ、EcoRⅠ、HindⅢ等限制性内切酶及X-gal、异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)、PCR扩增β-actin片段所用试剂等来自Promega公司,质粒载体用pBluescript SK(+), 来源于中国科学院细胞生物学研究所，琼脂糖由Sigma公司进口分装, 柱离心式胶回收试剂盒来源于Qiagen公司, 扩增β-actin cDNA片段长度为870 bp.1.2 DH5α感受态大肠杆菌的制备按Cohen提出的方法〔1〕, 用0.1 mol/L CaCl2制备感受态细菌.1.3 自制T-A克隆载体的方法将20 ng pBS质粒转化于自制的DH5α感受态菌, 用改良的碱裂法抽提pBS质粒. 取5 μg pBS质粒,用限制性内切酶EcoRⅤ切成平端后, 再用0.8%的琼脂糖凝胶电泳鉴定酶切是否完全(图1),用柱离心式回收试剂进行回收. 在40 μl反应体系中, 加入1 μg切成平端的pBS 质粒, 2U Taq DNA聚合酶, 10×PCR反应缓冲液4 μl, 10 mmol/L dTTP 4 μl, 75℃水浴2 h, 即成为3′端含单个胸腺嘧啶核苷酸(T)尾的开环T-A克隆载体.1：DNA分子质量标准ⅩⅥ(250 bp ladder, 0.25～3.0 kb);2，3：用EcoRⅤ酶切的pBS质粒；4：没有酶切的pBS质粒.1.4 β-actin cDNA片段的T-A克隆取自制的T-A克隆载体20 ng，按插入DNA片段与载体摩尔数之比(3∶1)的比例，在T4 DNA连接酶的作用下,在10～14℃连接48 h,然后转化于自制的DH5α感受态菌,在含X-gal/IPTG的LB固体培养基上进行蓝白斑筛选并对抽提质粒后进行酶切鉴定.2 结果和讨论对β-actin cDNA片段,从用T-A克隆载体进行克隆得到的蓝白斑中挑选1个蓝斑6个白斑,进行质粒提取及酶切鉴定.结果显示,从6个白斑中提取的质粒用限制性内切酶酶切后得到了与设定长度一致的β-actin cDNA片段(图2).从含X-gal/IPTG的LB固体培养基上的蓝白斑筛选结果可以看到, 用自制T-A克隆载体进行克隆时，蓝斑较少而白斑较多(图3)，且从6个白斑中提取的质粒用限制性内切酶酶切后都含有插入片段，故对β-actin cDNA片段进行T-A克隆是一简便,而效率高的方法.1：DNA ⅩⅥ(250 bp ladder,0.25～3.0 kb)；2～7：从自制的T-A克隆白斑中抽提的质粒用EcoRⅠ及HindⅢ进行酶切后的结果；8：从克隆的蓝斑中抽提的质粒经EcoRⅠ及Hind Ⅲ酶切后的结果.T-A克隆的原理是基于Taq DNA聚合酶具有非模板依赖性的活性, 可将PCR双链产物的每一条链的3′端加入单A核苷酸尾, 在70～75℃时，Taq DNA聚合酶的这种活性尤为显著, 而常规的PCR反应程序最后的步骤均为72℃延伸7～10 min, 故可满足PCR产物3′端为突出的单A核苷酸尾; 另一方面,在仅有适量的dTTP存在的情况下, Taq DNA聚合酶也可将切成平端的质粒的3′端加入单T核苷酸尾, 故用Taq DNA聚合酶也造成了切成平端的pBS 质粒3′端产生了突出的单T核苷酸. PCR产物的3′末端单A核苷酸尾与切成平端的pBS质粒的3′末端突出的单T核苷酸实现了T-A互补, 称为T-A克隆, 它实际上是一种粘性末端连接, 因而具有较高的连接效率.从一些生物工程公司(如美国的Invitrogen公司或Promega公司)可以购到已制备好的T-A 克隆载体, 其制备原理与自制T-A克隆载体方法相似〔2,3〕, 但这类载体价格昂贵, 不利于广泛推广, 而且这种载体反复冻溶后连接效率也会降低;另一方面Invitrogen公司等提供的这类载体量较少, 进行大量的PCR产物克隆需用大量的T-A克隆载体,不能满足大量克隆的需要, 而我们自制的T-A克隆载体, 不但应用pBS质粒可行, 应用其他质粒也同样有效, 且操作简便, 可大量制备, 连接效率足以满足进行克隆操作的需要, 故值得推广应用.另外,我们也将RT-PCR 扩增得到的含有369个bp的β-LH cDNA片段克隆入自制T-A 载体，经自动测序证实，插入片段为370 bp（PCR产物3′端加入了一个A），序列全长与设计的PCR产物序列及大小完全一致.在本实验中, 我们对用RT-PCR扩增的β-actin cDNA片段进行了T-A克隆,对一般的PCR 产物应用此方法也同样可行.。

测序通用引物列表

测序通用引物列表测序通用引物列表载体名称上游引物（5'primer）下游引物（3'primer）P3*FLAG-CMV CMV-30(825-854) CMV-24(1129-1152) pAc5.1/V5-His(_A,_B,_C) pAc5-5 BGH rev pAcG2T pGEX-5 not availablepACT T7EEV T3/EBVrevpACT2 GAL4 ADfor pGAL4-ADrvpACT2 p17110 p12584pACYC184(BamHI-site) PBRforBam PBRrevBampACYCDuet-1(MCSI) ACYCDuetUP1 Primer DuetDOWN1pACYCDuet-1(MCSII) DuetUp2 T7-Terminator pAdEasy-1 not available not availablepAdTrack-CMV not available not available pAS2-1 GAL4 Bdfor/P24990 pGAL4-BDrv/P31430pB42AD pB42ADF PB42ADRpBABE pBMN_5'pBacPAK8 BAC1 BAC2pBAD pBAD-F pBAD-R pBAD/HisABC pBAD-5'pBBR1MCS T3/M13rev T7/M13forpBD-GAL4 pBD-GAL4-F PBD-GAL4-RpBI121 35S NOSpBIND GAL4-Bdfor T3,EBVrevpBK-CMV M13F/T7 M13R/T3 pBluescriptIIKS(+/-) T3/M13rev T7/M13for（优先用M13F）pBluescriptIISK(+/-) T3/M13rev T7/M13forpBluescriptKS(+/-) T3/M13rev T7/M13forpBluescriptSK(+/-) T3/M13rev T7/M13forpBR322(BamHI-site) PBRforBam PBRrevBampBR322(EcoRI/HindIII-sites) pBRforEco pBRrevHind pBR325(BamHI-site) PBRforBam PBRrevBampBR329(BamHI-site) PBRforBam PBRrevBam pBridge(MCSI) GAL4-Bdfor 3'BDpBridge(MCSII) not available not available pBS-T II T3/M13rev T7/M13for pBS（AMP）T7 T3 pBSR T3 T7ter pBudCE4.1(MCSI) CMV-Profor,T7 c-mycrev,EBVrevpBudCE4.1(MCSII) EF-1α Fwd BGHpBudCE4.1/lacZ/CAT CMV-Profor,T7 c-mycrev,EBVrev pBV220 pBV220F PBV220RpCAL-c T7/Tac-Profor T7-TerminatorpCAL-n T7/Tac-Profor T7-Terminator pCAMBIA1301(1300) pCAMBIA1301-5'(ECORI)/M13R pCAMBIA1301-3'(HindIII) pCAMBIA1304 pCAMBIA1301-5'(ECORI) pCAMBIA1301-3'(HindIII) pCAMBIA2300 M13R(-48) M13F(-47)/M13F(-49) pCANTB5E S1 S6pCAT3-enhancer RVP3 此载体无反向引物pCDFDuet-1(MCSI) ACYCDuetUP1 Primer DuetDOWN1pCDFDuet-1(MCSII) DuetUP2 T7TER pcDNA1.1 CMV-Profor,T7 pCDM8-3pcDNA2.1 M13for/T7 M13rev/Tac-ProforpcDNA3 T7/CMV-Profor BGH rev/SP6 pcDNA3.1(+/-) pcDNA3.1F/T7/CMV-Profor BGH rev pcDNA3.1/His(_A,_B,_C) T7/CMV-Profor BGH rev pcDNA3.1/myc-His(_A,_B,_C) T7/CMV-Profor BGH rev/c-mycrev pcDNA3.1/V5-His(_A,_B,_C) T7/CMV-Profor BGH rev/V5rev pcDNA3.1/Hygro(+,-) T7/CMV-Profor BGH rev/V5revpcDNA3.1/Zeo(+.-) T7 BGHrevpcDNA3.3TOPOTA CMV-Profor TKPAreverse pcDNA4/HisMax(_A,_B,_C) Xpressfor BGH revpcDNA4/HisMax-TOPO Xpressfor BGH rev pcDNA4/HisMax-TOPO/lacZ Xpressfor BGH rev pcDNA4/myc-His(_A,_B,_C) T7,CMV-Profor BGH rev,c-mycrev pcDNA4/TO TREfor/CMV-Profor BGH rev pcDNA4/V5-His(_A,_B,_C) CMV-Profor,T7 BGH rev,V5rev pcDNA4-TET/ON/AMP+ CMV-ProforpcDNA5/FRT T7/CMV-Profor BGH rev pcDNA6/myc-His(_A,_B,_C) CMV-Profor,T7 BGH rev,c-mycrev pcDNA6/V5-His(_A,_B,_C) CMV-Profor,T7 BGH rev,V5rev pCEP4 pCEP-F/CMV-Profor EBVrevpCI T7（17BASE）EBVrevpCI-neo T7（17BASE）EBVrev,T3pCMS-EGFP T7 T3pCMS-EGFP T7 EBVrev,T3pCMV-3Tag-4A T3 /PFLAG-CMV-F T7 pCMV5 pCMV5F PCMV5RpCMV6 CMV-Profor pCMV6-3、HGHrevpCMV6-XL4 CMV-Profor/T7 pCMV6-3、HGHrevpCMV-HA PCMV-F,CMV-Profor,TREfor PCMV-R，EBVrev pCMV-MYC(AMP+) PCMV-F PCMV-R, EBVrevpCMVmyc/nuc CMV-Profor BGH rev,c-mycrev pcmv-scriptEXVector T3 T7 pCMV-Sport6 T7/M13for SP6/M13rev pCOLADuet-1(MCSI) ACYCDuetUP1 Primer DuetDOWN1 pCOLADuet-1(MCSII) DuetUP2 T7TER pCR2.1 T7,M13for M13rev pCR2.1-TOPO M13for,T7 M13rev pCR3.1 T7 BGH rev pCR3.1-Uni T7 BGH rev pCR4 T3/M13rev T7/M13for pCR4-Blunt T3/M13rev T7/M13forpCR4-TOPO M13rev,T3 M13for,T7pCR-Blunt M13rev T7,M13forpCR-BluntII M13rev/SP6 T7/M13for pCR-BluntII-TOPO M13rev/SP6 M13for/T7 pCRII M13rev/SP6 T7/M13for pCRII-TOPO M13rev/SP6 M13for/T7pCR-ScriptSK(+) T7/M13for T3/M13revpCR-XL-TOPO M13rev T7,M13forpCS2+(MCSI) SP6 EBVrev,T7?pCS2+(MCSII) T3 pSG5-3pDB_GAL4cam T7PpDB_leu PDBLeu-5 PDBLeu-3pDEST22 DEST22F DEST22RpDEST15 pGEX-5 T7-TerminatorpDEST20 pGEX-5 pFastBac-3pDEST26 TREfor/CMV-Profor T7/M13forpDisplay T7/CMV-Profor c-mycrev pDNR-LIB(MCS_A) M13for,T7 pSG5-3,M13R pDonar M13F M13RpDONR201 PDONR-F PDONR-RpDONR207 PDONR-F PDONR-RpDONR223 M13F M13RpDrive T7/M13rev SP6/M13for pDsRED1-C1 (DsRed1-N-f) DsRed1-C-rpDsRed1-N1 CMV-Profor RFP-Nrev,CMV-R?pDsRed2-N1 (DsRed1-N-f) DsRed1-C-rpDsRed2-C1 (DsRed1-N-f) DsRed1-C-r pDsRED2-C1(KAN+) pDsRED-ex-C1-F pEGFP-N-3’ pDsRed-Express dsRed1_N_primer/CMV-F dsRed1_C_primer/CMV-R pDSRED-monomer-N1(KAN+) dsRed1_N_primerpDSRED-N1(KAN+) pEGFP-N-5’ pDSRED-N-RpEASY-Blunt M13F T7/ M13RpEASY-BluntSimple M13F T7/ M13R（距离插入位点合适，优先安排）pEASY-T1 Simple M13F M13R（距离插入位点合适，优先安排）pEASY-T1 M13F/T7 M13RpEASY-T3 M13F/T7 M13R/SP6pECFP-N(C) PECFP-N-5. PECFP-N-3,pEF/myc/cyto/ER/mito/nuc pEF-5 Pcdna3.1R/BGH rev pEF1(4,6/myc-His) T7/pEF-5 Pcdna3.1R/BGH rev pEF1(4,6/V5-His) T7/pEF-5 Pcdna3.1R/BGH rev pEF1(4;6/His_A;_B;_C) T7/Xpressfor Pcdna3.1R/BGH rev pEF5/FRT/V5-D(-TOPO) T7/pEF-5 Pcdna3.1R/BGH rev pEGFP M13rev EGFP-NrevpEGFP-1 not available EGFP-Nrev/ PEGFP-N-3′pEGFP-C PEGFP-C-5′ PEGFP-C-3′pEGFP-C1 EGFP-Cfor SV40-pArevpEGFP-C2 EGFP-Cfor SV40-pArevpEGFP-C3 EGFP-Cfor SV40-pArevpEGFP-F EGFP-Cfor SV40-pArevpEGFP-N PEGFP-N-5′ PEGFP-N-3′pEGFP-N1 CMV-Profor EGFP-NrevpEGFP-N2 CMV-Profor EGFP-NrevpEGFP-N3 CMV-Profor EGFP-NrevpENTR M13F M13R pET-11(-a,-b,-c,-d) T7 T7-TerminatorpET-12(-a,-b,-c) T7 T7-Terminator pET-14b T7 T7-Terminator pET-15b T7 T7-TerminatorpET-16b T7 T7-TerminatorpET-17b T7 T7-TerminatorpET-17xb T7 T7-TerminatorpET-19b T7 T7-TerminatorpET-20b(+) T7 T7-TerminatorpET-21(-a,-b,-c,-d)(+) T7 T7-Terminator pET-22b(+) T7 T7-TerminatorpET-23(-a,-b,-c,-d)(+) T7 T7-TerminatorpET-24(-a,-b,-c,-d)(+) T7 T7-Terminator pET-25b(+) T7 T7-TerminatorpET-26b(+) T7 T7-TerminatorpET-27b(+) T7 T7-Terminator pET-28a(-b,-c)(+) T7 T7-TerminatorpET-29a(-b,-c)(+) S.tag/T7 T7-TerminatorpET-3(-a,-b,-c,-d) T7 T7-Terminator pET-30_Ek/LIC T7 T7-Terminator pET-30_Xa/LIC T7 T7-T erminator pET-30a(-b,-c)(+) S.tag/T7 T7-Terminator pET-31b(+) not available T7-T erminator pET-32_Ek/LIC TRXfor T7-T erminator pET-32_XA/LIC TRXfor T7-Terminator pET-32a(-b,-c)(+) S.tag/TRXfor T7-Terminator pET-33b(+) T7 T7-Terminator pET-34b(+) S.tag T7-Terminator pET-35b(+) S.tag T7-T erminator pET-36b(+) S.tag T7-Terminator pET-37b(+) S.tag T7-Terminator pET-38b(+) not available T7-Terminator pET-39b(+) S.tag T7-T erminator pET-40b(+) S.tag T7-Terminator pET-41_Ek/LIC GST-Cfor T7-Terminator pET-41a(-b,-c)(+) S.tag/pGEX-5 T7-Terminator pET-42a(-b,-c)(+) S.tag/pGEX-5 T7-Terminator pET-43.1a(-b,-c)(+) S.tag coliDOWN pET-43.1a_EK/LIC S.tag not available pET-44a(-b,-c)(+) S.tag T7-Terminator pET-44a_EK/LIC S.tag not available pET-45b(+) T7 T7-Terminator pET-46_Ek/LIC T7 T7-Terminator pET-5(-a,-b,-c) T7 T7-Terminator pET-52b(+) T7 T7-Terminator pET-7 T7 T7-Terminator pET-9(-a,-b,-c,-d) T7 T7-T erminator pET coco-1 T7 T7-Terminator pETDuet-1(MCSI) pETUP1 DuetDOWN1 pETDuet-1(MCSII) DuetUp2 T7-Terminator pET-T4 T7 T7-Terminator pEYFP-C1 pEGFP-C-5’ pEGFP-C-3' pEYFP-N1 pEGFP-N-5’,CMV-Profor pEGFP-N-3’ pFLAG-ATS N26for pTrcHis-rv；C24rev pFLAG-CTC N26for pTrcHis-rv；C24rev pFLAG1 N26for pTrcHis-rv；C24rev pFLAG-CMV(-2) CMV-30；CMV-Profor CMV-24 pFLAG-CMV1 CMV-30 CMV-24pGAD424 GAL4_ADfor 3'ADpGADGH GAL4_ADfor 3'ADpGADT7 T7/GAL4_ADfor 3'AD pGADT7-Rec T7/GAL4_ADfor 3'AD pGADT-T T7 3,BD pGAD10 GAL4_ADfor 3'AD pGAPZa-A a-FACTOR 3'AOX pGBKT7 T7 3,BDpGBT9 MATCHMAKER5'DNA-BD/GAL4BD MATCHMAKER3'DNA-BDpGEM-1 T7 SP6pGEM-3 T7 SP6 pGEM-3Zf(+)(-) SP6/M13rev T7/M13for pGEM-4 T7 SP6pGEM-4Z T7/M13for SP6/M13rev pGEM-5Zf(+)(-) SP6/M13rev T7/M13for pGEM-7Zf(+)(-) SP6/M13rev T7/M13for pGEM-9Zf(+)(-) T7/M13for SP6/M13rev pGEM-T T7/M13for SP6/M13rev pGEM-T_Easy T7/M13for SP6/M13rev pGene/V5-His_A(_B,_C) pGENE-5 BGH rev,V5rev pGEX-2T pGEX-5 pGEX-3 pGEX-2TK pGEX-5 pGEX-3pGEX-3X pGEX-5 pGEX-3 pGEX-4T-1(-2,-3) pGEX-5 pGEX-3 pGEX-5X-1(-2,-3) pGEX-5 pGEX-3 pGEX-6P-1(-2,-3) pGEX-5 pGEX-3 pGL2 GLP1 GLP2pGL3 RVP3 GLP2(RVP4)(没有特别说明用GLP2)pGL3-Basic(MCSI) RVP3(PGL3+)? GLP2(PGL3-)?pGL3-Basic(MCSII) RVP4, PLXSN-3'?pGL4pGlow(-TOPO) T7 pGlow-3 pGM-T T7 SP6pGWC SP6 T7pHook-2 T7/CMV-Profor not availablepIND/V5-His_A(_B,_C) not available BGH rev,V5rev PinpointTMVector PinpointPrimer SP6pIRES(MCSI) T7 pIRES-3pIRES(MCSII) not available T3,EBVrevpIRES2-EGFP CMV-Profor,pIRES2-EGFP.P5’ IRESrev,pIRES2-EGFP.P3’ pIRES-hrGFP-2a CMV-Profor,T3 pIRES-hrGFP-3 pIRESneo2 T7/CMV-Profor pIRES-3pIVEX(all) T7/pBRrevBam T7-T erminatorpLEXA pLEXA-F pLEXA-RpLNCX pLNCX-F pLNCX-RpLNCX2 CMV-Profor pRevTRE-3 pLVTHM（H1启动子下游）H1primer SP6 pLXSN pLXSN-F pLXSN-RpMALc MalE primer M13F(-47)pMAL-c2E MalE primer M13F(-47)pMAL-C2x Pmal-c2x-F(P5’) Pmal-C2X-R(P3’ )pMALd MalE primer M13F(-47)pMALe MalE primer M13F(-47)pMAL-P4X MalE primer M13F(-47)pMAL-p2X MalE primer M13F(-47)pMET A/B/C AUG1F AUG1RpMD18-T M13R(-48)ECORI M13F(-47)(HINDⅢ)pMD19-T M13F47 M13R48pMD20-T M13F47 M13R48pMOSBlue T7/M13rev M13forpMSCV-puro pLXSNfw pMSCVrev pMT/V5-His_A(_B,_C) Mtfor BGH rev,V5rev pNTAP T3 T7pCTAP pCTAP5'primer T7pOTB7 M13rev/T7 M13for/SP6 pOptiVEC-TOPO TA CMV-F/CMV-Profor EMCVIRES reverse pPC86 PPC86-F PPC86-R pPC97 PBD-GAL4-F PBD-GAL4-RpPIC3.5K 5'AOX 3'AOXpPic9k(A+,Z+) 5’AOX(Ppic9k-f)/a-factor 3’AOX(Ppi c9k-R) pPICZa 5'AOX/PPICZa-F 3'AOX pPROEXHTA M13R(-48) 无反向引物pProEX-HTa(b,c) M13R48/ Tac-Profor pBADrv/pTrcHis-3 pPD129.36 M13F20/M13F pQE30or40or60(AMP+) PQE30-F PQE-30R pRC/CMV2/CAT CMV/T7pRECEIVER CMV-F 此载体无反向引物pRECEIVER-M03 pRECEIVER-M03F pRECEIVER-M03R pREP4 pREP4 forward primer EBV reverse primerpRK5 SP6 pSG5-3pRSET T7/Xpressfor T7ter pRSFDuet-1(MCSI) DuetUP1 DuetDOWN1 pRSFDuet-1(MCSII) DuetUP2 T7TER pSecTac2 T7/CMV-Profor BGH rev/c-mycrevpSG5 pSG5-5,/T7 PSG5-R(SV40)pSHlox1 T7 SP6 pSHUTTLE-CMV PSHUTTLE-CMV-F PSHUTTLE-CMV-R pSI T7 EBVrev pSilencer1.0-U6 T7 T3 pSilencer2.0-U6 T7 M13for pSilencer2.1-U6neo T7 M13for pSilencer3.1-H1hygro M13F(-47) 3.0REV pSilencer4_1-CMVneo pSilener4.1-5' CMV-Profor pSILENCEV2.0-U6 T7 2.0REV pSIneo T7 EBVrev,T3Psit T7 T7T pSK01-T M13F M13RpSK-CMV(KAN+) T7 T3 pSOS Psos5' Psos3'pSP64 SP6 M13revpSP64/65 SP6 此载体无反向引物pSP65 SP6 M13revpSP70 SP6 T7pSP71 SP6 T7pSP72 SP6 T7pSP73 SP6 T7pSport1 SP6/M13F(-47) T7/M13RpSPORT1 SP6/M13for T7/M13revpSPT18 SP6 T7pSTBlue T7/M13rev SP6/M13for pSUPER.Basic T7/M13F M13R pSUPER T7 T3pSURE-T M13F M13R pSURE-Tsimple M13F-47 M13R-48 pSuperCos pBRforEco T7pT3T7 M13rev/T3 M13for/T7pT7-7 T7 not availablepT7Blue? T7 M13F(-47)pT7T3_18U M13rev/T7 M13for/T3 pT7T3D-PAC M13rev/T7 M13for/T3 pTA2 M13F/T7(优先使用M13F）T3/M13R pT-Adv M13rev T7,M13forpTAg T7/M13rev M13for pTARGETTM pTarget.F(在T7前面）/T7 pTarget.R pTG19-T M13F(-47) M13R(-48) pTARGETTM T7/M13F PTARGET-SEQ pThioHisA,B,andC Trx Forward Trx Reverse / M13forpTO-T7 T7 T7TERpTRC99A PTRC99A-F pTrcHis-rvpTrc99a-c PTRC99C-F PTRC99C-RpTRC99a-c PTRC99C-F PTRC99C-RpTrcHisB PTrcHisA-F/Xpressfor PTrcHisA-RpTrcHisA PTrcHisA-F PTrcHisA-RpT-REX-DEST30 TREfor T7 pTriEx1 T7/TriExup TriExdownpTriEx1.1 T7/TriExup TriExdownpTriEx1.1_Hygro T7/TriExup not availablepTriEx1.1_Neo T7/TriExup IRESrevpTriplEX1 TriplEx-LD-5 T7,TriplEx-LD-3pTriplEX2 TriplEx-LD-5；pTR5‘ T7,TriplEx-LD-3pTWIN-1 T7 T7TERpTXB1 T7 MxeInteinrevpTXB2 T7 MxeInteinrevpTXB3 T7 MxeInteinrevpTYB1 T7 InteinrevpTYB2 T7 InteinrevpTYB3 T7 InteinrevpTYB4 T7 InteinrevpTZ_18U T7/M13rev M13forpUB6/V5-His UB-F BGH rev,V5rev pUC13 M13rev/M13rev(-48) M13for/M13for(-49)pUC18 M13rev/M13rev(-48) M13for/M13for(-49) pUC18(19)/118(119) M13F(-47) M13R(-48)/PUC19(HINDⅢ) pUC19 M13rev/M13rev(-48) M13for/M13for(-49)pUC57 M13rev/M13rev(-48) M13for/M13for(-49)pUC8 M13rev/M13rev(-48) M13for/M13for(-49)pUC9 M13rev/M13rev(-48) M13for/M13for(-49)pUM-T M13F(-20) M13R(-20)pUCm-T(AMP+) M13F/T7 M13RpUNI/V5-His not available BGH rev,V5revpVAX1T7 T7/CMV-Profor PCDNA3.1R/BGHR pVP22/mycHis VP22-Cfor BGH rev,c-mycrev pVP22/mycHis2 T7/CMV-Profor VP22-Nrev pWE15 pBRrevHind T7pYES2 T7 pYes2.R pYES-DEST52 T7/GAL1-Profor V5rev/CYC1-Terminator pYEX_4T_1 Clontech pYEX_4T-3 pYEX_4T_2 pGEX-5 pYEX_4T-4pYEX_4T_3 pGEX-5 pYEX_4T-4pYEX_4T_4 pGEX-5 pYEX_4T-4 pZeoSV2+/hu-Tyr T7 not available pZERO-1 M13rev/SP6 T7/M13forpZERO-2 M13rev/SP6 M13for/T7pZome-1-C Zome-F Zome-RpZome-1-N Zome-F Zome-R YCp50(BamHI-site) PBRforBam PBRrevBam YEp13(BamHI-site) PBRforBam PBRrevBam YEp24(BamHI-site) PBRforBam PBRrevBam YIp5(BamHI-site) PBRforBam PBRrevBam RNAi-ReadypSIREN-RetroQ-U6Zs Green U6菌PCDB T7 BGH 天为时代TA载体T7 T3 m13（+）T7？T3？pMSCV-neo pMSCV-5' pMSCV-3'。

pBLUE-T 载体连接试剂盒使用说明书

2. 1)
常规连接反应：在一个标准的 10 l 连接反应体系中，加入 1 l 30ng pBLUE-T 载体、X l PCR 产物(在通常状况下，没有必要对 PCR 产物进行精确定量，一般 PCR 产物与载体的摩尔比优化至 2:1~10:1 就可以得到良好结果，推荐 3:1)、1l 10 ligation Buffer 和 0.5-1l (2.5 -5 Weiss Units)的 T4 DNA Ligase，其余用水补足。反应按以下体系进行： 1l 1l 1l X l Yl 0.5-1l（5 Weiss Units/l) Final V olume 10l -210Ligation Buffer (用前充分融解混匀) 10 PEG Enhancer pBLUE-T 载体纯化后的 PCR 产物/或者 1l 1000bp control 无菌水 T4 DNA Ligase
一般最后加入 T4 DNA Ligase。 2) 16℃连接过夜（一般可在 PCR 仪器完成）。通常推荐 16℃连接过夜（ 10l 体系标准连接酶量为 2.5 Weiss Units），可以得到最多的转化子。虽然本系统在 16℃连接 1 小时（10l 体系推荐连接酶量为 5 Weiss Units）即可达一般研究的要求。 3) 3. 1). 冰上冷却，然后转化或贮存于-20℃。快速连接反应：反应按以下体系进行： 5l 1l X l Yl 1l（5 Weiss Units/l) Final V olume 10l 2 Quick Ligation Buffer pBLUE-T 载体纯化后的 PCR 产物/或者 1l 1000bp control 无菌水 T4 DNA Ligase
完
-7-
6). 平板在 37℃下正向放置 1 小时以吸收过多的液体，然后倒置培养过夜。

PostScript3 Unit Type 2027 操作说明书

PostScript3 Unit Type2027操作说明书补充说明简介本说明书提供了关于使用机器的详尽操作说明和注意事项要充分利用本设备的各种功能所有操作员都应仔细阅读本手册并按照这些说明进行操作请将本手册存放在机器旁边便于阅读的地方重要事项本手册的内容若有变更恕不事先通知在任何情况下本公司不对使用或操作机器而引起的直接的间接的特殊的意外的或相因而生的损失负责商标Microsoft®Windows®和Windows NT®是Microsoft Corporation在美国和/或其它国家的注册商标Adobe®PostScript®Acrobat®和PageMaker®是Adobe Systems Incorporated的注册商标Appletalk Apple Macintosh和Mac是Apple Computer, Incorporated的注册商标本手册涉及的其它产品名称只用作识别目的有可能分别是相应公司的商标我们否认对这些标记负有任何或所有权利注本手册中的一些插图可能和机器略有差别某些选项在一些国家可能不能使用欲了解详细情况请和您当地的经销商联系目录1.PostScript 3可安装的选购件 (1)设定选购件 (1)打印文稿 (3)节省碳粉, 边缘平滑化 (8)装订 (10)样张打印 (12)锁定打印 (19)文件服务器 (25)Printer Utility for Mac (27)Printer Utility for Mac 的安装 (27)Printer Utility for Mac 的启动 (28)Printer Utility for Mac的功能 (29)下载PS字体 (30)显示字体 (31)删除字体 (31)初始化硬盘 (32)页面设置 (32)打印字体目录 (32)打印字体样本 (33)重命名设备 (33)重新启动设备 (34)下载PostScript文件 (34)选择地区 (34)显示设备状态 (35)启动对话控制台 (35)索引 (37)iii可以安装以下选购件LCT文件制成机500文件制成机1000请首先安装打印机驱动程序件即使它们确实已经安装也不能使用视操作系统的情况而定安装打印机驱动程序的过程可能不同Windows 您可以使用下列标签来设定任何选购件请从访问打印机驱动程序如果从应用程序使用则不能设定选购件如果计算机系统为只有具有管理值认情况下管理员当您更打印机驱动程序设定请用具有管理打印机许可的录Windows NT 4.0只有具有控制访问许可才能更程序设定值认情况下管理员服务器操作员组打印操作员者组有完全控制许可打印机驱动程序设定时请用具有控制许可的账户登录[附件 [设备设置PostScript 321❒如果在Windows 95/98/Me Windows 2000或Windows NT 4.0中使用Adobe PageMaker 6.0 6.5或7.0您必须在Adobe PageMaker 的打印对话框中设定选购件❖Mac OS 您可以使用[选配器]对话框设定所有选购件限制❒如果使用Mac OS X 该功能不能使用打印文稿31打印文稿本章节说明如何从应用程序打印文稿❖纸张来源下表说明从何处选择该功能❖目标纸盘下表说明从何处选择该功能❖介质类型使用该功能选择纸张类型下表给出了可选择此功能的标签或菜单Windows 95/98/Me [纸张]标签中的[类型:]Windows 2000/XP [纸张/质量]标签中的[纸张来源]Windows NT 4.0[页面设置]标签中的[纸张来源]Mac OS 打印对话框中的[一般]中的[纸张来源]Mac OS X 打印对话框中的[进纸]Windows 95/98/Me [纸张]标签上[目的地]中的[纸盘3(LCT)]Windows 2000/XP [纸张/质量]或[布局]标签上[高级...]上[打印机功能]中的[目的地]Windows NT 4.0[高级]标签上[文档选项]上[打印机功能]中的[目的地]Mac OS 打印对话框中[打印机特别选项]中的[目的地]Mac OS X 打印对话框中[打印机功能]中[功能1]标签上的[目的地]Windows 95/98/Me [纸张]标签上[所有页]中的[类型:]Windows 2000/XP [纸张/质量]标签上的[介质]Windows NT 4.0[高级]标签上[纸张/输出]中的[介质]Mac OS 打印对话框中[打印机特别选项]中的[纸张类型]Mac OS X 打印对话框中[打印机功能]中[功能1]标签上的[纸张类型]PostScript 341❖双面打印使用此功能选择双面打印限制❒要使用此功能必须在打印机上安装双面打印单元下表说明从何处选择该功能❖自动分页使用此功能可以启用分页这样在打印包含多页的文稿时打印机就可以方便地分页打印多套限制❒如果系统为Windows 2000/XP Mac OS 或Mac OS X 请务必确认未选择下列复选框• Windows 2000/XP[纸张/质量]标签上[高级...]上[纸张/输出]上的[自动分页]复选框• Mac OS打印对话框中的[自动分页]复选框• Mac OS X打印对话框中[副本数和页数]上的[自动分页]复选框下表说明从何处选择该功能Windows 95/98/Me[设定]标签上的[双面]Windows 2000/XP[布局]标签上的[双面打印]Windows NT 4.0[页面设置]标签上的[双面打印]Mac OS打印对话框中[版面]上的[双面打印]Mac OS X 打印对话框中[双面]上的[双面打印]Windows 95/98/Me[设定]标签上的[自动分页]Windows 2000/XP[纸张/质量]或[布局]标签上[高级...]上[打印机功能]中的[自动分页]Windows NT 4.0[高级]标签上[文档选项]上[打印机功能]中的[自动分页]Mac OS打印对话框中[打印机特别选项]中的[自动分页]Mac OS X 打印对话框中[打印机功能]中[功能1]标签上的[自动分页]打印文稿51❖边缘平滑化使用此功能可以提高文字打印质量将自动平滑处理曲线凹处以提供更清晰的外观限制❒如果选择[边缘平滑化]将不启用[节省碳粉]❒此功能专门用于提高文字打印质量因此当打印图片和半色调数据时应将其设定为关下表说明从何处选择该功能❖节省碳粉使用此功能可以在打印时减少碳粉使用量限制❒如果选择[节省碳粉]将不启用[边缘平滑化]下表说明从何处选择该功能Windows 95/98/Me [打印质量]标签上的[边缘平滑化]Windows 2000/XP [纸张/质量]或[布局]标签上[高级...]上[打印机功能]中的[打印模式]Windows NT 4.0[高级]标签上[文档选项]中[打印机功能]中的[打印模式]Mac OS 打印对话框中[打印机特别选项]中的[打印模式]Mac OS X 打印对话框中[打印机功能]中[功能1]标签上的[打印模式]Windows 95/98/Me [打印质量]标签上的[节省碳粉]Windows 2000/XP [纸张/质量]或[布局]标签上[高级...]上[打印机功能]中的[打印模式]Windows NT 4.0[高级]标签上[文档选项]上[打印机功能]中的[打印模式]Mac OS 打印对话框中[打印机特别选项]中的[打印模式]Mac OS X 打印对话框中[打印机功能]中[功能1]标签上的[打印模式]PostScript 361❖装订使用此功能可以将打印出来的纸张装订在一起限制❒当装订时应使用文件制成机选购件请参见复印参考或打印机参考2关详细情况请参见装订打印机参考2下表说明从何处选择该功能❖样张打印使用此功能可以只打印一套多份打印作业这样如果对结果满意可以从设备的控制面板打印剩余的套件限制❒使用自带驱动程序的应用程序如PageMaker不能使用此功能❒输入用户ID 有助于您区分不同的打印作业下表说明从何处选择该功能Windows 95/98/Me[设定]标签上的[装订]Windows 2000/XP[纸张/质量]或[布局]标签上[高级...]上[打印机功能]中的[装订]Windows NT 4.0[高级]标签上[文档选项]上[打印机功能]中的[装订]Mac OS打印对话框中[打印机特别选项]中的[装订]Mac OS X 打印对话框中[打印机功能]中[功能2]标签上的[装订]Windows 95/98/Me[设定]标签上的[作业方式::]Windows 2000/XP[作业日志]标签上的[作业方式::]Windows NT 4.0[作业日志]标签上的[作业方式::]Mac OS打印对话框中的[作业日志]Mac OS X 此功能不可使用1❖锁定打印使用此功能可以将文稿保存在设备硬盘中并加上密码然后根据需要打印它们限制❒使用自带驱动程序的应用程序如PageMaker 不能使用此功能4位下表说明从何处选择该功能❖文件服务器使用此功能可以存储您要打印的设备硬盘中的文稿也可以存储以后要合并或处理的打印文稿有关文件服务器功能的更多信息请参见打印机参考2中的访问文件服务器限制❒使用自带驱动程序的应用程序如PageMaker 不能使用此功能下表说明从何处选择该功能Windows 95/98/Me [设定]标签上的[作业方式:]Windows 2000/XP [作业日志]标签上的[作业方式:]Windows NT 4.0[作业日志]标签上的[作业方式:]Mac OS 打印对话框中的[作业日志]Mac OS X此功能不可使用Windows 95/98/Me [设定]标签上的[作业方式:]Windows 2000/XP [作业日志]标签上的[作业方式:]Windows NT 4.0[作业日志]标签上的[作业方式:]Mac OS 打印对话框中的[作业日志]Mac OS X此功能不可使用1节省碳粉, 边缘平滑化请按照下列步骤使用节省碳粉或边缘平滑化打印文稿Windows 95/98/MeA在应用程序的[文件]菜单上单击[打印]将出现[打印]对话框B选择打印机然后单击[属性]C单击[打印质量]标签D选择您要使用的功能E完成必要的设定后单击[确定]关闭打印机属性对话框F从应用程序的[打印]对话框开始打印Windows 2000A在应用程序的[文件]菜单上单击[打印]将出现[打印]对话框B单击[纸张/质量]标签C单击[高级...]显示[高级选项]对话框D单击[打印模式]选择需使用的功能E完成必要的设定后单击[确定]F从应用程序的[打印]对话框开始打印Windows XPA在应用程序的[文件]菜单上单击[打印]将出现[打印]对话框B选择打印机然后单击[首选设置]C单击[高级...]显示[高级选项]对话框1D 单击[打印模式]选择需使用的功能E 单击[确定]关闭[高级选项]对话框F 完成必要的设定后单击[确定]关闭[打印首选设置]对话框G 从应用程序的[打印]对话框开始打印Windows NT 4.0A 在应用程序的[文件]菜单上单击[打印]将出现[打印]对话框B选择打印机然后单击[属性]C 单击[高级]标签D 从[文档选项]单击[打印模式]选择要使用的功能E 完成必要的设定后单击[确定],关闭[属性]对话框F 从应用程序的[打印]对话框开始打印Mac OS/Mac OS XA 在应用程序的[文件]菜单上单击[打印]将出现[打印]对话框B 在弹出菜单中单击[打印机特别选项]C 单击[打印模式]选择需使用的功能D 完成必要的设定后单击[打印]1装订请按照下列步骤用装订功能打印文稿Windows 95/98/MeA在应用程序的[文件]菜单上单击[打印]将出现[打印]对话框B选择打印机然后单击[属性]C单击[设定]标签D在[装订]中进行必要的设定然后单击[确定]关闭打印机属性对话框E从应用程序的[打印]对话框开始打印Windows 2000A在应用程序的[文件]菜单上单击[打印]将出现[打印]对话框B单击[纸张/质量]标签C单击[高级...]显示[高级选项]对话框D单击[装订]选择需使用的功能E完成必要的设定后单击[确定]F从应用程序的[打印]对话框开始打印Windows XPA在应用程序的[文件]菜单上单击[打印]将出现[打印]对话框B选择打印机然后单击[首选设置]C单击[高级...]显示[高级选项]对话框D单击[装订]选择需使用的功能1E 单击[确定]关闭[高级选项]对话框F 完成必要的设定后单击[确定]关闭[打印首选设置]对话框G 从应用程序的[打印]对话框开始打印Windows NT 4.0A 在应用程序的[文件]菜单上单击[打印]将出现[打印]对话框B选择打印机然后单击[属性]C 单击[高级]标签D 从[文档选项]单击[打印模式]选择要使用的功能E 完成必要的设定后单击[确定],关闭[属性]对话框F 从应用程序的[打印]对话框开始打印Mac OS/Mac OS XA 在应用程序的[文件]菜单上单击[打印]将出现[打印]对话框B 在弹出菜单中单击[打印机特别选项]C 在[装订]弹出菜单上选择装订位置D 完成必要的设定后单击[打印]1样张打印请按照下列步骤用样张打印功能打印文稿Windows 95/98/Me况下打印机驱动程序会对样张打印作业自动分页如果在应用程序[打印]对话框中选择了分页选项可能会打印过多的页数A在应用程序的[文件]菜单上单击[打印]将出现[打印]对话框B选择打印机然后单击[属性]C单击[设定]标签D在[作业方式:]列表中单击[样张打印]E单击[详细资料]F 在[用户识别号码]框中输入最多8位字母数字字符a-z A-Z0-9字符的用户IDG单击[确定]H单击[确定]关闭打印机属性对话框I将打印份数设定为2或更多然后从应用程序的[打印]对话框开始打印样张打印作业被传送到设备并打印一套J检查打印结果确认设定值是否正确如果设定值正确请转到步骤K打印剩余的套件如果要删除已保存的作业请参见第18页“删除样张打印文件”K在设备的控制面板上按打印机键显示打印机屏幕1L按[查看样张打印作业]显示保存的样张打印文件列表另外还出现下列项目• 用户识别号码通过打印机驱动程序设定的用户ID • 日期/时间从计算机传送作业的日期和时间• 设定数量剩余套数M 按[U 前页]或[T 下页]滚动文件找到您要打印的文件N 选择要打印的文件时请在该文件上按一下• 如果要取消样张打印文件请再次按该文件• 一次只能选择一个文件O 按[更改打印件数量]更改要打印的套数如果不想更改套数请转到步骤QP 使用数字键输入新套数然后按[确定]再次出现文件列表画面❒按[清除]改正输入错误❒如果要取消[更改打印件数量]请按[取消]Q 按[打印]出现打印确认画面1R按[是]打印剩余的套件Windows 2000/XP, Windows NT 4.0况下打印机驱动程序会对样张打印作业自动分页如果在应用程序[打印]对话框中选择了分页选项可能会打印过多的页数A在应用程序的[文件]菜单上单击[打印]将出现[打印]对话框B选择打印机然后单击[属性]❒在Windows XP系统下选择打印机然后单击[首选设置]C单击[作业日志]标签D在[作业方式:]列表中单击[样张打印]E在[用户识别号码]框中输入最多8位字母数字字符a-z A-Z0-9字符的用户IDF单击[确定]关闭打印机属性对话框G将打印份数设定为2或更多然后从应用程序的[打印]对话框开始打印样张打印作业被传送到设备并打印一套H检查打印结果确认设定值是否正确如果设定值正确请转到步骤I打印剩余的套件如果要删除已保存的作业请参见第18页“删除样张打印文件”1I 在设备的控制面板上按打印机键显示打印机屏幕J 按[查看样张打印作业]显示保存的样张打印文件列表另外还出现下列项目• 用户识别号码通过打印机驱动程序设定的用户ID • 日期/时间从计算机传送作业的日期和时间• 设定数量剩余套数K 按[U 前页]或[T 下页]滚动文件找到您要打印的文件L 选择要打印的文件时请在该文件上按一下• 如果要取消样张打印文件请再次按该文件• 一次只能选择一个文件M 按[更改打印件数量]更改要打印的套数如果不想更改套数请转到步骤ON 使用数字键输入新套数然后按[确定]再次出现文件列表画面❒按[清除]改正输入错误❒如果要取消[更改打印件数量]请按[取消]1O按[打印]出现打印确认画面P按[是]打印剩余的套件Mac OS/Mac OS X限制❒如果使用Mac OS X该功能不能使用A在应用程序的[文件]菜单上单击[打印]将出现[打印]对话框B在弹出菜单中单击[作业日志]C在[作业方式:]弹出菜单上选择合适的设定值D在[用户识别号码]框中输入最多8位字母数字字符a-z A-Z0-9字符的用户IDE将打印份数设定为2或更多然后单击[打印]样张打印作业被传送到设备并打印一套F 检查打印结果确认设定值是否正确如果设定值正确请转到步骤G打印剩余的套件如果要删除已保存的作业请参见第18页“删除样张打印文件”G在设备的控制面板上按打印机键显示打印机屏幕1H按[查看样张打印作业]显示保存的样张打印文件列表另外还出现下列项目• 用户识别号码通过打印机驱动程序设定的用户ID • 日期/时间从计算机传送作业的日期和时间• 设定数量剩余套数I 按[U 前页]或[T 下页]滚动文件找到您要打印的文件J 选择要打印的文件时请在该文件上按一下• 如果要取消样张打印文件请再次按该文件• 一次只能选择一个文件K 按[更改打印件数量]更改要打印的套数如果不想更改套数请转到步骤ML 使用数字键输入新套数然后按[确定]再次出现文件列表画面❒按[清除]改正输入错误❒如果要取消[更改打印件数量]请按[取消]M 按[打印]出现打印确认画面1N按[是]打印剩余的套件删除样张打印文件如果对打印的文稿不满意您可以删除样张打印文件A在设备的控制面板上按打印机键显示打印机屏幕B按[查看样张打印作业]显示保存的样张打印文件列表C选择要删除的文件时请在该文件上按一下❒若要取消选择请再按一次突出显示的文件❒一次只能选择一个文件D 按[删除]出现删除确认画面E按[是]删除文件文件删除后打印机画面再次出现1锁定打印请按照下列步骤用锁定打印功能打印文稿Windows 95/98/MeA 在应用程序的[文件]菜单上单击[打印]将出现[打印]对话框B 选择打印机然后单击[属性]C 单击[设定]标签D 在[作业方式:]列表中单击[锁定打印]E 单击[详细资料]F 在[用户识别号码]框中输入最多8位字母数字字符a-zA-Z 0-9字符的用户ID然后在[密码:]框中输入四位数的密码G单击[确定]H 单击[确定]关闭打印机属性对话框I 完成必要的设定后单击[确定],关闭[打印]对话框文稿文件保存在设备中如果要打印此文稿请转到步骤J如果要删除此文稿请参见第24页“删除锁定打印文件 ”J 在设备的控制面板上按打印机键显示打印机屏幕1K按[查看锁定打印作业]显示存储的锁定打印文件的列表显示从计算机传送此作业的日期和时间以及用户IDL选择要打印的文件时请在该文件上按一下❒若要取消选择请再按一次突出显示的文件❒一次只能选择一个文件M按[打印]出现密码画面N使用数字键输入密码然后按[确定]出现打印确认画面O按[是]锁定打印文件被打印出来❒如果在开始打印后按[作业重设]来停止打印文件将被删除1Windows 2000/XP, Windows NT 4.0A 在应用程序的[文件]菜单上单击[打印]将出现[打印]对话框B 选择打印机然后单击[属性]❒在Windows XP 系统下选择打印机然后单击[首选设置]C 单击[作业日志]标签D 在[作业方式:]列表中单击[锁定打印]E 在[用户识别号码]框中输入最多8位字母数字字符a-z A-Z 0-9字符的用户ID然后在[密码:]框中输入四位数的密码F 单击[确定]关闭打印机属性对话框G 从应用程序的[打印]对话框开始打印文稿文件保存在设备中如果要打印此文稿请转到步骤H如果要删除此文稿请参见第24页“ 删除锁定打印文件 ”H 在设备的控制面板上按打印机键显示打印机屏幕I 按[查看锁定打印作业]显示存储的锁定打印文件的列表显示从计算机传送此作业的日期和时间以及用户ID1J选择要打印的文件时请在该文件上按一下❒若要取消选择请再按一次突出显示的文件❒一次只能选择一个文件K按[打印]出现密码画面L使用数字键输入密码然后按[确定]出现打印确认画面M按[是]锁定打印文件被打印出来❒如果在开始打印后按[作业重设]来停止打印文件将被删除1Mac OS/Mac OS X限制❒如果使用Mac OS X该功能不能使用A 在应用程序的[文件]菜单上单击[打印]将出现[打印]对话框B 在弹出菜单中单击[作业日志]C 在[作业方式:]弹出菜单中单击[锁定打印]D 在[用户识别号码]框中输入最多8位字母数字字符a-zA-Z 0-9字符的用户ID然后在[密码:]框中输入四位数的密码E 完成必要的设定后单击[打印]文稿文件保存在设备中如果要打印此文稿请转到步骤F如果要删除此文稿请参见第24页“删除锁定打印文件”F 在设备的控制面板上按打印机键显示打印机屏幕G 按[查看锁定打印作业]显示存储的锁定打印文件的列表显示从计算机传送此作业的日期和时间以及用户ID1❒若要取消选择请再按一次突出显示的文件❒一次只能选择一个文件I 按[打印]出现密码画面J使用数字键输入密码然后按[确定]出现打印确认画面K按[是]锁定打印文件被打印出来❒如果在开始打印后按[作业重设]来停止打印文件将被删除删除锁定打印文件如果对打印的文稿不满意您可以删除锁定打印文件A 在设备的控制面板上按打印机键显示打印机屏幕B按[查看锁定打印作业]显示存储的锁定打印文件列表1❒若要取消选择请再按一次突出显示的文件❒一次只能选择一个文件D 按[删除]出现密码画面E 使用数字键输入密码然后按[确定]出现删除确认画面F 按[是]文件删除后打印机画面再次出现文件服务器请按照下列步骤用文件服务器功能打印文稿Windows 95/98/MeA在应用程序的[文件]菜单上单击[打印]将出现[打印]对话框B 选择打印机然后单击[属性]C 单击[设定]标签D 在[作业方式:]列表中单击[文件服务器]E 单击[详细资料]F 在出现的对话框中输入用户ID 文件名和密码文件名和密码为任选项1G单击[确定]H从应用程序的[打印]对话框开始打印Windows 2000/XP, Windows NT 4.0A在应用程序的[文件]菜单上单击[打印]将出现[打印]对话框B选择打印机然后单击[属性]❒在Windows XP系统下选择打印机然后单击[首选设置]C单击[作业日志]标签D在[作业方式:]列表中单击[文件服务器]E在出现的对话框中输入用户ID文件名和密码文件名和密码为任选项F单击[确定]G 从应用程序的[打印]对话框开始打印Mac OS/Mac OS X限制❒如果使用Mac OS X该功能不能使用A在应用程序的[文件]菜单上单击[打印]将出现[打印]对话框B 在弹出菜单中单击[作业日志]C在[作业方式:]弹出菜单中单击[文件服务器]D在出现的对话框中输入用户ID文件名和密码文件名和密码为任选项E从应用程序的[打印]对话框开始打印271Printer Utility for Mac如果使用Printer Utility for Mac 您就可以执行下载字体和更改打印机名称等操作限制❒如果Macintosh 和打印机通过USB 选购件连接则不能使用Printer Utility forMac❒Printer Utility for Mac 要求有Mac OS 8.6-9.x支持Mac OS X 10.1操作环境Printer Utility for Mac 的安装请按照如下步骤在设备上安装Printer Utility for MacA 启动MacintoshB将光盘插入到光盘驱动器中将出现光盘图标C双击硬盘图标将它打开D 双击光盘图标将显示光盘上的内容E 双击[Mac OS 8 and 9]文件夹F 双击光盘中的[PS Utility ]文件夹然后将Printer Utility for Mac 文件拖放到Macintosh 硬盘G 将光盘图标拖放到[废纸篓]弹出光盘Printer Utility for Mac 安装完毕1这部分内容说明如何启动Printer Utility for MacMac OS印机A双击Printer Utility for Mac的图标出现[Printer Utility for Mac]对话框B单击[确定]启动Printer Utility for Mac需要几秒钟Mac OS XA双击Printer Utility for Mac的图标出现[Printer Utility for Mac]对话框B单击[确定]C在[可用的打印机:]框中选择要使用的打印机❒如果要更改打印机请单击Printer Utility for Mac菜单上的[选择打印机...] D选择您要使用的打印机启动Printer Utility for Mac需要几秒钟28291关于Printer Utility for Mac的功能说明如下❖Apple 菜单Mac OS Printer Utility for Mac 菜单Mac OS X• [关于Printer Utility for Mac...]• [选择打印机...]显示[选择目标打印机]对话框❖[文件]菜单• [下载PS 字体]将字体PostScript Type 1下载到设备请参见第30页 “ 下载PS 字体 ”• [显示打印机的字体]显示并删除设备内存和设备硬盘中的字体请参见第31页 “ 显示字体 ”• [初始化打印机磁盘]初始化设备的硬盘请参见第32页 “ 初始化硬盘 ”• [页面设置]设定纸张尺寸以打印打印机字体目录和打印机字体样本请参见第32页 “ 页面设置 ”• [打印机字体样本]打印可用字体的名称请参见第32页 “ 打印字体目录 ”• [打印字体目录]打印字体的样本请参见第33页 “ 打印字体样本 ”• [重命名打印机]更改当通过Appletalk 查看时显示的设备名称请参见第33页 “ 重命名设备 ”• [重新启动打印机]重新启动设备请参见第34页 “ 重新启动设备 ”❖[应用程序]菜单• [下载PostScript 文件]下载PostScript文件请参见第34页 “ 下载PostScript 文件 ”• [选择区域]通过Appletalk 更改打印机所属的区域请参见第34页 “ 选择地区 ”• [显示打印机的状态]显示打印机的状态请参见第35页 “ 显示设备状态 ”• [启动对话控制台]创建和编辑PostScript文件并将其下载到打印机请参见第35页 “ 启动对话控制台 ”。

质粒载体分类及阅读

质粒载体分类及阅读一.九种表达载体Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C,pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA二.克隆载体pTZ19R DNApUC57 DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisApTrxFuspRSET-ApRSET-BpVAX1PBR322pbv220pBluescript II KS (+)L4440pCAMBIA-1301pMAL-p2XpGD926三.PET系列表达载体Protein Expression » Prokaryotic Expression » pET Dsb Fusion Systems 39b and 40bProtein Expression » Prokaryotic Expression » pET Expression System 33b Protein Expression » Prokaryotic Expression » pET Expression Systems Protein Expression » Prokaryotic Expression » pET Expression Systems plus Competent CellsProtein Expression » Prokaryotic Expression » pET GST Fusion Systems 41 and 42Protein Expression » Prokaryotic Expression » pET NusA Fusion Sy stems 43.1 and 44Protein Expression » Prokaryotic Expression » pET Vector DNAProtein Purification » Purification Systems » Strep•Tactin Resins and Purification Kits四.PGEX系列表达载体T EcoR pGEX-1 I/BAPpGEX-2TpGEX-2TKpGEX-3XpGEX-4T-1pGEX-4T-2pGEX-4T-3pGEX-5X-1pGEX-5X-2pGEX-5X-3pGEX-6P-1pGEX-6P-2pGEX-6P-3五.PTYB systemPTYB1PTYB2PTYB11PTYB12六.真核表达载体pCDNA3.1(-)pCDNA3.1(+)pPICZ alpha ApGAPZαAPYES2.0pBI121pEGFP-N1pEGFP-C1pPIC9KpPIC3.5K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。

质粒DNA的提取

质粒DNA的提取一、原理采用碱变性发抽提取质粒DNA。

该法是基于染色体DNA与质粒DNA的变性预复性的差异而达到分离目的的。

在PH大于12的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开变性。

质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状结构的两条互补链不会完全分离，当以pH5.2的乙酸钠高盐缓冲液调节其pH至中性时，变性的质粒DNA又恢复到原来的构型，保存在溶液中。

而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构。

通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA，蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。

二、方法1.挑取一环在LB固体培养基平板上生长的含PUC57质粒的大肠杆菌，接在含有100μg/ml氨苄青霉素（Amp）的LB液体培养基（5ml/15ml试管）中，37℃震摇培养过夜。

2.将1.5ml菌液加入微离心管中，14000r/min，离心10秒，其取上清液。

反复数次，收集全部菌体。

3.倾去上清，滤纸吸干。

4.加30μlTE缓冲液（10mmol/L Tris—HCl,1mmol/L EDTA,pH8.0）,振荡起菌体。

5.加30μlTENS溶液（10mmol/L Tris—HCl, pH8.0，1mmol/L EDTA,0.1mol/LNaOH,0.5%SDS）,震荡10秒至溶液变粘稠。

6.加150μl 3.0mol/LnaAC,震荡3—5S，14000r/min，离心3分钟，沉淀细胞碎片及染色体DNA。

7.上清液转移至另一微离心管中，甲等体积胞和酚，混匀，12000r/min,离心2分钟。

8.上层水相转移至另一位离心管，加2倍量冷水乙醇，14000r/min，离心20分钟。

9．倾去乙醇，加入7o％冷乙醇淋洗。

10．倾去乙醇，滤纸吸于，真空抽吸2～3分钟。

lI．加人50μlTE缓冲液，溶解DNA。

12，加入1μl核糖核酸酶(10mg／m1)，14000r/min,离心2s，使核糖核酸酶与管底液体混匀。

M5 pBLUE-T Simple Cloning Kit 使用说明书

M5pBLUE-T Simple Cloning Kit使用说明书产品名称单位货号M5pBLUE-T Simple Cloning Kit20T MF134-01M5pBLUE-T Simple Cloning Kit4×20T MF134-04【储存条件】长期保存，请置于-20˚C，有效期6个月。

使用后请及时放入-20˚C保存以保证酶的活性。

【产品简介】pBLUE-T Simple Vector是一种高效克隆PCR产物(TA Cloning)的专用载体。

这种载体是由pBlueScript II SK(+)质粒改建而成，和传统T载体ECOR V切开后加T方法不同，pSURE-T Simple通过改造pBlueScript II SK(+)，在原pBlueScript II SK(+)多克隆位点引入Xcm I酶切后使其原多克隆位点两侧的3’末端直接产生未配对的T碱基，因此有更高的重组效率。

同时它消除了pBlueScript II SK(+)载体上的多克隆酶切位点，需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。

此时如果使用PCR扩增引物导入的酶切位点进行DNA酶切时，酶切反应将不会受到T载体上其它多克隆酶切位点上的限制酶影响，可以大大提高酶切效率，增加亚克隆成功率。

此外，本公司载体连接体系还有背景低（蓝斑小于10%），重组率高（白斑中超过90%有插入片段），可快速连接等特点。

本说明书末列出了pBLUE-T Simple载体相关的技术资料，其全序列可参照pBlueScript II SK(+)序列，只是其多克隆酶切位点处序列稍有不同。

测序推荐采用M13通用测序引物和T3启动子引物（见后面图谱）。

【产品组份】20T4×20TpBLUE-T Simple Vector(30ng/µl)20µl80µl1000bp Control（30ng/µl）5µl5µl10x PEG Enhancer50µl200µl10x Ligation Buffer40µl160µl2x Quick Ligation Buffer100µl400µlT4DNA Ligase,5U/ul20µl80µl【操作步骤】1.连接反应的准备：PCR产物是否要进行纯化取决于扩增产物的质量。

分子生物学5 分子生物学基本研究法

• 松弛型质粒DNA却继续复制数小时，使每个寄主细胞中 ColE1 质粒的拷贝数达到 1000~3000 个，占细胞总DNA的50%左右。
3、pBR322质粒载体
由三个不同来源的部分组成的：
第一部分来源于pSF2124质粒易位子Tn3的氨苄青霉素抗性基因（AmpR）；
第二部分来源于pSC101质粒的四环素抗性基因（tetr）；
5. 2 DNA操作技术 5. 2. 1核酸的凝胶电泳
自从琼脂糖（ agarose ）和聚丙烯酰胺（polyacrylamide）凝胶被引入核酸研究以来，按分子量大小分离DNA的凝胶电泳技术，已经发展成为一种分析鉴定重组DNA分子及蛋白质与核酸相互作用的重要实验手段。
第一个核酸内切酶EcoRI是Boyer实验室在1972年发现的，它能特异性识别GAATTC序列，将双链DNA分子在这个位点切开并产生具有粘性末端的小片段。
图5-1 几种主要DNA内切酶所识别的序列及其酶切末端。
Werner Arber, Hamilton Smith and Daniel Nathans were awarded the 1978 Nobel Prize for their work on REs.
多核苷酸激酶
把磷酸基团加到多聚核苷酸链的5'-OH末端（进行末端标记实验或用来进行DNA的连接
末端转移酶
在双链核酸的3‘末端加上多聚或单核苷酸
DNA外切酶III
从DNA链的3'末端逐个切除单核苷酸
λ噬菌体DNA外切酶
从DNA链的5'末端逐个切除单核苷酸
碱性磷酸酯酶
切除位于DNA链末端的磷酸基团
嘌呤

top10提质粒

top10提质粒Top 10提质粒提质粒是生物学研究中常用的工具，用于携带和复制外源DNA片段。

在科学研究和基因工程领域，提质粒的选择和使用至关重要。

本文将介绍十种常用的提质粒，它们在不同的实验和应用中具有独特的优势。

1. pUC19pUC19是最常用的提质粒之一，具有小分子量、高拷贝数和广谱抗性。

它含有多个重要的元件，包括起始子、多个限制性内切酶位点和启动子。

pUC19广泛应用于克隆、DNA测序和表达等多个实验中。

2. pBR322pBR322是最早被广泛应用的提质粒之一，具有中等大小、低拷贝数和广谱抗性。

它是第一个被用于大规模DNA克隆的提质粒，广泛应用于基因工程和分子生物学研究中。

3. pBluescriptpBluescript是一种常用的克隆载体，具有高拷贝数和广谱抗性。

它含有T7和T3启动子，可用于原核和真核表达。

pBluescript还具有多个限制性内切酶位点，方便插入DNA片段。

4. pET系列pET系列提质粒是用于原核表达的常用载体，具有高拷贝数和广谱抗性。

pET系统基于T7启动子和lac操作子，可实现高效的蛋白表达和纯化。

5. pGEX系列pGEX系列提质粒是用于原核表达和GST标签融合蛋白表达的载体。

GST标签可用于蛋白纯化和亲和层析。

6. pCDF系列pCDF系列提质粒是用于原核表达的载体，具有高拷贝数和广谱抗性。

pCDF载体可用于多个目的，包括蛋白表达、蛋白标签和蛋白互作研究等。

7. pGL3系列pGL3系列提质粒是用于真核表达和荧光素酶报告基因分析的载体。

pGL3载体含有荧光素酶基因和启动子，可用于转录调控和启动子活性分析。

8. pEGFP系列pEGFP系列提质粒是用于真核表达和绿色荧光蛋白（GFP）标签融合蛋白表达的载体。

GFP标签可用于蛋白定位和追踪。

9. pCAGGSpCAGGS是用于真核表达的常用载体，具有高拷贝数和广谱抗性。

pCAGGS含有强启动子和增强子，可实现高效的基因表达。

pBluescript II SK(-) Phagemid说明书

pBluescript II SK(-) Phagemid, Part Number 212206*************(24小时)化学品安全技术说明书GHS product identifier 应急咨询电话（带值班时间）::供应商/ 制造商:安捷伦科技贸易（上海）有限公司中国（上海）外高桥自由贸易试验区英伦路412号（邮编:200131)电话号码： 800-820-3278传真号码: 0086 (21) 5048 2818pBluescript II SK(-) Phagemid, Part Number 212206化学品的推荐用途和限制用途pBluescript II SK (-) Phagemid 212206-51XL1-Blue MRF’ E.coli Strain 200301-81部件号:物质用途:分析试剂。

pBluescript II SK (-) Phagemid 0.02 ml（毫升） (20 µg 1 µg/µl)XL1-Blue MRF’ E.coli Strain 0.5 ml（毫升）部件号（化学品试剂盒）:212206安全技术说明书根据 GB/ T 16483-2008 和 GB/ T 17519-2013GHS化学品标识:pBluescript II SK(-) 噬菌粒，部件号 212206危险性类别信号词:pBluescript II SK (-)Phagemid无信号词。

XL1-Blue MRF’ E.coli Strain 警告危险性说明:没有明显的已知作用或严重危险。

XL1-Blue MRF’ E.coli StrainH316 - 造成轻微皮肤刺激。

H319 - 造成严重眼刺激。

:XL1-Blue MRF’ E.coli Strain防范说明GHS标签要素象形图物质或混合物的分类根据 GB13690-2009 和 GB30000-2013皮肤腐蚀/刺激 - 类别 3H319严重眼损伤/眼刺激 - 类别 2A紧急情况概述pBluescript II SK (-) Phagemid 液体。

实验九大肠杆菌感受态细胞的制备及转化

可直接转化（也可冻存于-70℃）。
E.coli DH5a
37℃振荡
2mL LB 过夜
菌液
1mL
100mlLB
37℃振荡 2-3hrs
菌液
无菌预冷
弃上清 4℃,4100r/min 收集细胞
10min
冰浴 10min
50mL聚丙烯管
倒
mL 1min
置 30
0.1M CaCl2
重复2次
2ml 预冷 0.1M CaCl2
重悬细胞
悬浮细胞
200ul 1.5mlEP
分装
800μl ＬＢ４２℃,９０s 水浴１０μl 40ng DNA 转化
冰浴２min
混匀、冰浴３０min
３７℃ ４５min
涂平板(Ampr)３７℃,１２～１６hrs 观察结果
冻存-70℃
2 转化
实验目的及背景体外通过基因工程手段所构建的含目的基因
的重组质粒，选用转化和筛选技术，可获得含重组的阳性克隆。在此阳性克隆中，DNA可在生物体系中大量扩增，繁殖，保存以及表达目的基因的产物，这是PCR体外扩增DNA所不能替代的。配合DNA重组技术，所获得的，不同目的需要的阳性菌株已广泛应用于科研，医药生产和生物发酵等领域。
转化是指质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。
转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基— 钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42℃短时间热击处理，促进细胞吸收DNA复合物。将细菌放置在非选择性培养基中保温一段时间，促使在转化过程中获得的新的表型(如Ampr等)得到表达，然后将此细菌培养物涂在含有氨苄青霉素的选择性培养基上。
三、实验步骤
1．从大肠杆菌DH5α 的平板上挑取一个单菌落接于

常用载体及相关通用引物

常用载体及相关通用引物默认分类2008-10-06 13:16:31 阅读512 评论0 字号：大中小载体一端另一端pBlueScriptSK(+) M13F(-77)/M13F(-47)/M13F/T7 M13R(-88)/M13R(-48)/M13R/T3 pcDNA3 H1.3F/pCMV-F /pEGFP-N-5/T7 BGHpcDNA3.1(+) H1.3F/pCMV-F /pEGFP-N-5/T7 pCDNA3.1R/BGHpcDNA3.0(+)/myc-His C/A/B H1.3F/pCMV-F /pEGFP-N-5/T7 BGHpcDNA3.1(+)/myc-His C/A/B H1.3F/pCMV-F /pEGFP-N-5/T7 pCDNA3.1R/BGHpcDNA3.1(+)/myc-His/LacZ H1.3F/pCMV-F /pEGFP-N-5/T7 pCDNA3.1R/BGHpcDNA3.1/His C/A/B H1.3F/pCMV-F /pEGFP-N-5/T7 pCDNA3.1R/BGHpcDNA3.1/His/LacZ H1.3F/pCMV-F /pEGFP-N-5/T7 pCDNA3.1R/BGHpcDNA3.1/Hygro(-) H1.3F/pCMV-F /pEGFP-N-5/T7 pCDNA3.1R/BGHpcDNA3.1/Hygro(+) H1.3F/pCMV-F /pEGFP-N-5/T7 pCDNA3.1R/BGHpcDNA3.1/Hygro/LacZ H1.3F/pCMV-F /pEGFP-N-5/T7 pCDNA3.1R/BGHpcDNA3.1/V5-His C/A/B H1.3F/pCMV-F /pEGFP-N-5/T7 pCDNA3.1R/BGHpcDNA3.1/V5-His/LacZ H1.3F/pCMV-F /pEGFP-N-5/T7 pCDNA3.1R/BGHpcDNA3.1/V5-His-TOPO H1.3F/pCMV-F /pEGFP-N-5/T7 pCDNA3.1R/BGHpcDNA3.1/V5-His-TOPO/LacZ H1.3F/pCMV-F /pEGFP-N-5/T7 pCDNA3.1R/BGHpcDNA3.1/Zeo(-) H1.3F/pCMV-F /pEGFP-N-5/T7 pCDNA3.1R/BGHpcDNA3.1/Zeo(+) H1.3F/pCMV-F /pEGFP-N-5/T7 pCDNA3.1R/BGHpcDNA3.1/Zeo/CAT H1.3F/pCMV-F /pEGFP-N-5/T7 pCDNA3.1R/BGHpColdI DNA p-GEX3’pColdII DNA p-GEX3’pColdIII DNA p-GEX3’pColdIV DNA p-GEX3’pDream2.1 H1.3F/pCMV-F /pEGFP-N-5/T7 SP6pEGFP-N1,2,3 H1.3F/pCMV-F /pEGFP-N-5 pEGFP-N-3’/pEGFP-C-5’/pEGFP-C-3' pET15b T7 T7terpET20b T7 T7terpET22b T7 T7terpET28a T7 T7terpET28b T7 T7terpET30b T7 T7terpFastBac Dual pEGFP-C-3'pFastBac HT A,B,C pEGFP-C-3'pFastBac1 pEGFP-C-3'pGEM-T Easy M13F(-77)/M13F(-47)/M13F/T7 M13R(-88)/M13R(-48)/M13RpGEX-4T-1/3 p-GEX5’ p-GEX3’pGS-21a p-GEX5’ T7terpLenti6/V5-D-TOPO M13F(-47)/M13F/T7 M13R(-48)/M13R/T3pLenti6/V5-GW/lacZ M13F(-47)/M13F/T7 M13R(-48)/M13R/T3pMAL-p2x M13F(-47)/M13F/PBV220R M13R(-48)pMD18-T M13F(-77)/M13F(-47)/M13F M13R(-88)/M13R(-48)/M13RpMD19-T M13F(-77)/M13F(-47)/M13F M13R(-88)/M13R(-48)/M13RpMTBiPV5-His GFP p-GEX3’/ M13F(-47)/M13F M13R(-88)/M13R(-48)/M13R /pEGFP-C-3'/BGH pPCR script M13F(-77)/M13F(-47)/M13F/T7 M13R(-88)/M13R(-48)/M13R/T3pPIC3.5 5’AOX 3’AOXpPIC9 5’AOX 3’AOXpPICZ C/A/B 5’AOX 3’AOXpPICZalpha C/A/B 5’AOX/α-Factor 3’AOXpSecTag2 A,B,C H1.3F/pCMV-F /pEGFP-N-5/T7 BGHpTWIN T7 T7terpUC57 M13F(-77)/M13F(-47)/M13F M13R(-88)/M13R(-48)/M13RpUC18 M13F(-47)/M13F M13R(-48)/M13RpUC19 M13F(-47)/M13F M13R(-48)/M13R其他…… ……注：1）排列顺序为：有左到右==（离插入为点）由远到近；2）若有多个引物，红色的为首选引物：3）选择测序通用引物时，以距离插入位点约50碱基为佳；4）同时有T7，T7ter的载体，单反应首选T7ter；5）同时有T7，pCDNA3.1R的载体，单反应首选pCDNA3.1R ；6）同时有T7，BGH的载体，单反应首选BGH；7）同时有pCMV-F，BGH的载体，单反应首选BGH；。

PrestoTM Mini Plasmid Kit 快速协议说明书

Presto TM Mini Plasmid Kit Quick ProtocolFor research use onlyCatalogue NumberPDH004, PDH100, PDH300Instruction Manual DownloadWhen using this product for the first time, or if you are unfamiliar with the procedure,please scan the QR code and download the complete instruction manual.Instruction Manual Download 1. HarvestingTransfer 1.5 ml of cultured bacterial cells (1-2 x 109 E. coli grown in LB medium) to a 1.5 ml microcentrifuge tube. Centrifuge at 14-16,000 x g for 1 minute at room temperature to form a cell pellet then discard the supernatant completely. Repeat the harvesting step as required for samples between 1.5-7.0 ml using the same1.5 ml microcentrifuge tube.2. ResuspensionAdd 200 µl of PD1 Buffer (make sure RNase A was added) (Optional: Add 2 µl of TrueBlue Lysis Buffer) to the 1.5 ml microcentrifuge tube containing the cell pellet. Resuspend the cell pellet completely by vortex or pipette until all traces of the cell pellet have been dissolved.3. Cell LysisAdd 200 µl of PD2 Buffer to the resuspended sample then mix gently by inverting the tube 10 times. Do not vortex to avoid shearing the genomic DNA. Let stand at room temperature for at least 2 minutes to ensure the lysate is homogeneous. Do not exceed 5 minutes.4. NeutralizationAdd 300 µl of PD3 Buffer then mix immediately by inverting the tube 10 times. Do not vortex to avoid shearing the genomic DNA. Centrifuge at 14-16,000 x g for 3 minutes at room temperature. If using >5 ml of bacterial cells, centrifuge at 16-20,000 x g for 5-8 minutes. During centrifugation, place a PDH Column in a 2 ml Collection Tube.5. DNA BindingTransfer all of the supernatant to the PDH Column. Use a narrow pipette tip to ensure the supernatant is completely transferred without disrupting the white precipitate. Centrifuge at 14-16,000 x g for 30 seconds at room temperature then discard the flow-through. Place the PDH Column back in the 2 ml Collection Tube.6. WashFor Improved Downstream Sequencing ReactionsAdd 400 µl of W1 Buffer into the PDH Column. Centrifuge at 14-16,000 x g for 30 seconds. Discard the flow-through then place the PDH Column back in the 2 ml Collection Tube. Proceed with Wash Buffer addition. For Standard Plasmid DNA PurificationAdd 600 µl of Wash Buffer (make sure absolute ethanol was added) into the PDH Column. Centrifuge at 14-16,000 x g for 30 seconds at room temperature. Discard the flow through then place the PDH Column back in the 2 ml Collection Tube. Centrifuge at 14-16,000 x g for 3 minutes at room temperature to dry the column matrix. Transfer the dried PDH Column to a new 1.5 ml microcentrifuge tube.7. ElutionAdd 50 µl of Elution Buffer, TE or water into the CENTER of the column matrix. Let stand for at least 2 minutes to allow Elution Buffer, TE or water to be completely absorbed. Centrifuge at 14-16,000 x g for 2 minutes at room temperature to elute the purified DNA.Instruction Manual DownloadTMPresto™ Mini Plasmid Kit Functional Test DataFigure 1. Plasmid DNA was extracted using the Presto™ Mini Plasmid Kit. 5 µl aliquots from a 100 µl eluate of purified super coiled plasmid DNA from 1.5, 3, 5 and 7 ml overnight E. coli (DH5α) culture, containing a 3 kb plasmid pBluescript and pBR322 (OD600 = 4 U/ml) were used in Eco RI digestion and analyzed by electrophoresis on a 0.8% agarose gel. M = Geneaid 1 Kb DNA LadderpBluescript: 1=1.5 ml, 2=3 ml, 3=5 ml, 4=7 ml pBR322: 5=1.5 ml, 6=3 ml 7=5 ml, 8=7 ml1 2 3 4 M 5 6 7 81For PDH100 and PDH300 add provided RNase A to PD1 Buffer then mix by shaking for a few seconds. Check the box on the bottle. PD1 and RNase A mixture should be stored at 2-8ºC for up to 6 months. For PDH004 samples, RNase A was already added to PD1.2If precipitates have formed in PD2 Buffer, warm the buffer in a 37ºC water bath, followed by gentle shaking to dissolve.3Add absolute ethanol (see the bottle label for volume) to Wash Buffer then mix by shaking for a few seconds. Check the box on the bottle. Be sure and close the bottle tightly after each use to avoid ethanol evaporation.。

GA引物载体对照表1

AmpR AmpR
AmpR ZeocinR ZeocinR ZeocinR ZeocinR ZeocinR ZeocinR
KanaR
pGEM-1 pGEM-11z pGEM-3 pGEM-3z pGEM-3Zf(+)(-) pGEM-4 pGEM-4Z pGEM-4z pGEM-5z pGEM-5Zf(+)(-) pGEM-7z pGEM-7Zf(+)(-) pGEM-9z pGEM-9Zf(+)(-) pGEM-T pGEM-T pGEM-T_Easy pGEM-Teasy pGEX-4T-1(-2,-3) pGEX-5X-1(-2,-3) pGEX-6P-1(-2,-3) pGL2 pGL2-Basic pGL3(MCSI,luc+upstream) pGL3(MCSII,luc+downstream) pGL3-Basic(MCSI) pGL3-Basic(MCSII) pGL4(MCSI,luc+upstream) pGL4(MCSII,luc+downstream) pIRES(MCSI) pIRES(MCSII) pIRESneo2 pLVX-IRES-ZsGreen1 pMALc PMAL-C2X pMALd pMALe pMB438 Pmd18/19-T pPIC3.5K pPIC6A pPIC6alphaA pPIC6alphaB pPIC6alphaC
AmpR&KanaR AmpR&KanaR AmpR AmpR AmpR&KanaR AmpR&KanaR AmpR AmpR&KanaR
pET-3(-a,-b,-c,-d) pET-30_Ek/LIC pET-30_Xa/LIC pET-30a(-b,-c)(+) pET-31b(+) pET-32a(-b,-c)(+) pET-33b(+) pET-34b(+) pET-35b(+) pET-36b(+) pET-37b(+) pET-38b(+) pET-39b(+) pET-40b(+) pET-41a(-b,-c)(+) pET-42a(-b,-c)(+) pET-44a(-b,-c)(+) pET-44a_EK/LIC pET-45b(+) pET-46_Ek/LIC pET-5(-a,-b,-c) pET-7 pET-9(-a,-b,-c,-d) pETDuet-1(MCSI) pETDuet-1(MCSII) pFastBac-Dual pFastBacDual(MCSI,PHpromoter) pFastBacDual(MCSII,p10promoter) pFastBac-GT pFastBac-HT PFLAG-CMV4 pGADT7 pGADT7 pGAD-T7 pGAPZA pGAPZalphaA pGAPZalphaB pGAPZalphaC pGAPZB pGAPZC pGBD-T7 pGBKT7 pGBKT7

PostScript语言

一、概述PostScript语言是Adobe公司设计用于向任何支持PostScript语言的打印机打印文件的页面描述语言。

Postscript既是一种页面描述语言，也是一种高级解释型脚本语言。

由于它与设备的无关性，使得它无论在那种平台上，都能忠实的再现原貌，从而被广泛应用于打印出版行业，同时由于它是一种解释型脚本，所以它也可以像一般编程语言一样用来解决某些问题。

PS语言一方面是一个具有较强图形功能的通用程序设计语言，另一方面它又是一个具有一般程序设计特性的页面描述语言，因此它具有两者的特点：1. PS语言具有通用程序设计语言中的一些基本结构，如各种类型的数据、数组、字符串、控制语句、条件语言和过程等，它还包含有其它语言中一般不常用的名字(name)、词典(dictionary)等。

2. 具有较强的图形功能·它能构成由直线、弧以及三次曲线所组成的任何形状的图形；填充原语允许图形外轮廓线是任意形状和粗细；裁剪路径也可以是任意形状。

·文字和图形结合成一体，也就是说PS语言在图形模式下文字也作为图形来处理，PS中任何图形操作均适用于文字。

·在通用坐标系中，PS支持由平移、变比、旋转、反射和扭斜等线性变换所组成的复合变换，且这些变换适用于页面描述语言中的所有元素：文字、图形和图像。

二、通用程序设计语言PostScript语言具有通用程序设计语言的特性。

字符“%”用来在PostScript程序中表示注释。

作为一个通用的约定，每个PostScript都以字符“%!”开始，这样所有的设备都会将它解释为PostScript。

1．后缀表示法PS语言的语句采用后缀表示法，即在一个语句中，操作数在前，而相应的操作符在后，如：40 60 add 2 div200 300 moveto0 72 relineto第一条语句表示40和60相加后再除以2得50,第二、三条语句表示把现行点移到(200,300)后，再沿垂直方向画一条长度为72的直线。

质粒DNA的小量提取与DNA琼脂糖凝胶电泳实验报告

质粒DNA的小量提取及DNA琼脂糖凝胶电泳一、前言质粒质粒是附加到细胞中的非细胞的染色体或核区DNA原有的能够自主复制的较小的DNA分子(即细胞附殖粒、又胞附殖粒)。

大部分的质粒虽然都是环状构型，它存在于许多细菌以及酵母菌等生物（多为原核生物）中，乃至于植物的线粒体等胞器中。

然而，1984年，在Streptomyces coelicoler(天蓝色链霉菌)等放线菌以及在Borrelia hermsii(赫氏蜱疏螺旋体)等原核生物中，又相继发现线形质粒。

天然质粒的DNA长度从数千碱基对至数十万碱基对都有。

质粒天然存在于这些生物里面，有时候一个细胞里面可以同时有一种乃至于数种的质粒同时存在。

质粒的套数在细胞里从单一到数千都有可能。

有时有些质粒含有某种抗药基因(如大肠杆菌中就有含有抗四环素基因的质粒)。

有一些质粒携带的基因则可以赋予细胞额外的生理代谢能力，乃至于在一些细菌中提高它的致病力。

一般来说，质粒的存在与否对宿主细胞生存没有决定性的作用。

它是基因工程最常见的运载体。

质粒在细胞内的复制一般有两种类型:紧密控制型和松弛控制型。

前者只在细胞周期的一定阶段进行复制，当染色体不复制时，它也不能复制，通常每个细胞内只含有一个或几个质粒分子，如F因子。

后者的质粒在整个细胞周期中随时可以复制，在每个细胞中有许多拷贝，一般在20个以上，如Col E1质粒。

在使用蛋白质合成抑制剂-氯霉素时，细胞内蛋白质合成、染色体DNA复制和细胞分裂均受到抑制，紧密型质粒复制停止，而松弛型质粒继续复制，质粒拷贝数可由原来20多个扩增至1000-3000个，此时质粒DNA占总DNA的含量可由原来的2%增加至40-50%。

把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术，送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体。

细菌质粒是重组DNA 技术中常用的载体。

质粒分子本身是含有复制功能的遗传结构。

质粒还带有某些遗传信息，所以会赋予宿主细胞一些遗传性状。